一種緩解肉雞氧化應(yīng)激的綠色添加劑制備及使用方法
【專利摘要】一種緩解肉雞氧化應(yīng)激的綠色添加劑制備及使用方法，本發(fā)明制備過程如下：按重量份數(shù)取料，止痢草提取物300份，α-生育酚醋酸酯50份，VC磷酸酯100份，剩余份數(shù)為載體共1000份，均勻混合，得到綠色添加劑。上述所述的載體為多孔吸附性沸石粉與玉米芯粉按重量份數(shù)比2：1；兩者分別預(yù)先做粉碎處理，使其細(xì)度為10～100目。飼養(yǎng)生產(chǎn)中應(yīng)用效果顯著，可替代或部分替代抗生素的使用，對提高肉雞生產(chǎn)水平、保證雞肉產(chǎn)品安全、維護(hù)生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展具重要意義。
【專利說明】一種緩解肉雞氧化應(yīng)激的綠色添加劑制備及使用方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明為一種緩解肉雞氧化應(yīng)激的綠色添加劑制備及使用方法。

【背景技術(shù)】
[0003] -- 犧駕· {Origanum heracleoticum L.,過去也稱 firi卵spp 力iriw/z?)為唇形科牛至屬多年生草本植物。主要分布于地中海地區(qū)至中亞、北非、北美及我 國大部分地區(qū)。味辛、性涼、無毒，是一種安全的飼料添加劑。目前，肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)受動物疾 病高發(fā)的困擾，導(dǎo)致抗生素不僅僅作為治療疾病被使用，還在飼料中濫用，造成畜產(chǎn)品中藥 物殘留超標(biāo)、動物產(chǎn)生耐藥性，危害動物和人類健康。由此，食品安全問題已經(jīng)被全民重視， 綠色生態(tài)養(yǎng)殖迫在眉睫，天然植物止痢草提取物作為一種安全有效的中草藥類飼料添加劑 已逐漸被行業(yè)認(rèn)可。
[0004] 氧化應(yīng)激不同程度地影響著現(xiàn)代養(yǎng)殖生產(chǎn)中動物的生產(chǎn)力和經(jīng)濟(jì)效益。伴隨著肉 雞集約化養(yǎng)殖規(guī)模的迅速擴(kuò)大同時(shí)技術(shù)、管理滯后，疾病問題也日趨嚴(yán)重。特別是因疾病、 運(yùn)輸、環(huán)境溫度過高過低等應(yīng)激引起的氧化損傷嚴(yán)重影響了肉雞生產(chǎn)性能。肉仔雞生長速 度快，飼養(yǎng)周期短，7?8周既可出欄，50d體重可達(dá)2. 5kg，每平方米可飼養(yǎng)2周齡以內(nèi)的 雞3〇只左右；各組織器官和肌肉的生長發(fā)育不均衡，肌肉的生長速度遠(yuǎn)快于內(nèi)臟的生長 發(fā)育，尤其是心肺的發(fā)育慢于肌肉，心肺不能滿足供應(yīng)肌肉快速生長對血氧的需要，而常常 導(dǎo)致代償性疾病的發(fā)生；同時(shí)，肉雞對周圍環(huán)境的適應(yīng)能力和對疾病的抵抗能力較差，極易 出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)。氧化應(yīng)激表現(xiàn)為肉雞體內(nèi)產(chǎn)生過量的自由基，這些自由基與體內(nèi)的脂 質(zhì)、DNA發(fā)生鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，產(chǎn)生的氧化應(yīng)激導(dǎo)致疾病的發(fā)生、免疫力減弱、生產(chǎn)力下降、雞肉產(chǎn) 品質(zhì)量下降，嚴(yán)重時(shí)肉雞猝死。這種氧化應(yīng)激影響面大，特別是養(yǎng)殖環(huán)境惡劣、疾病多發(fā)的 規(guī)?；怆u養(yǎng)殖場尤為突出。
[0005]針對肉雞氧化應(yīng)激的防治有采用有機(jī)鉻、抗生素、鎮(zhèn)靜藥方法，但隨之而出現(xiàn)食品 安全問題。目前提倡添加維生素 E、C、A和電解質(zhì)以緩解氧化應(yīng)激。維生素 E和維生素 C通 常聯(lián)合使用，因 VE脂溶性，可以中斷脂肪過氧化自由基的連鎖反應(yīng)；VC為水溶性，其抗氧化 性可對許多水溶性的自由基反應(yīng)。但目前的研究表明由體外大劑量的添加 VC等抗氧化藥 物，對于預(yù)防和緩解肉雞氧化應(yīng)激反應(yīng)缺乏有利證據(jù)，這是因?yàn)樵斐裳趸瘧?yīng)激反應(yīng)的原因 非常復(fù)雜，可能與神經(jīng)、內(nèi)分泌、營養(yǎng)代謝和免疫系統(tǒng)都有關(guān)，自由基可能不是唯一致氧化 損傷因素，因此，除抗自由基外應(yīng)與其他添加物及防治措施同時(shí)使用，才能獲得更理想的效 果。天然植物和中草藥尚效、安全、沒有殘留，除抗菌、提高免疫力外兼具促生長、改善腸道 健康和廣品品質(zhì)等多種生理功能。
[0006]至于以往使用的丁基羥基茴香醚（BHA)、二丁基羥基甲苯（BHT)和沒食子酸丙醋 (PG)，日本報(bào)道從1明1年起經(jīng)過兩個(gè)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)BRA對大鼠前胃有致癌作用。據(jù)報(bào)道BHT有 可能抑制人體呼吸酶活性，故希臘、土耳其、印度尼西亞等國家禁用。有報(bào)道沒食子酸丙酯 及其他所有的酯類（辛酯、異戊酯、月桂酯等）可能是導(dǎo)致某些人患胃炎和皮膚炎的原因， 還包括引發(fā)哮喘或?qū)Π⑺蛊チ诌^敏。大劑量（1. I7%--2· 34%)長期飼養(yǎng)大鼠后有發(fā)生腎臟 損害、發(fā)育受阻、紅血球和白血球數(shù)異常等現(xiàn)象。
[0007] 止痢草蒸汽蒸餾加工得到的精油具有抗氧化活性。止痢草精油中兩種主要的酌類 物質(zhì)是香序酸和百里香酸，次要成分為糖苷配基，還有種類豐富的低分子量的次生代謝產(chǎn) 物如苯丙素類、醌類、黃酮類、單寧類、萜類等，這些化合物作為防御系統(tǒng)在抗氧化應(yīng)激、抵 御生理、環(huán)境、食物鏈上游和病原體的侵襲進(jìn)程中起著重要的協(xié)同作用。大量的上述這些活 性成分因具有抗生素樣功能和抗氧化作用因些可以作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于動物生產(chǎn) 以及食品中。天然植物及中草藥種類繁多，生理功能不盡相同。為使豐富的植物資源得到 充分利用，增加對安全、綠色抗氧化應(yīng)激添加物的選擇，有效預(yù)防和緩解肉仔雞氧化應(yīng)激反 應(yīng)，提高生產(chǎn)水平，開發(fā)研制了抗氧化應(yīng)激的綠色添加劑的制備及使用方法。這也是養(yǎng)殖生 產(chǎn)上亟待解決的問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于克服以上所存在的問題，提供一種預(yù)防和緩解肉仔雞氧化應(yīng)激 反應(yīng)的綠色添加劑制備方法。
[0009] 本發(fā)明制備過程如下： 按重量份數(shù)取料，止痢草提取物300份，α -生育酚醋酸酯50份，VC磷酸酯100份，剩 余份數(shù)為載體共1000份，均勻混合，得到綠色添加劑。
[0010] 上述所述的載體為多孔吸附性沸石粉與玉米芯粉按重量份數(shù)比2 :1 ;兩者分別預(yù) 先做粉碎處理，使其細(xì)度為10?100目。
[0011] 其中止痢草提取物是通過如下方法得到的： 1.采用止痢草植株（開花期）的地上部分，用流水和70%酒精反復(fù)清洗，除去灰塵和 污染物；然后陰千1〇?15d，使含水量低于12% ;粉碎，10?100目。
[0012] 2.準(zhǔn)確稱取粉碎后的止痢草500g用甲醇、石油醚、氯仿、丙酮和苯各1L，放入容器 內(nèi)，索式抽提法抽提20h，溫度不要超過溶液沸點(diǎn)；得到粗提物。
[0013] 3.粗提物用Whatman濾紙（No. 1)過濾，37°C蒸發(fā)、干燥去除多余溶劑。
[0014] 4.真空薄膜濃縮后與多孔吸附性沸石粉按1:1混合，70°C攪拌吸附3 h，再靜置 吸附24 h，過篩即得顆粒止痢草提取物。
[0015] 本發(fā)明使用方法如下： 使用方法：將上述綠色添加劑加入肉仔雞全價(jià)飼料中混勻，飼喂。
[0016] 使用劑量：以150g/t的重量將綠色添加劑'混勻在飼料中。
[0017] 使用時(shí)間：連續(xù)使用15?21d ;全程使用，還可以改善肉質(zhì)。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)： (1)止痢草提取的精油有效成分高，得率高。提取止痢草抗氧化有效成分采用有機(jī)溶劑 提取，克服了以往水蒸氣蒸餾提取方法中有些水溶解度大的揮發(fā)性成分，不易得到，得率低 的缺點(diǎn)?？朔顺R界二氧化碳萃取方法中親水性成分獲得率過低、不能提取極性較大物 質(zhì)、設(shè)備造價(jià)高、清洗設(shè)備困難的缺點(diǎn)。不同于其他有機(jī)溶劑提取方法的溶劑劑型單一，針 對該植物中不同的活性成分，分別米了用甲醇、石油醚、氯仿、丙酮和苯等不同溶劑來提取， 雖然操作時(shí)間長，但得油率高，精油的有效成分得以充分提取。
[0019] (2)效率高。目前提取止痢草活性成分常用的濃縮法為旋轉(zhuǎn)薄膜濃縮法，雖然濃縮 效率較高，但其容量小，且濃縮液體始終處于被加熱狀態(tài)可能導(dǎo)致一些熱敏性成分分解，影 響提取物成分含量和質(zhì)量。真空薄膜濃縮法克服了旋轉(zhuǎn)薄膜濃縮法的缺點(diǎn)，使?jié)饪s可以反 復(fù)進(jìn)行，不受被濃縮液體積的局限，可濃縮至所設(shè)定體積，容量大，饋出量高于旋轉(zhuǎn)薄膜濃 縮法。濃縮速度快，受熱時(shí)間短，保護(hù)了熱敏性成分不受破壞。
[0020] (3)多孔吸附性沸石粉含有動物生長發(fā)育所需要的常量礦物質(zhì)元素鈣和部分微量 元素，這些元素以離子狀態(tài)存在，能被動物吸收利用。多孔吸附性沸石粉還具有獨(dú)特的吸附 性、離子交換性、熱穩(wěn)定性、催化特性、耐酸性、生物學(xué)活性及抗毒性。多孔吸附性沸石粉內(nèi) 部孔穴和孔道中大量的流動性強(qiáng)的陽離子有很強(qiáng)的選擇性離子交換性，可將有害的重金屬 離子除掉。
[0021] (4)防止飼料氧化變質(zhì)。α-生育酚醋酸酯和VC磷酸酯可以防止飼料在運(yùn)輸、儲 存過程中脂類等營養(yǎng)物質(zhì)的氧化反應(yīng)，從而保存飼料營養(yǎng)價(jià)值，延長儲存期，避免飼料飼 料氧化酸敗造成的適口性下降，有利于肉雞生產(chǎn)。
[0022] (5)對所得的抗氧化應(yīng)激產(chǎn)品進(jìn)行動物體外抗氧化試驗(yàn)和肉雞體內(nèi)的抗氧化應(yīng)激 試驗(yàn)，論證了該綠色添加劑的抗氧化作用。同時(shí)還進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)，以充分論證其活性 物質(zhì)除抗氧化作用外，在其他方面的一個(gè)綜合、協(xié)調(diào)作用。
[0023] (6)充分調(diào)研肉雞氧化應(yīng)激產(chǎn)生的原因及引發(fā)的氧化傷害，以肉雞血清氧化功能 指標(biāo)和雞肉脂類氧化指標(biāo)為模式測試，使該綠色添加劑更具用實(shí)用性和適用性。依據(jù)肉雞 氧化應(yīng)激的癥狀及臨床表現(xiàn)特征，查找醫(yī)藥典籍，以抗氧化性能為主要藥理學(xué)指標(biāo)，結(jié)合抑 菌作用、提高生產(chǎn)性能作用、抗球蟲作用、調(diào)節(jié)免疫，將提取物進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)。
[0024] (7)本發(fā)明止痢草提取物，主要活性物質(zhì)為香芹酚和百里香酚，次要成分糖苷配 基，種類豐富的低分子量的次生代謝產(chǎn)物均具有很強(qiáng)的抗氧化作用，同時(shí)提高日增重，改善 飼料報(bào)酬；具有抑菌作用，降低疾病發(fā)生的可能性；可以提高肉雞的免疫力；控制肉仔雞艾 美耳球蟲病的發(fā)生。除抗自由基作用外,在肉仔雞的營養(yǎng)代謝和免疫系統(tǒng)方面起到了綜合 作用。
[0025] (8)止痢草的最小抑菌濃度顯著小于其他幾種植物提取物的最小抑菌濃度，將植 物的活性成分提取，濃縮，純化，保證療效的前提下，減少了使用量，不降低飼料的營養(yǎng)濃 度，確保其添加效果。
[0026] (9)選用的止痢草是歐美人們餐桌上的調(diào)味品，α -生育酚醋酸酯，VC磷酸酯，及 其載體為可食用、綠色、無毒副作用、不產(chǎn)生抗藥性、易獲得。而且，α-生育酚醋酸酯和VC 磷酸酯與止痢草提取物具有協(xié)同作用，其效果見后面的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。飼養(yǎng)生產(chǎn)中應(yīng)用效果顯 著，可替代或部分替代抗生素的使用，對提高肉雞生產(chǎn)水平、保證雞肉產(chǎn)品安全、維護(hù)生態(tài) 環(huán)境、促進(jìn)畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展具重要意義。
[0027]

【具體實(shí)施方式】
[0028] 止痢草提取物的體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，與a-生育酚對比，檢測儲藏豬油過氧化物的生 成速度；用常見的AA+肉仔雞為對象，檢測該綠色添加劑對肉雞血清的抗氧化作用和雞肉 脂類氧化影響；以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏桿菌為模式測試菌，實(shí)驗(yàn)室測定幾種 常見植物的最小抑菌濃度；測試肉仔雞對該止痢草提取物的毒性反應(yīng)；最后進(jìn)行臨床防治 驗(yàn)證。
[0029] 一、止痢草提取物體抗氧化實(shí)驗(yàn) (一）止痢草提取物體外抗氧化實(shí)驗(yàn) 1、準(zhǔn)備豬油。100°C加熱豬肉獲得豬油，過濾后-20?儲藏。
[0030] 2、所有化學(xué)試劑均為生物分析純，D-a-生育酚購自北京三區(qū)生物技術(shù)有限公司。
[0031] 3、將豬油轉(zhuǎn)入6個(gè)透明的玻璃瓶，每瓶l〇g。將止痢草提取物和D-a-生育酚用戊 烷溶解加入豬油樣本中，60°C熔化。添加量為2000mg/kg，另有一空白對照組，不添加任何添 加劑，每組兩個(gè)重復(fù)。所有樣本在培養(yǎng)箱60°C培養(yǎng)。檢測過氧化值(PV，Peroxide values), 檢測方法參照 GB-T 5538-2005/IS0 3960:2001，IDT。
[0032] 5、檢測了 3個(gè)月內(nèi)豬油過氧化值，如圖1，止痢草提取物對儲藏豬油氧化性能的影 響；對照組(不添加任何添加劑組)在第10天PV值迅速上升，D-a-生育酚在1個(gè)月后PV值 也快速上升，而止痢草提取物在實(shí)驗(yàn)80天前都體現(xiàn)了非常好的抗氧化能力。
[0033]圖1表明止痢草提取物在動物油脂起到了延緩其氧化的作用。其抗氧化能力遠(yuǎn)遠(yuǎn) 大于VE，特別是隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長更體現(xiàn)了其卓越的抗氧化性能，表現(xiàn)了很好的抗氧化 穩(wěn)定性。
[0034] (二）該綠色添加劑體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn) 2012年6月在錦州北鎮(zhèn)前進(jìn)養(yǎng)殖場進(jìn)行了生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)。
[0035] 1、動物、飼糧與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)選取1日齡同批孵化AA+720只，采用單因子隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為4個(gè)處 理，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只肉仔雞，公母各半。試驗(yàn)期42d，階段日糧采取逐漸 過渡的方式，試驗(yàn)無預(yù)飼期?；A(chǔ)飼糧參照2004我國肉仔雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和美國NRC (1994) 家禽營養(yǎng)需要配制。見表1。分組如下：I組為對照組：無添加的基礎(chǔ)日糧組，所用大豆油 過氧化物值<6 mmol/kg ;11組：基礎(chǔ)日糧中大見油為過氧化物值為40mmol/kg，無添加；III 組：基礎(chǔ)日糧(大豆油為過氧化物值為40ram〇l/kg)+150g/t綠色添加劑；IV組：基礎(chǔ)日糧(大 豆油為過氧化物值為40ram 〇l/kg) +50g/t止痢草提取物。試驗(yàn)III組與IV組止痢草精油濃度 相同。試驗(yàn)組間飼養(yǎng)管理、免疫程序一致。 * --Ρ?Η賴腿__龍憂?US職 ________ i fcesalj'ilgt

【權(quán)利要求】
1. 一種緩解肉雞氧化應(yīng)激的綠色添加劑制備方法，特征在于，其制備過程如下： 按重量份數(shù)取料，止痢草提取物300份，α -生育酚醋酸酯50份，VC磷酸酯100份，剩 余份數(shù)為載體共1000份，均勻混合，得到綠色添加劑； 上述所述的載體為多孔吸附性沸石粉與玉米芯粉按重量份數(shù)比2 :1 ;兩者分別預(yù)先做 粉碎處理，使其細(xì)度為10?1〇〇目； 上述所述的止痢草提取物是通過如下方法得到的： (1) .采用止痢草植株（開花期）的地上部分，用流水和70%酒精反復(fù)清洗，除去灰塵 和污染物；然后陰干10?15d,使含水量低于12% ;粉碎，10?100目； (2) .準(zhǔn)確稱取粉碎后的止痢草500g用甲醇、石油醚、氯仿、丙酮和苯各1L，放入容器 內(nèi)，索式抽提法抽提20h，溫度不要超過溶液沸點(diǎn)；得到粗提物； (3) .粗提物用Whatman濾紙（No. 1)過濾，37。(：蒸發(fā)、干燥去除多余溶劑； (4) ·真空薄膜濃縮后與多孔吸附性沸石粉按1 :1混合，7(rc攪拌吸附3 h，再靜置吸 附24 h，過篩即得顆粒止痢草提取物。
2. -種利用權(quán)利要求1的綠色添加劑的使用方法，特征在于，將上述綠色添加劑加入 肉仔雞全價(jià)飼料中混勻，飼喂；其使用劑量，以 150g/t的重量將綠色添加劑混勻在飼料中。
【文檔編號】A23K1/18GK104186966SQ201410356800
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】史東輝, 金立志, 許云賀, 王佳麗 申請人:廣州美瑞泰科生物工程技術(shù)有限公司