專利名稱：一種具有誘導(dǎo)抗性的木霉菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種具有誘導(dǎo)抗性的木霉菌株及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
化學(xué)農(nóng)藥的大量使用在保障糧食增產(chǎn)增收的同時，也引起了嚴重的環(huán)境污染。隨著人們對化學(xué)農(nóng)藥危害認識的逐漸加強，對環(huán)境相容性好的生物農(nóng)藥的篩選和使用日益受到重視。木霉菌屬于半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科，廣泛存在于土壤、根圍、葉 圍、種子等生態(tài)環(huán)境中，由于木霉菌的廣泛適應(yīng)性、抑菌廣譜性以及多機制性，本霉被普遍認為能夠代替多種化學(xué)農(nóng)藥的生防因子。早在1932年，Weidling就發(fā)現(xiàn)木素木霉對立枯絲核菌等病原菌有拮抗作用，之后經(jīng)多年的研究，發(fā)現(xiàn)該菌對18個屬30多種植物病原菌具有拮抗作用，如立枯絲核菌、錸刀菌、齊整小核菌、核盤菌、疫霉菌、腐霉菌、鏈格孢菌、灰霉菌、毛盤菌、輪枝孢菌、黒星菌等，能有效防治由這些病原真菌引起的立枯病、黃萎病、青枯病、蘋果輪紋病、灰霉病等植物病害。目前成功開發(fā)出多種木霉制劑，其中Topshield、Rootshield等土壤處理劑,可以有效地防治作物土傳病害。黃瓜灰霉病是由灰葡萄孢cinerea / /^)引起的一種常見黃瓜病害，該病的發(fā)生嚴重影響黃瓜的產(chǎn)量與品質(zhì)。目前，灰霉病防治主要依賴多菌靈、速克靈等化學(xué)藥劑，但由于病菌抗藥性迅速產(chǎn)生，導(dǎo)致農(nóng)藥用量不斷加大，從而引起農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境的嚴重污染。利用木霉防治黃瓜灰霉病是一種比較有效的生物防治方法，對降低化學(xué)農(nóng)藥的污染具有良好的作用。然而，由于木霉制劑是使用的木霉活體，用于防治灰霉病時在葉面噴施后其存活受多種環(huán)境因素的影響，致使其對防治葉面病害的效果不理想。因此，有針對性的篩選具有誘導(dǎo)抗性的木霉菌株，使木霉在土壌中施用達到防治葉面病害的效果，是解決目前木霉制劑存在的技術(shù)瓶頸的ー種方案。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之ー在于提供ー種能夠誘導(dǎo)黃瓜產(chǎn)生對灰霉病系統(tǒng)抗性作用的木霉菌株，本發(fā)明的目的之ニ在于提供該木霉菌株在防治黃瓜灰霉病中的應(yīng)用。為達到上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案
技術(shù)方案一
一種具有誘導(dǎo)抗性的木霉菌株(Trichoderma amazonicum)Tr-92,于2012年5月9日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區(qū)北辰路I號2院)，保藏號為CGMCC No. 6087。技術(shù)方案ニ
所述的木霉菌株在防治黃瓜灰霉病中的應(yīng)用，其是用滅菌草炭吸附所述木霉菌株的分生孢子，使其在滅菌草炭中的含量為O. IXIO9-IXiO9 cfu/g，制成木霉菌劑，將所述木霉菌劑溝施入黃瓜根部土壌，使用劑量為Ikg/畝。
本發(fā)明的木霉菌株是通過大量篩選工作篩選得到的，該菌株對黃瓜灰霉病菌具有較強的誘導(dǎo)抗病性；該木霉菌株的微生物菌劑原料易得，使用簡單方便，可減輕黃瓜灰霉病的發(fā)病率，降低病情指數(shù)，防病效果在50%以上。
具體實施例方式以下結(jié)合優(yōu)選實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行詳細地闡述。以下實施例僅僅用于說明和解釋本發(fā)明，而不構(gòu)成對本發(fā)明技術(shù)方案的限制。實施例I木霉菌株的分離
從植物病害嚴重的土壤中采集土壤樣品，在實驗室內(nèi)從該土壤樣品中分離出木霉菌，在PDA培養(yǎng)基上進行多次分離純化，得到木霉純培養(yǎng)菌落后，分別在PDA試管斜面中保存。
具體步驟上述土壤樣品來自多年重茬種植、病害嚴重的大棚土壌，將該土壤經(jīng)梯度稀釋后涂布于木霉選擇性培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的成分如下=MgSO4 ·7Η20 O. 2g/L ；Κ2ΗΡ04 0.9g/L ；KC1 0. 15 g/L ；NH4NO3 I. 0 g/L ;葡萄糖 3. 0 g/L ;氯霉素 0. 25 g/L ;敵磺鈉 0. 3 g/L ；五氯硝基苯0.2 g/L;玫瑰紅0.15 g/L;瓊脂15 g/L，余量為水；
將分離出的木霉經(jīng)多次純化得到木霉純培養(yǎng)菌株后，分別在PDA試管斜面保存。實施例2具有誘導(dǎo)抗性木霉菌株的篩選
具體步驟木霉菌株的培養(yǎng)，將篩選出的木霉菌株分別接種到PDA平板中，30°C恒溫培養(yǎng)5天，用無菌水沖洗木霉平板得到木霉孢子懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)并調(diào)整其濃度為106cfu/ml ;將保存的灰霉病菌接種到PDA平板，24°C恒溫培養(yǎng)7_10天使用，用無菌水沖洗灰霉菌平板得到灰霉菌孢子懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)并調(diào)整其濃度為106cfu/ml。挑選籽粒飽滿的黃瓜種子用無菌水沖洗3次，經(jīng)55°C恒溫水浴浸泡15min后用濕潤紗布包好放在培養(yǎng)皿中30°C催芽，待大部分種子出芽后挑取出芽情況一致的種子播種于裝有滅菌蛭石的直徑IOcm的塑料花盆中，每盆2粒種子，于20-24°C培養(yǎng)室(光照黑暗周期為16h :8h)進行培養(yǎng)，黃瓜幼苗長出5片真葉后，進行誘導(dǎo)處理。用無菌注射器將木霉孢子懸浮液5ml注入黃瓜植株根部土壌中，以加入5ml滅菌水的為對照。木霉誘導(dǎo)接種48h后，向黃瓜葉片上噴灑灰霉病菌孢子液，接種后保濕培養(yǎng)24h (濕度>90%)。待對照組葉面普遍發(fā)病后記錄并統(tǒng)計病情指數(shù)，計算防病效果。計算公式如下
病情指數(shù)％ = Σ (各級病葉數(shù)X病級數(shù))バ調(diào)查總?cè)~數(shù)X最高病級數(shù))X 100防病效果％ =(對照病情指數(shù)一處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)X 100。比較各菌株的防病效果，效果最好的木霉菌株(標記為TR-92)為具有誘導(dǎo)抗性能力的木霉菌株(其防病效果見表I )，表I中木霉TR-92對灰霉病菌的防病效果為56.0%。這一結(jié)果說明，木霉TR-92施入黃瓜根部，能夠誘導(dǎo)黃瓜幼苗葉部產(chǎn)生抗灰霉病的能力，從而降低了葉部灰霉病的發(fā)生。表I木霉誘導(dǎo)對黃瓜幼苗病情指數(shù)的影響
權(quán)利要求
1.一種具有誘導(dǎo)抗性的木霉菌株(7>icAoofe/maTr_92,其特征在于其保藏號為 CGMCC No. 6087。
2.權(quán)利要求I所述的木霉圃株在防治黃瓜灰霉病中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于用滅菌草炭吸附所述木霉菌株的分生孢子，使其在滅菌草炭中的含量為0. IXIO9-IXiO9 cfu/g，制成木霉菌劑，將所述木霉菌劑溝施入黃瓜根部土壤，使用劑量為Ikg/畝。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種保藏號為CGMCCNo.6087的木霉菌株(Trichodermaamazonicum)，還提供了該木霉菌株在黃瓜灰霉病防治中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的保藏號為CGMCCNo.6087的木霉菌株對黃瓜灰霉病具有較好的誘導(dǎo)抗性，將該菌株制成的微生物菌劑應(yīng)用在蔬菜種植環(huán)境中后，通過該木霉在土壤中的定植和繁殖，特別是在黃瓜根部中的定植，能夠誘導(dǎo)黃瓜對灰霉病的抗病性，降低黃瓜生產(chǎn)過程中化學(xué)農(nóng)藥的施用。
文檔編號A01P3/00GK102676403SQ20121017075
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月29日
發(fā)明者尹淑麗, 崔冠慧, 張麗萍, 張根偉, 李書生, 杜曉哲, 段普凡, 王淑霞, 程輝彩, 黃亞麗 申請人:河北省科學(xué)院生物研究所