專利名稱：診斷與治療氧化過激類病癥的材料和方法
診斷與治療氧化過激類病癥的材料和方法
糾碟申i青,X， 本申請案要求享有2007年6月13日提交的第60/934， 505號和2008年2月6 日提交的第61/063,745號美國臨時申請的權(quán)益。本申請案也是2006年9月28日提交 的第11/540， 864號美國專利申請案的部分延續(xù)申請案，第11/540， 864號美國專利申請 案是2005年4月15日提交的第11/107， 179號美國專利申請案的部分延續(xù)申請案，第 11/107， 179號美國專利申請案是2004年8月27日提交的第10/927， 742號美國專利申請 案的部分延續(xù)申請案，即現(xiàn)在的第7， 312， 243號美國專利案，現(xiàn)在的第7， 312， 243號美國專 利案正在要求享有2003年2003年8月29日提交的第60/499， 152號美國臨時專利申請案 的權(quán)益，此兩案的全文均以引用的方式并入本文，包括所有的圖形、表格、核酸序列、氨基酸 序列以及圖紙。
背景技術(shù)：
潰瘍性結(jié)腸炎是一種炎性腸道疾病，其特點表現(xiàn)為直腸出血和出血性腹瀉反復(fù)發(fā)
作。95%以上病例的初期炎癥反應(yīng)出現(xiàn)在腸道粘膜部位，并且這種炎癥可能會向臨近部位
不斷蔓延，最后引起整個結(jié)腸發(fā)炎(Hendrickson (亨德里克森)，2002)。 從組織學角度看，潰瘍性結(jié)腸炎很明顯主要是由于中性粒細胞滲透進入結(jié)腸黏膜
腸腺李氏隱窩，引起嗜中性隱窩炎并形成隱窩小膿腫，這兩種病癥并合就會形成肉眼可見
的出血性黏膜潰瘍。組織破壞性細胞因子的中性分泌作用和氧自由基引起慢性破壞性隱窩
結(jié)腸炎，這種結(jié)腸炎能夠擴散到整個結(jié)腸(Carpenter (卡彭特)，2000)。 目前，幾乎沒有令人滿意的潰瘍性結(jié)腸炎的治療模式，現(xiàn)有的治療仍局限于使用
氨基水楊酸的各類衍生物以及抗炎性皮質(zhì)激素做初期的治療，后續(xù)使用強力免疫抑制劑來
對抗這一頑疾，最后，對藥物治療無效的病人，只好施行結(jié)腸切除術(shù)。大多數(shù)輕度至中度患
者病程都無法預(yù)知。重度患者大約占患者總數(shù)的20%。 85%的重度患者或爆發(fā)性發(fā)病的患
者在一年內(nèi)必須施行全部結(jié)腸切除手術(shù)。25年內(nèi)患者需要接受結(jié)腸切除術(shù)的累積比率大
概為32% (NationalGuidelines Clearinghouse (美國臨床指南交流中心):htto:〃www.
ngc. gov( "Management of Ulcerative Colitis"("潰瘍性結(jié)腸炎的治療"))。 潰瘍性結(jié)腸炎藥物治療策略主要針對兩點要么中和浸潤性中性粒細胞產(chǎn)生的一
個或多個細胞因子，要么清除產(chǎn)生該細胞因子的根源，比如中性粒細胞本身。由于接受藥物
治療的潰瘍性結(jié)腸炎患者的病史具有終生反復(fù)發(fā)病的特點，看來目前還沒有有效的藥物治
療模式能夠控制基本病癥的發(fā)病，因此，目前的療法還不能從根本上改變這種情況。 在進化過程中出現(xiàn)的最偉大的生理奇跡也許就是這種高度進化后的免疫系統(tǒng)了，
他僅僅用一層只有細胞厚度的組織隔離著外界，讓機體在這個細菌高度匯集的星球上保持
泰然自若。 這種不太可能存在的細菌與免疫系統(tǒng)之間的"停戰(zhàn)"狀態(tài)恰恰描述了人類正常結(jié) 腸的生存條件，在結(jié)腸內(nèi)，潛在致病菌的內(nèi)腔濃度估計為每克結(jié)腸內(nèi)容物含有1012 ( —兆) 個菌落形成單元(活菌細胞)(Farrell (法雷爾)和P印percorn (佩伯孔恩)，2002)。胃
4腸道內(nèi)的原核菌細胞(IO")(—百兆)相當于人體內(nèi)的細胞總數(shù)(Blaut(布勞特)，2000; Guyton(蓋頓)和Hall (霍爾)，1997)。接近一半重量的人體排泄糞便由病菌組成，并且在 人類正常的結(jié)腸內(nèi)存在著超過400種的已知細菌，其中，很多細菌如果逃離腸道而進入到 其他體腔，都具有極強的毒性或化膿性。 概念上，可以將黏膜免疫系統(tǒng)分為一個正常的非反應(yīng)性或耐受性表皮成分和一個 潛在的反應(yīng)性皮下實體。由分布于結(jié)腸上皮細胞內(nèi)的T-細胞組成的表皮成分對結(jié)腸細菌 具有耐受性。這種無反應(yīng)性表皮T細胞先天具有對正常內(nèi)腔細菌群的響應(yīng)性。從目的論的 角度看，這些T-細胞可能是識別外來細菌的第一道防線，這些外來細菌能夠?qū)︷つけ旧硇?成感染。 皮下免疫系統(tǒng)的反應(yīng)性成份由巨噬細胞，B-細胞，以及另外的一些T-細胞組成。 這些T-細胞存在于固有層的結(jié)腸上皮基膜下方的無菌環(huán)境內(nèi)。這些免疫細胞被三個獨立 的人體保護屏障從內(nèi)腔細菌抗原中隔離出來。從內(nèi)腔側(cè)面開始，它們組成了一個黏液保護 層，一個完整的結(jié)腸膜內(nèi)壁，以及下鄰的基膜。這種隔離度保持了上皮下一個無菌的環(huán)境， 并且保護固有層的免疫細胞和脈管系統(tǒng)免于遭遇結(jié)腸細菌產(chǎn)物，否則就會引起一種免疫或 趨化性反應(yīng)。 結(jié)腸上皮細胞和表皮基膜保護屏障的完整性極為重要，它可以保持結(jié)腸組織內(nèi)的 免疫平穩(wěn)，并且，當細菌抗原準備侵入正常的上皮下無菌環(huán)境時，它可以阻止結(jié)腸免疫系統(tǒng) 對細菌抗原的高濃度發(fā)動免疫響應(yīng)。 因此，維護結(jié)腸表皮屏障功能整體性的細胞機制可能在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病初期就 會遭到破壞。要求保持黏膜整體性的生命過程的機能障礙是最終引起上皮屏障功能衰退的 一系列連續(xù)事件中一個早期而必要的部分，因為連學黏膜免疫激活作用是阻止抗原體侵入 固有層的第二道防線。 換言之，集中于共同的生化過程的異常細胞應(yīng)激因子的累加效應(yīng)同時起作用來擾 亂細胞內(nèi)的生化過程，而這種生化過程提供了維護結(jié)腸表皮屏障整體性所必須的一種功 能。 潰瘍性結(jié)腸炎的自發(fā)好轉(zhuǎn)又復(fù)發(fā)的高發(fā)生率(50 %以上)(Meyers (麥耶斯)和 Janowitz (杰諾維茨)，1989)說明其具有雙向破壞作用并且可能存在自我補充缺乏綜合 癥。這種自我補充缺乏綜合癥影響著黏膜整體性所必需的一個關(guān)鍵因子。
通過向動物直腸內(nèi)注入毒性化學藥品來創(chuàng)造出人類潰瘍性結(jié)腸炎的動物模型的 所有實驗嘗試都受到實驗本身的內(nèi)在局限。這種內(nèi)在局限就是實驗準確復(fù)制疾病的能力。 因為，在人體條件下，發(fā)病前存在著復(fù)雜的心理、生理、基因、環(huán)境以及免疫等相互作用，并 且這些相互作用有助于發(fā)病機理，而實驗室并不滿足如此復(fù)雜的相互作用(Farrell(法雷 爾)和P印percorn (佩伯孔恩)，2002)。目前，不主張對任何臨床情況的活體人類結(jié)腸使用 毒性化學藥品。但是，情況也并非總是如此。 在整個二十世紀的很多年里，內(nèi)科醫(yī)生推薦并使用過氧化氫灌腸劑用于排除 排便性嵌塞。最近的1980年，一本重要的護理著作推薦使用過氧化氫治療排便性嵌 塞(Brunner(布倫納)和Suddarth(薩達斯)，1980)。但是，二十世紀三十年代的一些 報告已經(jīng)開始提及在直腸出血和結(jié)腸炎之后使用過氧化氫灌腸劑(Benson(班森)和 Bargen(巴根)，1939) 。 1948年，首次記錄了一例使用過氧化氫灌腸劑后結(jié)腸炎致死的病例(Sheenan(希恩)和Brynjolf sson (布林約爾松)，1960)。在這一病例中，作者記錄了一 名41歲的白人女性為減輕排便性嵌塞，自行注入過氧化氫灌腸劑五天后死亡。尸解報告顯 示她患有活性潰瘍性結(jié)腸炎，這有助于人們了解過氧化氫灌腸劑的功能。從那時起，一直有 關(guān)于使用過氧化氫灌腸劑后出現(xiàn)繼發(fā)性結(jié)腸炎并產(chǎn)生致命結(jié)果的報告。1951年，龐弗里報 告稱兩名患者使用過氧化氫灌腸劑后出現(xiàn)嚴重的潰瘍性直腸乙狀結(jié)腸炎(Pumphery (龐弗 里)，1951) 。 1967年，肖恩報告了幾例嬰兒使用過氧化氫排除嵌塞的胎便后一段時間死亡 的病例(Shaw(肖恩)等人，1967)。 1981年，邁耶等人報告了三例使用過氧化氫灌腸劑后出 現(xiàn)活性潰瘍性結(jié)腸炎的病例，并陳述到使用過氧化氫灌腸劑后，活性潰瘍性結(jié)腸炎似乎已 成為一個完全可預(yù)見的情況(Meyer (邁耶)等人，1981) 。 1989年，比洛塔和韋恩記述了在 他們研究院的消化道內(nèi)窺鏡檢查單位中，發(fā)現(xiàn)過氧化氫導(dǎo)致結(jié)腸炎的流行。這是因為患者 接受結(jié)腸鏡檢查時，無意間被滴注了過氧化氫。與過氧化氫和結(jié)腸黏膜接觸的過程中，他們 見識了黏膜瞬間白化并產(chǎn)生泡沫狀水泡，他們將這一現(xiàn)象描述為"雪白"病癥(Bilotta(比 洛塔)和Waye(韋恩)，1989)。 1995年，在結(jié)腸鏡檢查過程中，無意間滴注入患者體內(nèi)的過 氧化氫導(dǎo)致了同樣的黏膜反應(yīng)(施瓦茨等，1995)。 2001年，再次記錄了過氧化氫灌腸劑引 發(fā)直腸出血并發(fā)癥的病例(Thibaud(提鮑德)等人，200D。 通過一流的實驗，希恩和拜恩約福森(1960)通過向小鼠直腸注入3%濃度的過氧 化氫溶液，成功的制造出急性和慢性潰瘍性結(jié)腸炎。顯微鏡下檢查死亡的小鼠，發(fā)現(xiàn)了結(jié)腸 黏膜潰瘍以及中性粒細胞侵入物，"與相鄰正常黏膜的對照清楚的顯示了這些物質(zhì)"。注入 藥劑5小時后黏膜炎癥到達肛門以上5厘米處，但是一周后擴大到接近9厘米的地方。此 外，作者還敘述到，在活下來的小鼠當中，除了一些小鼠，大多數(shù)小鼠的結(jié)腸黏膜潰瘍經(jīng)過 IO周就可以治愈，幾乎所有未能治愈小鼠的潰瘍都位于肛門以上幾厘米的左結(jié)腸部位。
過氧化氫是一種無色，強氧化性重質(zhì)液體，是一種強力漂白劑，在污水處理中被用 作消毒劑，也被用作火箭燃料的氧化劑。過氧化氫(H202)也普遍存在于細胞內(nèi)，細胞液以及 亞細胞細胞器，包括過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、以及細胞核，通過各種氧化酶和加氧酵素(例 如黃嘌呤氧化酶、p450細胞色素加氧酶)都可以持續(xù)生產(chǎn)出過氧化氫(Chance (切斯)等 人，1979)。然而，在大多數(shù)細胞內(nèi)，大概90%的過氧化氫是線粒體電子傳遞鏈呼吸活動產(chǎn)生 的有毒副產(chǎn)品(Eaton (伊頓)和Qian (錢)，2002)。 線粒體電子傳遞鏈(ETC)由五個不同的蛋白質(zhì)成份組成。這五個成份嵌入正對著 內(nèi)部液體基質(zhì)的線粒體內(nèi)膜里。其中三個蛋白質(zhì)成份是大型的，具有固定膜的蛋白質(zhì)復(fù)合 體(復(fù)合體I、III和IV)，這些復(fù)合體是連接質(zhì)子泵的跨膜氧化還原劑。質(zhì)子泵的作用是透 過內(nèi)膜將質(zhì)子轉(zhuǎn)移進膜間間隙(Schultz(舒爾茨)和Chan(陳)，2001)。這三個復(fù)合體與 另外兩個較小的活動載體(復(fù)合體II和細胞色素c)相互作用，從而使電子在復(fù)合體之間 穿梭。復(fù)合體II (琥珀酸脫氫酶，EC 1. 3. 5. 1)在復(fù)合體I (NADH脫氫酶EC 1. 6. 5. 3)與復(fù) 合體III(泛醇細胞色素c還原酶，EC 1. 10.2.2)之間轉(zhuǎn)移電子。而細胞色素c(一種含有 血紅素的蛋白質(zhì))將電子從復(fù)合體III轉(zhuǎn)移到復(fù)合體IV(細胞色素c氧化酶EC 1.9.3. 1)。 這些氧化還原劑電子的轉(zhuǎn)移導(dǎo)致了內(nèi)部膜結(jié)合性蛋白質(zhì)復(fù)合體(1、 II和III)的構(gòu)造發(fā)生 改變，從而驅(qū)使質(zhì)子流從基質(zhì)穿過內(nèi)部膜進入膜間間隙。膜間間隙內(nèi)質(zhì)子的復(fù)合集聚產(chǎn)生 了一個電化學梯度，這個化學梯度通過一個跨膜酵素(ATP合酶，EC 3. 6. 1. 34或者復(fù)合體 V)驅(qū)使這些質(zhì)子流返回基質(zhì)。正是這一逆向質(zhì)子流產(chǎn)生的能量降低了它的電化學梯度，而電化學梯度提供了 ATP合酶合成ATP的能量(舒爾茨和陳，2001)。傳遞鏈內(nèi)，電子的最終受 體是雙原子(即分子)氧，這種雙原子氧被細胞色素c氧化酶(復(fù)合體IV)在一個反應(yīng)中 完全還原成水。在這個反應(yīng)中，分子氧(02)結(jié)合4個電子(e—)和4個質(zhì)子(H+)產(chǎn)生兩個分 子的水(H20)。復(fù)合體I和III是細胞內(nèi)最終產(chǎn)生過氧化氫的電子漏的來源(Lemasters(勒 馬斯特斯)和Nieminen (涅米寧)，2001 ;St. -Pierre (圣 皮埃爾)等人，2002)。
在線粒體嵴基質(zhì)方向存在著大量的這種電子傳遞鏈蛋白復(fù)合體，連續(xù)地還原氧氣 以便建立膜間間隙質(zhì)子產(chǎn)生電化學梯度所必需的電化勢，從而合成三磷酸腺苷(ATP)。
然而，并非所有的電子都通過電子傳遞鏈完成傳遞，達到5%的電子在經(jīng)過傳 遞鏈時發(fā)生損耗，并且不能和氧結(jié)合產(chǎn)生水(Liu(劉)，1997 ;Turrens(圖勒斯)，1997 ; Eberhardt(艾伯哈特)，2001)。通過電子傳遞鏈的電子傳遞依賴于必需的結(jié)構(gòu)改變以及 質(zhì)子傳遞，并且這些程序在電子轉(zhuǎn)入傳遞鏈內(nèi)下一個蛋白質(zhì)之前必須完成。如果這些改變 不能發(fā)生，將導(dǎo)致電子傳遞的解耦，這種情況被稱為電子漏(舒爾茨和陳，2001)。從電子 傳遞鏈內(nèi)復(fù)合體I和復(fù)合體III "泄漏的"電子與鄰近的分子氧直接結(jié)合，從而取代鏈內(nèi) 下一個載體而形成超氧化物(02—O，這就是分子氧的第一個(單電子)未完全還原產(chǎn)物 (Cadenas (卡德納斯)和Davies (戴維斯)，2000)。其外部化合價軌道上的額外未配對電 子使超氧化物成為一個自由基，這一般被稱為反應(yīng)性氧代謝產(chǎn)物(ROM)或活性氧(ROS)。 大概有2%的有效氧被電子傳遞鏈的"泄漏"轉(zhuǎn)化為超氧化物(Boveris(博威利斯)和 Chance (切斯)，1973)。生理酸堿值過氧化物以一種陰離子自由基的方式存在，并傾向于作 為一種還原劑(消耗一個電子)而發(fā)生作用(Eberhardt (艾伯哈特)，2001)。如果放任超 氧化物聚集，將對細胞產(chǎn)生嚴重損害。 但是，由于過氧化物具有負電荷，所以無法穿過生物膜，并被包含在線粒體內(nèi)部。 過氧化物可以自發(fā)歧化為過氧化氫，或者，在線粒體內(nèi)生成過氧化物的地點，通過過氧化物 歧化酶(SOD)的酶歧化作用歧化為過氧化氫(H202) (EC1. 15. 1. 1)(切斯，1979 ;艾伯哈特， 2001)。在這個酶反應(yīng)中，兩個過氧化物分子結(jié)合兩個質(zhì)子并轉(zhuǎn)化為一個過氧化氫分子和一 個雙原子氧分子，(02— +02— — SOD， 2H+ — H202+02)。超氧化物被認為是一種線粒體過氧化 氫的化學當量先質(zhì)(切斯等人，1979 ;Han(韓)等人，2001)，這樣，實質(zhì)上，當通過超氧化物 輸送2%的線粒體氧耗量形成H202時，線粒體內(nèi)產(chǎn)生的所有超氧化自由基被轉(zhuǎn)化為過氧化 氫(韓等人，2001 ;博威利斯等人，1972)。 過氧化物和超氧化氫被認為是主要的反應(yīng)性氧代謝物。所有其他的自由基都是由 這些最初形成的反應(yīng)性氧代謝物的次生反應(yīng)產(chǎn)生的(艾伯哈特，2001)。因此，線粒體超氧 化物是形成過氧化氫的中間物。 在反應(yīng)性氧代謝物里面，過氧化氫是獨一無二的。由于它沒有不成對的電子，所以 它不是一個自由基。但是，因為它是已知的最具破壞性的化學反應(yīng)性自由基的直接先質(zhì)， 所以它被認為是一種ROM，這種已知的反應(yīng)性自由基就是氫氧根自由基( 0H)。過氧化氫 可以通過單電子還原為氫氧根自由基。還原劑(給電子物質(zhì))可以是一種過度金屬離子 (Fenton(芬頓)反應(yīng))，也可以是超氧化自由基(Haber-Weiss (哈伯-魏斯)反應(yīng))。
在芬頓反應(yīng)(Fe+2+H202 — Fe+3+H0—+H0 )或(Cu++H202 — Fe+3+HO—+H0 )中，存在 于組織內(nèi)的鐵離子和銅離子都可以被用作還原劑，將過氧化氫均裂分解為氫氧根自由基和 一個氫氧陰離子。
7
上述典型的芬頓反應(yīng)后，當鐵離子存在于鐵催化的哈伯_魏斯反應(yīng) (02— +Fe+3 — 02+Fe+2)中時，可以在體內(nèi)加速哈伯_魏斯反應(yīng)(02— +H202 — 02+H0—+H0 ) (艾伯哈特，2001)。除了細胞內(nèi)生成的超氧化物，超氧化物也被從不同源頭釋放進細胞外空 間，這些源頭包括纖維母細胞、內(nèi)皮細胞、以及腸道細菌(O'Do皿ell(奧丹尼)等人，1996 ; Souchard(舒切德)等人，1998 ;Huycke(?？?等人，2002 ;Huycke(?？?和Moore (摩 爾)，2002 ;?？说?，2001)。然而，在生物學體系中，鐵催化的哈伯-魏斯反應(yīng)被認為是產(chǎn)生 高度反應(yīng)性氫氧根自由基的主要機制(Kehrer (克雷爾)，2000)。 氫氧根自由基是一種非常強有力的氧化劑，它可以以有限的擴散率攻擊其他分 子，并隨意摧毀它遇到的任何物質(zhì)(艾伯哈特，2001 ;Fredovich(弗里多維奇)，1998 ; Chen (陳)和Schopfer (施格弗爾)，1999)。氫氧根自由基是細胞新陳代謝形成的最具化學 性的反應(yīng)性氧自由基，在動物體內(nèi)，主要起氧的細胞毒素效應(yīng)(陳和施格弗爾，1999)。盡管 具有無限的破壞性生物效應(yīng)，氫氧根自由基還是被連續(xù)地以相對輕松的方式生產(chǎn)出來(弗 里多維奇，1998)。這無疑應(yīng)歸功于它的先質(zhì)(H202)的構(gòu)造性質(zhì)，生成氫氧根自由基所必需 的過度金屬催化劑(鐵和銅)的隨處分布，以及作為最初的給電子(還原)物質(zhì)而大量存 在的超氧化自由基。在可控擴散率下起反應(yīng)意思是氫氧根自由基每次遇到其他分子，與其 他分子的每次碰撞后，它都會起反應(yīng)。由于具有極強的反應(yīng)能力，氫氧根自由基可以在一個 點以特定的方式與大多數(shù)分子發(fā)生反應(yīng)，因此，這種反應(yīng)是通過增加或襲奪大多數(shù)氫氧根 自由基清除劑分子來進行的(艾伯哈特，2001)。與氫氧根自由基相互反應(yīng)的分子遭受了嚴 重的破壞，破壞程度使氫氧根自由基能夠撕裂多糖、核酸已經(jīng)離氫氧根自由基產(chǎn)生點只有 幾原子直徑(納米)遠的蛋白質(zhì)(陳和施格弗爾，1999)。 氫氧根自由基的有限擴散反應(yīng)率使它在所有的反應(yīng)性氧代謝物中具有最短的半 衰期(十億分之一秒)(克雷爾，2000)。這一及其短暫的反應(yīng)時間使氫氧根自由基很難清 除所有的特效抗氧化劑分子。因此，氫氧根自由基的直接先質(zhì)——過氧化氫的解毒作用對 于細胞的正常功能及其生存都具有決定性的作用。所以，在過氧化氫能夠在細胞內(nèi)部空間 形成聚集之前，非常復(fù)雜的細胞內(nèi)抗氧化酶機理就應(yīng)在過氧化氫產(chǎn)生的地點就地中和過 氧化氫。這些過氧化劑中和抗氧化酶是過氧化氫酶(1. 11. 1.6)和谷胱甘肽過氧化物酶 (E. C. 1. 11. 1. 9)。存在兩種過氧化氫中和酶系統(tǒng)的事實說明過氧化氫的清除對細胞的生存 是必要的。 過氧化氫酶主要存在于過氧化酶體中，而谷胱甘肽過氧化物酶在整個細胞質(zhì)和線 粒體內(nèi)都可以找到(艾伯哈特，2001，第286頁;戴維斯，2000 ;卡迪納斯和戴維斯，2000)。 過氧化氫酶的區(qū)室作用結(jié)合過氧化氫更低的Km，以及與過氧化氫濃度完全成比例的第一級 催化反應(yīng)說明在移除過氧化氫方面，谷胱甘肽過氧化物酶比氧化氫酶更重要(艾伯哈特， 2001，第125頁)。 過氧化氫的降解輪廓已經(jīng)在人體T細胞系建立起來。本研究證實谷胱甘肽過氧 化物酶的反應(yīng)可以消耗91%的過氧化氫，而氧化氫酶只消耗了較小的9%的過氧化氫(卡 迪納斯和戴維斯，2000)。這些酶的相對重要性已被它們各自的缺陷狀態(tài)的后果證明。人 體內(nèi)缺過氧化氫酶血癥是一種相對良性的病癥，這種病癥的大多數(shù)患者不會出現(xiàn)嚴重的病 狀。 實驗中，缺過氧化氫酶血癥的小鼠同樣沒有自發(fā)性健康問題(伊頓和馬，1995)。
8相反，沒有關(guān)于人體完全缺乏谷胱甘肽過氧化物酶癥的報告，大概是因為這種極為關(guān)鍵的 酶的缺乏阻止了胚胎的產(chǎn)生。 從種群的層次看，據(jù)報告谷胱甘肽過氧化物酶具有人種差異性，在猶太人或地中 海血統(tǒng)民族的一些個體中呈現(xiàn)出告谷胱甘肽過氧化物酶更低的活動性(The Metabolic and Molecular Basis of Inherited Disease (遺傳件疾病的代謝和分子某礎(chǔ))，2001年， 第8版，第4650頁)。同時，還報告了這些種群潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病和傳播要比其他種群高 兩到四倍(Roth(羅斯)等，19S9)。 從上述內(nèi)如我們可以看出仍然需要探索治療炎癥性直腸類疾病的治療模式，比 如說，治療潰瘍性結(jié)腸炎。

發(fā)明內(nèi)容
本主題發(fā)明主要涉及到伴隨有氧化過激或缺乏免疫力還原環(huán)境的病狀的預(yù)防和 治療方法及其材料。 一方面，本發(fā)明涉及到治療炎癥性腸道病癥的方法和合成物，比如，克 羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎。在一個實施例中，本發(fā)明的一種治療合成物構(gòu)成了一種還原劑。 這是一種可以在細胞內(nèi)起作用的還原劑，或者，它也可以是一種細胞外活性劑，或兩者皆 備。在一個實證例中，該還原劑是5-氨基水楊酸(5-ASA)，和/或硫代硫酸鈉，和/或二氫 硫辛酸，和/或a硫辛酸(ALA)，和/或丙酮酸。具體指本發(fā)明的治療合成物包含硫代硫 酸鈉，堿式?jīng)]食子酸鉍，維生素E，以及色甘酸二鈉。具體例證為治療合成物適用于保留灌 腸的治療。另外一個表現(xiàn)為治療合成物適用于口服。 另一方面，本主題發(fā)明設(shè)計到合成物為治療用灌腸制劑。本發(fā)明的一種灌腸劑包 含5-ASA和一種類固醇化合物。本發(fā)明范圍內(nèi)預(yù)期的類固醇化合物包括皮質(zhì)類固醇。具體 指適用作灌腸劑的化合物包含了有效數(shù)量的5-ASA和布地奈德。在另外一個實實施例中， 本發(fā)明的一種化合物包含了 5-ASA和一種腎上腺皮質(zhì)素，比如，CORTENEMA。其他可用于本 發(fā)明的皮質(zhì)類固醇包括但不限于強的松和氫化潑尼松。 本主題發(fā)明也涉及到治療炎癥性腸道病癥的人或動物的治療方法。在主題方法的 一個實施例中，需要治療的人或動物被施用了本發(fā)明的一種合成物，施用這種合成物的方 式是在生物學上可兼容的方式或合成。在一個實施例中，將施用的合成物包含了一種還原 劑，比如5-ASA，硫代硫酸鈉，二氫硫辛酸(R- 二氫硫辛酸，或L- 二氫硫辛酸，或兩者)和/ 或a硫辛酸或ALA。本發(fā)明的一種灌腸劑包含了 5-ASA和一種類固醇化合物。本發(fā)明范圍 內(nèi)預(yù)期的類固醇化合物包括皮質(zhì)類固醇。在一個實施例中，適用作灌腸劑的化合物包含了 有效數(shù)量的5-ASA和布地奈德。在另外一個實施例中，本發(fā)明的一種合成物包含了 5-ASA 和一種腎上腺皮質(zhì)素，比如，CORTENEMA。其他可用于本發(fā)明的皮質(zhì)類固醇包括但不限于強 的松和氫化潑尼松。在一個實證例中，該治療合成物被用于直腸給藥。在另外一個實施例 中，一種口服合成物包含了 a硫辛酸，乙?；腚装彼?N-A-C)和L-谷氨酰胺。
本主題發(fā)明還涉及到口服合成物制劑。在一個實施例中，一種合成物包含了 a硫 辛酸，乙?；腚装彼?N-A-C)和L-谷氨酰胺。a硫辛酸可以是外肖旋a硫辛酸，R-硫 辛酸，或R—二氫硫辛酸。本發(fā)明的合成物也可以包含抑制阻止壞死因子(TNF)的混合物。
本主題發(fā)明還涉及到構(gòu)成本發(fā)明的治療合成物或混合物的用具和容器?？蛇x擇易 于向人體或動物施用治療合成物的容器。
本主題發(fā)明還涉及到檢測和診斷炎癥性腸道病癥的方法和用具，比如，潰瘍性結(jié)腸炎。


圖1A-1E顯示了乙狀結(jié)腸鏡檢查結(jié)果末端乙狀結(jié)腸(圖1A);末端乙狀結(jié)腸(圖
IB)沖間乙狀結(jié)腸(圖1C);末端乙狀結(jié)腸(圖ID);和直腸(圖IE)。 圖2A-2C顯示了乙狀結(jié)腸鏡檢查結(jié)果末端乙狀結(jié)腸(圖2A);直腸(圖2B)，和直腸(圖2C)。
具體實施例方式
本主題發(fā)明主要涉及到伴隨有氧化過激或缺乏免疫力還原環(huán)境的病狀的預(yù)防和治療方法及其材料。本發(fā)明的一個方面涉及到治療炎癥性腸道病癥的方法和合成物，比如，克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎以及應(yīng)激性腸病癥道。據(jù)發(fā)現(xiàn)，過氧化氫的產(chǎn)生及其過量產(chǎn)生并從胃腸道的細胞中逃逸是引起炎癥性腸道病癥的一個因果成份，比如，潰瘍性結(jié)腸炎。作為新陳代謝的副產(chǎn)品，人體的細胞不斷地產(chǎn)生氧自由基，包括過氧化氫。這些自由基必須在它們破壞細胞內(nèi)部解構(gòu)并導(dǎo)致細胞死亡之前在細胞內(nèi)被中和。氧自由基和過氧化氫的不斷產(chǎn)生是一種氧化應(yīng)激，這種氧化應(yīng)激被細胞的還原能力所中和。細胞內(nèi)最重要的還原物質(zhì)是谷胱甘肽。因此，細胞發(fā)揮其功能所要求的還原環(huán)境通過細胞的還原能力(主要是谷胱甘肽)與氧自由基(主要是過氧化氫)之間的一個脆弱平衡來維持。正常情況下，持續(xù)產(chǎn)生的谷胱甘肽可以中和(還原)過氧化氫，從而是細胞內(nèi)部的過氧化氫濃度維持的做一個很低的水平。但是，如果產(chǎn)生的過氧化氫增加，或谷胱甘肽的生產(chǎn)減少，或兩者同時發(fā)生，導(dǎo)致這種平衡被打破，那么，過氧化氫就會穿過細胞膜擴散到細胞外空間。如果這種情況在直腸組織內(nèi)發(fā)生，防御內(nèi)腔病菌的結(jié)腸屏障就會被破壞，抗原性物質(zhì)就會通過組織滲透進入正常的無菌結(jié)腸固有層。并發(fā)的活性中性粒細胞的滲透導(dǎo)致大量的破壞性組織細胞因子以及額外的氧自由基，包括過氧化氫，被分泌出來。這樣， 一個惡性循環(huán)就此建立，借此，接近于暴露在糞便下的隱窩中性粒細胞受到剌激開始產(chǎn)生破壞性細胞因子和氧自由基并試圖擺脫病菌的本地環(huán)境，這將進一步破壞結(jié)腸組織屏障，從而增加病菌滲透并擴大免疫響應(yīng)，直至整個結(jié)腸陷入這種狀況。滲透性中性粒細胞作用下，過氧化氫的產(chǎn)生能夠擴散進入鄰近的正常結(jié)腸組織，并征服它的還原能力并導(dǎo)致鄰近結(jié)腸屏障功能和上皮細胞受到氧化損害。這就將引起滲透從直腸內(nèi)的原始起點繼續(xù)向結(jié)腸的剩余部分蔓延。已擴散或從細胞內(nèi)逃逸的過氧化氫可被轉(zhuǎn)化為氫氧根自由基，氫氧根自由基接著就可以破壞細胞結(jié)構(gòu)，比如基膜和緊密接頭。這將引起免疫響應(yīng)，而這種免疫響應(yīng)將導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的病理。
潰瘍性結(jié)腸炎可以分為兩個階段。第一個階段稱為誘導(dǎo)期，始于過氧化氫在細胞外向細胞外環(huán)境擴散。在這一階段，上皮內(nèi)層看上去整體完整并且組織正常。破壞被限制于結(jié)腸上皮緊密接頭分子破裂和基膜分子破裂，這導(dǎo)致了結(jié)腸對腸道抗原體可透性瞬間增加。這一階段沒有腸道出血現(xiàn)象，整個過程可能持續(xù)數(shù)月至數(shù)年的時間，并引起偶發(fā)性腸道外癥狀表現(xiàn)，比如肌肉痛、關(guān)節(jié)痛以及肌膜炎，這些癥狀表現(xiàn)是由于短暫的結(jié)腸亞黏膜抗原滲透作用引起的偶發(fā)性免疫活化作用。由于，結(jié)腸上皮具有很高的更新率，大約三天就可以更新一次，所以如果初期破壞不是壓倒性的，那么，結(jié)腸上皮可以修復(fù)損壞的組織并恢復(fù)結(jié)
10腸屏障。但是，如果上皮屏障不能重新聚集，并且抗原體的入侵是持久性的，那么，將發(fā)生以嗜中性細胞滲透為表現(xiàn)形式的更進一步的免疫活化作用。 潰瘍性結(jié)腸炎的第二個階段開始于中性粒細胞侵入結(jié)腸組織，第二階段稱為繁殖期。正是在這一階段，嗜中性衍生細胞因子和氧自由基開始損傷組織，引起本疾病所具有的黏膜潰瘍、直腸出血以及腹瀉等特色癥狀。 將潰瘍性結(jié)腸炎的分為兩個不同階段的重要性在于能夠通過控制陽性危險因子(發(fā)炎性先驅(qū)物質(zhì)，過氧化氫生產(chǎn)的增加)和陰性危險因子(抗炎性物質(zhì)，過氧化氫生產(chǎn)的減少)，從而在誘導(dǎo)期緩和發(fā)炎過程。繁殖期，如其名稱蘊含之意，是一個自續(xù)的和自動剌激的極端，并且不受危險因子的影響。正是在繁殖期，由于結(jié)腸組織被破壞，患者表現(xiàn)出直腸出血，并且如果不借助外部調(diào)節(jié)來扭轉(zhuǎn)這一進程，那么可能會發(fā)展到大量結(jié)腸滲透，并需進行結(jié)腸切除術(shù)治療。結(jié)腸切除術(shù)可以清除誘導(dǎo)源和繁殖源，以及已經(jīng)被破壞或具有可滲透性屏障的腸道部分。這也將消除抗原體系統(tǒng)性入侵的入口，并終止發(fā)炎過程。然而，如果危險因子促進過氧化氫生產(chǎn)這一現(xiàn)象能夠被識別并被清除，那么，可以在誘導(dǎo)期的任何階段終止結(jié)腸滲透作用。在繁殖期，通過適當?shù)耐獠空{(diào)節(jié)，并使用本發(fā)明的方法和合成物來治療患者，可以達到終止繁殖的療效。 能夠用于中和過氧化氫及其分解產(chǎn)物(氫氧根自由基以及氫氧陰離子)的任何物質(zhì)都在本發(fā)明預(yù)期的范圍內(nèi)。這些物質(zhì)包括但不限于氧化劑、還原劑、酶類，比如谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶，催化劑(比如鋅粉、或其他金屬粉末、或金屬催化劑)、碳酸氫鹽緩沖系中的錳、以及石棉纖維或其他能夠分解過氧化氫的纖維。谷胱甘肽，或其先質(zhì)一氨基酸(甘氨酸、半胱氨酸以及谷氨酸)也可用于本發(fā)明的方法或合成物。由于附有酯基的谷胱甘肽被吸收進細胞后比谷胱甘肽更穩(wěn)定，所以，單酯或雙酯的谷胱甘肽衍生物可以與本主題發(fā)明同時使用。 在一個實施例中，本發(fā)明一種治療性合成物至少由一種還原劑組成。這種還原劑可以是主要在細胞外起作用的還原劑，也可以是主要在細胞內(nèi)起作用的還原劑，或同時在細胞內(nèi)和細胞外起作用的還原劑。在一個實施例中，本發(fā)明一種治療性合成物至少由一種細胞外還原劑組成，或至少有一種細胞內(nèi)還原劑組成。 在一個實證例中，還原劑是一種硫代硫酸鹽離子，這種硫代硫酸鹽離子可以一種鹽的形式提供，比如，例如，硫代硫酸鈉、硫代硫酸銨、硫代硫酸鈣、硫代硫酸鉀、硫代硫酸銀、硫代硫酸膽堿、硫代硫酸鈉金、硫代硫酸鎂氨基己糖苷酶水合物、以及次硫代硫酸鹽。本發(fā)明預(yù)期范圍內(nèi)的其他還原劑的示例包括但不限于金屬硼氫化物、二甲基硫脲、連二亞硫酸鈉、重亞硫酸鈉、二氧化硫脲、二乙基羥胺、鋅粉、氰基硼氫化鈉、氫化鈉、硼酸三甲酯、三苯磷氯化芐、三苯磷溴丁烷、醋酸乙酯三苯磷酸鹽、溴化乙酯三苯磷酸鹽、碘化乙酯三苯磷酸鹽、乙基三苯磷磷酸鹽、以及丁基醋酸磷酸鹽。另外一種可使用的還原劑是谷胱甘肽，或者一種單酯或雙酯谷胱甘肽、或者二酯谷胱甘肽、或多酯谷胱甘肽衍生物。 在一個實證例中，本發(fā)明的一種細胞內(nèi)還原劑是a硫辛酸(ALA)、或二氫硫辛酸、或丙酮酸鹽。這些還原劑都可以進入細胞，并與過氧化氫發(fā)生反應(yīng)。ALA是一種小分子(麗206.3，CAS#1077-28-7)。它以依據(jù)它的氧化還原狀態(tài)(氧化或還原)的多種名稱以及大約為三個碳手性中心的對映體構(gòu)造所聞名?；贒和L命名法的更老的相關(guān)物質(zhì)(對比)已經(jīng)被R和S指示性絕對立體化學構(gòu)型所取代。<formula>formula see original document page 12</formula>
肪酸。
(氧化)
硫辛酸的替換術(shù)語
硫辛酸
硫辛酸
1，2-二硫戊環(huán)_3-戊酸1，2-二硫戊環(huán)_3-戊酸DL-l，2-二硫戊環(huán)_3-戊酸
(還原)二ft硫辛酸的替換術(shù)語6，8硫辛酸DL-6硫辛酸R-二氫-硫辛酸6，8二氫硫辛酸RS- 二氫-硫辛酸
ALA是一種八碳環(huán)狀二硫化物，包含著人體所有細胞線粒體中合成的極微量的脂只有R-同分異構(gòu)體被自然合成。在自然狀態(tài)下，ALA通過酰胺鍵內(nèi)的末端羧基依共價鍵與賴氨酸殘留物的微量氨基結(jié)合，從而形成部分多亞基酶復(fù)合物，這些復(fù)合物可以促進線粒體內(nèi)新陳代謝反應(yīng)的生命能量。細胞質(zhì)內(nèi)或環(huán)流中很少有自由的ALA。
ALA以酶的轉(zhuǎn)譯后修飾的形式完成它與同源蛋白質(zhì)的結(jié)合。在它與酶己結(jié)合狀態(tài)下，它是一種必需的酶輔因子，被稱為硫辛酰胺。使用ALA的酶復(fù)合物是丙酮酸脫氫酶復(fù)合物，這種復(fù)合物可以催化丙酮酸鹽轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，乙酰輔酶A是通過克雷布斯(檸檬酸)循環(huán)產(chǎn)生能量的一種關(guān)鍵物質(zhì)?？梢源呋硗庖粋€重要的克雷布斯反應(yīng)的a酮戊二酸復(fù)合體，可以催化a-酮酸脫氫酶復(fù)合體，而a-酮酸脫氫酶復(fù)合體可以催化三個氨基酸分支鏈(纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)的氧化脫羧基。從而產(chǎn)生乙酰輔酶A以進入克雷布斯循環(huán)并最終進入甘胺酸分裂系統(tǒng)復(fù)合物，甘胺酸分裂系統(tǒng)復(fù)合物復(fù)合物可以促進5， 10亞甲基四氫葉酸鹽的形成。而5，10亞甲基四氫葉酸鹽核酸的合成中扮演著極其重要的角色。 ALA的自然功能是在每種酶復(fù)合物的所有亞基中與?；Y(jié)合，并將酰基團轉(zhuǎn)移
到連續(xù)性酶活性部位。在這一?；D(zhuǎn)移的過程中，ALA被還原為二氫辛硫酸，并且隨后又被
再氧化回ALA。這一過程是通過它的附屬同原酶實現(xiàn)的，這些附屬同源酶使ALA預(yù)備好進入
下一個?；D(zhuǎn)移過程。口服后，ALA具有高度的生物藥效率，并且表現(xiàn)出脂可溶性和水可溶
性。這使得它在細胞內(nèi)空間和細胞外空間都可以分布。 本發(fā)明的治療性合成物可以選擇如下的一種或幾種 1)抗菌性或可以防止或抑制病菌粘附到腸胃組織或細胞的一種化合物或合成物。在一個實施例中，這種化合物可以是一種鉍鹽。在一個實證例中，這種化合物可以是堿式?jīng)]食子酸鉍。可以包括用于對抗存在與胃腸道的病菌的活性抗菌素。在一個更好的實施例中，該化合物對擬桿菌屬具有活性對抗性。 2)可以增加粘性(對于位阻現(xiàn)象來說)，和/或抑制上皮脂質(zhì)過氧化作用的化合物或合成物，比如，例如，d-a生育酚(維生素E)，羧甲基纖維素、或其他具有粘性的單糖或多糖化合物。 3)抑制肥大細胞和/或有助于封閉或恢復(fù)胃腸道內(nèi)細胞間緊密接頭的化合物或合成物。
4)清除氫氧自由基的化合物或合成物。在一個實施例中，這種化合物可以是二甲基亞砜(DMS0)、甘露醇、甲二磺醛、脫氧核糖或DMP0(5， 5- 二甲基吡咯烷酮-N-氧化物)。
5)抑制或封鎖還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的化合物或合成物，比如匿S0或香莢蘭乙酮。 6)可以殺死或抑制結(jié)腸范圍內(nèi)中性粒細胞或預(yù)防和抑制中性粒細胞進入結(jié)腸或離開結(jié)腸脈管系統(tǒng)的化合物或合成物。在一個實施例中，可以使用脈管內(nèi)皮中存在的脈管粘附分子(ICAMS)的抗體或阻滯劑，比如，選擇蛋白、或抗體或?qū)?yīng)于中性粒細胞的反配體的其他阻滯劑，比如，整合素。 7)制止或抑制中性粒細胞產(chǎn)生過氧化氫的化合物或合成物。比如DSM0或己酮可可堿。 8)螯合或隔絕離子分子，這些離子分子是對于發(fā)生過氧化氫還原作用產(chǎn)生氫氧自由基是必需的。在一個實施例中，可以使用離子螯合劑——去鐵胺。
9)可以包括5-氨基水楊酸(5-ASA)化合物或巴柳氮二鈉。 10)中和或清除氫氧離子的化合物。在一個實施例中，本發(fā)明的一種合成物可以由弱酸或弱堿組成，比如，包含有碳酸氫鈉的，PH值大概在6. 8到7. 4之間的緩沖性溶液。
11)任何抑制電子傳遞鏈及其成份的試劑或治療合成物(比如，抑制細胞色素氧化酶的一種制劑或治療合成物)。 在一個實施例中，本發(fā)明的一種合成物包含了一種還原劑和一種NADPH-氧化酶抑制劑。更可取的是，這種還原劑是一種硫代硫酸鹽，比如硫代硫酸鈉，并且NADPH-氧化酶抑制劑是香莢蘭乙酮。在更好的實施例中，該合成物為一種口服膠囊，當這種膠囊存在于結(jié)腸內(nèi)時，它可以延遲溶解作用。 本發(fā)明的各類合成物可以作為單一合成物，或他們可以同時或不同時，通過相同的或不同的途徑(比如，口服，直腸等)使用于同一位病人。在一個實施例中，本發(fā)明的一種合成物以混合物或適合于直腸灌注的溶液的形式施用，并且這種化合物包含了硫代硫酸鈉、堿式?jīng)]食子酸鉍、維生素E、以及色甘酸二鈉。在一個實施例中，本發(fā)明的一種栓劑治療性合成物包含了丁酸鹽、和單酯谷胱甘肽或其他谷胱甘肽酯類衍生物。本栓劑可以選擇包括或不包括硫代硫酸鈉和/或維生素E。 本主題發(fā)明涉及到預(yù)防和/或治療由氧化過激引起的或惡化的疾病，或由細胞內(nèi)或細胞外還原環(huán)境被破壞引起或惡化的疾病的方法。本主題發(fā)明的一個實施例涉及到預(yù)防和/或治療患有一種炎癥性腸道病癥的人體或動物，比如，例如，潰瘍性結(jié)腸炎。本主題發(fā)明還涉及到預(yù)防和/或治療輻射誘導(dǎo)性直腸炎的方法，這種直腸炎可能起因于前列腺癌或其他病癥的輻射治療?？墒褂帽景l(fā)明的方法和合成物預(yù)防和/或治療的其他病癥包括但不限于帕金森氏癥、白內(nèi)障、大腦麻痹癥、以及各類胃腸道癌癥，比如，胃癌和結(jié)腸癌。本發(fā)明的合成物還可被用于治療或預(yù)防結(jié)腸切除術(shù)后結(jié)腸隱窩發(fā)炎。結(jié)腸隱窩炎是一種"J"隱窩炎癥，這種炎癥是結(jié)腸被切除后，由于外科手術(shù)而從小腸最后一英尺開始的炎癥。小腸的最后六英寸是向上彎曲的，并且被縫合回小腸內(nèi)部。在"J"隱窩的轉(zhuǎn)彎處留一個孔與肛門連接。目的是為糞便留一個存儲地，以避開外袋。 對于內(nèi)腔內(nèi)容物來說，小腸更容易被滲透，并且小腸存儲糞便，由于病菌含量的增加和氧化過激的增加，這種方式就能夠?qū)е掳l(fā)炎。灌腸劑以及口服治療合成物可被用于治療或預(yù)防結(jié)腸隱窩炎。 本主題發(fā)明還涉及到治療痔瘡的方法。在一個實施例中，本發(fā)明的一種液態(tài)灌腸 劑制劑被直接用于治療痔瘡。在一個特定的實施例中，本發(fā)明的一種液態(tài)灌腸劑制劑被置 于一種合適的材料上，比如紗布片或吸水墊，并且包含有該材料的灌腸劑與痔瘡接觸， 一般 大概兩到四小時。這種施用每天一到兩次。 在一個實施例中，需要治療的人或動物被施用了有發(fā)明的效數(shù)量的本一種合成 物，施用這種合成物的方式是在生物學上可兼容的方式或合成。對于預(yù)防性治療來說，在被 治療的病癥發(fā)作之前，應(yīng)對人體或動物施用本發(fā)明的有效數(shù)量的治療合成物。例如，有效數(shù) 量的本發(fā)明的一種合成物在進行前列腺癌的輻射治療之前被施用，以防止輻射誘導(dǎo)性結(jié)腸 隱窩炎。在一個實證例中，合成物的還原劑是ALA和/或二氫硫辛酸和/或丙酮酸鹽和/或 5-ASA和/或一種硫代硫酸鹽，比如，例如，硫代硫酸鈉。在一個實施例中，治療合成物被用 作直腸給藥或延緩溶解性口服膠囊。延緩溶解性劑型包括pH依賴性膠囊和包衣，這些膠囊 和包衣在與結(jié)腸環(huán)境相關(guān)聯(lián)的pH值下溶解。pH依賴性材料包括但不限于甲基丙烯酸甲 酯、甲基丙烯酸和/或丙烯酸乙酯聚合物，包括，例如，異丁烯酸銨共聚物。將本發(fā)明的一種 合成物傳遞到結(jié)腸的其他劑型包括，例如，時間依賴性傳遞系統(tǒng)、壓力依賴性傳遞系統(tǒng)、細 菌依賴性系統(tǒng)(Basit(巴斯特)等，2003)。同時，預(yù)期的劑型還有利用氧化電勢依賴性系 統(tǒng)。結(jié)腸內(nèi)容物比小腸內(nèi)容物具有更高的氧化電勢，因為很多時候結(jié)腸內(nèi)容納了更多的細 菌。氧化電勢依賴性系統(tǒng)是一種傳遞系統(tǒng)，這種傳遞系統(tǒng)對氧化電勢很敏感，并且釋放它的 內(nèi)容物或當膠囊在結(jié)腸內(nèi)面臨更高水平的氧化作用時，這種傳遞系統(tǒng)就變得具有活性。這 種系統(tǒng)可以以前體藥物的方式施用，該前體藥物發(fā)生氧化時被降解為一種活性藥物以及膠 囊，這種膠囊在結(jié)腸內(nèi)面臨高水平氧化作用時會溶解。在一個實施例中，對患者同時施用了 一種直腸給藥和口服合成物，特別是該患者具有直腸出血癥狀時。在控制住出血后，可以選 擇中斷直腸給藥治療，如果需要，繼續(xù)進行口服治療。可選擇硫代硫酸鹽，比如硫代硫酸鈉 作為靜脈注射溶液，例如，可以施用10%到25% (w/v)濃度的硫代硫酸鈉溶液。正如本文 所述，本發(fā)明的方法還考慮通過單一的或聯(lián)合使用本發(fā)明治療合成物設(shè)立患者生活方式改 變機制的可能性。 對單個患者施用各類化合物的劑量范圍可大致有熟練的臨床醫(yī)生來確定。本文提 供的劑量范圍示例僅用于指導(dǎo)，不應(yīng)理解為在施用劑量方面限制了本發(fā)明的范圍。例如，劑 量范圍可以為 參硫代硫酸鈉 150-250mg/kg體重
參a硫辛酸 10-20mg/kg體重
參二氫硫辛酸 10-20mg/kg體重
參丙酮酸鹽 50-100mg/kg體重 參堿式?jīng)]食子酸鉍2-4mg/kg體重
參維生素E 25-30IU/kg體重
參色甘酸鈉 l-3mg/kg體重。 在一個實施例中，硫代硫酸鈉、堿式?jīng)]食子酸鉍、維生素E、以及色甘酸鈉的組分可 根據(jù)下述步驟，在消毒水中調(diào)制成一種保留灌腸劑 第一步將硫代硫酸鈉在水中溶解，輕輕搖動直到晶體全部溶解。
第二步加入色甘酸鈉，直到完全溶解。
第三步加入堿式?jīng)]食子酸鉍，輕輕搖動，直到完全懸浮。
第四步加入維生素E，并搖動，直到懸浮。 本發(fā)明的方法也包括口服治療藥物，這種藥物可以降低內(nèi)生性兒茶酚胺，比如，可 樂定，這種治療應(yīng)根據(jù)患者表現(xiàn)出的癥狀和危險因子來確定。能夠抑制或預(yù)防線粒體MAO 代謝出內(nèi)生性兒茶酚胺的單胺氧化酶(MAO)抑制劑也可作為病人養(yǎng)生療法治療的一部分 使用，并且也在本發(fā)明預(yù)期的范圍內(nèi)。更可取的是，MAO抑制劑是可以不穿過血腦屏障的抑 制劑。在本發(fā)明的一個實施例中，一種可樂定(或類似的藥物)合成物和一種MAO抑制劑 被施用于一位患者。 NADra氧化酶抑制劑的施用，比如，己酮可可堿和香莢蘭乙酮，也在本發(fā)明預(yù)期的 范圍內(nèi)。這些抑制劑可以作為一種在結(jié)腸內(nèi)溶解的延緩溶解性口服膠囊，或直腸給藥溶劑 來施用。己酮可可堿具有抗炎功效，并且，通過滲透性中性粒細胞表面的腺苷酸受體，己酮
可可堿可以像嘌呤能促效藥一樣發(fā)揮功效。這樣就可以抑制NADra氧化酶和細胞死亡。連
同改變生活方式，這種口服治療可以繼續(xù)進行，作為一種維護性治療，以防止再誘導(dǎo)和復(fù) 發(fā)。 在一個實施例中，本發(fā)明的一種合成物由一種還原劑和一種NADPH-氧化酶抑制 劑組成。在一個實施例中，這種還原劑是一種硫代硫酸鹽，比如，硫代硫酸鈉，和/或5-ASA， 和/或ALA和/或二氫硫辛酸、和/或丙酮酸鹽，并且這種NADPH-氧化酶抑制劑是一種香 莢蘭乙酮。在另一個實施例中，提供的合成物是一種在結(jié)腸內(nèi)部延緩性溶解的口服膠囊。 延緩性溶解劑型包括pH依賴性膠囊和包衣，這種膠囊和包衣只在與結(jié)腸環(huán)境相關(guān)聯(lián)的pH 值下溶解。PH依賴性材料的實例包括但不限于甲基丙稀酸甲酯，甲基丙烯酸和/或丙烯 酸乙酯聚合物，包括，例如，異丁烯酸銨共聚物。將本發(fā)明的一種合成物傳遞到結(jié)腸的其他 劑型包括，例如，時間依賴性傳遞系統(tǒng)、壓力依賴性傳遞系統(tǒng)、細菌依賴性系統(tǒng)(巴斯特等， 2003)。同時，預(yù)期的劑型還有利用氧化電勢依賴性系統(tǒng)。 本主題發(fā)明的另一個方面涉及到灌腸劑。 一種灌腸劑制劑包含一種還原劑(或其 它任何具有相似作用模式的藥劑)和一種類固醇。在一個實施例中，本發(fā)明的一種灌腸劑 制劑包含了一種氨基水楊酸，比如5-ASA(5-氨基水楊酸，即美沙拉秦)或4-ASA(4-氨 基水楊酸)，或任何類似物或水楊酸的衍生物，和一種類固醇化合物。在另一個實施例中， 合成物包含柳氮磺胺吡啶作為還原劑。本發(fā)明預(yù)期范圍內(nèi)的類固醇化合物包括皮質(zhì)類固 醇。在一個實證例中，這種類固醇包含了布地縮松，或一種類似物或其衍生物。在一個具 體實施例中，適用于灌腸劑治療的一種合成物包含了有效數(shù)量的5-ASA和布地縮松。在另 一個具體實施例中，本發(fā)明的一種合成物包含了 5-ASA和一中氫化可的松化合物，比如， Cortenema?？捎糜诒景l(fā)明的其他皮質(zhì)類固醇包括但不限于強的松，潑尼松龍，倍他米松， 倍氯米松，以及替可的松。灌腸劑制劑也可以選擇包含聚山梨酸酯-80(或其他適用的乳化 劑)，和/或任何短鏈脂肪酸(例如一種，5，4，3，或2脂肪酸)作為一種結(jié)腸上皮能量源， 比如丁酸鈉(4碳)，丙酸(3碳)，醋酸鹽(2碳)等，和/或任何肥大細胞穩(wěn)定劑，比如色甘 酸鈉(Gastrocrom)或奈多羅米鈉(AL0CRIL)。在更進一步治療的實施例中，本發(fā)明的灌腸 劑制劑可以包含ALA。在一個實施例中，ALA被配制為ALA的R和L同分異構(gòu)體的消旋混 合物。在另一個實施例中，ALA被配制為R-a-硫辛酸。在另一個實施例中，ALA被配制為
15R_a -硫辛酸。在一個實施例中，本發(fā)明的一種灌腸劑制劑包含了一種有效數(shù)量的5-ASA， 布地縮松，丁酸鈉，四苷酸鈉，以及可以選擇的一種a -硫辛酸，比如R- 二氫硫辛酸。
在一個實施例中，合成物包含了大約200mg到3000mg，或大約500mg到1500mg的 5-ASA，或大約750mg到1250mg的5_ASA。在一個具體實施例中，該合成物包含了 1150mg的 5-ASA。在另一個實施例中，該合成物包含了 2600mg的5_ASA。在一個實施例中，5-ASA的 應(yīng)用為，按照體重30-40mg/kg。合成物也可以包含大約lmg到10mg的布地縮松或氫化可的 松或大約8mg的氫化可的松，或大約2. 5mg到7. 5mg的布地縮松或氫化可的松或大約8mg 的氫化可的松。在具體實施例中，該化合物包含大約5mg布地縮松。在一個實施例中，布地 縮松的使用量為按照體重0.05-0. 15mg/kg。如果合成物含有色甘酸鈉，其數(shù)量可以為大 約10mg到200mg，或大約20mg-100mg，或30mg到70mg。在一個具體實施例中，色甘酸鈉的 配制量為40mg。在另外一個實施例中，色甘酸鈉的配制量大約為100mg。如果合成物包含 了聚山梨酸酯-80，其配制濃度大約為1% (v/v)到10% (v/v)。如果該合成物包含了丁酸 鈉，其配制量大約為500mg到1500mg。在一個實施例中，該合成物中聚山梨酸酯_80的配制 濃度大約為6% (v/v)。在一個實證例中，適用于灌腸治療的灌腸劑制劑配制如下17cc的 5-ASA(大約1， 150mg的5-ASA) ， lcc的布地縮松(每cc含量為5mg) ， 2cc的色甘酸鈉(每 cc的含量為20mg)，和6X (v/v)的聚山梨酸酯_80。在另外一個具體實施例中， 一種合成 物包含了 10cc的氫化可的松(共16. 6mg) ， 30cc的5-ASA(共2mg)，以及可以選擇的a _硫 辛酸和/或L-谷氨酰胺和/或N-乙酰半胱氨酸和/或5cc的色甘酸鈉(100mg)，和/或 12. 5cc的丁酸鈉(1. lgm)。 在一個具體實施例中，本發(fā)明的一種灌腸劑制劑包含了 5-ASA，布地縮松，色甘酸 鈉，以及丁酸鈉。本制劑可包含，例如，大約1到5克的5-ASA，大約1到10mg的布地縮松， 大約10到1000mg的色甘酸鈉，以及大約5到50毫摩爾的丁酸鈉。在更特殊的制劑中，灌 腸劑可以配制為，包含有大約2. 7克的5-ASA(60cc的容器中裝入40cc的5-ASA，60cc的 5-ASA包含4克5-ASA)，大約5mg的布地縮松(lcc的含量)，大約100mg色甘酸鈉(5cc的 含量)，和大約15毫摩爾的丁酸鈉(15cc的1摩爾丁酸鈉水溶液含量)。
本發(fā)明的灌腸劑合成物施用于患者的劑量和施用時間有臨床醫(yī)生確定。在一個實 施例中，本發(fā)明的一種灌腸劑被每天施用。也可選擇每隔一天交替使用含有還原劑的灌腸 劑，比如5-ASA，也可選擇使用色甘酸鈉和/或聚山梨酸酯-SO，但是不得使用類固醇。在一 個實施例中，一位患者每天使用本發(fā)明的一種灌腸劑，大概持續(xù)了一個月。在治療的第二個 月，可選擇逐步減少類固醇的數(shù)量，例如，類固醇可以經(jīng)過四周的逐步減量，直到灌腸劑中 不含類固醇為止(例如治療的第三個月開始的時候)。在治療的第三個月，每天施用于患 者的本發(fā)明的灌腸劑可以包含還原劑，(比如，5-ASA)和一種短鏈脂肪酸(例如丁酸鈉)， 但不包括類固醇。的治療的第四個月，每天施用于患者的本發(fā)明的灌腸劑可以包含還原劑 但不包括短鏈脂肪酸和類固醇。在治療的第五個月，患者接受與第四個月相同的灌腸劑，但 是應(yīng)每隔一天施用，或根據(jù)實際需要進行選擇。 本主題發(fā)明還涉及到口服治療的合成物制劑。這些口服合成物可以作為單獨的治 療使用，也可以聯(lián)合本發(fā)明的灌腸劑制劑使用。在一個實施例中，在灌腸劑治療期間使用本 發(fā)明的口服合成物，并且在灌腸劑治療停止后繼續(xù)口服治療。在一個實施例中，一種合成物 包含了 口服還原劑，比如，a -硫辛酸或任何其他口服藥劑，這些口服藥劑直接或間接地通過中介機制而作為一種細胞內(nèi)或細胞外還原劑而作用，并且，中和或預(yù)防細胞內(nèi)或細胞外 過氧化氫或氧自由基的形成。本發(fā)明預(yù)期范圍內(nèi)的其他口服還原劑包括但不限于硫代硫 酸鈉，巰丙酰甘氨酸，N-乙酰半胱氨酸，谷胱甘肽，抗黑變激素，Q10輔酶，依布硒以及一種 氨基水楊酸，比如5-氨基水楊酸(5-ASA)。除了適用于灌腸劑制劑，5-ASA同樣適用于口服 制劑(包括，例如，柳氮磺胺吡啶，美沙拉秦，奧柳氮鈉，氨基水楊酸，巴柳氮，奧柳氮鈉)并 且能夠中和細胞外過氧化氫和氧自由基。a-硫辛酸可以是外消旋a-硫辛酸，R-硫辛酸， R- 二氫_硫辛酸，L-硫辛酸，和/或L- 二氫-硫辛酸。在一個實施例中，a -硫辛酸的用 量為5-10mg/kg。在具體實施例中，一名患者每天口服大概100-1000mg或更多量的a-硫 辛酸，更可取的是R- 二氫_硫辛酸。在一個更具體實施例中， 一名患者每天口服大概600mg 的a-硫辛酸，更可取的是R-二氫-硫辛酸。也可選擇，患者接受大約300mg的a -硫辛 酸，每日兩次，更可取的是R- 二氫_硫辛酸。 在一個實施例中，本發(fā)明的一種口服合成物包含了 a-硫辛酸，和/或N-乙 基-L-半胱氨酸(N-A-C)，和/或L-谷氨酰胺。本發(fā)明的合成物也可包含抑制組織壞死因 子(TNF)的化合物。本發(fā)明預(yù)期范圍內(nèi)的TNF抑制劑化合物包括白藜蘆醇，蕁麻葉提取 物，以及黃連素。本發(fā)明的合成物也可選擇包括直接中和過氧化氫的化合物(例如丙酮 酸鈣)，有助于保護蛋白質(zhì)不受氧化或老化的化合物(例如L-肌肽)，和/或?qū)怂峋哂?br> 保護作用的化合物(比如D-葡糖二酸鈣)。該合成物也可選擇包括以下物質(zhì)的一種或多
種硒，維生素B-2 (和磺酸)，維生素B-12，葉酸，以及維生素H。在一個具體實施例中，本發(fā) 明的一種合成物包含了 300mg的R- 二氫-硫辛酸，500mg的N-A-C， 500mg的L-谷氨酰胺， 200 ii g的硒，100mg的維生素B-2， 500 y g的維生素B_12， 800 y g的葉酸，2， 000 y g維生素 H， 1500mg的丙酮酸鈣，120mg的白藜蘆醇，275mg的蕁麻葉提取物，以及200mg的未加工的蕁 麻葉粉末，150mg的金印草根混合物形式的黃連素和300mg的金印草粉末，1000mg的L-肌 肽，和250mg的D-葡糖二酸鈣。 在一個實施例中，合成物以口服制劑的形式配制，比如膠囊，這種口服制劑在患者 的胃里和/或小腸里溶解。在另一個實施例中，合成物以口服膠囊的形式配制，這種膠囊進 入結(jié)腸后才會溶解。延緩性溶解劑型包括pH依賴性膠囊和包衣，這種膠囊和包衣只在與 結(jié)腸環(huán)境相關(guān)聯(lián)的pH值下溶解。pH依賴性材料的實例包括但不限于甲基丙稀酸甲酯，甲 基丙烯酸和/或丙烯酸乙酯聚合物，包括，例如，異丁烯酸銨共聚物。將本發(fā)明的一種合成 物傳遞到結(jié)腸的其他劑型包括，例如，時間依賴性傳遞系統(tǒng)、壓力依賴性傳遞系統(tǒng)、細菌依 賴性系統(tǒng)(巴斯特等，2003)。同時，預(yù)期的劑型還有利用氧化電勢依賴性系統(tǒng)。
可根據(jù)患者飲食的變化聯(lián)合使用本發(fā)明的灌腸劑合成物和口服合成物。本發(fā)明預(yù) 期范圍內(nèi)的飲食的變化包括礦物油消耗量的增加，不可溶纖維，李子汁，以及VSL#3。接受 治療的患者應(yīng)避免飲酒。 本發(fā)明的方法和合成物可以用于人類和其他動物。本發(fā)明的合成物可以本文所述 的方式用于需要接受治療的動物，比如，口服，和/或灌腸劑，等。本發(fā)明預(yù)期范圍內(nèi)的其他 動物包括馴養(yǎng)家畜，農(nóng)用牲畜，或動物園飼養(yǎng)的動物，或馬戲團飼養(yǎng)的動物。馴養(yǎng)家畜包 括，例如，狗、貓、兔子、雪貂、天竺鼠、倉鼠、小豬、猴子或其他靈長類動物和沙鼠。農(nóng)用牲畜 包括例如，馬、騾子、驢子、小驢、牛、奶牛、豬、羊和短吻鱷。動物園或馬戲團飼養(yǎng)的動物包 括，例如，獅子、老虎、熊、駱駝、長頸鹿、河馬和犀牛。
如上所述，本發(fā)明的口服或灌腸劑合成物可以單獨或聯(lián)合用于需要接受治療的人 體或動物。因此，在一個實施例中，對需要接受治療的人體或動物，本發(fā)明的一種方法包含 了單獨使用有效數(shù)量的本發(fā)明的一種口服合成物，或單獨使用本發(fā)明的有效數(shù)量的一種灌 腸劑合成物，或有效數(shù)量的口服合成物和灌腸劑合成物聯(lián)合使用。在一個實施例中，包含有 ALA(例如R-二氫-硫辛酸)有效數(shù)量的一種口服合成物，和包含有氨基氨基水楊酸(例 如5-ASA)的一種灌腸劑合成物，和/或任何使用的類固醇(比如布地縮松)，和/或任 何肥大細胞穩(wěn)定劑(比如色甘酸鈉)，和/或任何短鏈脂肪酸(比如丁酸鈉)，也可以選 擇一種乳化劑(聚山梨酸酯-80)，被施用于人體或動物。口服或灌腸劑合成物可以每天使 用，或每隔一天使用，或每隔兩天使用，或每隔三天使用，或每周使用一次，或熟練醫(yī)師確定 的其他合適的服用時間表。口服合成物和灌腸劑合成物可以交替使用，例如奇數(shù)日使用口 服合成物，偶數(shù)日使用灌腸劑合成物。在一個實施例中，每天施用口服合成物，每隔一天，兩 天，三天，四天，五天，六天或一周施用一次灌腸劑合成物?？诜铣晌锘蚬嗄c劑合成物每天 也可以單獨的使用一次或多次(比如，兩次，或三次等)。 本主題發(fā)明的有用化合物可根據(jù)已知的方法配制有用的藥物合成物。很多著名的 資料都詳細描繪素了相關(guān)配方，這些配方對于熟練醫(yī)師來說很容易使用。例如，《雷鳴登氏 制藥科學》E.W.馬丁著，描述了可以與本主題發(fā)明結(jié)合使用的配方。 一般而言，本主題發(fā)明 的合成物配制的原則是有效數(shù)量的化合物結(jié)合一個合適的載體以便促進該合成物的有效 施用。本發(fā)明各類方法使用的合成物也可以是各種形式。這些形式包括固態(tài)，半固態(tài)，以 及液態(tài)劑量形式，比如片劑、藥丸、粉末、液態(tài)溶液或懸浮液、栓劑、可注射的并不可溶解的 溶液、以及噴霧劑。優(yōu)先使用何種方式，取決于計劃的給藥模式以及治療方法。更好的合成 物包括熟練醫(yī)師所熟知的常規(guī)藥物學可接受的載體和稀釋劑。用于本發(fā)明化合物的載體 和稀釋劑的實例包括乙醇、二甲亞砜、甘油、氧化鋁、淀粉，以及等效的載體和稀釋齊U。為了 提供治療療法使用的這些藥劑的用法，本發(fā)明新的藥劑合成物的重量大概占合成物與載體 或稀釋劑總重量的O. 1%到45%，主要占大約1%到15%。 本主題發(fā)明還涉及到本發(fā)明的化合物和合成物的劑量形式。在一個實施例中，提 供的化合物和合成物是口服或直腸給藥的劑量形式。包含一個在結(jié)腸內(nèi)溶解的膠囊并含有 有效數(shù)量的如下物質(zhì)的口服劑量形式是本發(fā)明特別預(yù)期的i) 一種還原劑，例如，5-ASA和 /或硫代硫酸鈉，和/或APA，和/或二氫硫辛酸，和/或丙酮酸鹽，和/或一種a -硫辛酸， 并可選擇ii) 一種NADPH-氧化酶抑制劑，例如，香莢蘭乙酮。延緩性溶解劑型包括pH依 賴性膠囊和包衣，這種膠囊和包衣只在與結(jié)腸環(huán)境相關(guān)聯(lián)的pH值下溶解。pH依賴性材料的 實例包括但不限于甲基丙稀酸甲酯，甲基丙烯酸和/或丙烯酸乙酯聚合物，包括，例如，異 丁烯酸銨共聚物。將本發(fā)明的一種合成物傳遞到結(jié)腸的其他劑型包括，例如，時間依賴性傳 遞系統(tǒng)、壓力依賴性傳遞系統(tǒng)、細菌依賴性系統(tǒng)(巴斯特等，2003)。同時，預(yù)期的劑型還有 利用氧化電勢依賴性系統(tǒng)。 本主題發(fā)明的化合物也可以使用微脂粒技術(shù)、緩釋膠囊、植入泵、可生物降解性容 器以及其他已知的科學方式進行施用。這些傳遞工具和方法可以更好地在延續(xù)期提供相同 的劑量。 本主題發(fā)明還涉及到本發(fā)明的包含一種治療合成物的容器。容器的選擇要易用存 儲和/或便于向人體或動物施用一種合成物，比如一個容器可以是一種適合于向直腸施用 一種治療合成物的容器。這些容器可以由任何合適的材料制成，包括玻璃，塑料等，也可 以是一次性的也可以是可回收利用的。本發(fā)明的治療合成物應(yīng)在一個無菌容器中配制成一 種無菌合成物。本主題發(fā)明還涉及到用具，在一個或多個容器內(nèi)，這些用具包含有本發(fā)明的 一種治療合成物或化合物的。在一個實施例中，在一個或多個容器內(nèi)，本發(fā)明的一種用具包 括一種還原劑，和/或一種氨基水楊酸，和/或一種類固醇，和/或一種短鏈脂肪酸，和/或 一種乳化劑，和/或一種抗菌劑和/或抗粘劑，和/或一種粘性增強抑制劑和/或脂質(zhì)過氧 化抑制劑，和/或一種肥大細胞抑制劑和/或一種肥大細胞穩(wěn)定劑，和/或修復(fù)、封閉或恢 復(fù)細胞間緊密接頭的一種藥劑，比如，表皮生長因子(EGF)。在一個實證例中，這種用具含有 硫代硫酸鈉化合物，堿式?jīng)]食子酸鉍，維生素E，以及色甘酸鈉。在另一個實施例中，一種用 具包含5-ASA，布地縮松，色甘酸鈉，以及丁酸鈉。本發(fā)明的化合物可以以一種單獨的混合前 劑量形式提供到一種用具中，或者以單獨劑量單元提供到用具中，這些單獨的劑量單元在 施用前進行混合在一起或被單獨服用。在一個實施例中，本發(fā)明的一種用具包含了本發(fā)明 的一種灌腸劑制劑化合物和增加這種灌腸劑施用效果的材料或傳遞工具。
本主題發(fā)明還涉及到各類方法用于篩選與氧化過激相關(guān)的患病風險的評定結(jié)果 和/或診斷條件，比如，潰瘍性結(jié)腸炎和其他炎癥性腸道病癥，以及帕金森氏癥。在一個實 施例中，本發(fā)明的一個方法包含了篩選人體或動物基因內(nèi)的SNP (單核甘酸多形態(tài)現(xiàn)象)的 存在性，這些基因為抗氧化酶網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的酶編碼，而抗氧化酶網(wǎng)絡(luò)有助于維持細胞的細胞內(nèi) 氧化還原緩沖能力?；蛑械腟NP可以引起影響基因或基因產(chǎn)物準確表達的一種突變，或 引起酶活力的衰退或喪失。篩選SNP的標準方法和材料已為人們所熟知。本發(fā)明范圍內(nèi)的 酯類物質(zhì)包括但不限于谷胱甘肽_半胱氨酸連接酶，谷胱甘肽合成酶，二硫化谷胱甘肽還 原酶，谷胱甘肽過氧化物酶，亞甲基四氫葉酸還原酶，蘋果酸酶，6-磷酸葡萄糖脫氫酶，以及 磷酸葡萄糖酸脫氫酶。在一個實施例中，本發(fā)明的一種方法包含了篩選或鑒定人體或動物 體內(nèi)任何為谷胱甘肽-半胱氨酸連接酶(EC 6. 3. 2. 2)或谷胱甘肽合成酶(EC 6. 3. 2. 3)編 碼的基因。這些基因含有SNP可以引起酶活性衰退從而導(dǎo)致谷胱甘肽合成的消弱。在一個 實施例中，本發(fā)明的一種方法包含了篩選或鑒定人體或動物體內(nèi)任何為二硫化谷胱甘肽還 原酶(EC 1. 8. 1. 7)編碼的基因。這些基因含有SNP可以引起酶活性衰退從而導(dǎo)致NADra合 成的消弱。在一個實施例中，本發(fā)明的一種方法包含了篩選或鑒定人體或動物體內(nèi)任何為 谷胱甘肽過氧化物酶(EC 1. 11. 1.9)編碼的基因。這些基因含有SNP可以引起酶活性衰退 從而導(dǎo)致對過氧化氫中和的消弱。在一個實施例中，本發(fā)明的一種方法包含了篩選或鑒定 人體或動物體內(nèi)任何為亞甲基四氫葉酸還原酶(EC1.5. 1.20)編碼的基因。這些基因可以 引起對谷胱甘肽過氧化物酶(EC 1.11.1.9)的抑制。在一個實施例中，本發(fā)明的一種方法 包含了篩選或鑒定人體或動物體內(nèi)任何為蘋果酸酶(EC 1. 1. 1.40)，6-磷酸葡萄糖脫氫酶 (EC 1. 1. 1. 49)，以及磷酸葡萄糖酸脫氫酶(EC 1. 1. 1. 44)編碼的基因。這些基因含有SNP 可以引起酶活性衰退從而導(dǎo)致NADra合成的消弱?？赏ㄟ^如下網(wǎng)站搜索并鑒定抑制的各類
SNPhttp://www. ncbi. nlm. nih. gov/entrez/query. fcgi CMD = DisplayFiltered&DB = 本主題發(fā)明還涉及到檢測和診斷潰瘍性結(jié)腸炎的方法及其診斷用具。與本文所述
的潰瘍性結(jié)腸炎的誘導(dǎo)期或繁殖期相關(guān)的生理指標的檢測和衡量的任何方法都在本發(fā)明 預(yù)期的范圍內(nèi)。在一個實施例中，篩選了直腸組織以確定是否存在不斷提高的過氧化氫，不斷下降的谷胱甘肽，或兩者皆具。用于檢測和定量過氧化氫和谷胱甘肽的技術(shù)和材料已為 人們所熟知。在另一個實施例中，篩選了結(jié)腸組織，以確定活性中性粒細胞的滲透和/或中 性粒細胞衍生細胞因子或脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的存在性。用于檢測和定量活性中性粒細胞和中 性粒細胞衍生細胞因子的技術(shù)和材料已為人們所熟知。本發(fā)明的化驗可選擇包括對照物， 陽性和陰性，和/或其他標準(例如正常直腸組織或細胞，過氧化氫的標準或正常濃度，谷 胱甘肽的標準或正常濃度，等)來評估被測樣品的化驗結(jié)果。篩選與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的 多種生理指標的化驗包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。用于本發(fā)明化驗的組織可以是局部組織(比 如，直腸組織)，也可以是全身組織(比如血液，淋巴液等)。本發(fā)明可以做發(fā)病性診斷化驗 或非發(fā)病性診斷化驗。診斷性化驗可以提供氧化過激(誘導(dǎo)期)和氧化損壞(繁殖期)的 氧化風險(潰瘍性結(jié)腸炎進入誘導(dǎo)期的風險)證據(jù)。 本主題發(fā)明還涉及到評估患潰瘍性結(jié)腸炎的個體風險或確定患者在該病的哪個 階段的方法。這種方法包含了過氧化氫，谷胱甘肽，以及暴露持續(xù)時間參數(shù)的化驗，然后根 據(jù)如下公式確定一個個體的氧化性風險(R。x):
RoX=(過氧化氫水平)(組織暴露時間)
(谷胱甘肽水平) 其中 過氧化氫水平_是指可以直接或間接確定的結(jié)腸上皮的過氧化氫水平。 組織暴露時間_由結(jié)腸上皮更新速度確定。這是指上皮細胞暴露在包括過氧化氫
在內(nèi)的有害氫氧自由基下的時間。 谷胱甘肽水平-是指結(jié)腸上皮細胞可用于中和過氧化氫的保護細胞的細胞內(nèi)谷 胱甘肽的數(shù)量。 R。x- —個組織或機體氧化過激水平的總體衡量。Rox的值越高，患治療性氧化組織 損傷疾病的可能性越大，比如，潰瘍性結(jié)腸炎。 本文描述了確定上式每一個參數(shù)的化驗。R。,值可以用于評估一個個體，不管該個 體是否l)具有進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的風險，2)已進入潰瘍性結(jié)腸炎的誘導(dǎo)期，或3) 具有進入潰瘍性結(jié)腸炎的繁殖期的風險。
禾口討氣化氡，鵬齢纖豐舌: 1.直接或間接地衡量結(jié)腸細胞內(nèi)或細胞外過氧化氫，氫氧自由基或氫氧離子的各 種測試。過氧化氫可以在排泄物，直腸活體組織，以及血液中化驗。過氧化氫是形成所有氫 氧根(和氫氧化物)的最終共用途徑，這些氫氧根(和氫氧化物)是造成組織損傷的要素。 過氧化氫水平是潛在的氧化性組織損傷的一個直接的指示器。因此，任何可以增加過氧化 氫的條件都將增加R。r值。 2.直接或間接地衡量結(jié)腸谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)活性的各種測試。GPx是降 解過氧化氫的主要酶，而過氧化氫的增加將減少GPx的活性。 3.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞脂膜過氧化反應(yīng)的各種測試。潰瘍性結(jié)腸炎的 脂過氧化反應(yīng)是由結(jié)腸上皮細胞上的氫氧自由基作用引起的。 4.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞增值的各種測試。過氧化氫誘導(dǎo)結(jié)腸上皮細胞
增值。這表現(xiàn)為結(jié)腸黑變病的存在。結(jié)腸黑變病是一種在細胞內(nèi)聚集并迅速分裂的黑色脂
20質(zhì)色素。看上去像結(jié)腸粘膜上的黑色斑點。因此，本發(fā)明預(yù)期包括了結(jié)腸黑變病的衡量。
5.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞原子核DNA氧化作用(比如8-羥基脫氧鳥苷 (8-0HdG))的各種測試。過氧化氫還能夠擴散進入原子核并氧化DNA。這些氧化產(chǎn)物可以 被測量并提供對氧化過激的判斷。 6.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞線粒體DNA損傷的各種測試。過氧化氫在線粒 體內(nèi)產(chǎn)生，在破壞其他結(jié)構(gòu)之前先破壞線粒體DNA。 7.直接或間接地衡量蛋白質(zhì)羰基團的各類測試，這是因為過氧化氫也氧化蛋白 質(zhì)。同時，如果蛋白質(zhì)被氧化并被破壞，可以在糞便內(nèi)找到緊密接頭蛋白質(zhì)的殘留物質(zhì)。緊 密接頭和細胞內(nèi)酶類由蛋白質(zhì)構(gòu)成。 8.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞的超氧化物水平。超氧化物是過氧化物的直接 先質(zhì)。如果超氧化物含量提高，那么過氧化氫的含量也將提高。 9.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞超氧化歧化酶活性的各種測試。超氧化歧化酶 是一種將超氧化物轉(zhuǎn)化為過氧化氫的酶。如果其活性增加，那么過氧化氫也將增加。
10.直接或間接地衡量電子傳遞活動的各種測試。電子傳遞活動負責過氧化氫的 生產(chǎn)。如果可以測得電子傳遞活動就可以間接都反應(yīng)出過氧化氫的生產(chǎn)情況。電子傳遞活 動主要負責個體基本的代謝率(BMR)。如果新陳代增加，電子傳遞活動將增加，就會產(chǎn)生更 多的過氧化氫。 11.直接或間接地衡量結(jié)腸上皮細胞凋亡的各種測試。過氧化氫引起的單個細胞 死亡稱為細胞凋亡。這些死亡的細胞脫落進入糞便。在一個實施例中，通過糞便樣本或結(jié) 腸活體組織檢查測出了細胞凋亡。
暴露時間的詳細化驗: 1.結(jié)腸上皮細胞的更新周期大概為3天。表皮生長因子可以加速這種更新。任何 情況下，如果表皮生長因子或結(jié)腸上皮細胞上的表皮生長因子受體減少，那么，結(jié)腸表皮的 曝光時間和R。,值將增加。老年人的表皮生長因子及其受體都會減少。因此，60歲及60歲 以上的人群患潰瘍性結(jié)腸炎的幾率也會增加。因此，表皮生長因子及其受體水平的測量將 是一個有用的R。x值診斷指示器。
與谷胱甘肽相關(guān)的化驗: 1.直接或間接地衡量存在于血液，結(jié)腸組織或糞便內(nèi)的谷胱甘肽(GSH)的還原形 式的水平。如果GSH減少，過氧化氫將以未中和的方式存在并增加。只有谷胱甘肽的還原 形式可以中和過氧化氫。 2.直接或間接地衡量存在于血液，結(jié)腸組織或糞便內(nèi)的谷胱甘肽(GSH)的氧化形 式的水平。被氧化的谷胱甘肽(GSSG)是在過氧化氫被中和后產(chǎn)生的。如果需要清除太多 的過氧化氫，那么GSSG就會增加。 3.直接或間接地衡量谷胱甘肽還原酶水平的各種測試。谷胱甘肽還原酶是一種將 被氧化的谷胱甘肽(GSSG)轉(zhuǎn)化為還原形式的谷胱甘肽(GSH)所必需的酶。如果這種酶的 活動減少，那么過氧化氫將增加并產(chǎn)生一個增加了的Rox值。 4.直接或間接地衡量NADra水平的各種測試。NADra是一種至關(guān)重要的還原 劑，它可以將電子輸送給被氧化的谷胱甘肽(GSSG)，這樣被氧化的谷胱甘肽就可以還原回 GSH(還原的谷胱甘肽)。如果，NADPH減少，那么過氧化氫將增加。
5.直接或間接地衡量G-6-PD(葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)，H-6-PD(己糖6磷酸脫氫 酶)和/或6-PGD(6-磷酸葡糖酸脫氫酶)活動的各種測試。將被氧化的谷胱甘肽(GSSG) 恢復(fù)到有用的還原形式(GSH)以便谷胱甘肽中和過氧化氫，這一過程所需要的幾乎所有的 NADra都通過一種生物化學途徑產(chǎn)生。磷酸戊糖途徑(PPP)(正式名稱是磷酸己糖支路)。 在PPP內(nèi)，兩個脫氫酶專門負責產(chǎn)生的所有NADra的生產(chǎn)。它們是G-6-PD(葡萄糖-6-磷 酸脫氫酶EC1. 1. 1. 49)和6-PGD (6-磷酸葡糖酸脫氫酶EC 1. 1. 1. 44) 。 G-6-PD ( 'G'形式) 的遺傳缺陷已被描述并且將導(dǎo)致血紅細胞的溶血現(xiàn)象。它缺少一種正常的發(fā)生輔助酶，這 種輔助酶就是存在于人體其他細胞的H-6-PD (己糖6磷酸脫氫酶"H"形式)。G和H形式酶 的同時存在保證了 PPP產(chǎn)生正常數(shù)量的NADPH，只要存在第二個NADPH生產(chǎn)酶的正?；顒樱?6-PGD。然而，6-PGD (6-磷酸葡糖酸脫氫酶)的輔助并不有效，并且即使6-PGD活動減少量 達到50X，它仍可以以一種多晶型態(tài)存在。理論上，這可以使結(jié)腸上皮NADra的總量減少多 達25% 。如果NADra減少，過氧化氫就會增加，同時R。x上升，這就是結(jié)腸受到氧化性損傷 的誘因。 6.直接或間接地衡量頂酸鹽水平的各種測試。如果結(jié)腸上皮的頂酸鹽水平很低， 那么，谷胱甘肽就會減少。這將導(dǎo)致過氧化氫的增加。 7.直接或間接地衡量半胱氨酸，巰基丙氨酸以及谷氨酸水平的各種測試。如果谷 胱甘肽生產(chǎn)所必需的這三種氨基酸(半胱氨酸，巰基丙氨酸以及谷氨酸)的任何一種減少， 那么，產(chǎn)生的GSH就更少，而過氧化氫就會增加。 增加和減少罹患炎癥性腸道疾病的危險的相關(guān)因子已被鑒定?？梢栽黾友装Y性腸 道疾病發(fā)病風險的因子包括壓力，酒精，飲食以及異物代謝。因此，本主題方法也包括改變 患者的生活習慣，這種改變既可以單獨進行，也可以配合本發(fā)明的治療性合成物進行。
隨儲附: 皿發(fā)生潰瘍性結(jié)腸炎最大的危險因子是直腸的存在。在結(jié)腸的這個區(qū)域內(nèi)，眾 多生理參數(shù)在此結(jié)合，這些生理參數(shù)的集中增加了產(chǎn)生過氧化氫和氧化性組織損傷(誘導(dǎo) 性)的可能性。研究發(fā)現(xiàn)與鄰近的小腸相比，老鼠腸子的還原能力(抗氧化劑容量)和GSH 合成速度急劇下降，達到了它的遠端結(jié)腸的最低水平(Blau(布勞)，1999)。人類胃腸道的 還原能力同樣從胃部到小腸逐漸下降(Roediger(勒迪格)和Babige (巴比格)，1997)。與 肝臟的主要抗氧化酶(過氧化氫酶，超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽過氧化物酶)水平相比， 人體結(jié)腸的還原能力明顯偏低，分別大概達到肝臟值的4% ， 8% ，和40% (Grisham(格里斯 漢姆)等人，1990)。然而，直腸表皮細胞與肝臟具有相同的酶補充，比如，細胞色素氧化酶， 黃嘌呤氧化酶等用于代謝外部物質(zhì)包括酒精和外源性物質(zhì)(勒迪格和巴比格，1990)。這種 代謝的副產(chǎn)品之一就是過氧化氫，這種物質(zhì)如果過量直腸上皮就會發(fā)病。未被中和的過量 過氧化氫可以擴散到細胞外空間并導(dǎo)致結(jié)腸上皮屏障遭受氧化性損壞，這樣它就可以增加 其對內(nèi)腔病菌抗原體的滲透性。能夠使直腸上皮細胞內(nèi)的過氧化氫含量上升的新陳代謝留 在體內(nèi)的任何物質(zhì)是誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎的一個陽性危險因子。 結(jié)腸內(nèi)的病菌濃度從l(fcfu/克(盲腸內(nèi)排泄物質(zhì)的重量)上升到直腸內(nèi)的 10 fu/克。倘若屏障斷裂，占主導(dǎo)地位的粘膜粘性厭氧病菌濃度的大幅增加降明顯地增加 抗原體暴露的可能性。任何使結(jié)腸排泄物傳送減慢的條件都能使病菌有更多的增值時間。 這種內(nèi)部內(nèi)腔病菌濃度的增加是誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎的一個陽性危險因子。病菌的高濃度也增加了遺傳物質(zhì)水平傳遞的可能性，包括抗菌素抗性因子和病毒性因子。
排泄物物質(zhì)也產(chǎn)生了大量的氧自由基，除了排泄物基質(zhì)以及其他內(nèi)腔物質(zhì)，包括 生物異源物質(zhì)，毒性物質(zhì)以及膽汁酸，部分是由于病菌的高濃度產(chǎn)生的(0wen(歐文)等人， 2000 ;Harris (哈里斯)等人，1992)。直腸( 一個排泄物倉庫)內(nèi)存在的這些自由基濃度 的增加，能導(dǎo)致結(jié)腸屏障分解以及上皮受到氧化性損壞。因此，任何使結(jié)腸病菌濃度或新陳 代謝增加，都可以使內(nèi)腔氧自由基增加，這也是誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎的一個陽性因子。
如果發(fā)生組織缺氧或突然的再氧合，直腸上皮細胞也會形成一個電子傳遞鏈，這 個電子傳遞鏈可能成為產(chǎn)生過量過氧化氫的一個根源(Li(李)和Jackson(杰克遜)， 2002)。在直腸存儲排泄物的這段時間內(nèi)并且直到排泄物被排泄，直腸壁都面臨這側(cè)壓力， 這種側(cè)壓力能夠壓縮脆弱的亞粘膜血管。在這段時間內(nèi)，直腸上皮細胞暴露與一個相對的 組織缺氧環(huán)境下，緊隨這種狀態(tài)的是，排泄物物質(zhì)被排除后的迅速再灌注。這一缺氧和再氧 合的過程增加了電子傳遞鏈的活動，并導(dǎo)致過氧化氫生產(chǎn)的增加?？梢哉T導(dǎo)和增加便秘的 任何條件放大了這種效果，這也是潰瘍性結(jié)腸炎進入誘導(dǎo)期的一個危險因子。大約有10% 到16%的潰瘍性結(jié)腸炎患者有排便滯留癥狀。而且研究人員發(fā)現(xiàn)緩慢的結(jié)腸傳遞使我們易 患潰瘍性結(jié)腸炎(Allison(艾利森)和Vallance(瓦蘭斯)，1991 ;Black(布萊克)等人， 1987)。 在組織缺氧和再氧合過程中，另外一個能促進過氧化氫生產(chǎn)的因子是黃嘌呤氧化 酶的作用(Granger(格蘭杰)和Parks (帕克斯)，1983 ;帕克斯等人，1984 ;帕克斯和格蘭 杰，1986)。黃嘌呤氧化酶對次黃嘌呤向尿酸的轉(zhuǎn)化具有催化作用，并且在這一過程中，將分 子氧還原為過氧化氫。在組織缺氧過程中，由于不能獲得氧，黃嘌呤氧化酶的活動被明顯 的減低。這種氧是次黃嘌呤向尿酸酶崔轉(zhuǎn)化(即氧化)時，一個電子接受輔因子所必需 的。當氧氣被再次引入時，增加了的酶解物負荷引起次黃嘌呤新陳代謝和過氧化氫生產(chǎn)增 加。大小便時，便秘和排尿費力增加了結(jié)腸管道內(nèi)的壓力，將增加組織缺氧或再氧合對黃嘌 呤氧化酶系統(tǒng)的影響效果，因為這增加了它的活動，并排放出過氧化氫，過氧化氫又可以增 加進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的風險。別嘌醇， 一種黃嘌呤氧化酶的抑制劑，在這些條件下， 通過結(jié)腸上皮細胞可以減少過氧化氫的生產(chǎn)。 Mil:壓力對胃腸道有嚴重的影響。睡眠不足的壓力增加了病菌穿過腸上皮發(fā)生 易位(Everson(艾佛森)和Toth(托斯)，2000)。由于粘膜屏障功能的調(diào)整作用，壓力也 可以激活腸道肥大細胞而且并發(fā)性增加滲透性(Soderholm(蘇德毫母)等人，2002)。據(jù)報 道，生理和心理壓力能夠?qū)е履c生理異常，杯狀細胞功能障礙，增加粘膜病菌粘性以及增加 腸的可滲透性和分泌作用(蘇德毫母和Perdue (普度)，2001)。 壓力還可以增加生物胺(兒茶酚胺)的循環(huán)次數(shù)，比如羥色胺，腎上腺素，降腎上 腺素和多巴胺(Lechin (賴琴)等人，1996) 單胺氧化酶(EC#1. 4. 3. 4)， 一種存在于線粒體 外表層的酶，催化了異生胺和上述的兒茶酚胺壓力激素的氧化性脫氨作用，并且在這個過 程中將分子氧還原為過氧化氫(Cadenas (卡迪納斯)和Davies (戴維斯)，2000)。這種氧 化反應(yīng)為RCH2+H20+02 — RCH0+NH3+H202。 因此，任何情況下，持續(xù)性壓力可以增加循環(huán)型內(nèi)生兒茶酚胺的濃度并增加直腸 上皮細胞的過氧化氫的生產(chǎn)。這是進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個陽性危險因子。同樣， 應(yīng)采取措施減少循環(huán)型內(nèi)生兒茶酚胺同時減少結(jié)腸上皮細胞產(chǎn)生的過氧化氫，并降低直腸上皮屏障被破壞的風險。在這點上，可樂定，一種重要的a2促效劑已被成功應(yīng)用。因此， 本發(fā)明的方法也預(yù)期改變患者的生活習慣和/或生理習慣，以減少患者的壓力和/或壓力 對患者的影響。 牛物異源物質(zhì):大多數(shù)的藥物氧化反應(yīng)以及其他生物異源物的氧化反應(yīng)都由細胞 色素酶完成。 一項研究表明300種以上的被測藥物中，有56%的藥物被存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧合 酶的細胞色素p450 (CYP)族所代謝(Bertz (伯特茨)和Granneman (格蘭奈曼)，1997)。大 多數(shù)的CYP存在于肝臟中，但是也存在于腸內(nèi)。 一種典型的CYP催化反應(yīng)是
NADPH+H++02+RH — NADP++H20+R_OH 這一反應(yīng)消耗了NADPH，而這種物質(zhì)在還原的谷胱甘肽的再生中也要使用。谷胱甘 肽是細胞內(nèi)過氧化氫中和反應(yīng)的主要抗氧化劑。由于在CYP酶系統(tǒng)中觀察到的大量個體間 多晶型態(tài)現(xiàn)象，某些個體可能比其他個體具有更高的活性，并且可以以更快的速度代謝生 物異源物質(zhì)，同時在這一過程中消耗更多的NADPH。這些個體被稱為快速代謝劑。快速代謝 劑如果暴露在某些藥物下，那么它具有更高的誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的風險。
MM:人體攝取酒精后，酒精會在身體的所有細胞中分布包括直腸上皮細胞。酒 精通過酒精脫氫酶被酶改性地轉(zhuǎn)化為乙醛。乙醛通過乙醛脫氫酶轉(zhuǎn)化為乙酸。這兩種細胞 溶質(zhì)酶使用NAD+來氧化它們各自的酶解物并生成NADH，正常情況下，NADH是電子傳遞鏈的 電子供體。增加的可用NADH可以激活電子傳遞鏈并產(chǎn)生過量的過氧化氫(Hoek(霍克)等 人，2002 ;Bailey(貝利)，1999)。 酒精也可以被細胞色素p4502El在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)代謝，這中代謝減少了谷胱甘肽再生
所需要的NADPH。因此，酒精能夠生成過氧化氫應(yīng)減少中和過氧化氫所需要的谷胱甘肽的生
產(chǎn)。高度的過氧化氫已經(jīng)耗盡的谷胱甘肽，增加了誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的風險。 酒精抑制谷胱甘肽過氧化酶，這是一種可以中和過氧化氫的關(guān)鍵性酶，并損耗線
粒體的谷胱甘肽(霍克等，2002)。谷胱甘肽并不在線粒體內(nèi)合成，而必須穿過線粒體膜從
細胞質(zhì)傳遞進入線粒體。酒精干擾了谷胱甘肽向線粒體內(nèi)的有效傳播(Maher(馬希兒)，
1997)。這將導(dǎo)致線粒體內(nèi)谷胱甘肽枯竭同時過氧化氫聚積?？萁叩墓入赘孰暮驮黾拥倪^
氧化氫增加了誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的風險。因此，本發(fā)明的方法預(yù)期改變患者對酒精及其酒
精類飲品的攝取。
便秘 根據(jù)對大便習慣的調(diào)查，高達20%的人群患有便秘(Drossman(左斯曼)等人， 1999;Everhart(埃弗哈特)等人，1987)。據(jù)報告，潰瘍性結(jié)腸炎患者中，有27 %的患者伴 有便秘(Rao (拉奧)，1988)。便秘是一種普遍現(xiàn)象也是一種被經(jīng)常忽略的現(xiàn)象，但是便秘 對幾乎任何疾病尤其是潰瘍性結(jié)腸炎有很嚴重的加劇影響。1988年，在意大利羅馬舉行的 第13屆國際腸胃病學會議上，一組醫(yī)師對幾種不同的功能性腸道疾病做了更精確的診斷 定義，其中就包括便秘。被稱為"羅馬標準"，這套指導(dǎo)性準則概述了便秘的癥狀，以及應(yīng)用 參數(shù)，比如，頻率和持續(xù)時間，以便進行更準確和更標準的便秘診斷。1999年，修訂后的第二 版指導(dǎo)準則出版，即羅馬標準II，(左斯曼等，2000)。羅馬標準II對功能性便秘的定義包 括下列參數(shù) 在之前的12個月，非連續(xù)性的出現(xiàn)以下兩種或多種癥狀至少12周
1.超過25%的大小便會小便費力；
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2.超過25%的大小便會出現(xiàn)大便塊狀或硬質(zhì)大便； 3.超過25 %的大小便會感覺排便不完整； 4.超過25%的大小便會感覺肛門直腸阻塞或阻滯； 5.超過25%的大小便得手工輔助來完成排便(例數(shù)字式排泄，骨盆底支撐)；和
/或 6.每周排便少于3次。 無稀便，沒有充分的證據(jù)表明是腸易激綜合征。 由上所述，便面是潰瘍性結(jié)腸炎的一個重要的促惡性因子。百分之二十七的潰瘍 性結(jié)腸炎患者伴隨有便秘。便秘可以通過幾種方式進入潰瘍性結(jié)腸炎的誘導(dǎo)期。增加結(jié)腸 傳遞次數(shù)有利于細菌增生，細菌的增生將增加抗原性剌激物，這樣結(jié)腸上皮屏障再次遭到 破壞。便秘還可以延長排泄物產(chǎn)生的氧自由基與結(jié)腸粘膜之間的接觸時間，這可以使上皮 內(nèi)層里已經(jīng) 很低的抗氧化劑存儲量枯竭。 未排泄的直腸糞便物質(zhì)的大量聚積可以增加直腸粘膜的側(cè)壓并瓦解脆弱的毛細 血管床。這是結(jié)腸上皮再次遭受"灌注-再灌注"氧化損害的治病誘因。由于鄰近結(jié)腸的 吸收作用和谷胱甘肽枯竭導(dǎo)致的更進一步的惡變性氧化損害，便秘可以顯著的減少到達直 腸上皮的丁酸鹽的數(shù)量。因此，本發(fā)明的方法預(yù)期治療和/改變患者的飲食以便減輕和/ 或使便秘減到最少，以創(chuàng)造一種有規(guī)律的腸運動。
飲食XM^飲食因子有助于潰瘍性結(jié)腸炎的誘發(fā)。結(jié)腸上皮細胞更好的能量源是四
鏈脂肪酸，稱為丁酸鹽。丁酸鹽來源于兩種膳食源。大多數(shù)的丁酸鹽來源于未消化的膳食 纖維的結(jié)腸上皮發(fā)酵作用，并且是最大的膳食纖維代謝物。第二種重要的膳食纖維來源于 黃油，黃油包含有3%的丁酸鹽。丁酸鹽是一種短鏈脂肪酸(SCFA)，與其他兩種短鏈脂肪酸 (醋酸鹽和丙酸鹽)在膳食纖維的細菌發(fā)酵中一起生成(To卯ing(托品)和Clifton(克 里夫頓)，2001)。百分之九十五的SCFAs在結(jié)腸內(nèi)生成并被吸收。鄰近的大腸內(nèi)存在嚴重 的發(fā)酵作用和SCFA的生產(chǎn)。在糞便流通過的過程中，發(fā)酵衰退為可用酶解物枯竭的次要因 子。當糞便大量到達直腸的時候，少于5X的病菌性SCFA適用于結(jié)腸細胞攝取。鄰近的結(jié) 腸吸收作用負責這一重要的衰退。 SCFAs被結(jié)腸細胞快速代謝，而且是主要的呼吸性營養(yǎng)物，供應(yīng)了 70%結(jié)腸細胞 的能量需求(托品和克里夫頓，2001)。當與酶解物共存時，結(jié)腸細胞更傾向于使用丁酸鹽， 比如，葡萄糖，谷胱甘肽，以及存在的其他SCFAs。 末端結(jié)腸和直腸屬于大腸，丁酸鹽對它們的供應(yīng)最有限，并且對丁酸鹽的吸收也 是最低水平的，因此，這里是最主要的發(fā)病區(qū)，包括潰瘍性結(jié)腸炎。當丁酸鹽的數(shù)量不足以 滿足結(jié)腸上皮細胞的能量需求時，一種替換性能量源就被使用，并且結(jié)腸上皮細胞將轉(zhuǎn)向 葡萄糖和氨基酸谷氨酰胺。 谷氨酰胺是由它的直接先質(zhì)——谷氨酸合成的。谷氨酸也被用于合成中和過氧化 氫所需的谷胱甘肽。如果太多的谷氨酸作為一種能量源而轉(zhuǎn)入到谷氨酰胺的形成物中，那 么，適用于結(jié)腸上皮谷胱甘肽合成的谷氨酸將更少。這將導(dǎo)致細胞內(nèi)谷胱甘肽濃度的縮減， 同時過氧化氫增加。因此，膳食纖維的缺乏是進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個陽性危險因 子。
在更廣的層面上，90X的丁酸鹽以及其他SCFAs通過結(jié)腸細胞線粒體(10%在過 氧物酶體內(nèi))內(nèi)的P氧化被代謝。干擾P氧化的各種情況將強制細胞使用替代能量源比 如，谷氨酰胺。如果直腸上皮細胞沒有足夠的可用酶解物(比如丁酸鹽)P氧化將減少。 不充分的直腸內(nèi)腔丁酸鹽可以與可發(fā)酵的膳食纖維的不充分攝取或者縮短的結(jié)腸傳遞時 間(即便秘)同時發(fā)生。在超過50小時的整個腸道的運轉(zhuǎn)時間中，從糞便并不能檢測到 丁酸鹽(托品和克里夫頓，2001)。 洛迪格和楠思報告稱向老鼠直腸灌注一種特殊的13氧化抑制劑后，可以誘發(fā)潰 瘍性結(jié)腸炎(Roedinger (洛迪格)，1986)。作者總結(jié)道"一種合適的P氧化抑制劑暢通無 阻的進入到結(jié)腸上皮細胞的線粒體內(nèi)"。過氧化氫對生物膜具有滲透性，包括細胞膜以及線 粒體內(nèi)膜和線粒體外膜。研究顯示，過氧化氫可以抑制酶類的P氧化酶系統(tǒng)(Gulati(谷 拉蒂)等，1993)。在活性潰瘍性結(jié)腸炎過程中，作為結(jié)腸粘膜內(nèi)中性粒細胞活化結(jié)果的過 氧化氫被生產(chǎn)出來，因此，它能夠擴散返回結(jié)腸上皮細胞，這將導(dǎo)致對細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氧化 破壞，包括P氧化酶。這可以解釋為什么在活性潰瘍性結(jié)腸炎中，丁酸鹽新陳代謝會出現(xiàn) 異常，這種癥狀在病癥緩解后會得到解決。因此，本發(fā)明的方法也預(yù)期改變患者的飲食，以 便向結(jié)腸上皮細胞提供足夠的谷胱甘肽，包括，例如，向接受治療的患者或有患潰瘍性腸道 病癥風險的人提供足量的膳食纖維。 m:對單一性或聚合性不飽和脂肪的高攝取可以增加潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的風 險。在油類中制做的普通食物中含有脂類過氧化物的濃縮物，或脂肪(漢堡包，炸薯條)，如 果與腸粘膜接觸就會引起粘膜氧化過激以及氧化還原失衡(Aw，1999)。與控制脂肪飲食的 小鼠相比，用高脂肪喂養(yǎng)的小鼠腸道產(chǎn)生的超氧化物量比前者要高出幾倍。腸道脂類氧化 物以及氫氧自由基的含量增加了 3. 5倍。腸道粘膜DNA破裂增加了 2. 4倍(Bagchi (巴格 齊)等人，1998)。 DNA的氧化損害說明存在嚴重的細胞質(zhì)氧化環(huán)境。高脂肪量的攝取是進 入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個陽性危險因子。因此，本發(fā)明的方法也預(yù)期改變患者的飲食， 以減少脂肪的攝取。 M^fi:據(jù)發(fā)現(xiàn)，作為一種高脂飲食，辛辣食品能夠?qū)δc道粘膜產(chǎn)生類似的氧化過 激。研究發(fā)現(xiàn)喂養(yǎng)辛辣食品的小鼠腸道粘膜氫氧自由基的產(chǎn)生量比正常的小鼠要高4.8 倍，甚至比喂養(yǎng)高脂肪食品的小鼠都要高(巴格齊等，1998)。辛辣食品的攝取應(yīng)被認為是 進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個陽性危險因子。 皿據(jù)報道，一種含有大量紅肉(牛肉)的食品能夠增加腸道類桿菌屬的數(shù)量 (Maier(梅爾)等人，1974)。在攝取大量牛肉飲食后，在正常的飲食方法下，這種影響將持 續(xù)數(shù)周。類桿菌屬類物質(zhì)已被認為是一種對潰瘍性結(jié)腸炎具有剌激性的抗原劑(見上文)。
維生素和礦物質(zhì)
葉酸 亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR) (EC 1. 5. 1. 20)是主要的同行同型半胱氨酸代謝 調(diào)解酶之一，并且，在葉酸的新陳代謝中扮演著一個重要角色(Friedman(弗里德曼)等人， 1999 ;Goyetter(戈維特)等人，1998) 。 MTHFR是一種細胞質(zhì)酶，它是NADm相關(guān)的亞甲基四 氫葉酸還原為甲基四氫葉酸的催化劑。甲基四氫葉酸是同型半胱氨酸甲基化的甲基供體。 已發(fā)現(xiàn)為MTHFR編碼的基因的變異。這種基因變異引起胞嘧啶在基礎(chǔ)位置677向胸腺嘧啶 轉(zhuǎn)移，這一過程可以將丙氨酸在氨基酸位置222轉(zhuǎn)化為纈氨酸(A222V)。多晶型態(tài)型MTHFR酶(C677T)的活性明顯的比正常MTHFR要少(正常MTHFR的35-50% )，這導(dǎo)致血清同型半 胱氨酸的含量提高(戈維特等，1998)。 馬哈茂德等報告稱與7. 3%的對照物相對，17. 5%的潰瘍性結(jié)腸炎患者是MTHFR 基因C677T變體的同型結(jié)合(Mahmud(馬哈茂德)等人，1999)。 同型半胱氨酸的提高將通過幾種機制增加過氧化氫的生產(chǎn)。過氧化物是在同型半 胱氨酸氧化為高胱氨酸的過程中產(chǎn)生的(弗里德曼等人1999 ;Upchurch(厄普丘奇)等人， 1997)。同型半胱氨酸也可以增加超氧化歧化酶(S0D)的含量水平(Wilchen(威爾卡克) 等人，2000)。 SOD催化超氧化陰離子轉(zhuǎn)化為過氧化氫。這種酶活性的增加將導(dǎo)致產(chǎn)生更多 的過氧化物。據(jù)報道同型半胱氨酸抑制谷胱甘肽氧化物酶(GPx)的活性(厄普丘奇等， 1997)，使之活性降低10倍(Outinen(奧汀寧)等人，1999) 。 GPx是中和細胞內(nèi)過氧化氫的 必要的酶系統(tǒng)。GPx失去活性將使過氧化氫含量水平增加。研究發(fā)現(xiàn)，對GPx的抑制在自由 同型半胱氨酸的生理(9毫克分子/L)濃縮物中存在(陳，2000)。 從生物地理學角度看，C677T多晶型態(tài)變體的全球分布表明，在潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā) 病過程中，這種調(diào)節(jié)酶的有害影響。40X頻率的T對偶基因被發(fā)現(xiàn)于美國，但是在非洲和亞 洲，頻率去卩很低(The Metabolic and Molecular Basis of Inherited Disease, 2001， 8th ed. ，Ch即ter 155，Vol. 3，pp. 3897-3993 (《遺傳病的代謝和分子基礎(chǔ)》，2001，第8版，第155 章，第3巻，3897-3993頁))。這就平行比較說明潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病在北美洲更普遍，亞 洲和非洲具有比較低的普遍性(Whelan(蕙蘭)，1990 ;Farrokhar (法洛卡)等人，2001)。
C677T的種族分布也說明了他在潰瘍性結(jié)腸炎中所扮演的角色。瑞迪等發(fā)現(xiàn) 在中歐系猶太人的對偶基因中，C677T的比率為47.7%，而非猶太人的比率為28.7% (Rady(瑞迪)等人，1999)。據(jù)報道，潰瘍性結(jié)腸炎在猶太人中也更普遍(Roth(羅斯)等 人，1989 ;Karlinger(卡琳格)，2000)。 換言之，這一MTHFR變體酶可以通過增加SOD含量水平來增加結(jié)腸上皮細胞內(nèi)的
過氧化氫，使谷胱甘肽氧化物酶失去活性，抑制谷胱甘肽合成并增加同型半胱氨酸的生產(chǎn)，
而在同型半胱氨酸的氧化過程中可以產(chǎn)生過氧化氫。MTHFR的C677T變體可以以額外過氧
化氫的形式提供足夠的氧化過激，以顛覆細胞平衡，進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)過程。 顯型氧化性連同C677T可以產(chǎn)生足夠的滲透性，從而破壞某些?；鶊F和某些地域
的人群，表現(xiàn)出更高的潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率。因此，多晶型態(tài)MTHFR的存在應(yīng)被認為是進入
潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個陽性危險因子。 此外，正常的葉酸新陳代謝的缺乏可以減少必需的氨基酸蛋氨酸的新陳代謝。氨 基酸蛋氨酸是氨基酸半胱氨酸的一種先質(zhì)。半胱氨酸是合成谷胱甘肽必需的三種縮氨酸之 一。另一種谷胱甘肽的氨基酸成份是甘氨酸，它的合成也必需有葉酸。因此，葉酸缺乏以及 葉酸新陳代謝的抑制可能會直接干擾能否生產(chǎn)出足量的谷胱甘肽，并且，通過增加過氧化 氫含量水平，有助于增加細胞內(nèi)氧化過激。 據(jù)報道多種維生素血清含量低，包括葉酸，與潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān) (Femandez-Banares (費爾南德斯_伯納瑞斯)等人，l989 ;Elsborg(艾斯伯格)和 Larsen (拉森)，1979 ;Koutroubakis (寇切巴凱斯)等人，2000)。這應(yīng)歸咎于飲食攝取不 足，腸道營養(yǎng)不良以及藥物誘導(dǎo)(艾斯伯格和拉森，1979)。如上所述，與葉酸缺乏共存易于 加劇多晶型態(tài)MTHFR的氧化作用。實驗上，用于猴子體內(nèi)的誘導(dǎo)性葉酸缺乏導(dǎo)致了潰瘍性結(jié)腸炎(Duncan (鄧肯)，1964)。
維牛素B-6 據(jù)報道妣哆醇(維生素B-6)的高攝取量可以增加潰瘍性結(jié)腸炎的患病風險 (Geerling(吉爾林)等人，2000)。維生素B_6在人體內(nèi)被吡哆醇4-氧化酶氧化，反應(yīng)式 為吡哆醇+02—吡哆醛+11202。這一反應(yīng)主要在肝臟內(nèi)發(fā)生，但是，也可以在其他地方發(fā)生， 比如胃腸道。這一反應(yīng)的一種毒性副產(chǎn)物就是過氧化氫。因此，過量的吡哆醇是進入潰瘍 性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個陽性危險因子。
鐵和銅: 單一的電子還原是僅有的可以引起氫氧自由基從過氧化氫中形成的反應(yīng)。電子供 應(yīng)劑可以是一種電子供應(yīng)基，比如超氧化物(02—*)，或者一種重要的生物氧化還原過度金 屬，比如，鐵和銅(Eberhardt(艾伯哈特)，2001)。這些過氧化氫的一個電子還原反應(yīng)以及 其他過氧化物表明這是在生物系統(tǒng)內(nèi)形成反應(yīng)的最重要的基團，并負責生成大多數(shù)的氫 氧根。 Fe+2+H202 — Fe+3+HO—+H0 芬頓反應(yīng) 02— +H202 — 02+H0—+H0 哈伯-魏斯反應(yīng) 鐵可以作為一種中間物質(zhì)其作用并促進單一電子從超氧化物向過氧化氫的轉(zhuǎn)化。 鐵通過催化哈伯-魏斯反應(yīng)加快從過氧化氫生成氫氧根自由基(艾伯哈特，2001 ;Graf(格 拉夫)等人，1984)。 02— +Fe+3 — 02+Fe+2 三價鐵(Fe+3)催化 Fe+2+H202 — Fe+3+HO—+H0 哈伯-魏斯反應(yīng) 在細胞內(nèi)，鐵與生物高分子配對，比如蛋白質(zhì)和DNA。因此，氫氧根自由基的形成 將與這些分子緊密接觸。由于氫氧根自由基具有很強的反應(yīng)性，因此，這種強力氧化劑在其 生成的地點就會造成破壞(艾伯哈特，2001)。這種迅速的特定地點目標氧化將阻止自由基 清除劑對這種反應(yīng)的干擾，并極大地放大H202/HO 系統(tǒng)的破環(huán)作用。即使存在穩(wěn)定的可用 于反應(yīng)的表面鐵原子，過氧化物也能誘導(dǎo)鐵從存儲的蛋白質(zhì)中釋放出來，比如鐵蛋白和酶 類。然后，這一被釋放的鐵通過與過氧化氫發(fā)生反應(yīng)就可以產(chǎn)生氫氧根(Keyer(凱耶)和 Imlay(伊母利)，1996 ;萊沃切烏和弗里德利奇，1999)。因此，在生物系統(tǒng)內(nèi)，過氧化物能夠 提供穩(wěn)定的供它自己使用的鐵催化劑，這種鐵催化劑是維持從過氧化氫中生成氫氧根所必 需的。相反地，盡管過氧化物濃度最低時，過量的鐵能夠?qū)M織造成傷害說明除了 02— ，當 自由鐵與過氧化氫開始氧化還原循環(huán)時，其他的還原劑也可以向自由鐵供應(yīng)電子(凱耶和 伊母利，1996)。 根據(jù)這些觀察，據(jù)報道鐵增補通過氫氧根自由基的形成破壞胃腸道，并且，在 實驗上，將使試驗動物體內(nèi)的試驗誘導(dǎo)性結(jié)腸炎惡化(Srigiridhar(斯利格里拉)等人， 2001 ;Reifen(瑞芬)等人，2000)。據(jù)報道，人體口服硫酸亞鐵用于治療貧血，也會導(dǎo)致潰 瘍性結(jié)腸炎(Kawai(卡瓦伊)等人，1992)。相反，據(jù)報道，鐵螯合用于潰瘍性結(jié)腸炎患者可 以減少反應(yīng)性氧族物質(zhì)的產(chǎn)生(Millar(米勒)等人，2000)。 因此，以補品或紅肉方式過量攝取的鐵，可以增加(GI屏障)破壞性氫氧根自由基 的產(chǎn)生，并促使?jié)冃越Y(jié)腸炎從誘導(dǎo)期向繁殖期過度。因此，過量的鐵是潰瘍性結(jié)腸炎進入 繁殖期的一個危險因子。
據(jù)報道，活性潰瘍性結(jié)腸炎和靜態(tài)潰瘍性結(jié)腸炎的患者體內(nèi)銅含量比正常人的含 量高(Dalekos(達勒克斯)等人，1998 ;Ringstad (瑞恩斯塔德)等人，1993)，并且有可能 成為一種有益于氫氧根自由基形成的因子。據(jù)報道，人體潰瘍性結(jié)腸炎與威爾遜病有關(guān)，而 且是威爾遜病的并發(fā)病癥，在威爾遜病中，人體組織內(nèi)含有異常高的銅(Torisu(特里蘇)， 2002)。和鐵一樣，過量的銅也可以加速過氧化氫的還原，并增加氫氧根自由基的形成。因 此，過量的銅也應(yīng)本認為是潰瘍性結(jié)腸炎進入繁殖期的一個危險因子。
維牛素C : 維生素C(抗壞血酸)是一種與氧基發(fā)生反應(yīng)的抗氧化劑。然而，抗壞血酸基的連 續(xù)反應(yīng)能夠產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫在存在鐵和銅的情況下，能夠產(chǎn)生氫氧根自由基(艾 伯哈特，2001)?；峡箟难岷偷V物質(zhì)補足品是潰瘍性結(jié)腸炎進入誘導(dǎo)期的一個陽性危險 因子?？箟难猁}也能夠被L-抗壞血酸氧化酶氧化，并產(chǎn)生副產(chǎn)物過氧化氫。維生素C的 過量攝取本身就是一個有助于誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的危險因子。
維牛素B-l : 硫胺素(維生素B-l)可以被硫胺素氧化酶代謝，并產(chǎn)生過氧化氫。過量的硫胺素
是有助于進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一個危險因子。 A辦甘卩細: 人造甜味劑，比如山梨糖和木糖醇，被木糖醇氧化酶氧化，并產(chǎn)生過氧化氫。如果 大量食用，也是誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的一個危險因子。 阿斯巴甜是一種被廣泛用于許多產(chǎn)品的人工甜味劑，比如軟飲料和烘烤產(chǎn)品。通 常情況下，在很多餐館我們可以看打它被裝入一個藍色小袋內(nèi)與糖和糖精一起使用。阿斯 巴甜是一種縮二氨酸，由兩個氨基酸組成L-苯基丙氨酸，即甲酯(Phe)和L-天冬氨酸 (Asp)。大約百分之十的阿斯巴甜以甲醇的形式被釋放。甲醇可以被甲醇氧化酶代謝為甲 醛和過氧化氫。天冬氨酸被天冬氨酸氧化酶代謝并釋放出過氧化氫。苯基丙氨酸被氨基酸 氧化酶代謝同時釋放出過氧化氫。阿斯巴甜引起的氧化過激的數(shù)量取決于攝取的阿斯巴甜 的數(shù)量。由于這種產(chǎn)品普遍存在，所以他產(chǎn)生結(jié)腸上皮過氧化氫的能力可能超過了一般的 蛋白質(zhì)氨基酸。易患病人群攝取阿斯巴甜可能成為一個誘發(fā)病癥的危險因子。
味精: 谷氨酸一鈉(MSG)是氨基酸谷氨酸鈉鹽。作為一種調(diào)味品，它被廣泛使用。谷氨 酸被谷氨酸氧化酶代謝并釋放出這一反應(yīng)的副產(chǎn)品——過氧化氫。MSG的氧化負荷取決于 谷氨酸一鈉的攝取數(shù)量。易患病人群如果攝入大量的MSG是進入潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)期的一 個危險因子。 因此，本發(fā)明的方法也預(yù)期改變患者對維生素，人造甜味劑，以及食品添加劑的攝 取量水平。 陰性危險因子(降低病癥誘發(fā)危險) 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些因子可以減少潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的風險。它們中，主要是吸煙，可以 減低潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病(Abraham(亞伯拉罕)等人，2003 ;0dessa (澳德斯)，2001)。有些 研究人員已給潰瘍性結(jié)腸炎貼上了不吸煙者專屬疾病的標簽(Madretsma(馬德萊斯瑪)， 1996)。潰瘍性結(jié)腸炎最近在停止吸煙的人群中爆發(fā)(Farrell(法雷爾)和P印percorn(皮 頗科恩)，2002)。
研究表明煙草煙霧中的焦油物質(zhì)可以抑制電子傳遞鏈。煙草焦油對線粒體電子 傳遞鏈的定量研究報告稱，煙草焦油對整個鏈的呼吸作用具有82%的抑制率(Pryor(普里 亞)等人，1992)。在這項研究中，尼古丁對電子傳遞活動沒有影響。ETC抑制作用將減少 線粒體過氧化氫的產(chǎn)生。另據(jù)報告吸煙者體內(nèi)的單胺氧化酶減少(Fowler(富勒)等人， 2003)。位于線粒體外膜的MAO是負責代謝內(nèi)生性兒茶酚胺的主要酶。對這種酶的抑制，減 少了兒茶酚胺的酶性氧化，并且產(chǎn)生了這個反應(yīng)的一種副產(chǎn)物一過氧化氫。據(jù)報道，煙草 焦油提取物可以抑制大量的P450酶系統(tǒng)(Van Vleet (范維萊特)等人，2001)。過氧化氫 是P450新陳代謝的一種副產(chǎn)物，并且抑制這些酶可以減少過氧化氫的產(chǎn)生。
另據(jù)報道，香煙煙霧提取物可以抑制細胞因子的產(chǎn)生，包括TNF-a ，抑制率達到 90%以上(0uyang(歐陽)等人，2000)。在潰瘍性結(jié)腸炎中，細胞因子是炎癥響應(yīng)的組成部 分。細胞因子的減少可對患者起到保護作用。 因此，吸煙可以通過抑制過氧化氫的產(chǎn)生而形成保護，并預(yù)防進入潰瘍性結(jié)腸炎
的誘導(dǎo)期。然而，通過吸煙，在ETC被抑制的這段時間內(nèi)，用于產(chǎn)生過氧化氫的酶解物一直
在人體所有細胞的線粒體內(nèi)聚積，包括，結(jié)腸上皮細胞。對電子傳遞鏈的抑制也導(dǎo)致了 ETC
的增量調(diào)節(jié)，并伴隨著酶對屏障的攻擊。在ETC被抑制的這段時間內(nèi)，由于，當過氧化氫的
產(chǎn)生很低時，細胞沒有大量消耗抗氧化劑，所以，谷胱甘肽的生產(chǎn)也被減量調(diào)節(jié)。 如果一個人突然停止吸煙，這種抑制也被突然移除，從而引起更劇烈的ETC活動，
這種活動是通過增加酶解物和酶活性激活的。這也導(dǎo)致了額外的過氧化氫被生產(chǎn)出來，在
易患病的人群中，這可以克服結(jié)腸上皮細胞內(nèi)的可用谷胱甘肽，并增加誘發(fā)病癥的危險。 根據(jù)ETC抑制作用，預(yù)計主動吸煙者具有最低的誘發(fā)風險潰瘍性結(jié)腸炎的。最近
停止吸煙的人具有最高的誘發(fā)風險，因為它們產(chǎn)生了最多數(shù)量的過氧化氫。不吸煙的人具
有最低的誘發(fā)風險。這在統(tǒng)計上反映出吸煙與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的風險。 在活性潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病期間停止吸煙預(yù)計會加重病狀。據(jù)報道，患者在活性潰
瘍性結(jié)腸炎期間停止吸煙，病情加重(Beaugerie等人，2001)。 尼古丁是一種擬副交感神經(jīng)劑并且它對胃腸道的影響主要是通過剌激副交 感神經(jīng)的神經(jīng)節(jié)進行的。它的影響一般是增加色調(diào)和收縮性(National Academayof Sciences (美國國家科學院)，2001)。香煙煙霧中的尼古丁可以增加腸道蠕動活動，這將引 起糞便流的增加并預(yù)防糞便郁積，而糞便郁積可以增加腸道病菌和上皮氧化過激負荷。突 然停滯這一結(jié)腸蠕動活動輔助劑將有利于結(jié)腸內(nèi)容物的郁積并引起便秘。而便秘是潰瘍性 結(jié)腸炎發(fā)病的一個危險因子(見上文"便秘"部分)。因此，本發(fā)明的方法預(yù)期通過調(diào)節(jié)，逐 步停止患者吸煙。
共病情況: 潰瘍性結(jié)腸炎可與甲狀腺機能亢進并發(fā)。在一個病例報告中，兩位潰瘍性結(jié)腸炎 患者隨后出現(xiàn)了甲狀腺機能亢進癥(Modebe(莫德波)，1986)。其中的一位患者是潰瘍性結(jié) 腸炎的第二次惡化，在發(fā)現(xiàn)她患有甲狀腺毒癥前，她的潰瘍性結(jié)腸炎一直不能得到控制。只 有在控制甲狀腺機能亢進癥之后，對潰瘍性結(jié)腸炎的治療才有效。 另外一項研究對300名記錄患有潰瘍性結(jié)腸炎的患者與600名年齡和性別匹配的 正常人對照物，就甲狀腺疾病發(fā)病頻率進行了比較(Jarnerot等人，1975)。結(jié)果，3.7%的 潰瘍性結(jié)腸炎患者具有甲狀腺毒癥的病史，而這一比例在正常人一組中只占0，8%。百分之七十的潰瘍性結(jié)腸炎患者在患潰瘍性結(jié)腸炎之前患了甲狀腺機能亢進。盡管潰瘍性結(jié)腸炎 患者可并發(fā)甲狀腺甲狀腺機能亢進，但是，在患者尋求潰瘍性結(jié)腸炎的治療前，不可能未發(fā) 現(xiàn)臨床癥狀不明顯的甲狀腺機能亢進癥。因此，先患有甲狀腺機能亢進癥的潰瘍性結(jié)腸炎 患者的數(shù)量可能被低估了。 結(jié)腸和甲狀腺具有不同的胚胎基源，這就反駁了兩種疾病具有共同病因的觀點 即它們具有誘發(fā)一種自動免疫性發(fā)病的共同的交叉反應(yīng)性抗原體剌激源。
甲狀腺激素被認為能提高新陳代謝率。它通過增加線粒體電子傳遞鏈的活動來完 成這一過程(Venditti(文迪蒂)等人，2003 ;Goglia(戈里亞)等，2002 ;文迪蒂等，1997)。 在超量甲狀腺激素的影響下，產(chǎn)生了更大數(shù)量的過氧化氫，并被加速的線粒體ETC活動釋 放出來(文迪蒂等，2003)。 因此，增加了的ETC活動導(dǎo)致人體所有細胞的細胞內(nèi)產(chǎn)生更多的過氧化氫，包括 結(jié)腸組織。在合適的條件下，如果過量未中和的過氧化氫擴散，逃出結(jié)腸上皮細胞，這可以 導(dǎo)致結(jié)腸上皮進入潰瘍性結(jié)腸炎的誘導(dǎo)期。 相反，患有實驗誘導(dǎo)性結(jié)腸炎的動物模型被化學誘導(dǎo)患甲狀腺機能亢進癥后出項 了明顯的衰弱癥狀(Isman(伊斯曼)等人，2003 ;Oren (奧倫)等人，1997)。這說明在甲 狀腺功能正常的情況下，產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)性過氧化氫是細胞主要的氧化劑負荷，并導(dǎo)致大量的 細胞內(nèi)谷胱甘肽被損耗。 因此，本發(fā)明的方法預(yù)期使用合成物和治療方法來控制患者體內(nèi)的甲狀腺激素水 平。 遺傳因子: 潰瘍性結(jié)腸炎在同卵雙胞胎之間的共病率為10% (Farrell和P印percorn，
2002)。這說明了環(huán)境因素的多樣性及其對疾病發(fā)展的重要影響?？勺R別基因型的缺乏說
明遺傳因素是多方面的(非單一的)，而且外顯率不足，不足以自行引發(fā)疾病。 換句話說，單個協(xié)同因子都不足以引發(fā)可識別致病反應(yīng)，協(xié)同因子的環(huán)境暴露可
能與外顯率較弱的部分遺傳因子共同作用，遺傳因子只在10%的同卵雙胞胎中重疊，導(dǎo)致
潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生。 Cho等人在遺傳研究中在人體1號染色體短臂發(fā)現(xiàn)了病理生理學上關(guān)鍵的傳染性 法氏囊病易感基因(lp36) (Cho等人，2000 ;Cho等人，1998)此基因點編碼代表了能夠?qū)?胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生根本性的影響的兩種酶基因。 第一種酶基因，亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MITHER，ECl. 5. 1. 20)，有若干多態(tài)性 變異表型，這些表型會干擾正常的葉酸代謝(上述)。位于lp36.3。目前大約有20%的人 患有潰瘍性結(jié)腸炎。這種多態(tài)酶會引起血清同型半胱氨酸升高，減少蛋氨酸和甘氨酸。這 種上位性效應(yīng)會抑制谷胱甘肽過氧化物酶的功能，并干擾谷胱甘肽的合成，而這兩個過程 對于過氧化氫的解毒作用都非常關(guān)鍵。這就造成正常細胞內(nèi)過氧化氫升高，增加潰瘍性結(jié) 腸炎誘導(dǎo)風險。 第二種位于lp36. 3的酶基因是6-磷酸葡萄糖脫氫酶(PGD) (EC1. 1. 144) 。 PGD是 磷酸戊糖途徑(磷酸己糖旁路)的第二種脫氫酶，磷酸戊糖途徑負責還原性輔酶II的生 成。PGD催化磷酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)化為核酮糖5-磷酸，生成兩個NADra分子。為中和細胞內(nèi)過 氧化氫的連續(xù)生成，NADra對于將谷胱甘肽(GSSG)還原為還原型谷胱甘肽(GSH)非常重要。磷酸戊糖途徑是減少使過氧化氫生成系統(tǒng)作用的(NADPH)等價物的主源，比如ATP生
成電子傳遞鏈和大部分氧化酶。沒有NADra再生還原型谷胱甘肽，細胞內(nèi)酶將遭受因過氧
化氫過量帶來的無法彌補的氧化損傷，而且由于細胞凋亡被觸發(fā)后細胞功能會在幾分鐘內(nèi)停止。 PGD以若干種多態(tài)形式存在，活性下降范圍在正?；钚缘?2% -79%。 (Davidson,1967 ;Parr， 1967 ;Dern等人，1966 ;Nelson， 1982)。報告稱谷胱甘肽水平的降低是由PGD多態(tài)酶造成的(C即ari，2001)。這說明這兩種磷酸戊糖途徑中的NADPH生成酶的正?；钚誀顟B(tài)對正常的谷胱甘肽水平非常重要。外部因素比如抗生素，膳食脂肪和老齡化進程也能夠降低PGD的活性(Ciftci，2002 ;Tomlinson， 1998 ;Cordillo， 1991)。 PGD多態(tài)變量能夠減少生成的NADra數(shù)量。在適當?shù)臈l件下，帶有這種遺傳多態(tài)性的個體細胞內(nèi)過氧化氫的累積風險會加大，潰瘍性結(jié)腸炎誘導(dǎo)的風險會變高。因此，缺乏免疫力的PGD活性會促進敏感個體的潰瘍性結(jié)腸炎的誘導(dǎo)過程。 細胞色素P450氧化酶是約包含50個具有基因差異并能代謝異源物的酶系統(tǒng)家族
的一部分。為代謝進入體內(nèi)的藥物和毒素，這種酶將把NADra作為電子供體。如上所述，再
生還原型谷胱甘肽也需要NADPH。因此，在藥物接觸中，任何具體藥物的快速代謝都會消耗更多的NADPH。 NADra從谷胱甘肽再生轉(zhuǎn)化為藥物解毒作用，能夠增加細胞內(nèi)過氧化氫的濃度和潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的風險。在外源物代謝過程中，P450酶也會生成過氧化氫，進一步增加氧化負荷。 對看似正常的結(jié)腸黏膜進行研究發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽合成和代謝中出現(xiàn)了顯著的個體間酶變異(Batist等人，1988)。谷胱甘肽_S_轉(zhuǎn)移酶出現(xiàn)8倍變異，谷胱甘肽過氧化物水平10倍變異，谷胱甘肽水平16倍變異，Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽14倍變異，Y-谷氨酰半胱氨酸合成酶5倍變異。大量的酶變異直接或間接地影響細胞內(nèi)谷胱甘肽的濃度，而研究發(fā)現(xiàn)個體間細胞內(nèi)谷胱甘肽濃度發(fā)生了 16倍變異。 報告還發(fā)現(xiàn)了磷酸葡萄糖脫氫酶(EC:l. 1. 1.44)，谷胱甘肽過氧化物酶(EC1. 11. 119)，谷胱甘肽還原酶(EC 1.6.4.2)， Y _谷氨酰半胱氨酸合成酶(EC 6.3.2.2)，谷胱甘肽合成酶(EC 6.3.2.3)的種族變異和酶病.(Scriver等人，2001 ;Larsson和Anderson, 2001 ;Buetler禾口 Mats翻to， 1975)。 影響結(jié)腸谷胱甘肽濃度的遺傳因子數(shù)量龐大。影響谷胱甘肽的合成、還原再生或第二階段生物偶聯(lián)能夠增加細胞中的過氧化氫。沒有單個因子能夠改變氧化還原平衡使細胞內(nèi)的過氧化物實現(xiàn)過量積累。但是，在這些遺傳因子的細胞遷移和適當?shù)沫h(huán)境條件下，結(jié)腸上皮細胞對細胞內(nèi)生成過氧化氫的中和能力可能會被損壞，細胞組織會進入潰瘍性結(jié)腸炎的誘導(dǎo)階段。 因此，在需要時，發(fā)明方法還要考慮個體及變體的遺傳審查，生活方式和/或基于篩查結(jié)果的治療方案的制定。 本文提及和弓|用的所有專利、專利申請、臨時申請和出版物，包括所有數(shù)據(jù)及表格全部作為參考材料，與本說明中的明確示教不具抵觸性。 下面是說明本發(fā)明實踐步驟的具體實例。不應(yīng)受這些實例所限。如未特別說明，所有重量以百分比計，所有溶劑混合比例以體積計。
例l-i秀導(dǎo)期內(nèi)患者的治療
32
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，如能在誘導(dǎo)期確認疾病，潰瘍性結(jié)腸炎與許多其它疾病一樣是可以預(yù) 防的。由于只是很少或根本沒有癥狀或體征表明結(jié)腸是問題的根源，而且從組織結(jié)構(gòu)上及 目視上結(jié)腸都處于正常狀態(tài)，所以要確認誘導(dǎo)過程有些困難。本階段確認病情需要高懷疑 指數(shù)、腸外表現(xiàn)、異生物質(zhì)關(guān)聯(lián)、家族遺傳史、潰瘍性結(jié)腸炎流行病學數(shù)據(jù)和生活方式史。
如果結(jié)腸上皮屏障具有足夠穿透性使腸內(nèi)免疫系統(tǒng)和細菌抗原長期接觸，則 p-anca抗體可能呈陽性?，F(xiàn)已證明p-anca抗體主要針對普通類桿菌的表面抗原，它指示了 帶有后續(xù)免疫活性的結(jié)腸屏障缺口。因過氧化氫能夠誘導(dǎo)上皮細胞增殖，故能在糞便樣本 中找到結(jié)腸上皮細胞周轉(zhuǎn)量增加的證據(jù)。如進行結(jié)腸鏡檢查，還會發(fā)現(xiàn)上皮細胞增殖的其 它證據(jù)，比如結(jié)腸黑變病(Parli等人，1998)。腸道活檢的免疫染色法可以顯示改變后的緊 密聯(lián)系蛋白，比如鈣粘蛋白和基底膜異常?？赡艿脑挘w內(nèi)傳導(dǎo)研究將顯示出正常目視結(jié)腸 組織中通透性的增強。 對于在誘導(dǎo)期確診的患者，為減少結(jié)腸的氧化應(yīng)激壓力，可以采取措施改變生活 方式。應(yīng)停止服用所有的外源物和酒精。應(yīng)逐漸停止吸煙，不可突然完全停止，即，患者在 戒煙過程中應(yīng)避免突然完全停止吸煙。應(yīng)對便秘進行治療。不食用快餐，采取抗氧化劑含 量高(蔬菜和水果)，高纖維及優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)的膳食。必要時通過心理輔導(dǎo)減壓。
例2-傳播期內(nèi)患者的治療 目前，幾乎沒有患者能在誘導(dǎo)期被確認患病，只有在進入傳播期直腸開始出血才
尋求醫(yī)療幫助。腸粘膜內(nèi)的結(jié)腸中性粒細胞炎癥反應(yīng)無法通過誘導(dǎo)期使用的方法進行逆
轉(zhuǎn)，但為防止炎癥反應(yīng)完成逆轉(zhuǎn)后出現(xiàn)再次誘導(dǎo)，采用這些措施是比較審慎的。 傳播期結(jié)腸炎的治療方案可以為下列之一或一個以上 1.結(jié)腸過氧化氫的中和作用。 2.通過結(jié)腸細菌降低中性剌激。 3.結(jié)腸上皮細胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終止。 4.結(jié)腸黏膜通透性的降低。 過氧化氫的中和作用對于終止組織的持續(xù)損傷非常關(guān)鍵。如通過直腸灌注硫代硫 酸鈉可以將過氧化氫中和于水及非活性硫酸鹽產(chǎn)品。 結(jié)腸細菌，主要是厭氧桿菌，對中性粒細胞的剌激作用可以通過堿式?jīng)]食子酸鉍
進行緩和，堿式?jīng)]食子酸鉍能夠防止細菌附著于直腸上皮，有殺菌作用。 結(jié)腸上皮細胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終止可以通過將d-a生育酚(維他命E)作為醋
酸或琥珀酸實現(xiàn)。這也增加了溶液的粘性，溶液產(chǎn)生位阻以防止細胞因子和自由基與其靶 組織的相互作用。 最后一種方法，色甘酸鈉可以阻止結(jié)腸肥大細胞，減少結(jié)腸對腔抗原的滲透性。
這種療法可以作為保留灌腸法每日一次。 可以采用通過口服可樂定療法減少僅次于壓力的內(nèi)源性兒茶酚胺的氧化作用。己
酮可可堿具有抗炎活性，通過可以抑制NADra氧化酶與細胞凋亡的中性粒細胞浸潤表面的
腺苷受體，己酮可可堿可以用作嘌呤能激動劑。隨著生活方式的調(diào)整，這種口服治療可以作 為維持治療繼續(xù)進行，防止再次復(fù)發(fā)。
例3 患者為44歲女性，自1994年以來患潰瘍性結(jié)腸炎。初期癥狀出現(xiàn)流血。她每半年
33都會出現(xiàn)一次流血和抽筋的癥狀。在沒有治療的情況下，每次病發(fā)后癥狀會自動減退。從 2003年癥狀開始加劇。 2003年10月，患者第一次接受結(jié)腸鏡檢查，正式確診為潰瘍性結(jié)腸炎?；颊唛_始 使用ASACOL (Medeva Pharma Schweiz AG， Switzerland)進行治療但病情仍出現(xiàn)復(fù)發(fā)；復(fù)發(fā) 時間更短。每三-五個月復(fù)發(fā)一次。有時非常嚴重，對氫化可的松灌腸治療沒有反應(yīng)。隨 后，出現(xiàn)嚴重發(fā)病，使用ASACOL和灌腸治療都沒有效果?；颊呤褂每傻乃蛇M行治療，幾個內(nèi) 后有所改善，但隨后又復(fù)發(fā)，癥狀比之前更嚴重。 乙狀結(jié)腸鏡檢查顯示中度活性疾病已達到20厘米處(見圖1A-1E)。此外粘膜正 常，排便正常。患者接受了活組織檢查和拍照?；顧z標本顯示帶有隱窩畸變，固有層單個核 細胞擴增，基底漿細胞增多癥和粘膜潰瘍的彌漫性結(jié)腸炎，符合慢性潰瘍性結(jié)腸炎狀態(tài)，具 有高度活躍性，發(fā)育障礙中上皮病變?yōu)殛幮?，并未發(fā)現(xiàn)巨細胞病毒。 接受乙狀結(jié)腸鏡檢查后，該患者開始了一日一次的灌腸治療，本發(fā)明的灌腸治療 方案由以下幾部分組成l)40cc Rowasa(2. 6gms)(美沙拉嗪)直腸懸吊術(shù)；2)5cc鈉色甘酸 鈉(100mg/5cc 口服濃度);3) 1摩爾酸鈉15cc (15毫摩爾或1. 5克)；和4) lcc鈉布地奈德 (5mg/cc)?；颊哌€開始口服R- 二氫硫辛酸，每天兩次，每次300mg。 在完成七天療程后，患者表示狀況改善了85%，明顯改善從第四天開始。未出現(xiàn)痙 攣、粘液，無流血現(xiàn)象。大便成形。病人將繼續(xù)進行一周的治療，然后進行乙狀結(jié)腸鏡檢查。
乙狀結(jié)腸鏡檢查結(jié)果顯示粘膜外觀完全正常(見圖2A-2C)。患者還接受了活檢。 活檢標本顯示了隱窩畸變，固有層單核細胞擴增，符合靜態(tài)慢性潰瘍性結(jié)腸炎狀態(tài)。未出現(xiàn) 活躍性炎癥。發(fā)育障礙中上皮病變?yōu)殛幮浴?應(yīng)了解本文描述的實例及具體表現(xiàn)僅供解釋說明之用，各修改或變更應(yīng)由專業(yè)人 士在此應(yīng)用精神和權(quán)限以及所附聲明的范圍內(nèi)進行。此外，文中公開的任何發(fā)明或具體實 例的要素或限制條件都能與文中公開的任一和/或全部其它要素或限制條件或其它發(fā)明 或具體實例相結(jié)合，所有這些結(jié)合都應(yīng)考慮到但不限于此發(fā)明的范圍。
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權(quán)利要求
人和動物直腸給藥的組合物，如灌腸劑或栓劑，所述組合物包含氨基水楊酸和類固醇。
2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述氨基水楊酸是5-ASA或4-ASA，或類似物或氨基水楊酸的衍生物。
3. 如權(quán)利要求1所述的組合物，還包含乳化劑和/或肥大細胞穩(wěn)定劑。
4. 如權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述乳化劑是聚山梨醇酯-80。
5. 如權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述肥大細胞穩(wěn)定劑是指色甘酸鈉和奈多羅米鈉。
6. 如權(quán)利要求1所述的組合物，包含約500mg-約5000mg的5-ASA ;或約750mg-約3000mg的5-ASA ;或約2000mg的5-ASA 。
7. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述類固醇為皮質(zhì)類固醇。
8. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述類固醇是氫化可的松、強的松、強的松龍、倍他米松、倍氯米松、巰氫、或布地奈德、或其類似物或衍生物。
9. 如權(quán)利要求l所述的組合物，還包含短鏈脂肪酸。
10. 如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述脂肪酸是丁酸鈉、丙酸鹽或醋酸鹽。
11. 如權(quán)利要求10所述的組合物，還包含約5-50毫摩爾的丁酸鈉；或約15亳摩爾的丁酸鈉。
12. 如權(quán)利要求1所述的組合物，還包含約lmg-約10mg的布地奈德；或約2. 5mg-約7. 5mg的布地奈德；或約5mg的布地奈德。
13. 如權(quán)利要求5所述的組合物，包含約10-約lOOOmg的色甘酸鈉；或約lOOmg的色甘酸鈉。
14. 如權(quán)利要求1所述的組合物，包含5-ASA，或其類似物或衍生物；布地奈德；和色甘酸鈉。
15. 如權(quán)利要求14所述的組合物，還包含丁酸鈉。
16. 人或動物的口服藥物組合物，包含a-硫辛酸和/或N-乙酰-L-半胱氨酸(N-A-C)和/或卜谷氨酰胺。
17. 如權(quán)利要求16所述的組合物，還包含5-ASA。
18. 如權(quán)利要求16所述的組合物，還包含抑制細胞壞死因子(TNF)的混合物。
19. 如權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述抑制細胞壞死因子TNF的混合物由包含白藜蘆醇，蕁麻提取物，和黃連素的群組中選出。
20. 如權(quán)利要求16所述的組合物，還包含一種或多種由群組中選出的組合物，該群組包含能直接中和過氧化氫的組合物、幫助防止蛋白質(zhì)氧化和/或降解的組合物，保護核酸的組合物。
21. 如權(quán)利要求20所述的組合物，其中能直接中和過氧化氫的組合物為丙酮酸鈣，輔助保護蛋白質(zhì)氧化和/或降解的組合物是蜇肌肽，保護核酸的組合物是D-葡糖二酸鈣。
22. 如權(quán)利要求16所述的組合物，還包含一份或更多硒，維生素B-2，維生素B-12，葉酸或生物素。
23. 如權(quán)利要求16所述的組合物，其中a -硫辛酸為消旋a -硫辛酸，R-硫辛酸，或R-二氫硫辛酸。
24. 如權(quán)利要求16所述的組合物，包括約lOOmg-lOOOmg的R- 二氫硫辛酸；或者約250mg-約750mg的R- 二氫硫辛酸；或約300mg的R- 二氫硫辛酸。
25. 人或動物腸道炎癥疾病的預(yù)防方法或治療方法，該方法包括施與以下藥物的有效劑量a) 權(quán)利要求1-15中用于人和動物直腸給藥的組合物，如灌腸劑或栓劑；和/或b) 權(quán)利要求16-24中用于人或動物口服的組合物。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述腸道炎癥疾病為潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、腸易激癥、或輻射致直腸炎。
27. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述口服組合物需每日 一或兩次，或每兩天服用一次或兩次。
28. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述灌腸劑或栓劑組合物需每日，每兩日，每三日，每四日，每五日，每六日，每七日或間隔更長使用一次。
29. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述口服組合物需每日用藥，灌腸劑或栓劑每日，每兩日，每三日，每四日，每五日，每六日，每七日或間隔更長使用一次。
30. 如權(quán)利要求25-29中任一項所述的方法，其中所述口服組合物及灌腸劑或栓劑組合物是被服用的。
31. —套在一個或一個以上的容器中的藥劑組合包含下列成分i) 氨基水楊酸；和/或ii) 類固醇；和/或iii) 肥大細胞穩(wěn)定劑；和/或iv) 短鏈脂肪酸；和/或v) 乳化劑。
32. 如權(quán)利要求31所述的藥劑組合，其中所述氨基水楊酸為5-ASA，或4-ASA，或其類似物或衍生物。
33. 如權(quán)利要求31所述的藥劑組合，其中所述乳化劑是聚山梨醇酯-80。
34. 如權(quán)利要求31所述的藥劑組合，其中所述肥大細胞穩(wěn)定劑是色甘酸鈉或奈多羅米鈉。
35. 如權(quán)利要求31所述的藥劑組合，其中所述類固醇為氫化可的松，強的松，強的松龍，倍他米松，倍氯米松，巰氫，或布地奈德，或其類似物或衍生物。
36. 如權(quán)利要求31所述的藥劑組合，其中所述脂肪酸是丁酸鈉，丙酸鹽或醋酸鹽。
37. 如權(quán)利要求32-36所述的藥劑組合，還包含影響灌腸劑或栓劑用藥的物質(zhì)和/或藥
全文摘要
本發(fā)明涉及疾病癥狀預(yù)防和治療的物質(zhì)和方法，疾病癥狀與氧化應(yīng)激或使免疫力下降的環(huán)境有關(guān)，疾病包括腸道炎癥疾病，例如克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。本發(fā)明的另一方面涉及給藥組合物的制備，如灌腸劑。在具體實例中，適合灌腸給藥的組合物包括有效劑量的5-ASA和類固醇，例如，布地奈德或氫化可的松。本發(fā)明還涉及口服給藥的處方組合物。在具體實例中，組合物包括α-硫辛酸和/或N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)和/或L-谷氨酰胺。上述α-硫辛酸可以是消旋α-硫辛酸，R-硫辛酸，或R-二氫硫辛酸。發(fā)明方法包括復(fù)合物用藥或者本發(fā)明中的組合物。在具體實例中，本發(fā)明的復(fù)合物或組合物均用于從患者肛門灌輸。另一個實例中的復(fù)合物及組合物為口服用藥。本發(fā)明還涉及評估與氧化應(yīng)激(如潰瘍性結(jié)腸炎和其他腸道炎癥疾病)相關(guān)的患病與癥狀診斷風險的方法和審查。
文檔編號A61K31/136GK101707877SQ200880020124
公開日2010年5月12日 申請日期2008年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月13日
發(fā)明者杰伊·普拉夫達 申請人:杰伊·普拉夫達