一種冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法。它是將中國(guó)被毛孢菌(Ophiocordyceps?sinensis)接種到無(wú)菌的大米培養(yǎng)基中，置于9-13℃下培養(yǎng)40-60天，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，1-8℃下低溫誘導(dǎo)60-80天即可長(zhǎng)出子實(shí)體原基，轉(zhuǎn)至11-16℃下培養(yǎng)至收獲子實(shí)體。本發(fā)明提供的方法無(wú)需低氧環(huán)境，可降低培養(yǎng)成本；從誘導(dǎo)到收獲子實(shí)體只需3-4個(gè)月；使用的大米培養(yǎng)基成本低廉，適合于冬蟲夏草子實(shí)體商業(yè)化栽培。
【專利說(shuō)明】一種冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 冬蟲夏草（Ophiocordyceps sinensis,異名 Cordyceps sinensis)是我國(guó)最具 特色的生物資源，隸屬子囊菌門（Ascomycota)、糞殼菌綱（Sordariomycetes)、肉座菌目 (Hypocreales)、線蟲草科（Ophiocordycipitaceae)、蟲草屬（Ophiocordyceps)，國(guó)內(nèi)主要 產(chǎn)于西藏、青海、云南、四川、甘肅等海拔3000米以上的雪山高寒山區(qū)。正宗的藥用冬蟲夏 草是中國(guó)被毛孢（Ophiocordyceps sinensis)真菌感染寄主昆蟲-蝙蝠蛾幼蟲，并使其僵 化，在適宜條件下感菌僵蟲生長(zhǎng)，形成具有蟲（僵蟲）草（真菌子實(shí)體）復(fù)合形態(tài)的結(jié)構(gòu)。
[0003] 冬蟲夏草是我國(guó)藥食同源佳品，具有"補(bǔ)肺、強(qiáng)腎、益精氣、理諸虛百損"等眾多功 效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)則把冬蟲夏草視作天然免疫調(diào)節(jié)劑，是呵護(hù)人體健康的"天然大復(fù)方"。冬蟲 夏草可產(chǎn)生多種具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗輻射及免疫調(diào)節(jié)等功能的生理活性物質(zhì)，在 醫(yī)藥、食品以及現(xiàn)代生物技術(shù)等方面具有廣泛的應(yīng)用，尤其在我國(guó)傳統(tǒng)滋補(bǔ)品市場(chǎng)中占有 非常重要的地位，一直被國(guó)民推崇和信賴，并在日本、韓國(guó)、東南亞國(guó)家和美國(guó)等國(guó)際市場(chǎng) 熱銷。
[0004] 資源的枯竭、需求的旺盛和政策的保護(hù)導(dǎo)致其市場(chǎng)價(jià)格飛漲。野生冬蟲夏草已被 列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)物種。為了保護(hù)青藏高原生態(tài)、蟲草資源，讓冬蟲夏草更好地為人類健 康服務(wù)，唯一選擇是人工培育。但是，冬蟲夏草的生長(zhǎng)條件苛刻，目前尚無(wú)冬蟲夏草人工規(guī) ?；囵B(yǎng)技術(shù)問(wèn)世，盡管冬蟲夏草無(wú)性型-中國(guó)被毛孢或相關(guān)真菌的發(fā)酵培養(yǎng)及其產(chǎn)品業(yè) 已投入市場(chǎng)（Zhou et al.，2013, Informa Heathcare, D01:10. 3109/07388551. 791245 ;Yue et al. , 2013, International Journal of Medicinal Mushrooms, 15:425 - 434.)〇
[0005] 目前，世界上能夠成功人工培育的蟲草子實(shí)體種類不多。除了利用含米飯的培養(yǎng) 基栽培蛹蟲草子實(shí)體外，還通過(guò)以昆蟲為寄主來(lái)培養(yǎng)蛹蟲草。潘中華等（2002)(江蘇蠶 業(yè)，24:21-24)和汪西強(qiáng)等（2002)(安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，30 :965-968)分別利用家蠶蛹（Bombyx mori L.)和蚱蝶蛹（Cryptotympana pustulata F.)培植蛹蟲草。李如春等（2005)(菌物 學(xué)報(bào)，24 :349-355)以臺(tái)灣蟲草（C.formosana)菌感染黃粉蟲（Tenebrio molitor L.)形 成菌索。李泰輝等（2005)(國(guó)家發(fā)明專利，ZL200510101348.0)利用人工培養(yǎng)的黃粉蟲蛹 成功培植出蛹蟲草子座。一些專利也描述了利用蠶蛹培植蛹蟲草方法（徐道田等，2000， ZL0013038L 3 ;李健，2001，ZL01141386. 7 ;陳瑞英等，1997, ZL97113190. 2)。韓日疇等 (2006)(國(guó)家發(fā)明專利，ZL200610123355. 5)利用大蠟螟（Galleria mellonella)幼蟲成功 培植出蛹蟲草子實(shí)體。
[0006] 專利申請(qǐng)?zhí)枮?01310432723. 4,發(fā)明名稱為：一種冬蟲夏草子實(shí)體及其培植方 法，雖然其能夠培養(yǎng)出冬蟲夏草子實(shí)體，但是其具有以下三個(gè)缺點(diǎn)：1、其誘導(dǎo)子實(shí)體至子實(shí) 體長(zhǎng)出需要在低氧濃度（10?15%氧氣濃度）下，如果在低海拔地區(qū)，維持低氧濃度長(zhǎng)達(dá) 5-6個(gè)月的話，其成本是非?？捎^的。2、其誘導(dǎo)子實(shí)體至子實(shí)體長(zhǎng)出需要長(zhǎng)達(dá)5-6個(gè)月的時(shí) 間，時(shí)間比較長(zhǎng)。3、其培養(yǎng)基的成本比較高，不適合商業(yè)化大規(guī)模培養(yǎng)。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種無(wú)需低氧環(huán)境，可在低海拔地區(qū)的正常氧濃度下商業(yè)化 人工培養(yǎng)冬蟲夏草子實(shí)體的方法。
[0008] 本發(fā)明的冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0009] 將中國(guó)被毛孢菌（Ophiocordyceps sinensis)接種到無(wú)菌的栽培培養(yǎng)基中，置于 9-13°C下培養(yǎng)40-60天，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，1-8°C下低溫誘導(dǎo)60-80天即可長(zhǎng)出子實(shí)體 原基，轉(zhuǎn)至11-16°C下培養(yǎng)30-40天可收獲長(zhǎng)度為4-12cm的子實(shí)體，收獲的子實(shí)體棒狀、不 分枝、灰褐色，與野外采集的冬蟲夏草的子實(shí)體形態(tài)相似；
[0010] 所述的栽培培養(yǎng)基由大米和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1?1. 5混合而成，所述的營(yíng)養(yǎng)液， 按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，包括葡萄糖2%，ΚΗ2Ρ040. 2%，MgS040. 1 %，檸檬酸銨0. 1 %，蛋白胨 0.5%,蠶蛹粉0.2%，余量為水，ρΗ6· 0-6. 5。 toon] 作為優(yōu)選，所述的將中國(guó)被毛孢菌接種到無(wú)菌的栽培培養(yǎng)基中，其中國(guó)被毛孢菌 是通過(guò)以下方法制備：
[0012] (1)母種制備：將中國(guó)被毛孢菌接入固體PPDA培養(yǎng)基中，9-16°C下培養(yǎng)45-60天 后，選取冬蟲夏草典型菌落作為母種；
[0013] (2)液體菌種制備：將母種菌落接至液體PPDA培養(yǎng)基中，9-16°C下，振蕩培養(yǎng) 40-60天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2-3毫米的作為液體菌種；
[0014] 在無(wú)菌環(huán)境下，用無(wú)菌水稀釋液體菌種5-10倍，再接入到無(wú)菌的栽培培養(yǎng)基上。
[0015] 本發(fā)明的固體PPDA培養(yǎng)基是現(xiàn)有技術(shù)中常用的培養(yǎng)基，其配方為：葡萄糖20g， 馬鈴薯 200g，蛋白胨 10g，KH2P043g，MgS04 · 7Η201· 5g，VB10. 02g，瓊脂 15g，H201000mL，自然 pH，其配制方法為：將馬鈴薯洗凈去皮，加水煮爛，再用紗布過(guò)濾，在濾液中加入葡萄糖、蛋 白胨，KH2P0 4, MgS04 · 7H20, VB1，瓊脂，用水定容至1L，121°C滅菌30分鐘備用。所述的液體 PPDA培養(yǎng)基是指將固體PPDA培養(yǎng)基中的瓊脂去掉后得到的培養(yǎng)基，其配制方法同上，只是 不加瓊脂。
[0016] 本發(fā)明經(jīng)過(guò)多次重復(fù)，均能達(dá)到本發(fā)明的目的，即能成功規(guī)?；耘喑龆x夏草 子實(shí)體。子實(shí)體培養(yǎng)條件建立是本發(fā)明得以實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵。
[0017] 按照本發(fā)明的栽培方法栽培獲得的冬蟲夏草子實(shí)體在形態(tài)上與野生冬蟲夏草的 子實(shí)體相似，主要成分含量未低于野生冬蟲夏草子實(shí)體，可作為食品應(yīng)用。以下是野生冬蟲 夏草和按照本發(fā)明的人工栽培方法獲得的冬蟲夏草子實(shí)體主要成分的分析結(jié)果，具體如表 1所示。
[0018] 表1 :本發(fā)明的人工栽培的冬蟲夏草子實(shí)體和野生冬蟲夏草子實(shí)體主要成分的分 析結(jié)果
[0019]

【權(quán)利要求】
1. 一種冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法，其特征在于，包括以下步驟： 將中國(guó)被毛孢菌（Ophiocordyceps sinensis)接種到無(wú)菌的栽培培養(yǎng)基中，置于 9-13°C下培養(yǎng)40-60天，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后，1-8°C下低溫誘導(dǎo)60-80天即可長(zhǎng)出子實(shí)體 原基，轉(zhuǎn)至11_16°C下培養(yǎng)至收獲子實(shí)體； 所述的栽培培養(yǎng)基由大米和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1?1. 5混合而成，所述的營(yíng)養(yǎng)液，按 總質(zhì)量分?jǐn)?shù)1〇〇%計(jì)，包括葡萄糖2%，1^2?040.2%，1%3040.1%，檸檬酸銨0.1%，蛋白胨 〇· 5%，蠶蛹粉0· 2%，余量為水，ρΗ6· 0-6. 5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的冬蟲夏草子實(shí)體人工栽培方法，其特征在于，所述的將中國(guó) 被毛孢菌接種到無(wú)菌的栽培培養(yǎng)基中，其中國(guó)被毛孢菌是通過(guò)以下方法制備： (1) 母種制備：將中國(guó)被毛孢菌接入固體PPDA培養(yǎng)基中，9-16°C下，暗培養(yǎng)45-60天 后，選取冬蟲夏草典型菌落作為母種； (2) 液體菌種制備：將母種菌落接至液體PPDA培養(yǎng)基中，9-16°C下，振蕩培養(yǎng)40-60 天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2-3毫米的作為液體菌種； 然后在無(wú)菌環(huán)境下，用無(wú)菌水稀釋液體菌種5-10倍，再接入到無(wú)菌的栽培培養(yǎng)基上； 所述的固體PPDA培養(yǎng)基，每升含有葡萄糖20g，馬鈴薯200g，蛋白胨10g，KH2P043g， MgS04 · 7Η201· 5g，VB10. 02g，瓊脂 15g，余量為水，自然 pH ; 所述的液體PPDA培養(yǎng)基，每升含有葡萄糖20g，馬鈴薯200g，蛋白胨10g，KH2P043g， MgS04 · 7Η201· 5g，VB10. 02g，余量為水，自然 pH。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK104082034SQ201410289703
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】曹莉, 韓日疇 申請(qǐng)人:廣東省昆蟲研究所