一種測定荷花花粉活力的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種花粉活力測定方法，尤其涉及一種荷花花粉活力的測定方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明公開了一種離體萌發(fā)法測定荷花品種花粉活力的方法，可有效的測定荷花花粉活力。所用的花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基，以蒸餾水為溶劑，組分為250g/L蔗糖、10mg/L?H3BO3、部分ME3和100g/L?PEG1500。將培養(yǎng)液滴于載玻片上，用毛筆將少量花粉蘸到培養(yǎng)基中，不蓋蓋玻片，播種后將載玻片置于墊有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為25℃和黑暗條件下，4h后用光學(xué)顯微鏡觀察花粉萌發(fā)和花粉管生長情況。本方法簡單，完全定量，數(shù)據(jù)可靠，可操作性強，具有較高的實際應(yīng)用價值，對提高荷花育種效率具有重要意義。
【專利說明】一種測定荷花花粉活力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種花粉活力測定方法，尤其涉及一種荷花花粉活力的測定方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]荷花(Nelumbo nucifera)為睡蓮科蓮屬多年生挺水花卉。我國擁有燦爛的荷文化及悠久的栽培史，作為我國十大名花的荷花，其品種繁多，花型奇特，清香遠溢，盛開于炎炎夏日，是我國園林配置水景的主要水生植物。目前，花粉萌發(fā)需要一定的條件:水分、溫度、糖類、PH值、礦質(zhì)元素、維生素等，其中糖類、礦質(zhì)元素為主導(dǎo)因素。蔗糖不僅可調(diào)節(jié)花粉的滲透勢，使其不會過分吸水脹破，還可用作呼吸底物和合成淀粉原料，促進花粉管的生長。當(dāng)蔗糖濃度大于30%時，不利于花粉的萌高濃度的蔗糖能改變花粉管的透性，導(dǎo)致代謝物和離子泄露在培養(yǎng)基里，反而對萌發(fā)不利。因此，蔗糖在花粉萌發(fā)中，不僅作為滲透壓調(diào)節(jié)齊IJ，還參與其它代謝功能；硼是維管植物生長的必需微量元素，也是花粉萌發(fā)及花粉管生長必不可少的元素，它在絕大多數(shù)顯花植物柱頭及花柱組織里普遍存在(胡適宜，1982)。硼對花粉的作用有三個方面，第一，促進糖的吸收與代謝；第二，增加氧的吸收；第三，參與果膠質(zhì)的合成，有利于花粉管在生長中壁的建造。因此，花期給植株噴硼能促進花粉的萌發(fā)和花粉管的伸長，但用量單位不宜過高；黃靜，曹秋芬，孟玉平(2004)研究認(rèn)為花粉萌發(fā)對鈣的要求并不高，但在培養(yǎng)基中加入鈣能促進花粉萌發(fā)，并在一定程度上提高花粉的萌發(fā)率，并對花粉管的伸長有明顯的促進作用。在有些情況下，外源Ca2+對花粉的萌發(fā)和花粉管生長并非必需，自身釋放的Ca2+已滿足需要。何金環(huán)，李巧枝，任梅(2006)研究認(rèn)為:某些植物花粉萌發(fā)和花粉管生長仍然需要細(xì)胞外Ca2+的調(diào)節(jié)。
[0003]目前,關(guān)于荷花花粉離體萌發(fā)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件還未見報道,本發(fā)明的公布，可以為荷花品種提供最適的花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)體系，為花粉活力測定提供一個高效、快速、簡便的方法。.

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提出一種測定荷花花粉活力的方法，可以高效快速地測定荷花的花粉活力。
[0005]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決技術(shù)問題，一種測定荷花花粉活力的方法，包括以下步驟:
[0006]步驟一、采用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，所述液體培養(yǎng)基含有250g/L蔗糖、10mg/LH3BO3>2.2g/L 的 ME3 培養(yǎng)基、100g/L PEG-1500 ；
[0007]步驟二、采集花粉，于早晨10:00采集盛開的荷花花粉，將所述花粉裝入離心管中，避光保存；
[0008]步驟三、培養(yǎng)花粉，將所述液體培養(yǎng)基滴在載波片上，用毛筆蘸取所述花粉至液體培養(yǎng)基，直接將載波片置于墊有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)4小時；[0009]步驟四、顯微鏡觀察計算花粉活力，培養(yǎng)完畢后，將載波片置于光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)芽狀況，以花粉管長度大于花粉直徑視為花粉萌發(fā)，隨機觀察10個視野進行記錄，實驗重復(fù)3次。
[0010]上述方法中，所述步驟一中，ME3培養(yǎng)基由370mg/L MgSO4 ? 7H20、950mg/L KNO3>880mg/L CaCl2 *2H20,0.025mg/L FeSO4 ? 7H20 和 0.83mg/L KI 組成。所述液體培養(yǎng)基的 pH值為5.8。
[0011 ] 所述步驟二中，采集花粉前，在開花前一天對所采集的花序進行人工套袋隔離。
[0012]所述步驟三中，培養(yǎng)的條件是黑暗、保持25°C。培養(yǎng)時，每隔I小時在顯微鏡下檢測花粉萌發(fā)情況，當(dāng)花粉萌發(fā)無變化時即可進行步驟四。
[0013]所述步驟四中，花粉生活力=每個視野萌發(fā)花粉數(shù)/每個視野總花粉數(shù)X 100%。
[0014]本發(fā)明的測定方法科學(xué)合理:1.首先，蔗糖、硼酸和鈣對于花粉萌發(fā)和花粉管伸長是必需的，是花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基的主要成分。蔗糖在花粉萌發(fā)中主要起提供能源和調(diào)節(jié)滲透壓作用，一定量的硼酸和鈣離子能使花粉管長得較直且粗，不致過長。其次，PEG能使花粉內(nèi)膜結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，改變膜表面電荷，使膜的柔軟程度和通透性提高，從而促進花粉萌發(fā)和花粉管生長。2.本方法對荷花花粉離體培養(yǎng)和活力檢測，具有播種花粉多且均勻、檢測方法簡單和可操作性強等特點，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，并可完全定量，對于提高荷花育種效率具有較高的實際應(yīng)用價值。
【具體實施方式】
[0015]實施例
[0016]本實施例按以下方法測定荷花花粉的活力:
[0017]步驟一、采用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，所述液體培養(yǎng)基含有250g/L蔗糖、10mg/LH3BO3> ME3 培養(yǎng)基(370mg/L MgSO4 ? 7H20、950mg/L KN03、880mg/L CaCl2 ? 2H20、0.025mg/LFeSO4? 7H20和 0.83mg/L KI)、100g/L PEG-1500 ；
[0018]步驟二、采集花粉，7月下旬當(dāng)荷花品種‘友誼紅’(可由南京藝蓮苑花卉有限公司購買)開花時節(jié)，采集花粉前，在開花前一天對所采集的花序進行人工套袋隔離，于早晨8:00左右采集盛開的荷花花粉，將采集的花粉裝入離心管中，避光保存；
[0019]步驟三、培養(yǎng)花粉，將液體培養(yǎng)基滴3滴在載波片上，用毛筆蘸取所述花粉至液體培養(yǎng)基，直接將載波片置于墊有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)在黑暗條件下25°C培養(yǎng)4小時；培養(yǎng)時，每隔I小時在顯微鏡下檢測花粉萌發(fā)情況，當(dāng)花粉萌發(fā)無變化時即可進行步驟四。
[0020]步驟四、顯微鏡觀察計算花粉活力，培養(yǎng)完畢后，將載波片置于光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)芽狀況，以花粉管長度大于花粉直徑視為花粉萌發(fā)，隨機觀察10個視野進行記錄，實驗重復(fù)3次，花粉生活力=每個視野萌發(fā)花粉數(shù)/每個視野總花粉數(shù)X 100%。
[0021]結(jié)果見表I，
[0022]表I不同培養(yǎng)時間‘友誼紅’的花粉活力
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種測定荷花花粉活力的方法，包括以下步驟: 步驟一、采用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，所述液體培養(yǎng)基含有250g/L蔗糖、10mg/L H3B03、2.2g/L 的 ME3 培養(yǎng)基、100g/L PEG-1500 ； 步驟二、采集花粉，于早晨10:00采集盛開的荷花花粉，將所述花粉裝入離心管中，避光保存； 步驟三、培養(yǎng)花粉，將所述液體培養(yǎng)基滴在載波片上，用毛筆蘸取所述花粉至液體培養(yǎng)基，直接將載波片置于墊有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)4小時； 步驟四、顯微鏡觀察計算花粉活力，培養(yǎng)完畢后，將載波片置于光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)芽狀況，以花粉管長度大于花粉直徑視為花粉萌發(fā)，隨機觀察10個視野進行記錄，實驗重復(fù)3次。
2.根據(jù)權(quán)利 要求1所述測定荷花花粉活力的方法，其特征在于:所述步驟一中，ME3培養(yǎng)基由 370mg/L MgSO4 ? 7H20、950mg/L KN03、880mg/L CaCl2 ? 2H20、0.025mg/L FeSO4 ? 7H20和 0.83mg/L KI 組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定荷花花粉活力的方法，其特征在于:所述液體培養(yǎng)基的PH值為5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定荷花花粉活力的方法，其特征在于:所述步驟二中，采集花粉前，在開花前一天對所采集的花序進行人工套袋隔離。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定荷花花粉活力的方法，其特征在于:所述步驟三中，培養(yǎng)的條件是黑暗、保持25 °C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述測定荷花花粉活力的方法，其特征在于:培養(yǎng)時，每隔I小時在顯微鏡下檢測花粉萌發(fā)情況，當(dāng)花粉萌發(fā)無變化時即可進行步驟四。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定荷花花粉活力的方法，其特征在于:所述步驟四中，花粉生活力=每個視野萌發(fā)花粉數(shù)/每個視野總花粉數(shù)X100%。
【文檔編號】A01C1/02GK103430659SQ201310399731
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】孫春青, 潘躍平, 戴忠良, 馬志虎, 孫國勝 申請人:鎮(zhèn)江瑞繁農(nóng)藝有限公司