一種間充質干細胞凍存液及注射液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種間充質干細胞凍存液，它包含如下體積百分比的成分：勃脈力A液25～75%、18AA5%復方氨基酸注射液10～35%、20%人血白蛋白1～50%、DMSO5～20%。本發(fā)明還提供了一種間充質干細胞注射液及其制備方法。本發(fā)明間充質干細胞凍存液可克服現(xiàn)有細胞凍存液的缺陷，既能長時間維持間充質干細胞的活率，又能直接臨床輸注，具有良好的應用前景和經(jīng)濟效益。
【專利說明】一種間充質干細胞凍存液及注射液
[0001]本申請是專利申請?zhí)?201210321533.0， 申請人::四川新生命干細胞科技股份有限公司，申請日:2012年9月3日的分案申請。
【技術領域】
[0002]本發(fā)明涉及一種間充質干細胞凍存液及注射液。
【背景技術】
[0003]干細胞(stem cells, SC)是一類具有自我復制能力(self-renewing)的多潛能細胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞。干細胞(Stem Cell)是一種未充分分化，尚不成熟的細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫(yī)學界稱為“萬用細胞”。
[0004]間充質干細胞【mesenchymal stem cells, MSC】是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。MSC最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注。間充質干細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內皮等多種組織細胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。
[0005]由MSCs制備的干細胞注射液在臨床上可以用于預防和治療異體造血干細胞移植后產(chǎn)生的移植物抗宿主病(GVHD)，以及治療自生免疫性疾病，I型糖尿病、如紅斑狼瘡、風濕性關節(jié)炎和硬皮病等。然而，與普通生物制品和藥品不同，間充質干細胞注射液的活性物質是細胞，細胞在離體環(huán)境中，活性會迅速下降，傳統(tǒng)方法用含人血白蛋白的氯化鈉注射對MSCs進行保存，在8~24小時以內，細胞活性即大幅下降，無法長期保證細胞活性，給MSCs注射液大量、全國大范圍臨床應用于提出了嚴峻的挑戰(zhàn)。
[0006]大量研究發(fā)現(xiàn)，用含有胎牛血清或者細胞培養(yǎng)基的保存液可以解決細胞活性下降快的問題，能夠長時間維持細胞活率。但是，細胞接觸胎牛血清時會內吞胎牛血清，進而引起細胞某些蛋白表達特性的變化，細胞回輸人體后可能引起過敏反應，不能直接用于臨床輸注；細胞培養(yǎng)基因其成分與人體環(huán)境相差較遠，未被批準臨床使用，也不能直接臨床輸注，通常被科研機構用來體外培養(yǎng)及凍存細胞。
[0007]申請?zhí)?201010246409.3， 發(fā)明名稱:一種直接靜脈應用的間充質干細胞凍存液的專利申請，公開了一種間充質干細胞凍存液的制備方法，包括如下步驟:1)將人AB血置于無菌離心管中，在1000rpm-1200rpm條件下離心15分鐘；2)吸取上清液，轉移入新的離心管中，在4000g條件下離心20分鐘，上清即為凍存用人AB血漿；3)將二甲基亞砜、上述凍存用人AB血漿、勃脈力A注射液按體積比1: 3: 6混合均勻，即為間充質干細胞凍存液。由該專利申請文件的實施例表1可以看出，該發(fā)明的凍存液I和II凍存1、2、3個月后復蘇，檢測細胞活率，凍存液I的細胞活率依次為96%、92.6%和89%，其細胞活率降低率為3.5%/月，凍存液II細胞活率依次為97.4%,95%和為94.7%，其細胞活率降低率為1.35%/月，該申請公開的凍存液雖然可以直接靜脈輸注，但是細胞活率維持時間短。并且，該細胞凍存液中含有人AB血漿，血漿中含有大量未知成分，用于異體輸注存在安全隱患，同時，血漿來源也很少，成本高，難以大規(guī)模應用。
[0008]綜上，現(xiàn)有技術中的細胞的凍存液難以兼顧長時間維持細胞活率與臨床直接輸注。
【發(fā)明內容】
[0009]為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新的間充質干細胞凍存液。
[0010]本發(fā)明間充質干細胞凍存液，它包含如下體積百分比的成分:
[0011]
【權利要求】
1.一種間充質干細胞凍存液，其特征在于:它包含如下體積百分比的成分:
2.根據(jù)權利要求1所述的凍存液，其特征在于:它包含如下體積百分比的成分:
3.根據(jù)權利要求2所述的凍存液，其特征在于:它包含如下體積百分比的成分:
4.根據(jù)權利要求3所述的凍存液，其特征在于:它由如下體積百分比的成分組成:
5.一種間充質干細胞注射液，其特征在于:它包含權利要求1~4任意一項所述的間充質干細胞凍存液和間充質干細胞，間充質干細胞的濃度為IX IO5~IX IO8個/ml。
6.一種制備權利要求5所述間充質干細胞注射液的方法，其特征在于:它包括如下步驟: (I)按照權利要求1~4任意一項所述比例取勃脈力A液、18AA5%復方氨基酸注射液、20%人血白蛋白和DMSO ； (2 )將步驟(1)勃脈力A液、18AA5%復方氨基酸注射液和20%人血白蛋白混勻，加入間充質干細胞至細胞濃度為I X IO5~I X IO8個/ml，得細胞懸液； (3)將步驟(1) DMSO加入步驟(2)所得的細胞懸液，即可。
【文檔編號】A01N1/02GK103583511SQ201310568189
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2012年9月3日 優(yōu)先權日:2012年9月3日
【發(fā)明者】任瑩瑩, 田甜, 馮學蓉 申請人:四川新生命干細胞科技股份有限公司