生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，檢測方法步驟如下：（1）無菌苗的培育；（2）葉片處理；（3）誘抗檢測。本發(fā)明可直觀檢測生防菌對植物的誘導抗病效果。相較傳統(tǒng)用誘導抗病性指標來檢測誘導抗病性的方法更直觀、簡便、有說服力。
【專利說明】生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物病害領域，尤其是一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法。
【背景技術】
[0002]植物生長在自然環(huán)境中不斷面臨著各種侵染，在長期進化過程中形成發(fā)展了一系列防御機制，其中誘導抗病性是植物重要的抗病機制之一。植物的誘導抗病性主要包括過敏反應和誘導系統(tǒng)抗性兩類反應。過敏反應是一種快速的局部反應，而誘導系統(tǒng)抗性能使植物除誘導部位外的其他部位也能產(chǎn)生抗病性，是一種全面的抗性。目前，鑒定誘導抗病性主要采用調(diào)查病情指數(shù)法和測定相關酶活兩種方法。調(diào)查病情指數(shù)的方法能直觀地鑒定誘導抗病性，是發(fā)病率和嚴重度的綜合指標。然而，許多病情一旦爆發(fā)在短時期內(nèi)就會很嚴重，而誘抗劑的誘導效果較小，在調(diào)查病情指數(shù)時不能很好的體現(xiàn)誘抗劑的誘抗效果。許多科研工作者常通過測定誘抗相關酶活來鑒定誘導抗病性，與植物誘導抗病性有關的酶有:過氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、過氧化氫酶等。然而，誘抗機理是多種多樣的，酶活變化與誘抗強度的關系研究不是很 明確，測定生化指標只能作為一種輔助手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，主要針對黃瓜誘導效果的鑒定，通過檢測生防菌誘導葉片后，根部分泌物的抑菌效果來鑒定誘抗菌的誘導抗病能力。并且操作簡單，能直觀地體現(xiàn)誘抗物的誘導效果，很好地鑒定誘導抗病性，尤其是系統(tǒng)誘導抗病性。
[0004]本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的:
[0005]一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其步驟如下:
[0006](I)無菌苗的培育:
[0007]取黃瓜種子用洗衣粉水清洗，用濃度為75%酒精浸泡40-100S，再用無菌水沖洗3次之后，將黃瓜種子在濃度為30%的次氯酸鈉溶液中浸泡10-15min，用無菌水沖洗4次，得到消毒后的黃瓜種子A，備用；
[0008]將上述消毒后的黃瓜種子A接種至滅菌后的組培瓶中，每瓶播種2-3粒，在白天25-28°C，晚上18-21°C條件下培養(yǎng)5_10天，得到子葉完全展開的黃瓜苗B，備用；
[0009](2)葉片處理
[0010]用移液器取生防菌發(fā)酵液滴到步驟(1)所得黃瓜苗B的子葉上，在白天25_28°C，晚上18-21°C條件下培養(yǎng)5-7天，得到黃瓜幼苗C，備用；
[0011](3)誘抗檢測
[0012]將病原真菌孢子懸浮液加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶液中，倒平板，晾干后在培養(yǎng)基中央放置牛津杯，將步驟(2)所得黃瓜幼苗C拔出組培瓶，將組培瓶中剩余的培養(yǎng)基混合均勻后置于牛津杯中，在27°C培養(yǎng)3-4天后觀測到抑菌圈說明生防菌對黃瓜誘導抗病具有效果。
[0013]所述的步驟(1)中滅菌后的組培瓶中為MS培養(yǎng)基。
[0014]所述的步驟(2)中生防菌發(fā)酵液的菌量為IO8-1O11個/ml。
[0015]所述的步驟(3)中馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基與病原真菌孢子懸浮液體積比為100:1。
[0016]所述的步驟(3)中病原真菌孢子懸浮液在10倍鏡下每個視野有40-60個孢子。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點及有益效果是:
[0018]本發(fā)明主要針對黃瓜誘導抗病性的鑒定，通過檢測生防菌誘導黃瓜葉片后，根部分泌物的抑菌效果來鑒定誘抗菌的誘導抗病能力。操作簡單，能直觀地體現(xiàn)誘抗物的誘導效果，很好地鑒定誘導抗病性，尤其是系統(tǒng)誘導抗病性。
【具體實施方式】
[0019]本發(fā)明通過以下實施例進一步詳述。需要說明的是:下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。
[0020]實施例1
[0021]一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其步驟為:
[0022](I)無菌苗的培育:`[0023]取黃瓜種子用洗衣粉水清洗，用濃度為75%酒精浸泡40s，再用無菌水沖洗3次之后，將黃瓜種子在濃度為30%的次氯酸鈉溶液中浸泡lOmin，用無菌水沖洗4次，得到消毒后的黃瓜種子A,備用；
[0024]將上述消毒后的黃瓜種子A接種至滅菌后的組培瓶中，每瓶播種2粒，在白天250C，晚上18°C條件下培養(yǎng)5天，得到子葉完全展開的黃瓜苗B，備用；
[0025](2)葉片處理
[0026]用移液器取菌量為IO8個/ml解淀粉芽孢桿菌TJ發(fā)酵液滴到步驟(1)所得黃瓜苗B的子葉上，在白天28°C，晚上18°C條件下培養(yǎng)5天，得到黃瓜幼苗C，備用；
[0027](3)誘抗檢測
[0028]將病原真菌孢子懸浮液加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶液中，倒平板，晾干后在培養(yǎng)基中央放置牛津杯，將步驟(2)所得黃瓜幼苗C拔出組培瓶，將組培瓶中剩余的培養(yǎng)基混合均勻后置于牛津杯中，在27°C培養(yǎng)3天后觀測到抑菌圈，說明生防菌對黃瓜誘導抗病具有效果。通過試驗觀測到抑菌圈的直徑為5_，說明黃瓜幼苗根系分泌物抑菌能力較弱，誘抗物誘導抗病能力較弱。
[0029]實施例2
[0030]一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其步驟為:
[0031](I)無菌苗的培育:
[0032]取黃瓜種子用洗衣粉水清洗，用濃度為75%酒精浸泡100s，再用無菌水沖洗3次之后，將黃瓜種子在濃度為30%的次氯酸鈉溶液中浸泡15min，用無菌水沖洗4次，得到消毒后的黃瓜種子A,備用；
[0033]將上述消毒后的黃瓜種子A接種至滅菌后的組培瓶中，每瓶播種2粒，在白天28°C，晚上21°C條件下培養(yǎng)7天，得到子葉完全展開的黃瓜苗B，備用；[0034](2)葉片處理
[0035]用移液器取菌量為1011個/ml解淀粉芽孢桿菌TJ發(fā)酵液滴到步驟(1)所得黃瓜苗B的子葉上，在白天28°C，晚上21°C條件下培養(yǎng)9天，得到黃瓜幼苗C，備用；
[0036](3)誘抗檢測
[0037]將病原真菌孢子懸浮液加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶液中，倒平板，晾干后在培養(yǎng)基中央放置牛津杯，將步驟(2)所得黃瓜幼苗C拔出組培瓶，將組培瓶中剩余的培養(yǎng)基混合均勻后置于牛津杯中，在27°C培養(yǎng)4天后觀測到抑菌圈，說明生防菌對黃瓜誘導抗病具有效果。通過試驗觀測到抑菌圈的直徑為12_，說明黃瓜幼苗根系分泌物抑菌能力較強，誘抗物誘導抗病能力較強。
[0038]實施例3
[0039]一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其步驟為:
[0040](I)無菌苗的培育:
[0041]取黃瓜種子用洗衣粉水清洗，用濃度為75%酒精浸泡80s，再用無菌水沖洗3次之后，將黃瓜種子在濃度為30%的次氯酸鈉溶液中浸泡13min，用無菌水沖洗4次，得到消毒后的黃瓜種子A,備用；
[0042]將上述消毒后的黃瓜種子A接種至滅菌后的組培瓶中，每瓶播種3粒，在白天26°C，晚上20°C條件下培養(yǎng)6天，得到子葉完全展開的黃瓜苗B，備用；
[0043](2)葉片處理`
[0044]用移液器取菌量為IO9個/ml解淀粉芽孢桿菌TJ發(fā)酵液滴到步驟(1)所得黃瓜苗B的子葉上，在白天26°C，晚上20°C條件下培養(yǎng)6天，得到黃瓜幼苗C，備用；
[0045](3)誘抗檢測
[0046]將病原真菌孢子懸浮液加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶液中，倒平板，晾干后在培養(yǎng)基中央放置牛津杯，將步驟(2)所得黃瓜幼苗C拔出組培瓶，將組培瓶中剩余的培養(yǎng)基混合均勻后置于牛津杯中，在27°C培養(yǎng)4天后觀測到抑菌圈的直徑為17_，說明黃瓜幼苗根系分泌物抑菌能力強，誘抗物誘導抗病能力強。
[0047]實施例4
[0048]通過本定性檢測方法檢測生防菌對黃瓜誘導抗病效果試驗中，當觀測不到抑菌圈時，說明黃瓜幼苗根系分泌物無抑菌能力，生防菌不能誘導黃瓜產(chǎn)生抗病能力。
【權利要求】
1.一種生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其特征在于:該檢測方法步驟如下: (1)無菌苗的培育: 取黃瓜種子用洗衣粉水清洗，用濃度為75%酒精浸泡40-100S，再用無菌水沖洗3次之后，將黃瓜種子在濃度為30%的次氯酸鈉溶液中浸泡10-15min，用無菌水沖洗4次，得到消毒后的黃瓜種子A，備用； 將上述消毒后的黃瓜種子A接種至滅菌后的組培瓶中，每瓶播種2-3粒，在白天25-28°C，晚上18-21°C條件下培養(yǎng)5_10天，得到子葉完全展開的黃瓜苗B，備用； (2)葉片處理 用移液器取生防菌發(fā)酵液滴到步驟(1)所得黃瓜苗B的子葉上，在白天25-28°C，晚上18-21°C條件下培養(yǎng)5-7天，得到黃瓜幼苗C，備用； (3)誘抗檢測 將病原真菌孢子懸浮液加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶液中，倒平板，晾干后在培養(yǎng)基中央放置牛津杯，將步驟(2)所得黃瓜幼苗C拔出組培瓶，將組培瓶中剩余的培養(yǎng)基混合均勻后置于牛津杯中，在27°C培養(yǎng)3-4天后觀測到抑菌圈說明生防菌對黃瓜誘導抗病具有效果。
2.根據(jù)權利要求1所述的生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其特征在于:所述的步驟(1)中滅菌后的組培瓶中為MS培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權利要求1所述的生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其特征在于:所述的步驟(2)中生防菌發(fā)酵液的`菌量為IO8-1O11個/ml。
4.根據(jù)權利要求1所述的生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其特征在于:所述的步驟(3)中馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶液與病原真菌孢子懸浮液體積比為100:1。
5.根據(jù)權利要求1所述的生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其特征在于:所述的步驟(3)中病原真菌孢子懸浮液在10倍鏡下每個視野有40-60個孢子。
6.根據(jù)權利要求1所述的生防菌對黃瓜誘導抗病效果的定性檢測方法，其特征在于:所述的生防菌包括解淀粉芽孢桿菌TJ、枯草芽孢桿菌HJ和解淀粉芽孢桿菌YL。
【文檔編號】C12Q1/18GK103555814SQ201310535951
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月1日 優(yōu)先權日:2013年11月1日
【發(fā)明者】王遠宏, 李娟 , 常若葵, 徐明珠, 李云龍, 閻國榮, 李寧 申請人:天津農(nóng)學院