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      一種轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法與流程

      文檔序號:12294558閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.一種轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,包括以下步驟:

      1)農(nóng)藝性狀形態(tài)學測定

      將轉(zhuǎn)基因青蒿植株從溫室內(nèi)移栽至大田種植區(qū)域內(nèi),移植3-4個月后,測定植株的形態(tài)學參數(shù),同時,以野生型青蒿作對照;

      2)抗逆性評價

      在溫室中進行轉(zhuǎn)基因青蒿的鹽脅迫、干旱脅迫、除草劑耐受性以及越冬能力評價,同時,以野生型青蒿作對照;

      3)基因漂移測定

      設置矩形實驗場來進行基因漂移試驗,其面積不低于5畝,含外源基因的轉(zhuǎn)基因青蒿種植于中心點及其4-7個同心圓中,同心圓的半徑從內(nèi)到外以0.8-1.4m逐個增加,矩形實驗場的最短邊長應是同心圓最大半徑的4-9倍,同心圓外種植野生型青蒿,同時,在該矩形實驗場周圍設置物理隔離區(qū);

      在野生型受體青蒿種植區(qū)內(nèi),沿同心圓的8個以上方向設置不少于72個測試點,呈米字形,收獲各測試點的青蒿種子,測定種子發(fā)芽率、并進行卡那霉素抗性篩選,對于抗卡那霉素的植株利用PCR方法進一步驗證其是否含有插入的外源基因。

      2.如權利要求1所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟1)所述的生長形態(tài)參數(shù)為株高、冠幅、莖粗、種子發(fā)芽率、葉片干重、千粒重和葉片形狀。

      3.如權利要求2所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,所述步驟1)中的生長形態(tài)參數(shù)中,對于株高、冠幅和莖粗,在植株的營養(yǎng)生長早期和中期分別測定;對于種子發(fā)芽率的測定過程為:取等量的轉(zhuǎn)基因青蒿種子,清洗后分別播種至基質(zhì)、水以及無菌培養(yǎng)基中,培養(yǎng)7-15天,按下式統(tǒng)計種子發(fā)芽率;

      種子發(fā)芽率=(發(fā)芽種子數(shù)/播種種子數(shù))×100。

      4.如權利要求2所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟1)所述農(nóng)藝性狀形態(tài)學參數(shù)中,千粒重的測定過程為:收集30-50株植株的種子,數(shù)出1000粒并測定種子的千粒重。

      5.如權利要求1所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟2)中,鹽脅迫測定中,測定了葉片的相對含水量、過氧化物酶活性、游離脯氨酸和丙二醛含量;干旱脅迫實驗時利用PEG模擬干旱狀態(tài),并測定干旱脅迫中青蒿葉片中的游離脯氨酸、株高和復葉數(shù)差值;除草劑耐受性中所述的除草劑為非選擇性除草劑和選擇性除草劑。

      6.如權利要求1所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟3)中所述的矩形實驗場的寬度不低于長度的1/2,在該矩形實驗場周圍種植玉米隔離帶作為物理隔離區(qū)。

      7.如權利要求6所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟3)中,一個方向由內(nèi)到外設置8~14個測試點,其中,測試點1~5之間每兩點間隔0.8m,測試點6~10之間每兩點間隔2.4m,測試點11~14之間每兩點間隔4.8米。

      8.如權利要求1所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟3)中,收獲的青蒿種子來自植株的頂部、中部和下部,均勻采收。

      9.如權利要求1所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟3)中,抗卡那霉素的植株被移植到穴盤壯苗后,生長15-25天后,從每株幼苗上選取3-5片葉片進行DNA的提取。

      10.如權利要求1所述的轉(zhuǎn)基因青蒿的環(huán)境安全評價方法,其特征在于,步驟3)中,導入了外源基因CYP71AV1和CPR的轉(zhuǎn)基因青蒿的基因漂移距離為29.2m。

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