芽糖、蔗糖、可溶性淀粉，用量各為2%。
[0026] (3)不同氮源試驗(yàn)的培養(yǎng)基 在碳源和氮源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2%的葡萄糖， 分別加入各種待測(cè)氮源：麩皮、酵母粉、蛋白胨、硫酸銨、碳酸銨、硝酸鉀，用量各為〇. 5% (4)碳氮比試驗(yàn)的培養(yǎng)基在碳源和氮源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入4%的葡萄糖作為碳源， 不同含量的硫酸銨作為氮源，構(gòu)成不同碳氮比（C/N)培養(yǎng)基，使碳氮比分別為10:1、15:1、 20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1。
[0027] 培養(yǎng)方法和培養(yǎng)條件 1.5. 1 菌種活化將保存好的菌種接種到斜面培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)7-8天，長(zhǎng)滿 整個(gè)斜面。
[0028] 接種和培養(yǎng) 500mL搖瓶裝液量150mL，接種2塊約Icm2大小等量菌塊。每種碳 源、氮源、碳氮比試驗(yàn)均做4個(gè)重復(fù)。在25°C條件下靜止培養(yǎng)ld，然后在160r/min (恒定） 搖床上培養(yǎng)7-8d。
[0029] 測(cè)定方法 1. 6. 1菌絲體干重測(cè)定用已稱重的脫脂棉過(guò)濾搖好的培養(yǎng)液，蒸餾水洗3次，60°C 烘干至恒重，電子天平稱重，用差量法計(jì)算獲得菌絲體干重。
[0030] 終點(diǎn)培養(yǎng)液pH測(cè)定將過(guò)濾出菌球的培養(yǎng)液用PHS-3C型精密pH計(jì)測(cè)定pH。
[0031] 結(jié)果分析 2. 1不同碳源對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響 不同碳源對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4和圖5。
[0032] 表4不同碳源對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響
碳源試驗(yàn)結(jié)果表明，所試碳源對(duì)杏鮑菇生長(zhǎng)影響差異較明顯?？梢钥闯觯吁U菇對(duì)單 糖、雙糖和多糖均可利用。在本試驗(yàn)條件下，杏鮑菇在以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)得最 好，生物量最高。其次是果糖和蔗糖。
[0033] 不同氮源對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響 不同氮源對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5和圖6、7。
[0034] 表5不同氮源對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響 氮源試驗(yàn)結(jié)果表明，所試氮源對(duì)杏鮑菇生長(zhǎng)影響差異較明顯?？梢钥闯?，總的來(lái)說(shuō)，杏 鮑菇對(duì)有機(jī)氮的利用強(qiáng)于無(wú)機(jī)氮，有機(jī)氮中以來(lái)源于天然農(nóng)副產(chǎn)品中的麩皮最好，其次是 酵母粉和蛋白胨等多組分復(fù)合氮源。無(wú)機(jī)氮中，對(duì)銨態(tài)氮和硝態(tài)氮均可利用，但對(duì)銨態(tài)氮的 利用比對(duì)硝態(tài)氮的利用要強(qiáng)。但值得注意的是，無(wú)論是液體培養(yǎng)還是平板培養(yǎng)，杏鮑菇對(duì)碳 酸銨均幾乎不能利用，原因可能是不能合成杏鮑菇生長(zhǎng)所必需的各種氨基酸。
[0035] 不同碳氮比（C/N)對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響 不同碳氮比（C/N)對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6和圖8、9。
[0036] 表6 不同碳氮比（C/N)對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響
碳氮比試驗(yàn)結(jié)果表明，不同碳氮比對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)影響顯著，在一定的碳氮比范 圍內(nèi)，杏鮑菇生長(zhǎng)的較好，生物量較高，比例太低或者太高，都不利于菌絲的生長(zhǎng)?？梢钥?出，本試驗(yàn)條件下，當(dāng)碳氮比為30:1時(shí)，菌絲體干重最大。
[0037] 討論 3.1在碳源試驗(yàn)中，以葡萄糖作碳源，杏鮑燕菌絲生長(zhǎng)最好，菌絲干重最大。這一結(jié)果 符合大多數(shù)真菌的生理代謝過(guò)程。據(jù)V.W. Kakilan報(bào)道，真菌的主要呼吸途徑碳源都是以 葡萄糖的磷酸化衍生物方式為其始點(diǎn)的。本試驗(yàn)還可以看出，杏鮑菇對(duì)單糖、雙糖和多糖均 可以利用，而且對(duì)單糖的利用最好，雙糖次之，多糖較差。
[0038] 酵母粉、牛肉膏、蛋白胨等有機(jī)氮源富含各種氨基酸，這些氨基酸可直接被菌絲吸 收利用，因而使用多組分復(fù)合氮源，杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)快，生物量較高。當(dāng)使用無(wú)機(jī)氮為氮源 時(shí)，菌絲必須利用無(wú)機(jī)氮合成其需要的各種氨基酸，而某些氨基酸幾乎或者完全不能生物 合成，從而影響菌絲的生長(zhǎng)。因此，包括杏鮑菇在內(nèi)的多數(shù)食用菌雖然能利用無(wú)機(jī)氮，但生 長(zhǎng)緩慢。值得一提的是，杏鮑菇在麩皮等天然植物氮源中生長(zhǎng)最好，收得率最高。原因一方 面可能是這些氮源中含有豐富的蛋白質(zhì)及多種生長(zhǎng)刺激因子；另一方面可能是由于杏鮑菇 菌絲分泌的蛋白酶較適合于這類植物蛋白。因此，生產(chǎn)應(yīng)用上，完全可以采用麩皮等農(nóng)副產(chǎn) 品加工中的下腳料作為杏鮑菇生長(zhǎng)所需的主要氮源物質(zhì)，其效果比添加蛋白胨、酵母粉、牛 肉膏等貴重氮源物質(zhì)還要好。這正好符合當(dāng)今以再生資源開(kāi)發(fā)利用為設(shè)計(jì)思想的最經(jīng)濟(jì)、 最有效的食用菌液體深層發(fā)酵工業(yè)化生產(chǎn)趨勢(shì)。
[0039] 杏鮑菇的生長(zhǎng)需要較豐富的碳氮源，在本試驗(yàn)中，當(dāng)碳氮比為30:1時(shí)，菌絲生長(zhǎng) 得最快，生物量最高。碳氮比太高或太低，都不利于杏鮑菇生長(zhǎng)。
[0040] . 4通過(guò)本試驗(yàn)初步篩選了杏鮑菇深層培養(yǎng)的最佳碳氮源和碳氮比（C/N)，為今后 大規(guī)模進(jìn)行生產(chǎn)提供參考依據(jù)。其具體最佳優(yōu)化培養(yǎng)基組合有待于進(jìn)一步探討。
[0041] (三）杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基篩選的研究 本研究在不同碳氮源對(duì)杏鮑菇研究的基礎(chǔ)上，以菌絲體生物量為指標(biāo)，篩選適宜杏鮑 菇液體菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，為用液體菌種大規(guī)模栽培杏鮑菇提供基礎(chǔ)資料。
[0042] 材料與方法 1.1材料 I. I. 1供試菌種濟(jì)南杏鮑菇，由煙臺(tái)師范學(xué)院食用真菌研究所提供并保存。
[0043] 1. 1.2斜面培養(yǎng)基(馬鈴薯綜合培養(yǎng)基）馬鈴薯(去皮)20%，麥麩5%，葡萄糖 2%，KH2PO4 0· 2%，MgSO4 0· 1%,蛋白胨 0· 5%, VB1IOmg/!,瓊脂 2%。
[0044] 1.1.3液體菌種培養(yǎng)基馬鈴薯(去皮)20%，葡萄糖2%，蛋白胨0. 5%，KH2PO4O. 2%， MgSO4O. 1%，VB110mg/L。
[0045] 1.1.4 正交試驗(yàn)共同培養(yǎng)基 KH2PO4O. 2%，MgSO4O. P/cbVBilOmg/L。
[0046] 試驗(yàn)方法 1.2.1液體菌種的制備將剛長(zhǎng)滿管的斜面菌種接種于種子培養(yǎng)基中，在25°C恒溫 箱中靜置24h，然后在25°C、180r/min旋轉(zhuǎn)式搖床振蕩培養(yǎng)7d，作為液體菌種。
[0047] 1.2. 2發(fā)酵培養(yǎng)工藝在500ml三角瓶中裝入150ml培養(yǎng)液(配制時(shí)將固體原料 均制成浸制液使用)，滅菌后按10%的接種量進(jìn)行接種。然后，放在25°c的培養(yǎng)箱中靜置培 養(yǎng)24h，再放在25°C，180r/min搖床上振蕩培養(yǎng)5d，觀察記錄菌絲體生長(zhǎng)情況。
[0048] 1.2.3培養(yǎng)基篩選正交試驗(yàn)根據(jù)對(duì)杏鮑菇液體培養(yǎng)的碳源、氮源的篩選研究， 為了找到合理的液體培養(yǎng)基配方，選用葡萄糖、麥麩、玉米粉和蛋白胨等四因素，進(jìn)行L 9(34 )正交試驗(yàn)，測(cè)定菌絲干重。
[0049] 1.2.4菌絲干重的測(cè)量將培養(yǎng)好的菌液經(jīng)干燥的脫脂棉過(guò)濾后得菌絲體，用蒸 餾水沖洗干凈，放于60°C干燥箱中烘至恒重后測(cè)重。
[0050] 結(jié)果與分析 以葡萄糖、麥麩、玉米粉和蛋白胨為直接因素按L9(34)正交表設(shè)計(jì)表頭，以菌絲干重為 指標(biāo)進(jìn)行正交試驗(yàn)(表7、8)。
[0051] 表7正交試驗(yàn)因素與水平L9(34)
表8各組分L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果
從表8中可以分析出，葡萄糖是杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的主要因素，玉米粉和麥麩是杏鮑 菇菌絲體生長(zhǎng)的次要因素，蛋白胨對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響最小。最佳組合為=A3B1C 3D2, 從而得出杏鮑菇液體發(fā)酵最適培養(yǎng)基為：葡萄糖3%，麥麩1%，玉米粉3%，蛋白胨0. 2%， KH2PO4O. 2%，MgSO4O. 1%，VB1IOmgzlo在此培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的杏鮑菇菌球小，密度高，生物量高。
[0052] 討論 通過(guò)正交試驗(yàn)篩選出杏鮑菇液體發(fā)酵最適培養(yǎng)基為：葡萄糖3%，麥麩1%，玉米粉3%，蛋 白胨 0· 2%，KH2PO4O. 2%，MgSO4O. 1%，VBdOmg/L。
[0053] 該培養(yǎng)基配方以農(nóng)副產(chǎn)品為主，添加一些無(wú)機(jī)鹽類，原料來(lái)源豐富且廉價(jià)易得，適 合在大規(guī)模液體培養(yǎng)中推廣應(yīng)用。
[0054] (四）杏鮑菇液體搖瓶種培養(yǎng)條件的研究 我國(guó)從1993年開(kāi)始進(jìn)行杏鮑菇菌種引種選育和栽培技術(shù)研究，但有關(guān)杏鮑菇液體培 養(yǎng)條件的研究卻少有報(bào)道，為此我們通過(guò)搖瓶試驗(yàn)研究了杏鮑菇液體培養(yǎng)條件，現(xiàn)將結(jié)果 報(bào)道如下。
[0055] 材料與方法 1. 1材料 1. 1. 1供試菌種 本試驗(yàn)采用的杏鮑菇菌種由煙臺(tái)師范學(xué)院食用菌研究所提供。
[0056] I. L 2 培養(yǎng)基 I. 1. 2. 1母種培養(yǎng)基 PDA基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
[0057] I. L 2. 2液體菌種培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基(不含瓊脂)。
[0058] I. 1. 2. 3搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基 (1)玉米粉 1. 5%，麥麩 L 5%，蔗糖 2%，酵母粉 0· 5%，KH2PO4O. 1%，MgSO4O. 1%，VB110mg/L。
[0059] (? 葡萄糖 2%，蛋白胨 0· 2%，MgSO4O. 〇5%，CaCL20.0 1%，KH2PO40.0 1%，VBJOmg/L。
[0060] 培養(yǎng)設(shè)備 HZQ - Q全溫振蕩培養(yǎng)箱由哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司制造。
[0061] 方法 1. 3. 1液體菌種的制備 將培養(yǎng)好的斜面菌種接種于液體菌種培養(yǎng)基中，每瓶接入Icm2大小的菌絲兩塊，25°C， 170r/min搖床振蕩培養(yǎng)7d，作為液體菌種備用。
[0062] 1. 3. 2搖瓶發(fā)酵試驗(yàn) 將搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基分裝在500mL搖瓶中，接入液體菌種，控制不同的實(shí)驗(yàn)條件在恒溫 振蕩器上培養(yǎng)4d，測(cè)菌絲生物量。
[0063] 1. 3. 4測(cè)量方法 1. 3. 4. 1菌絲生物量的測(cè)定 振蕩發(fā)酵結(jié)束后，培養(yǎng)液經(jīng)40目尼龍布過(guò)濾，菌絲球經(jīng)蒸餾水沖洗數(shù)次后，60°C烘干 至恒重，由電子天平稱其干重；攪拌發(fā)酵過(guò)程中，取樣于GL - 20B冷凍離心機(jī)(轉(zhuǎn)速6000r/ min)中離心20min，濕菌絲體在烘箱（60°C)中烘干至恒重，由電子天平稱量其干重。
[0064] 結(jié)果與分析 2. 1搖瓶培養(yǎng)條件試驗(yàn) 2. I. 1培養(yǎng)基起始pH對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響： 將搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基（1)用HCl和NaOH調(diào)pH3-9,接入液體菌種進(jìn)行二級(jí)培養(yǎng)，結(jié)果見(jiàn) 表9和圖10: 表9培養(yǎng)基起始pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
從表9、圖10可以看出，pH值在6左右菌球比較均勻，菌球大小適中，菌球密度大，菌絲 生物量最高，所以杏鮑菇生長(zhǎng)的最適PH在6左右。在搖瓶培養(yǎng)過(guò)程中，可以人為調(diào)節(jié)培養(yǎng) 基的起始PH值，縮短停滯期，菌絲生長(zhǎng)快速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以縮短發(fā)酵周期。
[0065] 2. L 2搖瓶裝量對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響： 在 500mL 三角瓶中分別裝量 75mL，100 mL，125 mL，150 mL，175 mL，200 mL，225 mL 搖 瓶發(fā)酵培養(yǎng)基（1)，移液體菌種進(jìn)行二級(jí)培養(yǎng)，結(jié)果見(jiàn)圖11 : 培養(yǎng)基裝量小