專利名稱：液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備生物農(nóng)藥的方法，尤其涉及ー種液體發(fā)酵制備木霉菌生物農(nóng)藥的方法。
背景技術(shù)：
二十世紀(jì)八十年代以來，我國蔬菜種植業(yè)迅猛發(fā)展，種植面積由1980年的316萬公頃增長到2008年的1787萬公頃。蔬菜多為連年種植，從而導(dǎo)致某些病害的病原菌大量積累，加上大棚種植的推廣，給蔬菜病害的發(fā)生、發(fā)展提供了適宜的條件。一些土傳性病害，如黃瓜枯萎病、茄子黃萎病和青椒疫病等，會(huì)導(dǎo)致作物減產(chǎn)30%、甚至絕產(chǎn)。長期以來，在蔬菜病害防治方面，化學(xué)農(nóng)藥由于其見效快，殺菌譜等特點(diǎn)，在病害 防治中占據(jù)了主要位置。但是長期大量使用化學(xué)農(nóng)藥會(huì)導(dǎo)致土壌中有益微生物群落減少，破壞生物群落結(jié)構(gòu)，造成環(huán)境污染，并導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性和抗藥性，從而化學(xué)農(nóng)藥用量逐年増加，帶來更加嚴(yán)重的環(huán)境問題，以至于許多化學(xué)農(nóng)藥被禁用或即將被禁用。利用生物防治的方法防治蔬菜病害不僅避免了化學(xué)農(nóng)藥帶來的一系列問題，而且安全、有效和持久，不容易使病原菌產(chǎn)生抗藥性，對(duì)人畜安全無毒，不污染環(huán)境，無殘留。隨著人們對(duì)生態(tài)環(huán)境和自身健康的日益關(guān)注，生物農(nóng)藥將逐步取代傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥，成為防治蔬菜病害的主要產(chǎn)品。如專利KR20090035368A公開的預(yù)防大白菜根腫病的芽孢桿菌組合物，專利KR100896041B1公開的預(yù)防番茄和馬鈴薯枯萎病的葡萄球菌組合物，專利KR100890013B1公開的能夠殺滅南瓜疫病菌的枯草芽孢桿菌組合物，專利HU225133B1公開的Erwinia anylovora ATCC15580菌株用于預(yù)防植物病原菌和昆蟲的危害。木霉菌(Trichoderma spp.)是ー種分布廣泛的土壤習(xí)居菌,具有對(duì)植物病原菌真菌的拮抗作用，可利用各種簡單或復(fù)雜的碳源和氮源，甚至具有轉(zhuǎn)化和降解ー些有害或持久存在的污染物的能力。木霉菌能夠夠產(chǎn)生多種拮抗作用，如競爭作用、重寄生作用、產(chǎn)生抗生物質(zhì)和溶菌酶類、促進(jìn)植物生長等，是ー種廣譜性生防菌，尤其適用于防治土傳疾病，如專利CNlO 1861879A公開的木霉菌分生孢子可濕性粉劑，另外國外已有商品化的木霉菌制劑，如美國TopShield (主要成分哈茨木霉T22)，以色列Trichodex (主要成分為哈茨木霉T39)。目前國內(nèi)木霉菌生產(chǎn)エ藝主要以固體發(fā)酵為主，專利CN101024816B公開的木霉菌分生孢子粉塵劑的制備方法，采用麥麩、秸桿粉或玉米渣、稻殼等制成培養(yǎng)基；專利CN101485336A公開的防治作物土傳病害的木霉菌制劑，采用谷殼、玉米粉和麥麩制成培養(yǎng)基；專利CN101565688A公開的木霉孢子菌劑，采用農(nóng)副產(chǎn)品和磷肥等組成培養(yǎng)基；專利CN101195807A公開的木霉菌突變株分生孢子的固體發(fā)酵方法,也是米用固體發(fā)酵的方式；王英姿等在《緑色木霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化組合正交篩選》(植物保護(hù)，2007年第33卷第2期，61飛3頁)一文中利用廉價(jià)農(nóng)副產(chǎn)品為原料進(jìn)行固體發(fā)酵，并進(jìn)行正交試驗(yàn)篩選出最佳組合配方。但是固體發(fā)酵エ藝繁瑣，工作量大，不利于エ業(yè)上大規(guī)模生產(chǎn)。雖然目前也有關(guān)于單菌液體深層發(fā)酵的報(bào)道，但主要以生產(chǎn)分生孢子為主，如專利CN101671625A公開的液體深層發(fā)酵方法和裝置。但是分生孢子保存期較短，導(dǎo)致產(chǎn)品貨架期短；同時(shí)由于受到培養(yǎng)液等條件限制，使得通常的發(fā)酵罐液體深層培養(yǎng)發(fā)酵條件下，不具備產(chǎn)孢條件。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了ー種液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)菌種或菌株同時(shí)發(fā)酵，生產(chǎn)厚垣孢子的活性孢子粉，相對(duì)于固體發(fā)酵，本發(fā)明エ藝簡單、設(shè)備投資?。幌鄬?duì)于液體發(fā)酵的現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)的分生孢子，本發(fā)明產(chǎn)品貨架期長；而且多個(gè)菌種或菌株同時(shí)發(fā)酵制備的產(chǎn)品，應(yīng)用范圍更廣。本發(fā)明液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，步驟包括
步驟I，菌種接種于培養(yǎng)基(如PDA固體培養(yǎng)基)中，恒溫培養(yǎng)；
步驟2，將培養(yǎng)后的菌種轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液；
步驟3，發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌，然后將步驟2中得到的分生孢子液倒入發(fā)酵罐中，加壓通入無菌空氣，進(jìn)行發(fā)酵，得到厚垣孢子；
步驟4，厚垣孢子發(fā)酵液中加入硅藻土，攪拌均勻，過濾得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。本發(fā)明還提供了ー種多菌種同時(shí)發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，步驟如下
步驟1，測定各種菌種的生長速度和相容性，并選擇相容性好和生長速度相同或相近的菌種；
步驟2，各種菌種分別接種于培養(yǎng)基(如PDA固體培養(yǎng)基)中，恒溫培養(yǎng)；
步驟3，將選擇的菌種分別轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液；
步驟4，發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌，然后將步驟2中得到的分生孢子液倒入發(fā)酵罐中混合均勻，加壓通入無菌空氣，進(jìn)行發(fā)酵，得到厚垣孢子；
步驟5，厚垣孢子發(fā)酵液中加入硅藻土，攪拌均勻，過濾得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。其中，本發(fā)明所述“多菌種”指的是不同的多個(gè)菌種或同一菌種的多個(gè)不同菌株，所述“相容性好”和“生長速度相同或相近”的含義對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來講是明確的。本發(fā)明步驟I中所述“培養(yǎng)基”和步驟2、3中所述“培養(yǎng)液”，在沒有特別說明的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)不同菌種采用現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行選擇和配制。優(yōu)選地，本發(fā)明所述培養(yǎng)液組分包括蠶豆粉、葡萄糖、酵母提取物、混合果蔬汁；具體地，所述培養(yǎng)液優(yōu)選為
蠶豆粉2wt% ；
葡萄糖0. 2wt% ；
酵母提取物 0. 4wt% ；
混合物果蔬汁3wt% ； pH 值7.5。其中，所述混合果蔬汁為市場采購水果和蔬菜采用現(xiàn)有技術(shù)在不加水的條件下進(jìn)行榨汁得到。根據(jù)本發(fā)明所述方法的ー種優(yōu)選實(shí)施方式，采用擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和綠色木霉菌作為菌種進(jìn)行發(fā)酵制備生物農(nóng)藥，步驟如下
步驟1，擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和緑色木霉菌分別接種于土豆汁培養(yǎng)基，所述土豆汁培養(yǎng)基組分包括
土豆汁20wt% ；
葡萄糖0. 2wt% ；
瓊脂1.8wt%。
25 30°C條件下恒溫培養(yǎng)3飛天，觀察三個(gè)菌種的相容性和生長速度，三個(gè)菌種相容性和生長速度符合生產(chǎn)要求，進(jìn)行下ー步驟；
步驟2，擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和緑色木霉菌按照步驟I所述方法進(jìn)行培養(yǎng)；
步驟3，將三個(gè)菌種分別轉(zhuǎn)移至裝有本發(fā)明上述培養(yǎng)液的搖瓶中，25 30°C和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下培養(yǎng)，獲得分生孢子液；
步驟4，發(fā)酵罐中投入本發(fā)明上述培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌；發(fā)酵罐保持正壓降溫至25 30°C，倒入步驟3獲得的三個(gè)菌種的分生孢子液進(jìn)行混合；25 30°C、0. 4^0. 5kg壓力、180(T3500L/h空氣流量和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵獲得厚垣孢子；
步驟4，厚垣孢子粉與硅藻土混合均勻，過濾分離得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述硅藻土厚垣孢子混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。步驟I中測定各種菌種的生長速度和相容性的方法優(yōu)選為哈茨木霉，緑色木霉菌和擬康氏木霉菌采用點(diǎn)接法均勻的接種到土豆汁培養(yǎng)基培養(yǎng)皿的四周，在25-28°C條件下培養(yǎng)3-5天以后觀察三個(gè)不同菌種的相容性。步驟2中所述培養(yǎng)方法具體優(yōu)選為將擬康氏木霉，哈茨木霉和綠色木霉在無菌條件下分別接種在所述土豆汁培養(yǎng)基茄形培養(yǎng)瓶內(nèi)，塞上無菌棉花塞，然后將茄形培養(yǎng)瓶放入恒溫培養(yǎng)箱中，在25-28°C條件下培養(yǎng)3-5天。步驟3所述搖瓶培養(yǎng)方法優(yōu)選為將擬康氏木霉，哈茨木霉和綠色木霉在無菌條件下分別轉(zhuǎn)移至裝有300ml所述培養(yǎng)液的IL搖瓶中，將所述搖瓶放在搖床上，26 28°C、180rpm轉(zhuǎn)速條件下培養(yǎng)3天。根據(jù)本發(fā)明所述方法的一種更優(yōu)選實(shí)施方式，步驟如下
步驟1，測定各種菌種的生長速度和相容性，具體操作可參照上述方法；
步驟2，按照上述培養(yǎng)方法培養(yǎng)菌種；
步驟3，按照上述搖瓶培養(yǎng)方法進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液(即ー級(jí)種子)；
步驟4，配制所述培養(yǎng)液，并投入中級(jí)發(fā)酵罐中，高溫高壓滅菌；發(fā)酵罐保持正壓，冷卻至25 30°C，倒入步驟3得到的三個(gè)菌種的分生孢子液進(jìn)行混合，25 30°C、0. 4^0. 5kg壓力、180(T2100L/h空氣流量和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵，得到ニ級(jí)種子；
步驟5，配制所述培養(yǎng)液，并投入大體積發(fā)酵罐中，高溫高壓滅菌，發(fā)酵罐保持正壓，冷卻至25 30で，將步驟4中得到的ニ級(jí)種子轉(zhuǎn)移至所述大體積發(fā)酵罐，25 30°C、0. 4^0. 5kg壓力、36 42m3/h空氣流量和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵，獲得厚垣孢子；
步驟6，厚垣孢子粉與硅藻土混合均勻，過濾分離得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述硅藻土厚垣孢子混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。其中，上述中級(jí)發(fā)酵罐指的是大于IL而小于I噸規(guī)格的發(fā)酵罐，大體積發(fā)酵罐指的是大于等于I噸規(guī)格的發(fā)酵罐，所述規(guī)格為本技術(shù)領(lǐng)域公知常識(shí)。步驟4中所述中級(jí)發(fā)酵罐發(fā)酵方法優(yōu)選為65L所述培養(yǎng)液投入100L規(guī)格的發(fā)酵罐中，高溫高壓滅菌；發(fā)酵罐保持正壓，冷卻至28°C，倒入步驟3得到的三個(gè)菌種的分生孢子液進(jìn)行混合，28±0. 5°C、0. 4 0. 5kg壓力、180(T2100L/h空氣流量和185rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵，得到ニ級(jí)種子。步驟5中所述大體積發(fā)酵罐發(fā)酵方法優(yōu)選為1200L所述培養(yǎng)液投入2噸規(guī)格的發(fā)酵罐中，高溫高壓滅菌；發(fā)酵罐保持正壓，冷卻至28°C，將步驟4中得到的ニ級(jí)種子轉(zhuǎn)移至所述大體積發(fā)酵罐，28±0. 5°C、0. 4^0. 5kg壓力、36 42m3/h空氣流量和185rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵，獲得厚垣孢子。上述方法中所述高溫高壓滅菌優(yōu)選為121°C溫度、15磅壓カ下滅菌25分鐘。 上述方法中，優(yōu)選地，所述高溫高壓滅菌前，向所述發(fā)酵罐內(nèi)投入消泡劑，所述100L規(guī)格發(fā)酵罐中消泡劑加入體積優(yōu)選為100ml，所述2噸規(guī)格發(fā)酵罐中消泡劑加入體積優(yōu)選為1000ml。上述方法中所述硅藻土顆粒大小優(yōu)選為700目，所述硅藻土與所述厚垣孢子體積比優(yōu)選為1:1。上述方法中所述過濾優(yōu)選為采用板框壓濾機(jī)過濾分離。上述方法中所述硅藻土厚垣孢子混合物干燥溫度優(yōu)選為35°C。本發(fā)明提供了ー種液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，エ藝簡單、設(shè)備投資??；本發(fā)明還提供了一種多菌種同時(shí)液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，產(chǎn)品應(yīng)用范圍更為廣泛。本發(fā)明還提供了ー種上述液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法制備的生物農(nóng)藥，所述生物農(nóng)藥生物活性成分為厚垣孢子，如擬康氏木霉厚垣孢子、哈茨木霉厚垣孢子和緑色木霉厚垣孢子中的ー種或任意幾種的混合物。同時(shí)本發(fā)明提供了一種新的液體發(fā)酵培養(yǎng)液，采用常見的蠶豆、水果和蔬菜為原料，成本低，制備簡單，而且解決了傳統(tǒng)液體深層發(fā)酵無法形成孢子的難題。本發(fā)明上述制備生物農(nóng)藥的方法，產(chǎn)品為活性厚垣孢子粉，抵御外界不良環(huán)境能力強(qiáng)，壽命長，因此可長時(shí)間儲(chǔ)存，貨架期長。
具體實(shí)施例方式首先，本發(fā)明提供了ー種液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，步驟如下 步驟I，菌種接種于培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)；
步驟2，將培養(yǎng)后的菌種轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液；
步驟3，發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌，然后將步驟2中得到的分生孢子液倒入發(fā)酵罐中，加壓通入無菌空氣，進(jìn)行發(fā)酵，得到厚垣孢子；
步驟4，厚垣孢子發(fā)酵液中加入硅藻土，攪拌均勻，過濾得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。其次，本發(fā)明還提供了一種多菌種同時(shí)液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，步驟如下
步驟1，測定各種菌種的生長速度和相容性，并選擇相容性好和生長速度相同或相近的菌種；
步驟2，各種菌種分別接種于培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)；
步驟2，將選擇的菌種分別轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液；
步驟3，發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌，然后將步驟2中得到的分生孢子液倒入發(fā)酵罐中混合均勻，加壓通入無菌空氣，進(jìn)行發(fā)酵，得到厚垣孢子；
步驟4，厚垣孢子發(fā)酵液中加入硅藻土，攪拌均勻，過濾得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。優(yōu)選地，上述方法中所述培養(yǎng)液組分包括蠶豆粉、葡萄糖、酵母提取物、混合物果蔬汁。下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明上述方法進(jìn)行詳細(xì)介紹和描述，以使更好的理解本發(fā)明，但是下述具體實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。實(shí)施例I
哈茨木霉菌無菌條件下接種于裝有土豆汁培養(yǎng)基的茄形培養(yǎng)瓶內(nèi)，塞上無菌棉花塞，然后將茄形培養(yǎng)瓶放入恒溫培養(yǎng)箱中，在25 28°C條件下培養(yǎng)3-5天。土豆汁培養(yǎng)基主要組分如下
權(quán)利要求
1.ー種液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，其特征在于，包括如下步驟 步驟I，菌種接種于培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)； 步驟2，將培養(yǎng)后的菌種轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液； 步驟3，發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌，然后將步驟2中得到的分生孢子液倒入發(fā)酵罐中，加壓通入無菌空氣，進(jìn)行發(fā)酵，得到厚垣孢子； 步驟4，厚垣孢子發(fā)酵液中加入硅藻土，攪拌均勻，過濾得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉； 其中，步驟2和3中所述培養(yǎng)液pH值為7. 5，且組分包括 蠶豆粉2wt% ； 葡萄糖0. 2wt% ； 酵母提取物 0. 4wt% ； 混合物果蔬汁3wt%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述菌種為擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌或綠色木霉菌。
3.ー種多菌種同時(shí)發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，其特征在于，包括如下步驟 步驟1，測定各種菌種的生長速度和相容性，并選擇相容性好和生長速度相同或相近的菌種； 步驟2，各種菌種分別接種于培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)； 步驟3，將選擇的菌種分別轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，得到分生孢子液； 步驟4，發(fā)酵罐中投入培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌，然后將步驟2中得到的分生孢子液倒入發(fā)酵罐中混合均勻，加壓通入無菌空氣，進(jìn)行發(fā)酵，得到厚垣孢子； 步驟5，厚垣孢子發(fā)酵液中加入硅藻土，攪拌均勻，過濾得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉； 其中，步驟3 4中所述培養(yǎng)液pH值為7. 5，且組分包括 蠶豆粉2wt% ； 葡萄糖0. 2wt% ； 酵母提取物 0. 4wt% ； 混合物果蔬汁3wt%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述菌種為擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和綠色木霉菌的任意混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，包括如下步驟 步驟1，擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和緑色木霉菌分別接種于土豆汁培養(yǎng)基，所述土豆汁培養(yǎng)基組分包括 土豆汁20wt% ； 葡萄糖0. 2wt% ； 瓊脂1.8wt%。
6.25 30°C條件下恒溫培養(yǎng)3飛天，觀察三個(gè)菌種的相容性和生長速度，進(jìn)行下一歩驟； 步驟2，擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和緑色木霉菌按照步驟I所述方法進(jìn)行培養(yǎng)；步驟3，將三個(gè)菌種分別轉(zhuǎn)移至裝有所述培養(yǎng)液的搖瓶中，25 30°C和18(T 185rpm轉(zhuǎn)速條件下培養(yǎng)，獲得分生孢子液； 步驟4，發(fā)酵罐中投入所述培養(yǎng)液，高溫高壓滅菌；發(fā)酵罐保持正壓降溫至25 30°C，倒入步驟3獲得的三個(gè)菌種的分生孢子液進(jìn)行混合；25 30°C、0. 4^0. 5kg壓力、36 42m3/h空氣流量和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵獲得厚垣孢子； 步驟4，厚垣孢子粉與硅藻土混合均勻，過濾分離得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述硅藻土厚垣孢子混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉； 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，包括如下步驟 步驟1，擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和緑色木霉菌分別接種于所述土豆汁培養(yǎng)基，25 30°C條件下恒溫培養(yǎng)3飛天，觀察三個(gè)菌種的相容性和生長速度，進(jìn)行下ー步驟； 步驟2，擬康氏木霉菌、哈茨木霉菌和緑色木霉菌按照步驟I所述方法進(jìn)行培養(yǎng)； 步驟3，將三個(gè)菌種分別轉(zhuǎn)移至裝有所述培養(yǎng)液的搖瓶中，25 30°C和18(T 185rpm轉(zhuǎn)速條件下培養(yǎng)，獲得分生孢子液； 步驟4，所述培養(yǎng)液投入中級(jí)發(fā)酵罐中，高溫高壓滅菌；發(fā)酵罐保持正壓，冷卻至25 30°C，倒入步驟3得到的三個(gè)菌種的分生孢子液進(jìn)行混合，25 30°C、0. 4^0. 5kg壓力、180(T2100L/h空氣流量和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵，得到ニ級(jí)種子； 步驟5，所述培養(yǎng)液投入大體積發(fā)酵罐中，高溫高壓滅菌，發(fā)酵罐保持正壓，冷卻至25 30°C，將步驟4中得到的ニ級(jí)種子轉(zhuǎn)移至所述大體積發(fā)酵罐，25 30°C、0. 4^0. 5kg壓力、36 42mVh空氣流量和18(Tl85rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵，獲得厚垣孢子； 步驟6，厚垣孢子粉與硅藻土混合均勻，過濾分離得到硅藻土厚垣孢子混合物，所述硅藻土厚垣孢子混合物經(jīng)過干燥粉碎得到活性厚垣孢子粉。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述硅藻土與所述厚垣孢子混合物體積比為1:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述硅藻土厚垣孢子混合物干燥溫度為 35。。。
9.一種如權(quán)利要求I或3所述方法制備的生物農(nóng)藥，其特征在于，所述生物農(nóng)藥活性成分為厚垣孢子。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種液體發(fā)酵制備生物農(nóng)藥的方法，所用液體發(fā)酵培養(yǎng)液包括蠶豆粉、混合果蔬汁、葡萄糖和酵母提取物。采用本發(fā)明方法和培養(yǎng)液制備的產(chǎn)品為活性厚垣孢子粉，貨架期長；而且本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)多菌種同時(shí)液體發(fā)酵，因此產(chǎn)品應(yīng)用范圍更為廣泛。
文檔編號(hào)C12R1/885GK102648714SQ20111004451
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月24日
發(fā)明者張鈺, 曠文豐, 毛偉力, 王軍, 王承芳 申請人:上海萬力華生物科技有限公司