一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物菌株領(lǐng)域，具體涉及一株具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株及其培養(yǎng)方法 和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物寄生線蟲在世界上許多國家和地區(qū)發(fā)生和為害，種類多種多樣。在全球范 圍內(nèi)，植物寄生線蟲的發(fā)生與危害隨著農(nóng)林業(yè)的發(fā)展和耕作栽培制度的變化日益嚴(yán)重，據(jù) Esser統(tǒng)計，到1990年為止全世界已報道發(fā)現(xiàn)植物寄生線蟲207屬4832種（劉維志，段玉 璽.2000.植物病原線蟲學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，P. 1-2)。據(jù)估計，植物寄生線蟲造成 世界主要農(nóng)作物的年損失率為12. 3%，超過1000億美元，而實際的損失遠遠超過估計，理 由是許多線蟲造成的危害因沒有田間可見癥狀或?qū)；蕴卣鞫匆鹱⒁猓ㄍ鯄廴A.果樹 線蟲學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1994.P. 1-5)，此外，世界范圍內(nèi)對線蟲為害的新發(fā)現(xiàn) 還在不斷增加，而且一些更新的農(nóng)業(yè)栽培體制使線蟲問題更加突出，再者，線蟲與其它生物 相互作用而對植物產(chǎn)生的直接或間接影響還在急劇增加。從這種意義上說，線蟲造成的危 害較其它生物更加隱蔽。目前對植物有害的線蟲約有3000多種，在我國主要有大豆胞囊線 蟲、胞囊線蟲、松材線蟲、甘薯莖線蟲等。大豆胞囊線蟲是農(nóng)業(yè)上為害最大的一類線蟲，病害 發(fā)生后，一般減產(chǎn)10%左右，嚴(yán)重的高達75%以上，甚至絕收（A.G.Whitehead，1998.Plant NematodeControl.ISBN0851991882CABInternational)。目前，植物寄生線蟲的防治仍 以化學(xué)防治為主，但近年來，化學(xué)殺線劑的應(yīng)用浪費大，污染環(huán)境，選擇性差，滅生性強，破 壞土壤生物區(qū)系等弊端日益為人們所重視（張克勤，何世川，周薇等.1991.真菌和細菌在 線蟲生防中的作用及其研究進展.誘導(dǎo)抗性微生物.3 :55-66)，21世紀(jì)稱為環(huán)保世紀(jì)，一些 有效的化學(xué)殺線劑的應(yīng)用逐步受到限制，因此對植物寄生線蟲的生物防治研究自然成為熱 點問題。最近AdvancedBiologicalMarketing(ABM)近日宣布獲得一項美國專利，專利號 為8716001，此項專利技術(shù)有關(guān)木霉菌株誘導(dǎo)植物病害抗性，并促進植物的生長，專利所屬 為康奈爾大學(xué)，該專利可以應(yīng)用于大豆，但表述為具有抗逆性。但對于利用真菌發(fā)酵液處理 植物種子使植物產(chǎn)生對植物寄生線蟲具有抗性的專利較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對上述問題，本發(fā)明以植物寄生線蟲為靶標(biāo)，從真菌代謝產(chǎn)物中尋找具有高效 殺線蟲活性物質(zhì)，擬為研究開發(fā)新型生物殺線蟲劑尋找新的資源。
[0004] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0005] -種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株，所述菌株為微紫青霉（PeniciIlium janthinellum)，保藏號為CGMCCNo. 10487,保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心；地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日 期：2015年05月11日；是從大量沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)線蟲實驗室試驗地的土壤真菌菌株中篩選 出的一株對大豆胞囊線蟲具有良好誘導(dǎo)抗性的真菌菌株。
[0006] 上述一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：
[0007] S1、稱取硝酸鈉3g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂七結(jié)晶水0. 5g，氯化鉀0. 5g，硫酸亞鐵 〇? 〇lg，蔗糖30g，加蒸餾水至1000ml，得（察氏）液體發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0008] S2、將步驟S1所得的液體培養(yǎng)基按每瓶100mL的比例分裝于250mL的三角瓶內(nèi)， 將試管種接種到液體培養(yǎng)基中，25°C~28°C，搖床轉(zhuǎn)速150r?min1~200r?min\發(fā)酵 240h，得真菌代謝物。
[0009] 上述的一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株的應(yīng)用可用于制備植物寄生線蟲生物防治 誘導(dǎo)劑，所述誘導(dǎo)劑包含有效量的上述真菌或步驟S2所得的真菌代謝物。
[0010] 其中，所述的植物寄生線蟲為大豆胞囊線蟲（Soybeancystnematode)。
[0011] 本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，土壤真菌有很多株真菌都具有一定的直接殺線蟲活 性，但僅有少數(shù)真菌菌株處理大豆種子可以誘發(fā)大豆植株根系產(chǎn)生對植物寄生線蟲的 抗性，其中真菌菌株Snefl650具有很好的誘導(dǎo)抗性作用，經(jīng)鑒定該菌株為微紫青霉菌 P.janthinellum
[0012] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0013] 本發(fā)明的真菌菌株P(guān).janthinellumSnefl650或其代謝物具有誘導(dǎo)抗線蟲的活性 物質(zhì)，可用于植物寄生線蟲的生物防治，特別是大豆胞囊線蟲（Soybeancystnematode)。
【具體實施方式】
[0014] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步 詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0015] 實施例1
[0016] 微紫青霉（P.janthinellum)Snef1650 的培養(yǎng)
[0017] 將微紫青霉（P.janthinellum)Snefl650的菌株接種到試管培養(yǎng)基上，試管種 培養(yǎng)基配方為馬鈴薯瓊脂（PDA)培養(yǎng)基，即馬鈴薯200g;葡萄糖20g;瓊脂17g;蒸餾水 1000mL〇
[0018] (察氏）液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：硝酸鈉3g;磷酸氫二鉀lg;硫酸鎂.七結(jié)晶水 〇. 5g;氯化鉀0. 5g;硫酸亞鐵0. 01g;鹿糖30g;加蒸餾水至1000ml。
[0019] 將試管種接種到250mL三角瓶（每瓶裝100mL)液體培養(yǎng)基中，25°C~28°C下，搖 床轉(zhuǎn)速以 150r?min1 ~200r?min\ 發(fā)酵 120h。
[0020] 形成的發(fā)酵液或發(fā)酵液的制成品可以以1 : 70的（發(fā)酵液與種子的重量比）包 衣大豆。被處理的大豆種子所形成的根系可以減輕由大豆胞囊線蟲病害所造成的危害。
[0021] 實施例2
[0022] 微紫青霉（P.janthinellum)Snef1650發(fā)酵產(chǎn)品防治大豆胞囊線蟲田間效果試驗
[0023] 本試驗分別在遼寧省沈陽市沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗田，遼寧省沈陽市康平市試驗田 和黑龍江省大慶市農(nóng)科院試驗田進行田間效果試驗。將制備好的發(fā)酵液原液，采用液種 1 : 70體積比進行種子包衣處理，在陰涼條件下陰干，將處理過的大豆種子正常播種，大豆 植株在苗期可以產(chǎn)生對大豆胞囊線蟲的抗性，并且誘抗效果比較穩(wěn)定，取得很好的防治效 果。
[0024] 1.制備試驗制劑
[0025] 按前述液體發(fā)酵培養(yǎng)方法制備微紫青霉（P.janthinellum)Snefl650的發(fā)酵液， 待備用。
[0026] 2?試驗用大豆種子
[0027] 遼豆15,遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大豆研究所提供。
[0028] 3.種子處理方法
[0029] 將大豆種子先用5. 0%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，再用無菌水沖洗3-5次。將 制備好的發(fā)酵液采用液種1 : 70體積比進行種子包衣處理，在陰涼條件下陰燥，備用。
[0030] 4?試驗方法
[0031] 本試驗分別在遼寧省沈陽市沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗田，遼寧省沈陽市康平市和黑龍江 省大慶市農(nóng)科院試驗田進行田間效果試驗，三處試驗田大豆胞囊線蟲均很嚴(yán)重，主栽作物 大豆和玉米等。以未經(jīng)過包衣的大豆種子和察氏液體培養(yǎng)液包衣的大豆種子為對照，在大 豆種植后45d進行調(diào)查，將大豆植株連根挖出，保持根系完整，調(diào)查大豆根系胞囊數(shù)和根腐 病情級數(shù)。
[0032] 5?試驗結(jié)果
[0033] 使用Snefl650發(fā)酵產(chǎn)品處理的大豆，大豆根系線蟲胞囊數(shù)顯著低于對照，在沈陽 農(nóng)業(yè)大學(xué)，康平和大慶的田間防效分別為54. 4%，78. 5%和64. 94%，包衣處理后的大豆與 未處理的大豆存在顯著差異。
[0034] 表1Snefl650發(fā)酵產(chǎn)品包衣處理大顯種子的田間防效
[0035]
[0036] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株，其特征在于，所述菌株為微紫青霉（Penicillium janthinellum)，保藏號為 CGMCC No. 10487。2. 如權(quán)利要求1所述的一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括 如下步驟： 51、 稱取硝酸鈉3g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂七結(jié)晶水0. 5g，氯化鉀0. 5g，硫酸亞鐵 〇? 〇lg，蔗糖30g，加蒸餾水至1000ml，得（察氏）液體發(fā)酵培養(yǎng)基； 52、 將步驟Sl所得的液體培養(yǎng)基按每瓶IOOmL的比例分裝于250mL的三角瓶內(nèi)，將試 管種接種到液體培養(yǎng)基中，25°C~28°C，搖床轉(zhuǎn)速150r ? min 1~200r ? min \發(fā)酵240h， 得真菌代謝物。3. 如權(quán)利要求1所述的一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株的應(yīng)用，其特征在于，用于制備 植物寄生線蟲生物防治誘導(dǎo)劑。4. 如權(quán)利要求3所述的一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株的應(yīng)用，其特征在于，所述誘導(dǎo) 劑包含有效量的上述真菌或步驟S2所得的真菌代謝物。5. 如權(quán)利要求3所述的一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株的應(yīng)用，其特征在于，所述的植 物寄生線蟲為大豆胞囊線蟲（Soybean cyst nematode)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有誘導(dǎo)抗性的真菌菌株及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用，該菌株為微紫青霉(Penicillium？janthinellum)，保藏號為CGMCC？No.10487。上述真菌菌株的培養(yǎng)基由以下原料制備而成：硝酸鈉3g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂七結(jié)晶水0.5g，氯化鉀0.5g，硫酸亞鐵0.01g，蔗糖30g，加蒸餾水至1000ml。本發(fā)明的真菌菌株P(guān).janthinellum？Snef1650或其代謝物具有誘導(dǎo)抗線蟲的活性物質(zhì)，可用于植物寄生線蟲的生物防治，特別是大豆胞囊線蟲(Soybean？cyst？nematode)。CGMCC No.1048720150511
【IPC分類】C12R1/80, A01N63/04, A01P5/00, C12N1/14
【公開號】CN105112307
【申請?zhí)枴緾N201510607223
【發(fā)明人】朱曉峰, 段玉璽, 陳立杰, 王媛媛, 閆繼辰
【申請人】沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月15日