雜交萵苣種子的生產(chǎn)的制作方法【專利摘要】本發(fā)明涉及雜交萵苣種子的生產(chǎn)，包含下列步驟：在封閉介質(zhì)中彼此接近地栽培用作“母本”的雄性不育表型的萵苣植株和用作“父本”的雄性可育表型的萵苣植株，兩個(gè)親本之一，作為補(bǔ)充特征，表現(xiàn)對(duì)于賦予不同于該雄性不育性的可檢測(cè)表型的基因而言是純合子的事實(shí)，而另一個(gè)親本不攜帶此基因；在植株的開花期，在封閉介質(zhì)中，以每m2超過100只雙翅目昆蟲，或每m3超過25只雙翅目昆蟲，優(yōu)選每m2超過250只雙翅目昆蟲或每m3超過至少75只雙翅目昆蟲的密度引入雙翅目昆蟲進(jìn)行授粉；以及采集由該雄性不育植株產(chǎn)生的種子?！緦＠f明】雜交萵苣種子的生產(chǎn)[0001]本申請(qǐng)是原申請(qǐng)的申請(qǐng)日為2008年3月5日，申請(qǐng)?zhí)枮?00880007108.6,發(fā)明名稱為《雜交萵苣種子的生產(chǎn)》的中國專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。[0002]本發(fā)明涉及雜交萬苣（Lactucasativa)的種子以及生產(chǎn)該種子的方法。本發(fā)明同樣涉及雜交萵苣植株以及雜交萵苣植株的細(xì)胞。[0003]在大規(guī)模生產(chǎn)植物雜交種子的幾個(gè)原因中，人們特別考慮雜種優(yōu)勢(shì)（或者雜交活力）、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定（植物在不同環(huán)境中的穩(wěn)定性）、將對(duì)昆蟲、真菌、細(xì)菌或病毒的抗性基因組合的可能性、或者還有對(duì)非生物性逆境的適應(yīng)性，諸如對(duì)極端溫度、即5°C以下或30°C以上的溫度的耐受性、或者還有對(duì)低照度的耐受性。[0004]在萵苣（栽培萵苣）中，在純合子譜系中使某些抗性基因組合被證實(shí)是不可能的或者非常困難的，尤其是當(dāng)所考慮的基因處于同一基因座上（在每個(gè)等位基因上）或者在一些非常接近的基因座上時(shí)。[0005]特別是Fl雜交栽培萵苣的獲得，使并合了由位于同一基因座或者非常接近的基因座上的不同等位基因所攜帶的在農(nóng)業(yè)上有意義幾個(gè)共顯性或顯性基因的雜種的商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)成為可能，故具有巨大的效益。[0006]萬苣屬包括100多個(gè)種，其中有萬苣（Lactucasativa)(栽培種）、Lactucasaligna(野生種）、毒萬苣（Lactucaserriola)(野生種）和毒萬苣（Lactucavirosa)(野生種）。[0007]萵苣是二倍體物種（2n=18)，一般自花受精，通過自花受粉的種子生產(chǎn)占98%。雄蕊（雄性器官）是成組的，形成雄蕊管，其中花藥的花粉囊打開。雌蕊（雌性器官）包括子房、花柱和二裂的柱頭?；ㄩ_時(shí)，雄蕊管內(nèi)部的長形花柱以及柱頭被花粉覆蓋，于是該植株自體受精。根據(jù)栽培條件，植株萵苣一般產(chǎn)生重〇.5至6克，甚至10克的種子，每克一般有600至1000粒種子。[0008]大規(guī)模生產(chǎn)雜交植物的傳統(tǒng)技術(shù)包括，彼此相近地種植用作"親本"的兩個(gè)品種，并利用昆蟲授粉，親本之一具有雄性不育性，以避免自花傳粉造成的污染。接著在該雄性不育的親本上采集種子。[0009]這種技術(shù)允許在每一個(gè)親本中使以純合子的形式出現(xiàn)的感興趣的基因組合，但仍舊保留試驗(yàn)田的同質(zhì)性，F(xiàn)l代在采集階段上（花開之前）呈現(xiàn)100%的均一表型。[0010]用這個(gè)技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)雜交栽培萬苣（Lactucasativa)被證實(shí)是非常困難的。事實(shí)上，萵苣只在一天中的某個(gè)時(shí)刻（早晨一早）開花一次，開花持續(xù)僅僅幾個(gè)小時(shí)，例如，1至4小時(shí)，這時(shí)傳粉昆蟲，諸如某些種的蜂（蜜蜂（Apismellifera))或者熊蜂（Bombusspp.)尚未活動(dòng)。[0011]萵苣的授粉也不靠風(fēng)來實(shí)現(xiàn)。[0012]于是，鑒別可以用來生產(chǎn)雜交萵苣的傳粉昆蟲碰到許多困難，特別是：[0013]-開花期既短又早，這使鑒別飛臨這些花朵的昆蟲變得困難；[0014]-該花只開一次，因而，選定的傳粉昆蟲應(yīng)該是一種整日都飛臨這些花朵的昆蟲，以便保證給最大數(shù)目的雄性不育花朵授粉。[0015]另一方面，生產(chǎn)雜交Fl需要設(shè)置"雄性"系和"雌性"系。"雌性"系可以通過對(duì)植物進(jìn)行人工去雄的辦法而獲得。然而，在萵苣的情況下，每朵花只開一次，而且花期非常短(幾小時(shí)），由于需要的人工費(fèi)非常高，這個(gè)方法難以以商業(yè)規(guī)模實(shí)施。[0016]"雌性"系同樣可以通過引入基因型不育（或者核型不育）或者細(xì)胞質(zhì)型不育的辦法而獲得，表現(xiàn)為無花藥、空花藥或者花粉無活力。這種不育在核不育（或者基因不育）的情況下部分地傳給子代，或者在細(xì)胞質(zhì)不育的情況下完全傳給子代。[0017]Goubara和Takasaki(動(dòng)物昆蟲學(xué)應(yīng)用（八卩卩1.已111:〇111〇.Zool).38(4):571-581,2003[I])在其工作中進(jìn)行了開放式和封閉式田間試驗(yàn)，目的在于鑒別可以用來生產(chǎn)雜交萵苣（Lactucasativa)的有授粉潛力的昆蟲。所觀察的22種昆蟲（21個(gè)種的蜂和一個(gè)種的用花蜜飼養(yǎng)的幡，財(cái)幡科長尾管財(cái)幡（SyrphidaeEristalistenax))中，發(fā)現(xiàn)蜂Lagioglossumvillosulumtrichopse(軟毛隧蜂）是最佳的潛在授粉者。[0018]Goubara和Takasaki(Appl.Entomo.Zool.39(1):163-169,2004[2])也在封閉介質(zhì)中在蜂Lagioglossumvillosulumtrichopse存在的情況下進(jìn)行了攜帶雄性不育基因的萵苣和雄性可育萵苣之間的小規(guī)模的雜交試驗(yàn)。作者披露，獲得了Fl雜交萵苣，但是產(chǎn)量非常低。[0019]至今，尚未看到利用傳粉昆蟲生產(chǎn)雜交萵苣的任何其他試驗(yàn)。[0020]至今，尚未以商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)出任何品種的Fl雜交萵苣。[0021]按照本發(fā)明，下列術(shù)語理解如下：[0022]-栽培萬苣是指物種萬苣（Lactucasativa)。栽培萬苣有5個(gè)主要栽培組（見圖1):萬苣var.angustana(蘆輿萬苣）；萬苣var.capitata(蘋果形萬苣，黃油萬苣）；萬苣var.crispa(荷蘭萬苣或者冰山萬苣）；萬苣var.Iongifolia(羅馬萬苣）和萬苣var.acephala(皺葉菊苣，收割萵苣）。本發(fā)明包含這些不同類型萵苣中每一種的應(yīng)用。[0023]一授粉是指把花藥的花粉輸送到同一朵花或者另一朵花的柱頭。這種有性生殖系統(tǒng)是開花植物（被子植物和裸子植物）天然的繁殖模式。它允許花粉顆粒達(dá)到柱頭，接著經(jīng)過花柱形成通到胚珠的花粉管，以便授精。[0024]一自花授粉是指通過其適當(dāng)?shù)幕ǚ圻M(jìn)行個(gè)體或者生物型的授粉，結(jié)果個(gè)體自花授粉。[0025]-自花受精是指植物自花受精的能力，兩個(gè)配子出自同一個(gè)體。[0026]-異花授粉是指一個(gè)個(gè)體的花由來自一個(gè)或者幾個(gè)其他個(gè)體的花粉授精的現(xiàn)象。[0027]-傳粉昆蟲是指利用探索花（例如，尋求花蜜）的昆蟲（其中有蜂、蝴蝶、雙翅目昆蟲或某些鞘翅目昆蟲）摩擦雄蕊，從而收集幾?；ǚ郏缓髼壷迷诹硪欢浠ㄉ?。[0028]一基因座（locus)是指基因或者等位基因在染色體上占據(jù)的位置。[0029]一等位基因是指一個(gè)物種中處于染色體給定位置（基因座）上的基因的變異體，。一個(gè)基因的不同等位基因引起不同的特性表達(dá)。[0030]一基因簇（cluster)是指位于同一染色體上彼此靠近的位置的兩個(gè)或多個(gè)基因。Kesseli等人[12]特別描述了在萵苣中鑒別出抗性基因基因簇（clusters)。[0031]一顯性基因是指在一對(duì)染色體的兩個(gè)染色體或一個(gè)染色體上出現(xiàn)的賦予表型的基因。[0032]一隱性基因是指當(dāng)其出現(xiàn)在兩個(gè)同源染色體中的每一個(gè)上時(shí)不賦予表型的基因。[0033]-共顯性是指兩個(gè)等位基因在該表型中彼此表達(dá)由它們所決定的特征的特性。在攜帶兩個(gè)共顯性等位基因的雜合體中，就這些基因所攜帶的信息而言，該遺傳型在該表型中被完全表達(dá)。[0034]-雜合子是指在同一對(duì)染色體的一個(gè)給定基因座上具有兩個(gè)不同的等位基因的細(xì)胞或個(gè)體。[0035]一純合子是指在同一對(duì)染色體的一個(gè)給定基因座上具有兩個(gè)相同的等位基因的細(xì)胞或個(gè)體。[0036]一術(shù)語雜種是指不同遺傳結(jié)構(gòu)的個(gè)體（優(yōu)選是同一品種）之間雜交的產(chǎn)物。[0037]一Fl雜種是指通過不同遺傳結(jié)構(gòu)的個(gè)體之間雜交而產(chǎn)生的第一代。因而，F(xiàn)l雜種對(duì)于至少一個(gè)基因而言是雜合子。[0038]一回交（或者回交雜交或者"回交"）是指雜種與其親本之一之間的雜交。[0039]-栽培品種是指變種。[0040]-基因型是指?jìng)€(gè)體所攜帶的并構(gòu)成其基因遺傳型（patrimoinehereditaire)的遺傳材料的總體。[0041]一表型是指?jìng)€(gè)體顯現(xiàn)的形態(tài)或者功能特性的總體，它們既響應(yīng)基因型的表達(dá)部分，也響應(yīng)由外部介質(zhì)決定的一些現(xiàn)象。[0042]一農(nóng)業(yè)上感興趣的表型是指例如兩個(gè)純合基因型之間雜交所產(chǎn)生的、表現(xiàn)出從農(nóng)業(yè)的觀點(diǎn)看感興趣的特征的表型，其中，諸如對(duì)不同病原體或昆蟲的抗性特性組合，雜種活力（就是說，雜種特性的平均水平超過兩個(gè)親本的平均水平）、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、對(duì)非生物性逆境的適應(yīng)能力、形態(tài)特征，諸如，顏色、形狀、葉子的剛?cè)彳浶浴⒃撝参锏臓I養(yǎng)素成分或味覺質(zhì)量。[0043]一雜種優(yōu)勢(shì)或雜種活力是指Fl雜種在一個(gè)或幾個(gè)特性上，特別是涉及活力方面，明顯地優(yōu)于其親本的較佳者的現(xiàn)象。[0044]一內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定是指植物適應(yīng)其環(huán)境，甚至幾個(gè)環(huán)境特征的能力。[0045]一術(shù)語雄性不育是指由于花的雄性要素的不育性而不能通過自花受粉繁殖的植物。例如，該花粉可能不起作用，或者可能雄性繁殖器官有結(jié)構(gòu)畸形，例如，在花藥（絨氈層）的滋養(yǎng)絨氈層水平上的結(jié)構(gòu)畸形。[0046]一細(xì)胞質(zhì)雄性不育是指細(xì)胞質(zhì)類型的經(jīng)母性遺傳一致性地傳遞的不育性。[0047]一細(xì)胞核（或基因）雄性不育是指由（細(xì)）胞核的DNA所攜帶的孟德爾遺傳性的不育性，它或者可能由隱性基因決定，或者可能由顯性基因決定。[0048]-單基因雄性不育性是指由一個(gè)基因引起的雄性不育。[0049]-多基因雄性不育性是指由幾個(gè)基因引起的雄性不育。[0050]-抗性是指，與敏感的變種相比，在類似的條件、環(huán)境和病原體或害蟲的壓力下，一個(gè)變種抑制給定病原體或害蟲生長和發(fā)育和/或其所引起的損害的能力。但是，這些變種在病原體或者害蟲的強(qiáng)大壓力的情況下可能表現(xiàn)出幾種病害的癥狀或者表現(xiàn)幾種損害。[0051]-標(biāo)準(zhǔn)抗性或者高抗性是指在病原體和害蟲的普通壓力條件下，與敏感的變種相比，變種有力地抑制給定病原體或害蟲的生長和發(fā)育的能力。但是，在該病原體或該害蟲的強(qiáng)大壓力的情況下，這些變種可能表現(xiàn)出一些癥狀或損害。[0052]-中等抗性或適度抗性是指變種抑制給定病原體或害蟲的生長和發(fā)育的能力，但是與高/標(biāo)準(zhǔn)抗性變種相比，可能表現(xiàn)出更多的癥狀或損害。該中等抗性變種在類似的條件、環(huán)境和/或病原體或害蟲的壓力下，表現(xiàn)出的癥狀或損害，與在敏感變種上所觀察到的相比，較不嚴(yán)重。[0053]_分子標(biāo)記是指，在個(gè)體完整的基因組中可以鑒別出的，而且可以用來確定感興趣基因的位置，或者查核一個(gè)個(gè)體是否遺傳了一個(gè)親本機(jī)體特定特征的特定DNA片段。它可能涉及或不涉及編碼序列。在遺傳雜交中，一般將感興趣的基因與分子標(biāo)記相連接。于是，對(duì)分子標(biāo)記的檢測(cè)則允許選擇出呈現(xiàn)感興趣基因的個(gè)體，而不必知道該基因的序列。[0054]在農(nóng)學(xué)領(lǐng)域中，分子標(biāo)記的利用允許在選擇的過程中迅速地測(cè)試植物，并允許保留擁有所需特征的植物。在某些情況下，與一個(gè)特性相關(guān)的標(biāo)記的存在，使育種者能夠免除某些測(cè)試或表型的觀察。具體地說，雄性不育基因（優(yōu)選是雄性不育顯性基因）的特定分子標(biāo)記的利用，允許在雄性不育植物開花期之前提前進(jìn)行選擇。這種選擇允許清除在雜交種子的生產(chǎn)中，例如，在利用雄性不育顯性基因的情況下，可能構(gòu)成對(duì)計(jì)劃用作"母本"（雄性不育）植株的污染的一部分雄性可育植株，并因而減小與這些雄性可育植株的自花受精相關(guān)的污染的危險(xiǎn)。[0055]本發(fā)明的目的是雜交植物萬苣（Lactucasativa)的種子、植株和細(xì)胞，其特征在于，它們屬雄性不育基因型，而且對(duì)于至少一個(gè)不包含在雄性不育中的基因而言是雜合子，而且賦予該植物一種可檢測(cè)的表型。[0056]植物萵苣的種子、植株或者細(xì)胞所帶的雄性不育性可以來自細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)。在它們是細(xì)胞質(zhì)雄性不育的情況下，該不育性是母性遺傳的。它們往往是由細(xì)胞質(zhì)中存在的線粒體和一些細(xì)胞核基因之間的相互作用造成的。該細(xì)胞質(zhì)雄性不育的特征在于，在母本基因組中不存在育性恢復(fù)基因時(shí)，出現(xiàn)100%雄性不育表型的子代。當(dāng)母本"基因組中存在育性恢復(fù)（Rf)基因時(shí)，該雄性育性可以在該子代水平上進(jìn)行恢復(fù)。[0057]更具體地說，本發(fā)明涉及雄性不育基因型包含至少一個(gè)細(xì)胞核基因的情況，或者種子、細(xì)胞或植物對(duì)該雄性不育來源的一個(gè)或幾個(gè)基因而言是雜合子的情況。[0058]細(xì)胞核雄性不育是由細(xì)胞核DNA傳遞的一個(gè)或幾個(gè)雄性不育基因引起的，這一個(gè)或幾個(gè)基因可以是顯性基因或隱性基因。[0059]在這些雄性不育基因中，人們特別是考慮Ryder(美國園藝協(xié)會(huì)雜志（J.Amer.Soc.Hort.Sci)96(6)826-828,1971[8])所描述的細(xì)胞核顯性基因Ms7。雄性不育植株是雜合子一Ms7ms7。可育植株是純合子ms7ms7。顯性基因Ms7Ms7純合子的獲得仍舊是非常困難的，甚至是不可能的。另外，按照Ryder的教導(dǎo)，對(duì)于雜交萵苣的生產(chǎn)，這種雄性不育顯性基因特性包括該基因的效用抑制（freina1'utilite)。按照本發(fā)明的方法所獲得的包含基因源Ms7的萵苣種子樣本于2007年2月13日以保藏號(hào)NCMB41470保藏于英國食品工業(yè)與海洋細(xì)菌菌種保藏中心（NCMB)(NCMBLtd.，弗格森大廈，克瑞斯通工業(yè)區(qū)，巴克斯本，阿伯丁，A219YA,蘇格蘭，英國（FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,Aberdeen，A219YA,Scotland,UK))。另一方面，由本發(fā)明人開發(fā)的分子標(biāo)記RAPDBA05-675(SEQIDNO:2)，其效益尤其在于，它允許在開花期之前的提前階段上投入分子測(cè)試，以便鑒別出隨后用于雜交的雄性不育植株，幫助選擇雄性不育萵苣Ms7植株。該標(biāo)記（該序列示于圖8)的檢測(cè)，對(duì)所有混淆的（confondues)萵苣類型，允許以平均96%案例鑒別雄性不育植株(表18)〇[0060]三個(gè)雄性不育隱性基因一msl、ms2和ms3也由lindqvist(Heriditas46:387-470,1960[3])鑒別出來，而其他三個(gè)ms4、ms5和ms6同樣被1^(161'(?1'〇(3.4111.5〇(3.Hort.Sci83:585-595,1963[6],Proc.Am.Soc.Hort.Sci91:366-368,1967[7])鑒別出來。但是，Ryder在其1979年發(fā)表的文獻(xiàn)（多葉沙拉蔬菜（LeafySaladVegetables),p.30[9])中披露，不育基因msl、ms2、ms3、ms4、ms5、ms6和Ms7均為細(xì)胞核不育基因，不太可能用于Fl雜種生產(chǎn)。盡管如此，本發(fā)明人已經(jīng)成功地利用細(xì)胞核來源的雄性不育獲得雜交的種子、植株細(xì)胞。[0061]該細(xì)胞核雄性不育性可以是多基因的或者單基因的。在它們是多基因的情況下，例如，可以借助于多個(gè)隱性基因，例如，上述基因msl、ms2和ms3的組合獲得。本發(fā)明優(yōu)選涉及雄性不育是單基因的情況。[0062]細(xì)胞核雄性不育性可以是顯性的或者隱性的。具體地說，本發(fā)明涉及該雄性不育基因是顯性單基因的情況。更具體地說，本發(fā)明涉及該雄性不育是由上述顯性基因Ms7賦予的情況。[0063]本發(fā)明的種子、植株或細(xì)胞的基因組優(yōu)選包含650至700個(gè)核苷酸，例如，655至695、660至690、665至685、670至680、673至677個(gè)核苷酸，或者674、675或676個(gè)核苷酸的雙鏈DNA序列，其中兩條鏈中每一條的5'末端均由"5'TGCGTTCCAC3'"（SEQIDNo.1)的序列開始。按照優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的種子、植株或細(xì)胞的基因組包含圖8所示的核苷酸序列（SEQIDNo.2)或這個(gè)序列衍生的序列，其中1至10個(gè)，較優(yōu)選1至5個(gè)，更優(yōu)選1至3個(gè)核苷酸被其他核苷酸取代、被缺失或加入。[0064]本發(fā)明優(yōu)選涉及由一個(gè)或幾個(gè)雜合基因賦予的可檢測(cè)表型是農(nóng)業(yè)上感興趣的表型的情況，所述表型例如為對(duì)不同病原體或昆蟲的抗性、雜種活力（或者雜種優(yōu)勢(shì)）、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定（在不同環(huán)境中植株的穩(wěn)定性）、對(duì)非生物性逆境，諸如例如，極端的溫度或低照度的適應(yīng)性、產(chǎn)量高于產(chǎn)生雜交的變種、形態(tài)特征，諸如顏色、形狀、尺寸、葉子的剛?cè)?、植株?duì)I養(yǎng)素成分或味覺質(zhì)量。[0065]另外，本發(fā)明人觀察到，令人驚訝的是，由按照本發(fā)明的通過不同萵苣之間不同雜交產(chǎn)生的種子長出的雜交植株，在冬季和在氣候溫和的區(qū)域栽種生長更迅速，與在同一條件下栽種的親本植株相比，平均提早7至10天成熟。還觀察到，F(xiàn)l雜種的實(shí)驗(yàn)田內(nèi)（在每塊試驗(yàn)田約30植株的數(shù)目下）發(fā)育的一致性，優(yōu)于譜系（親本植株）試驗(yàn)田。換句話說，在其發(fā)育延緩和提前的植株數(shù)目上，與同一試驗(yàn)田的植株總體相比，在Fl雜種試驗(yàn)田上明顯小于譜系變種的試驗(yàn)田。因而，F(xiàn)l雜種的這些特征不僅縮短萵苣的生產(chǎn)周期，而且可以在較短的期限內(nèi)集中收獲。[0066]農(nóng)業(yè)上感興趣的表型尤其可以由一個(gè)或幾個(gè)對(duì)病毒、細(xì)菌、昆蟲或者真菌傳染的標(biāo)準(zhǔn)抗性或中等抗性基因賦予，更具體地說，對(duì)下列真菌之一：萬苣盤梗霉（BremiaIactucae)、尖抱鏡刀菌（Fusariumoxysporum)、小核盤菌（Sclerotiniaminor)或核盤菌（Sclerotiniasclerotorum)、灰霉菌（Botrytiscinerea)、立枯絲核菌（Rhizictoniasolani)、紅色雪腐病菌（Microdochiumpanattonianum)、棉花黃萎病菌（Verticiuliumdahliae)、白粉菌(Erysiphechicocearum)或腐霉菌(Pithiumtracheiphilum)；對(duì)下列昆蟲之一：萬苣財(cái)（Nasonoviaribisnigri)、桃財(cái)（Myzuspersicae)、大戟長管財(cái)（Macrosiphumeuphorbia)、根腐線蟲（Nematodespratylenchus)或根結(jié)線蟲（meloidogyne),南美斑潛幡（mineusesLiriomyzahuidobrensis)或囊柄癭綿蟲牙（Pemphigusbusarius);對(duì)下列細(xì)菌之一：假單胞菌（pseudomonas)、黃單胞菌(xanthomonas)或根單胞菌（rhizomonas);或還對(duì)下列病毒之一：LMV(萬苣花葉病病毒）、TSWV(番茄斑萎病毒）、"巨脈（Bigvein)"（或由病毒LBW(萵苣巨脈病毒）和MILV(米拉菲奧里萵苣病毒）組成的大葉脈植物病害）、TBSV(番茄叢矮病毒）、LNSV(萵苣壞死斑點(diǎn)病毒）、TuMV(蕪菁花葉病病毒）、CMV(黃瓜花葉病病毒）或BWYV(甜菜西部黃化病毒）。[0067]在農(nóng)業(yè)上感興趣的表型由一個(gè)或幾個(gè)對(duì)病毒、細(xì)菌、昆蟲或真菌引起的傳染病的標(biāo)準(zhǔn)或中等抗性基因賦予的情況下，賦予這種表型的所述一個(gè)或多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或中等抗性基因尤其可以在對(duì)盤梗霉（bremia)DmlO、R17、Dm5、Dm8、R36、R37(位于萵苣基因簇1的基因）、Dml、Dm2、Dm3、Dm6、Dml4、Dml5、Dml6、Dml8(位于萵苣的基因簇2上的基因）、Dm4、Dm7、Dmll，R38(位于萵苣基因簇4上的基因）；或者還有（位于基因簇1上的抗TuMV基因Tu;位于基因簇2上的抗萬苣財(cái)（Nasonovia)基因Nr;或位于位于基因簇4上的抗LMV基因mol1和mol2中間選擇。MichelmoreR.W.(植物病理學(xué)（PlantPathol)?，1987,vol.36,no4:499-514[4],遺傳學(xué)理論應(yīng)用（Theor.Appl.Genet.)，1993,vol.85，NO.8:985-993[5])特別定義了上述基因簇1、2和4。[0068]可以更具體地說，在農(nóng)業(yè)上感興趣的表型是由對(duì)涉及萬苣盤梗霉（Bremialactucae)、在葉瓣內(nèi)表面上誘發(fā)粉狀微白的毛茸的真菌的主要植物病害標(biāo)準(zhǔn)或者中等抗性的一個(gè)或幾個(gè)基因賦予的。另外，Bremia具有一種強(qiáng)大的適應(yīng)潛力，后者會(huì)導(dǎo)致能夠躲避（contourner)育種者在該變種中已經(jīng)引入的抗性的新品種的出現(xiàn)。[0069]本發(fā)明優(yōu)選還涉及植物萵苣的種子、植株或細(xì)胞對(duì)至少兩個(gè)沒有包含在雄性不育中并賦予植株一種可檢測(cè)的表型的基因而言是雜合子的情況。更優(yōu)選的是，進(jìn)一步賦予植株一種可檢測(cè)的表型的該兩個(gè)基因位于同一基因簇上，例如，在萵苣的基因簇1、2或者4這樣的抗性基因基因簇上。[0070]本發(fā)明的另一目的是表現(xiàn)雄性不育基因型的萵苣的雜交種子的種群，以及對(duì)于至少一個(gè)沒有包含在該雄性不育中并賦予出自這些種子的植株一種可檢測(cè)的表型的基因的雜合子，必要時(shí)呈現(xiàn)上述附加的特征，使得所述種群包括至少IO5粒種子，優(yōu)選至少106粒，更優(yōu)選至少IO7粒種子。[0071]在該種子是通過兩個(gè)萵苣植株之間雜交獲得的情況下，其中一個(gè)（"母本"）是一個(gè)或幾個(gè)顯性基因所賦予的細(xì)胞核雄性不育性的攜帶者，而且用作"母本"的植株本身是通過雜交產(chǎn)生的，該用作"母本"的植株對(duì)于不育基因而言是強(qiáng)雜合子。事實(shí)上，為了使它們成為所述對(duì)一個(gè)或多個(gè)顯性雄性不育基因而言的純合子，兩種植株就應(yīng)該由雜交產(chǎn)生，用作"母本"的植株本身應(yīng)該是雄性不育基因攜帶者，然而若是如此，則該兩棵植株之間的雜交是不可能的。[0072]因而，按照本發(fā)明，由于減數(shù)分裂時(shí)染色體分離的現(xiàn)象，兩個(gè)類型萵苣植株（其中之一（"母本"）是一個(gè)或幾個(gè)顯性基因所賦予的細(xì)胞核雄性不育的攜帶者）之間雜交產(chǎn)生的種子種群，由一個(gè)或多個(gè)雄性不育顯性基因攜帶者萵苣的種子和并非所述一個(gè)或幾個(gè)基因攜帶者的種子組成。在"母本"所帶的雄性不育是單基因而且是顯性的情況下，雄性不育種子的比例一般至少為40%。[0073]本發(fā)明特別是在本發(fā)明人觀察到以下事實(shí)之后實(shí)現(xiàn)的，即盡管雙翅目昆蟲并非萵苣花通常的傳粉昆蟲，而且已知并非吃花蜜的，但是這些昆蟲，特別是，反吐麗蠅(Calliphoravomitaria)jJl*_幡（Calliphoraerythrocephala)和叉葉綠幡（Luciliacaesar)，當(dāng)在一個(gè)封閉介質(zhì)中以過多的數(shù)量引入時(shí)，可起萵苣授粉者的作用。[0074]同樣，本發(fā)明還旨在利用雙翅目昆蟲在封閉介質(zhì)中通過雄性可育植株，給雄性不育的萵苣植株進(jìn)行授粉，特別是為了獲得雜交萵苣植株。所用的雄性不育萵苣植株，優(yōu)選擁有由僅由一個(gè)顯性基因帶來的雄性不育性，優(yōu)選擁有上述Ms7雄性不育性。所利用雄性可育植株優(yōu)選是萵苣植株，而且更優(yōu)選栽培品種。[0075]按照本發(fā)明，該封閉介質(zhì)尤其可以是封閉的溫室、籠子或者地道，面積優(yōu)選超過30m2,更優(yōu)選超過300m2,例如，30至1500m2或者50至1000m2。封閉介質(zhì)的高度一般在2m和4m之間，優(yōu)選在2.5m和3.5m之間，例如，3m。它尤其可以具有通風(fēng)裝置、噴淋裝置、溫度和照度控制裝置。所述封閉介質(zhì)優(yōu)選是一個(gè)對(duì)昆蟲封閉的空間。[0076]所用的雙翅目昆蟲優(yōu)選應(yīng)該達(dá)到每m2至少100只雙翅目昆蟲的密度，優(yōu)選每m2至少250只雙翅目昆蟲，例如，每m2100至1000只雙翅目昆蟲。該密度同樣可以按每m3確定雙翅目昆蟲的數(shù)目，優(yōu)選每m3至少25只雙翅目昆蟲，更優(yōu)選每m3至少50只雙翅目昆蟲，最優(yōu)選每m3至少75只雙翅目昆蟲，例如，每m325至500只雙翅目昆蟲或者每m375至250只雙翅目昆蟲。[0077]本發(fā)明同樣旨在提出一種獲得雜交萵苣種子的方法，包括以下步驟：[0078]-在封閉介質(zhì)中彼此接近地栽種用作"母本"的雄性不育表型的萵苣植株和用作"父本"的雄性可育表型的萵苣植株，兩個(gè)親本中，一個(gè)親本作為補(bǔ)充特征，表現(xiàn)對(duì)于賦予不同于雄性不育的可檢測(cè)表型的基因而言是純合子的事實(shí)，另一個(gè)親本不攜帶此基因的步驟；[0079]-在植株的開花期在封閉介質(zhì)中以每m2超過100只雙翅目昆蟲，優(yōu)選每m2至少250只雙翅目昆蟲的密度引入的雙翅目昆蟲進(jìn)行授粉的步驟；和[0080]-采集由該雄性不育的植株產(chǎn)生的種子的步驟。[0081]第二親本對(duì)于另一個(gè)親本不攜帶的、賦予雄性不育以外的可檢測(cè)表型的至少一個(gè)基因而言，優(yōu)選同樣是純合子。所述封閉介質(zhì)優(yōu)選是一個(gè)對(duì)昆蟲密封的封閉空間。[0082]已經(jīng)觀察到當(dāng)雙翅目昆蟲有過多的數(shù)量時(shí)有較好的結(jié)果，同樣，其密度優(yōu)選每m2超過400只雙翅目昆蟲，更優(yōu)選每m2超過500只雙翅目昆蟲。[0083]這些雙翅目昆蟲可以在卵裂階段以幼蟲、蛹或成蟲引入。它們優(yōu)選采取蛹的形式引入。[0084]所用的這些雙翅目昆蟲優(yōu)選是一些短角亞目（brachyceres)昆蟲，例如，短角環(huán)裂亞目（brachycerescyclorhaphes)，更優(yōu)選幡科（Muscidae)或_幡科（Calliphorides)的短角（brachyceres)昆蟲，例如，反吐麗幡（Calliphoravomitaria)、紅頭麗幡(Calliphoraerythrocephala)或叉葉綠幡（Luciliacaesar)。若在至少3至4周期間每周一次，優(yōu)選每周兩次引入雙翅目昆蟲，則一般獲得較佳的產(chǎn)量。[0085]同樣，若在該封閉介質(zhì)中雄性不育的植株的數(shù)目大于雄性可育植株的數(shù)目，則一般獲得較佳的產(chǎn)量。在該封閉介質(zhì)中雄性不育的植株數(shù)目例如，是至少2000株，而雄性可育植株的數(shù)目例如，是至少1000株。[0086]按照本發(fā)明的方法的實(shí)施方案，兩個(gè)親本之間要有一致的開花期。這個(gè)特性可以通過在該特性上進(jìn)行選擇，或通過采取適當(dāng)?shù)呐嘀泊胧┒@得。[0087]用作母本的植株的雄性不育性，優(yōu)選是單基因的，顯性的和細(xì)胞核的，更優(yōu)選由基因Ms7賦予。[0088]用作母本的植株的基因組，優(yōu)選包含650至700個(gè)核苷酸，例如，655至695、660至690、665至685、670至680、673至677個(gè)核苷酸，或者674、675或者676個(gè)核苷酸的雙鏈DNA序列，其中雙鏈中每條鏈的5'末端由序列"5'TGCGTTCCAC3'"（SEQIDNo.1)開頭。按照一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，用作母本的植株的基因組包含圖8所示的核苷酸序列（SEQIDNo.2)，或者這個(gè)序列中1至10個(gè)，優(yōu)選1至5個(gè)，或更優(yōu)選1至3個(gè)核苷酸被其他核苷酸取代、或缺失或插入而衍生的序列。[0089]如上所述，由于減數(shù)分裂時(shí)染色體分離的現(xiàn)象，不可能用傳統(tǒng)的雜交技術(shù)獲得用作"母本"的雄性不育顯性基因攜帶者植株的均一種群。因而，在利用雄性不育顯性基因情況下，用作母本的植株可以用包括下列步驟的方法獲得：[0090]-在對(duì)于細(xì)胞核雄性不育顯性基因而言是雜合子的萵苣植株和不含不育基因的雄性可育萵苣植株之間進(jìn)行雜交的步驟；[0091]-栽培由所述雜交產(chǎn)生的種子的步驟；以及[0092]-除去呈現(xiàn)雄性可育表型的植株的步驟。[0093]除去呈現(xiàn)雄性可育表型的植株的步驟，例如，可以根據(jù)允許區(qū)分雄性不育的萵苣植株和雄性可育的萵苣植株的可見特性手工實(shí)現(xiàn)。例如，在不育與基因Ms7相關(guān)的情況下，可以利用雄性不育的植株的頭狀花序打開的時(shí)間比雄性可育的植株長，而雄性不育的植株不具有花粉的事實(shí)進(jìn)行挑選。[0094]按照一個(gè)可選實(shí)施方案，除去呈現(xiàn)雄性可育表型的植株的步驟，可借助于在每棵植株的樣本中，檢測(cè)雄性不育顯性基因的特定分子標(biāo)記的缺少來實(shí)現(xiàn)。例如，這可以指長度約為675對(duì)堿基（例如，650至700、655至695、660至690、665至685、670至680、673至677、674、675或者676對(duì)堿基）的RAPD(多態(tài)DNA的隨機(jī)擴(kuò)增）標(biāo)記，其中雙鏈中每條鏈的5'末端由序列"5'TGCGTTCCAC3'"（SEQIDNo.1)開頭，諸如，本發(fā)明人開發(fā)的標(biāo)記BA05-675(SEQIDNo.2)或者標(biāo)記SCAR(SequencedCharacterizedAmplifiedRegionMarker(順序特征擴(kuò)增區(qū)標(biāo)記））、標(biāo)記CAPS(CleavedAmplifiedPolymorphicSequence(分裂擴(kuò)增多態(tài)的序列））或者所有其他從標(biāo)記RAPD衍生的一般稱為STS(SequenceTaggedSite(序列標(biāo)簽基因座））的標(biāo)記。按照優(yōu)選的實(shí)施方案，雄性不育顯性基因特定分子標(biāo)記存在與否的檢測(cè)是，在用作母本植株的開花期之前，優(yōu)選在植株生長早期階段，例如，長1至5片葉子的階段，優(yōu)選在長1至2片葉子的階段實(shí)現(xiàn)。[0095]所用的分子標(biāo)記優(yōu)選允許檢測(cè)帶有至少70%，75%，80%，85%，95%，98或者99%，或更優(yōu)選100%靈敏度的雄性不育的植株，該靈敏度定義為出現(xiàn)分子標(biāo)記（真肯定）的雄性不育植株的數(shù)目與真肯定的數(shù)目和不出現(xiàn)分子標(biāo)記（偽否定）的雄性不育的植株數(shù)目的總和之比（見表17)。[0096]同樣，該所用的分子標(biāo)記優(yōu)選允許以至少70%，75%，80%，85%，95%，98或99%，或甚至100%的特異性，檢測(cè)雄性不育的植株，該特異性定義為不出現(xiàn)分子標(biāo)記（真否定）的雄性可育植株數(shù)目與真肯定的數(shù)目和出現(xiàn)分子標(biāo)記（偽肯定）的雄性可育植株的數(shù)目的總和之比（見表17)。[0097]按照本發(fā)明的方法獲得的種子的麗S(千粒重（千粒種子的重量）），較之由用作"父本"的雄性可育萵苣植株自花授粉獲得的種子的MMS，一般至少大10%，甚至至少大20%，更甚至至少大30%。[0098]本發(fā)明同樣涉及按照上述方法可能獲得的種子的種群，而且它含有至少IO5粒種子，優(yōu)選IO6粒種子，更優(yōu)選107粒。[0099]附圖的簡(jiǎn)要描述[0100]圖1:萵苣的系譜；[0101]圖2:在試驗(yàn)1過程中用作"父本"和"母本"的萵苣的安排；[0102]圖3:在試驗(yàn)2過程中用作"父本"和"母本"的萵苣的安排；[0103]圖4:試驗(yàn)10的50棵雜交植株的基因型：用TaqI消化之后分子標(biāo)記SCW09的擴(kuò)增圖譜（profil);該標(biāo)記SCW09標(biāo)記萬苣盤梗霉（BremiaIactucae)抗性基因Dm6和Dml8。A=對(duì)照（temoin)Dml8+/Dml8+、B=對(duì)照（temoin)Dml8-/Dml8_;C=對(duì)照（temoin)Dm6+;D=未經(jīng)TaqI消化。[0104]圖5:試驗(yàn)10的50棵雜交植株的基因型：標(biāo)記Dm3對(duì)BremiaIactucae的抗性的分子標(biāo)記Bl的擴(kuò)增概況（profil(!'amplification);A=對(duì)照（temoin)+Dm3+;B=對(duì)照(temoin)Dm3-。[0105]圖6:帶有標(biāo)記BA05-675(箭頭）的引物（amorce)0PBA05的電泳圖譜。在1.0%瓊脂糖凝膠上在190V.M下電泳1小時(shí)45分：100_bp分子量標(biāo)記梯（PharmaciaBiotech、ref.27.4001.01)；[0106]圖7:對(duì)于萵苣與基因座Ms7相關(guān)的分子標(biāo)記BA05-675的基因圖譜（按照Kosambi函數(shù)計(jì)算距離）。[0107]圖8:對(duì)于萵苣的與雄性不育Ms7相關(guān)的標(biāo)記BA05-675的核苷酸序列5'-3'（SEQIDNo.2)〇實(shí)施例[0108]實(shí)施例1:雜交萵苣種子的獲得[0109]在下面所描述的不同試驗(yàn)中用作"母本"的雄性不育萵苣植株是不育基因Ms7的攜帶者。這些植株由基因Ms7攜帶者（XGirelle94-9538-1)-加有保護(hù)罩的（溫室的）黃油萬苣（laituebeurred'abri)的第五代（BC5)回交產(chǎn)生，所述攜帶者可以在不同的研宄組織諸如法國國家農(nóng)藝研宄院（INRA)、美國農(nóng)業(yè)部（USDA)等等獲得。[0110]Ms7基因是顯性的，兩個(gè)基因Ms7攜帶者植株之間的雜交是不可能的。因而，呈現(xiàn)雄性不育表型的植株對(duì)基因Ms7而言是強(qiáng)雜合子，而且只能通過Ms7/ms7(不育的）植株和mS7/ms7(可育）植株之間雜交的偏性獲得。[0111]結(jié)果是，為了清除雄性可育植株需要純化步驟。由于植株Ms7/ms7沒有花粉而且植株Ms7/ms7的頭狀花序開花時(shí)間比植株ms7/ms7長的事實(shí)，使這個(gè)步驟變?yōu)榭赡?。[0112]試駘1：[0113]在這第一試驗(yàn)框架內(nèi)：[0114]-栽培品種Nacre/CambriaDml8/R38(基因簇2的Dml8抗性基因和基因簇4的R38抗性基因）與黃油萵苣Ms7的第三代回交產(chǎn)生的450棵加上保護(hù)罩黃油萵苣植株，與對(duì)BremiaIactucae品種24(B124)敏感性結(jié)合，用作"母本"（在它們之中約一半是雄性不育的）；和[0115]-BRADml8/R37(基因簇2的Dml8和基因簇1的R37抗性基因）的100棵栽培品種加有保護(hù)罩（d'abri)的黃油萵苣植株，抗B124結(jié)合，用作"父本"。[0116]這兩個(gè)親本在開花期上呈現(xiàn)完美的一致性，允許盡可能均勻的授粉。[0117]這些植株以下列方法安排在一個(gè)36m2對(duì)昆蟲密封的封閉空間（荷蘭奶牛(hollandaise)型溫室，具有控制大氣濕度和溫度的可能性，llmx3.30m)中（見圖2):[0118]一用作"父本"的植株沿著封閉空間的邊緣安排成2行，植株間距20cm，和[0119]一用作"母本"的植株安排成7行，夾在2行"父本"之間，離開父本的距離為50cm，植株間距15cm，而行間距為25cm。[0120]13周后進(jìn)行播種，而16周后進(jìn)行栽種。[0121]由于基因Ms7顯性特性，需要對(duì)呈現(xiàn)雄性可育表型的用作"母本"的植株采取純化(除去）步驟。該步驟在26和27周后利用Ms7/ms7植株沒有花粉和Ms7/ms7(雄性不育）開花期長于ms7/ms7(雄性可育）植株植株的頭狀花序的事實(shí)手工實(shí)現(xiàn)。[0122]在用為母本的450棵植株中，217棵呈雄性不育，而且被有效地利用。[0123]兩種類型的雙翅目昆蟲和麗蠅科（Calliphorides)的昆蟲用作傳粉昆蟲：[0124]-幡反吐_幡（Calliphoravomitaria)和紅頭_幡（Calliphoraerythroc印hala)所謂"蛆"（同樣稱為藍(lán)蠅或者肉蠅），工作在15_20°C，和[0125]-反吐麗幡（Luciliacaesar)所謂'pinkies'（同樣稱為死尸綠幡）工作在20-250C.[0126]在28至31周期間引入傳粉昆蟲，以每m2引入300只蠅的比率以兩周的頻率實(shí)現(xiàn)。[0127]33周后收獲雄性不育的植株（"母本"）和同樣用作自花受精對(duì)照（temoin)的雄性可育植株（"父本"）。[0128]將這些植株烘干、拍打，接著將種子送到空氣柱上，以便完成清洗并消除輕的殘余碎肩并按長度和寬度分類。[0129]2007年2月13日以保藏號(hào)NCMB41470將試驗(yàn)1中獲得的2500粒種子的樣本保藏于NCIMB(NCIMBLtd.,FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,Aberdeen,A219YA,Scotland,UK)〇[0130]試駘2[0131]在一個(gè)對(duì)昆蟲密封的336m2的封閉空間（長度：56m，寬度：6m，高度：3m)中，以更大規(guī)模進(jìn)行類似的第二試驗(yàn)。在這第二試驗(yàn)框架內(nèi)：[0132]-3000棵加上保護(hù)罩的黃油萵苣植株，其通過栽培品種黃油萵苣Nacre/CambriaDml8/R38與Bremia(對(duì)B124敏感結(jié)合）黃油萵苣Ms7的第四代回交（BC4)產(chǎn)生，用作"母本"（它們之中約有一半是雄性不育的）；和[0133]-1500棵B124抗性栽培品種加上保護(hù)罩的黃油萵苣植株BRADml8/R37,用作"母本[0134]這些植株按以下方法（見圖3)安排在封閉空間中：[0135]一用作"父本"的植株安排成四行：一行沿著封閉空間的每個(gè)邊緣（80cm)，而兩行在中心（間距20cm)，這些植株安排成梅花形，間距15cm，和[0136]-用作"母本"的植株在雄性可育植株各行之間安排成8行，尚開雄性可育植株65和70cm，這些植株的間距15cm，行間距25cm。[0137]12周后進(jìn)行播種，而16周后進(jìn)行栽種。[0138]類似于試驗(yàn)1所作的，需要對(duì)呈現(xiàn)雄性可育表型的用作母本的植株進(jìn)行純化（除去）步驟。這個(gè)步驟在25和26周后利用植株Ms7/ms7沒有花粉和植株Ms7/ms7(雄性不育的）植株的頭狀花序開花期長于植株ms7/ms7(雄性可育）的事實(shí)手工實(shí)現(xiàn)。[0139]在3000棵用為母本的植株中，1250棵是雄性不育的并被有效利用。[0140]但是，16棵植株ms7/ms7(雄性可育）在純化時(shí)被保留，并在由網(wǎng)狀物或者布構(gòu)成不讓昆蟲穿過的封閉空間中自花授粉，以便用作自花受精的對(duì)照。[0141]所用的傳粉昆蟲與試驗(yàn)1時(shí)相同。[0142]在25至29周期間以一周的頻率以平均每次引入每Hi2IlOO只蠅的比率引入傳粉昆蟲。[0143]同時(shí)，在純化步驟中保留的10棵雄性可育植株（父本）和16棵可育植株ms7/ms7，在由網(wǎng)狀物或者布構(gòu)成不讓昆蟲通過的封閉空間中進(jìn)行自花授粉，以便用作自花受精的對(duì)照。[0144]33周后收獲雄性不育的植株（"父本")，以及在純化步驟中保留10棵雄性可育植株（父本）和16棵可育植株mS7/ms7,用作自花受精的對(duì)照。[0145]這些植株烘干、拍打，接著將種子在空氣柱上穿過，接著用以完成清洗和消除輕的殘余碎肩，并按長度和寬度分類。[0146]播種所獲得的種子樣本并按照正式的協(xié)議GEVES(變種和種子研宄和控制組）對(duì)所獲得的植株對(duì)B124的抗性進(jìn)行測(cè)驗(yàn)。這些植株被證實(shí)是抗B124的。[0147]試駘1和2的結(jié)果[0148]試驗(yàn)1和2的結(jié)果列于下表。[0149]轟1:試驗(yàn)1和2期間收集的種子重量比較[0150]【權(quán)利要求】1.獲得雜交萵苣種子的方法，包含下列步驟：在封閉介質(zhì)中彼此接近地栽培用作"母本"的雄性不育表型的萵苣植株和用作"父本"的雄性可育表型的萵苣植株，兩個(gè)親本之一，作為補(bǔ)充特征，表現(xiàn)對(duì)于賦予不同于該雄性不育性的可檢測(cè)表型的基因而言是純合子的事實(shí)，而另一個(gè)親本不攜帶此基因；在植株的開花期，在封閉介質(zhì)中，以每m2超過100只雙翅目昆蟲，或每m3超過25只雙翅目昆蟲的密度引入雙翅目短角亞目昆蟲進(jìn)行授粉；以及采集由該雄性不育植株產(chǎn)生的種子。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中每m2超過250只雙翅目昆蟲或每m3超過至少75只雙翅目昆蟲。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中第二親本對(duì)于賦予其不同于該雄性不育性的可檢測(cè)表型的至少一個(gè)基因而言同樣是純合子，而另一個(gè)親本不攜帶此基因。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述引入雙翅目昆蟲的密度，每m2超過400只雙翅目昆蟲。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述雙翅目昆蟲是以蛹的形式引入的。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述封閉介質(zhì)是對(duì)昆蟲密封的封閉空間。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述雙翅目昆蟲屬于麗幡科（Calliphorides)或幡科（Muscidae)〇8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述雙翅目昆蟲是反吐麗蠅（Calliphoravomitaria)，會(huì)工頭|^屯串（Calliphoraerythrocephala)或叉葉綠屯串（Luciliacaesar)。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在該封閉介質(zhì)中，雄性不育植株的數(shù)目大于雄性可育植株的數(shù)目。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在該封閉介質(zhì)中，雄性不育的植株的數(shù)目至少為2000棵，而雄性可育植株的數(shù)目至少為1000棵。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中雙翅目昆蟲的引入在3至4周期間至少每周重新開始一次。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中用為母本的植株的雄性不育性是單基因來源的、顯性來源的和細(xì)胞核來源的，而且其中用為母本的植株是由包括下列步驟的方法獲得的：在對(duì)于細(xì)胞核雄性不育顯性基因而言為雜合子的萵苣植株和不攜帶不育基因的雄性可育萵苣植株之間進(jìn)行雜交的步驟；栽培所述雜種產(chǎn)生的種子的步驟，以及除去呈現(xiàn)雄性可育表型的植株的步驟。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中除去呈現(xiàn)雄性可育表型的植株的步驟，是借助于在每棵植株的樣本上檢測(cè)雄性不育顯性基因的特定分子標(biāo)記的缺失而實(shí)現(xiàn)的。14.獲得雜交萵苣植株的方法，包含下列步驟：在封閉介質(zhì)中彼此接近地栽培用作"母本"的雄性不育表型的萵苣植株和用作"父本"的雄性可育表型的萵苣植株，兩個(gè)親本之一，作為補(bǔ)充特征，表現(xiàn)對(duì)于賦予不同于該雄性不育性的可檢測(cè)表型的基因而言是純合子的事實(shí)，而另一個(gè)親本不攜帶此基因；在植株的開花期，在封閉介質(zhì)中，以每m2超過100只雙翅目昆蟲，或每m3超過25只雙翅目昆蟲的密度引入雙翅目短角亞目昆蟲進(jìn)行授粉；采集由該雄性不育植株產(chǎn)生的種子；以及播種采集的種子，獲得雜交萵苣植株。15.雙翅目短角亞目昆蟲的應(yīng)用，其中雙翅目昆蟲以每m2超過100只雙翅目昆蟲，或者每m3超過25只雙翅目昆蟲的密度，用于在封閉介質(zhì)中實(shí)施由雄性可育植株向雄性不育的萬苣植株的授粉。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中該雙翅目昆蟲呈現(xiàn)每m2至少250只雙翅目昆蟲，或者每m3至少75只雙翅目昆蟲的密度。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，用以獲得雜交萵苣植株。18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中該雄性不育萵苣植株擁有由唯一的顯性基因帶來的雄性不育性。19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中雄性可育植株同樣是萵苣植株?！疚臋n編號(hào)】A01H1/02GK104472338SQ201410584894【公開日】2015年4月1日申請(qǐng)日期:2008年3月5日優(yōu)先權(quán)日:2007年3月5日【發(fā)明者】埃爾韋·米歇爾,蒂埃里·蘇森申請(qǐng)人:維爾莫林公司