專利名稱：一種霍山石斛的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及一種組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種石斛的組織培養(yǎng)方法。使組培苗提前走出組培室，進(jìn)入陽光大棚，人工“馴化”。比正常組培苗早6-8個(gè)月進(jìn)入栽培基地。
背景技術(shù)：
霍山石斛為蘭科多年生附生草本植物。形曲不直，似蚱蜢髀，是石斛中的極品。為我縣獨(dú)有，擁有原產(chǎn)地地理保護(hù)標(biāo)志和瀕臨滅絕的國家級(jí)珍惜名貴中藥材，是國家野生中藥材二級(jí)保護(hù)品種，有“植物大熊貓”之稱。《本草綱目》記載:石斛生于懸崖峭壁之間、性微寒，有養(yǎng)胃生津、滋陰除熱、補(bǔ)腎益精、明目之功效。以之代茶可開胃健脾。霍山石斛具有益精填髓、補(bǔ)五臟內(nèi)絕不足，平胃氣、長肌肉、益智除煩、清虛熱、輕身延年之功效。清趙學(xué)敏、趙學(xué)凱《本草綱目拾遺》《百草經(jīng)》語曰:石斛近時(shí)有一種形短祗寸許細(xì)如燈芯，色青黃、嚼之味甘，微有滑涎。系出六安穎州府霍山縣是名霍山石斛最佳……經(jīng)中國科技大學(xué)和中山醫(yī)科大學(xué)研究證明:霍山石斛具有增強(qiáng)T細(xì)胞B細(xì)胞WK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的作用。對(duì)抑制腫瘤和降血糖有非常好的療效。可促進(jìn)血液循環(huán)，增強(qiáng)心臟功能，促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)增強(qiáng)消化功能。顯著提高人體的sop (超氧岐化酶)水平。降低LPO (過氧化脂質(zhì))，起到顯著的抗衰老作用。藥用石斛有50種之多，品質(zhì)最佳的是霍山石斛，為石斛中的珍品，野生石斛與黃金等價(jià)。 石斛喜陰涼濕潤環(huán)境，常附生于陰涼濕潤的樹上和巖石上。喜風(fēng)，又有“風(fēng)大貫”之稱。尤其是半陰半陽的地方，附生有苔蘚植被石灰?guī)r石上和樹上最好。其生長條件苛刻，石斛種子細(xì)小，不具胚乳(供幼苗生長的物質(zhì))，在自然狀態(tài)下，發(fā)芽率很低，成苗更難。20世紀(jì)40年代kundson介紹了簡便萌發(fā)蘭花種子的培養(yǎng)基。為石斛種子培育試管苗奠定了基礎(chǔ)。但石斛組織培養(yǎng)試管苗工作大多起步于20世紀(jì)70年代末至80年代初。20世紀(jì)90年代，國內(nèi)許多教育科研植物園等單位均開展此項(xiàng)研究工作，發(fā)展很快。至90年代末組織培養(yǎng)試管苗移栽大田成活率已達(dá)95%以上。本發(fā)明人在石斛組織培養(yǎng)中，利用不同生長期用不同的生長物質(zhì)和特殊試管苗馴化手段使試管苗提前約6個(gè)月進(jìn)入種植基地。既節(jié)約了資源又優(yōu)化了試管苗品質(zhì)。安徽省霍山縣地處我省西部偏南，大別山北麓。介于北緯33° 03’-31° 33’，東經(jīng)115° 52’-116° 32’之間。平均海拔500米，屬亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)。四季分明，雨量充沛，年平均氣溫14.2°C -16.1 °C，最冷月平均氣溫2 °C，最熱月平均氣溫27.8 °C。年降水量1100-1600mm,絕對(duì)濕度年平均15.6mb,常年相對(duì)濕度80%，全年> 80%天數(shù)200天左右。無霜期為220-270天，無霜期長。自然環(huán)境優(yōu)美，是霍山石斛品質(zhì)形成的重要條件。野外栽培的石斛培產(chǎn)量低，受自然因素控制，收成受氣候影響大，病蟲害嚴(yán)重且難以防治；大棚種植的石斛品質(zhì)又得不到保證，因此先對(duì)石斛進(jìn)行組織培養(yǎng)，然后再在自然環(huán)境下種植生長，可以提高石斛的產(chǎn)量和品質(zhì)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的就是為了提供一種霍山石斛的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種霍山石斛的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)取石斛種子，于4-6°C的低溫條件下保存10-15天；
(2)將保存的種子取出，用酒精消毒后，加入到培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)40-50天，期間種子會(huì)萌發(fā)生芽；
所述的培養(yǎng)基A，每升培養(yǎng)基A中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、南瓜粉 5000-6000、瓊脂 7000-9000、硝酸鉀1500-2000、硝酸銨 1500-1800、硝酸鈉 1000-1200、磷酸二氫鉀 150-200、硫酸鎂 300-400、氯化鈣400-500、碘化鉀0.8-1、煙酸0.5-1、硼酸5_10、硫酸錳20-30、硫酸鋅8_10、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉 20-30 ；
(3)將生芽的種子幼苗加入到培養(yǎng)基B中添加微肥進(jìn)行培養(yǎng)70-80天，期間保持環(huán)境溫度為20-30°C，直至種子幼苗長大到高度為1.2-2厘米；
所述的培養(yǎng)基B，每升培養(yǎng)基B中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖15000-20000、蛋白胨3000-4000、大豆蛋白粉5000-6000、瓊脂7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣400-500、硫酸鎂10-20、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2-4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鑰酸鈉0.01-0.02 ；
(4)將上述長大的幼苗加入到培養(yǎng)基C中添加微肥進(jìn)行培養(yǎng)95-110天，得到成品苗； 所述的培養(yǎng)基C，每升培養(yǎng) 基C中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、脫脂奶粉 15000-20000、酵母粉 7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣400-500、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2_4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鹽酸硫胺素0.1-0.5、鑰酸鈉 0.01-0.02 ；
(5)將得到的成品苗在陽光大棚中人工培養(yǎng)90-100天，即可進(jìn)行常規(guī)種植。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
本發(fā)明提供的石斛組織培養(yǎng)方法，解決了霍山石斛野外栽培產(chǎn)量低，受自然因素控制，靠天收，病蟲害防治難、大棚種植的品質(zhì)低等缺陷，因?yàn)槭鷮?duì)于生產(chǎn)環(huán)境條件要求苛刻，通過組織培養(yǎng)，節(jié)約了土地資源，保持了石斛的優(yōu)良特性，提高了種植成活率。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
一種霍山石斛的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)取石斛種子，于6°c的低溫條件下保存15天；
(2)將保存的種子取出，用酒精消毒后，加入到培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)50天，期間種子會(huì)萌發(fā)生芽；
所述的培養(yǎng)基A，每升培養(yǎng)基A中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖20000、蛋白胨4000、南瓜粉6000、瓊脂9000、硝酸鉀2000、硝酸銨1800、硝酸鈉1200、磷酸二氫鉀200、硫酸鎂400、氯化鈣500、碘化鉀0.8、煙酸0.5_1、硼酸10、硫酸錳30、硫酸鋅8-10、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉30 ；(3)將生芽的種子幼苗加入到培養(yǎng)基B中進(jìn)行培養(yǎng)80天，期間保持環(huán)境溫度為30°C，直至種子幼苗長大到高度為1.2厘米；
所述的培養(yǎng)基B，每升培養(yǎng)基B添加微肥中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖20000、蛋白胨4000、大豆蛋白粉6000、瓊脂9000、硝酸鉀2000、氯化鈣500、硫酸鎂20、肌醇100、硫酸銅0.02、甘氨酸4、活性炭600、鹽酸吡哆醇0.5、硫酸亞鐵30、EDTA 二鈉30、鑰酸鈉0.02 ；
(4) 將上述長大的幼苗加入到培養(yǎng)基C中添加微肥進(jìn)行培養(yǎng)110天，得到成品苗； 所述的培養(yǎng)基C，每升培養(yǎng)基C中所含原料的重量(mg)為:
蔗糖20000、蛋白胨4000、脫脂奶粉20000、酵母粉9000、硝酸鉀2000、氯化鈣500、肌醇100、硫酸銅0.02、甘氨酸4、活性炭600、鹽酸吡哆醇0.5、硫酸亞鐵30、EDTA 二鈉30、鹽酸硫胺素0.5、鑰酸鈉0.02 ；
(5)將得到的成品苗在陽光大棚中人工培養(yǎng)100天，即可進(jìn)行常規(guī)種植。
權(quán)利要求
1.一種霍山石斛的組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括以下步驟: (1)取石斛種子，于4-6°C的低溫條件下保存10-15天； (2)將保存的種子取出，用酒精消毒后，加入到培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)40-50天，期間種子會(huì)萌發(fā)生芽； 所述的培養(yǎng)基A，每升培養(yǎng)基A中所含原料的重量(mg)為: 蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、南瓜粉 5000-6000、瓊脂 7000-9000、硝酸鉀1500-2000、硝酸銨 1500-1800、硝酸鈉 1000-1200、磷酸二氫鉀 150-200、硫酸鎂 300-400、氯化鈣400-500、碘化鉀0.8-1、煙酸0.5-1、硼酸5_10、硫酸錳20-30、硫酸鋅8_10、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉 20-30 ； (3)將生芽的種子幼苗加入到培養(yǎng)基B中添加微肥培養(yǎng)70-80天，期間保持環(huán)境溫度為20-30°C，直至種子幼苗長大到高度為1.2-2厘米； 所述的培養(yǎng)基B，每升培養(yǎng)基B中所含原料的重量(mg)為: 蔗糖15000-20000、蛋白胨3000-4000、大豆蛋白粉5000-6000、瓊脂7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣400-500、硫酸鎂10-20、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2-4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鑰酸鈉0.01-0.02 ； (4)將上述長大的幼苗加入到培養(yǎng)基C中添加微肥進(jìn)行培養(yǎng)95-110天，得到成品苗； 所述的培養(yǎng)基C，每升培養(yǎng)基C中所含原料的重量(mg)為: 蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、脫脂奶粉 15000-20000、酵母粉 7000-9000、硝酸鉀1000-2000、氯化鈣4 00-500、肌醇90-100、硫酸銅0.01-0.02、甘氨酸2_4、活性炭400-600、鹽酸吡哆醇0.5-1、硫酸亞鐵20-30、EDTA 二鈉20-30、鹽酸硫胺素0.1-0.5、鑰酸鈉 0.01-0.02 ； (5)將得到的成品苗在陽光大棚中人工培養(yǎng)90-100天，即可進(jìn)行常規(guī)種植。
全文摘要
本發(fā)明提供的霍山石斛組織培養(yǎng)方法，解決了霍山石斛野外栽培產(chǎn)量低，受自然因素控制，靠天收，病蟲害防治難、大棚種植的品質(zhì)低等缺陷，因?yàn)槭鷮?duì)于生產(chǎn)環(huán)境條件要求苛刻，通過組織培養(yǎng)，提高了種子出苗率，保持了石斛的優(yōu)良特性，提高了種植成活率。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103109742SQ20131003800
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月31日
發(fā)明者何斌 申請(qǐng)人:安徽霍山縣藥王谷林農(nóng)科技有限公司