一種具有誘導(dǎo)抗性活性的細(xì)菌菌株及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及菌株領(lǐng)域，具體涉及一種具有誘導(dǎo)抗性活性的細(xì)菌菌株及其培養(yǎng)方法 和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物寄生線蟲在世界上許多國家和地區(qū)發(fā)生和為害，種類多種多樣。在全球范 圍內(nèi)，植物寄生線蟲的發(fā)生與危害隨著農(nóng)林業(yè)的發(fā)展和耕作栽培制度的變化日益嚴(yán)重，據(jù) Esser統(tǒng)計(jì)，到1990年為止全世界已報道發(fā)現(xiàn)植物寄生線蟲207屬4832種（劉維志，段玉 璽.2000.植物病原線蟲學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，P. 1-2)。據(jù)估計(jì)，植物寄生線蟲造成 世界主要農(nóng)作物的年損失率為12. 3%，超過1000億美元，而實(shí)際的損失遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過估計(jì)，理 由是許多線蟲造成的危害因沒有田間可見癥狀或?qū)；蕴卣鞫匆鹱⒁猓ㄍ鯄廴A.果 樹線蟲學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1994.P. 1-5)，此外，世界范圍內(nèi)對線蟲為害的新發(fā) 現(xiàn)還在不斷增加，而且一些更新的農(nóng)業(yè)栽培體制使線蟲問題更加突出，再者，線蟲與其它生 物相互作用而對植物產(chǎn)生的直接或間接影響還在急劇增加。從這種意義上說，線蟲造成的 危害較其它生物更加隱蔽！目前對植物有害的線蟲約有3000多種，在我國主要有胞囊線 蟲、松材線蟲、甘薯莖線蟲等。胞囊線蟲是農(nóng)業(yè)上為害最大的一類線蟲，病害發(fā)生后，一般 減產(chǎn)10 %左右，嚴(yán)重的高達(dá)75 %以上，甚至絕收（A.G.Whitehead，1998.PlantNematode Control.ISBN0851991882CABInternational)。目前，植物寄生線蟲的防治仍以化學(xué)防治 為主，但近年來，化學(xué)殺線劑的應(yīng)用浪費(fèi)大，污染環(huán)境，選擇性差，滅生性強(qiáng)，破壞土壤生物 區(qū)系等弊端日益為人們所重視（張克勤，何世川，周薇等.1991.細(xì)菌和細(xì)菌在線蟲生防中 的作用及其研究進(jìn)展.殺蟲微生物.3 :55-66)，21世紀(jì)稱為環(huán)保世紀(jì)，一些有效的化學(xué)殺 線劑的應(yīng)用逐步受到限制，因此對植物寄生線蟲的生物防治研究自然成為熱點(diǎn)問題。已報 道的可防治植物寄生線蟲的生防細(xì)菌主要類群有：Bacillius，Pseudomonas，Acinebacter， Chromobacterium，Enterobacter，Serratia，Burkholderia等，其中以Bacillus和 Pseudomonas中的種類最多。過去對蘇云金芽孢桿菌的生防作用一般都是利用BT毒蛋白對 昆蟲的生物防治，直接對線蟲有殺死活性的研究也有類似報道，而對于處理植物種子產(chǎn)生 誘導(dǎo)抗性防御病害報道的很少，而對于利用蘇云金芽孢桿菌處理大豆種子誘導(dǎo)大豆植株根 系產(chǎn)生抗植物線蟲的研究和發(fā)明均未見報道。如何利用菌株的代謝物誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性， 激發(fā)植物的免疫系統(tǒng)，是本發(fā)明關(guān)注的關(guān)鍵。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對上述問題，本發(fā)明通過系統(tǒng)篩選獲得一株蘇云金芽孢桿菌，利用該菌或該菌 的代謝產(chǎn)物處理大豆種子，可誘導(dǎo)大豆在種子萌發(fā)和生長期間產(chǎn)生對大豆胞囊線蟲的抗 性，從而為解決了大豆胞囊線蟲病害的問題提供了新的途徑。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0005] -種具有誘導(dǎo)抗性活性的細(xì)菌菌株，所述菌株為蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringiensisSneb1076,保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心； 地址：中國.北京.朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；保藏日期：2015年5月21日；保藏登記入 冊的編號：CGMCCNo. 10831。B.thuringiensisSneb1076是從大量土壤細(xì)菌菌株中篩選 出的一株對大豆胞囊線蟲具有良好誘導(dǎo)抗性的細(xì)菌菌株。
[0006] 上述一種具有誘導(dǎo)抗性活性的細(xì)菌菌株的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：
[0007] S1、按質(zhì)量百分比稱取：酵母浸膏0. 1% -0.2%、蛋白胨0.5% -0.6%、牛肉浸膏 0. 3 % -0. 4%、蔗糖1 % -2 %，余下為蒸餾水，混合后，得液體培養(yǎng)基；
[0008] S2、將步驟S1所得的液體培養(yǎng)基按每瓶150mL的比例分裝于250mL的三角 瓶內(nèi)，分裝完成后將菌種接種到液體培養(yǎng)基中，PH6. 8-7. 0,溫度為25-28°C，搖床轉(zhuǎn)速 150r?min\發(fā)酵2-3d，得可用于誘導(dǎo)大豆產(chǎn)生抗大豆胞囊線蟲抗性的細(xì)菌代謝物。
[0009] 上述一種具有誘導(dǎo)抗性活性的細(xì)菌菌株可用于制備植物寄生線蟲生物防治誘導(dǎo) 抗性制劑。所述誘導(dǎo)抗性制劑包含有效量的上述蘇云金芽孢桿菌（B.thuringiensise)或 步驟S2所得的代謝產(chǎn)物。
[0010] 其中，所述的植物寄生線蟲為胞囊線蟲（Soybeancystnematode)。
[0011] 本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，從土壤中篩選出多株具有誘導(dǎo)大豆抗大豆胞囊線蟲的細(xì)菌 菌株，其中蘇云金芽孢桿菌（B.thuringiensise)Snebl076防效較好，且相對穩(wěn)定。
[0012] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0013] 本發(fā)明的蘇云金芽孢桿菌（B.thuringiensise)Snebl076或其代謝物具有對大豆 的誘導(dǎo)活性，可用于大豆的種子處理，不僅可促進(jìn)大豆植株和根部的生長，同時對大豆胞囊 線蟲胞囊的形成具有較好的抑制作用，為大豆胞囊線蟲防治提供一個新途徑。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步 詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0015] 實(shí)施例1
[0016] 蘇云金芽抱桿菌（B.thuringiensise)Snebl076 的培養(yǎng)
[0017] 將蘇云金芽孢桿菌（B.thuringiensise)Snebl076的菌株接種到試管培養(yǎng)基上， 培養(yǎng)基配方為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，即成分：牛肉浸膏3g，酵母浸膏l(xiāng)g，蛋白胨10g，蔗糖 l〇g，瓊脂17_20g，加蒸餾水至1000mL。28°C培養(yǎng)3d，獲得試管種。
[0018] 再將試管種接種到250mL三角瓶（每瓶裝150mL)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方為： 以重量百分比計(jì)，酵母浸膏〇. 1% _〇. 2%、蛋白胨0. 5% -0.6%、牛肉浸膏0. 3% -0.4%、蔗 糖1% -2%，余下為蒸餾水，pH為6. 8-7. 0,發(fā)酵溫度為25-28°C，搖床轉(zhuǎn)速150r?min\發(fā) 酵時間2-3d。形成的發(fā)酵液或發(fā)酵液的制成品可以直接或間接處理大豆種子。被處理的大 豆種子可以減輕由大豆胞囊線蟲病害所造成的危害。
[0019] 實(shí)施例2
[0020] 蘇云金芽孢桿菌（B.thuringiensise)Snebl076發(fā)酵產(chǎn)品防治大豆胞囊線蟲田間 效果試驗(yàn)
[0021] 本試驗(yàn)分別在遼寧省沈陽市沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)田，遼寧省沈陽市康平市試驗(yàn)田 和黑龍江省大慶市農(nóng)科院試驗(yàn)田進(jìn)行田間效果試驗(yàn)。將制備好的發(fā)酵液原液，采用液種 1