一種短小芽孢桿菌可濕性粉劑的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及生物農(nóng)藥與微生物肥料領域，具體設及一種含有短小芽抱萌發(fā)劑的短 小芽抱桿菌可濕性粉劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 我國每年使用大量的化學農(nóng)藥制劑與化肥，極易造成農(nóng)藥殘留超標，生物富集，不 僅污染生態(tài)環(huán)境，還影響人類的健康。而生物農(nóng)藥副作用小，對人無害，是一種具有廣闊前 景的綠色農(nóng)藥，日益成為全球農(nóng)藥發(fā)展的一種趨勢。
[0003] 芽抱桿菌是目前生物農(nóng)藥與生物肥料中研究最多的一種微生物，它具有廣譜抗菌 活性和極強的抗逆能力，其營養(yǎng)細胞能在真菌性病原菌絲體表面繁衍定殖，有效抑制病菌 生長，因此，在控制病害發(fā)生、促進植株生長，提高作物產(chǎn)量等方面顯示出了廣闊的應用前 景。
[0004] 短小芽抱桿菌是一種易在±壤中分離得到的微生物，通過研究發(fā)現(xiàn)，不僅能促進 小麥、甜菜、黃瓜，水稻，蕃茄等作物的生長，還能防治水稻稻攝病，黃瓜菌核病，蘋果腐爛 病，茄子枯萎病，小麥赤霉病，白菜黑斑病和番茄灰霉病等。
[0005] 目前，國內(nèi)外關于短小芽抱桿菌的研究主要集中在對其生防作用W及產(chǎn)生的木聚 糖酶的研究。肖愛萍等發(fā)現(xiàn)短小芽抱桿菌對稻攝病具有很好的防治效果，且其有效作用成 分為多膚類物質(zhì)（肖愛萍等，2003)。崔云龍等發(fā)現(xiàn)短小芽抱桿菌D82對小麥根腐病有強抗生 作用，且發(fā)酵液稀釋濃度100倍W下的平板抑菌效果為100%(崔云龍等，1995)。此外，徐長倫 等還發(fā)現(xiàn)一株短小芽抱桿菌的優(yōu)化菌株PlO能對甜菜具有增產(chǎn)增糖的作用（徐長倫等， 1994);朱桂梅等分離得到一株短小芽抱桿菌TW-2對水稻稻攝病菌具有強烈的抑制作用，對 水稻稻攝病具有較高的防治效果。短小芽抱桿菌(BaciIlus pumiIus)近年來被陸續(xù)確定具 有括抗灰葡萄抱菌、腐霉菌等病原真菌的能力(Mari M，et al，1996;Walker R，et al， 1998)"A化tar M. S.報道(2008)將短小芽抱桿菌作為生物菌肥用于鷹嘴豆根腐病獲得了 很好的防治效果。崔云龍等（1995)報道了短小芽抱桿菌D82對小麥根腐病菌有極強的括抗 作用。游春平等(2001)分離的短小芽抱桿菌對稻攝病菌有顯著的抑制作用。王靜等分離到 一株短小芽抱桿菌AR03,其菌體和發(fā)酵液對煙草黑腔病菌具有很強的括抗活性，在田間試 驗結(jié)果顯示具有較好的防治煙草黑腔病的能力。
[0006] 目前，國內(nèi)已有關生產(chǎn)短小芽抱桿菌類產(chǎn)品的相關技術，如:潘W樓等在專利號： 201 21027 13964中公開了一種短短小芽抱桿菌水分散粒劑的制備方法，在專利號 2007100215091中公開了一種用于防治稻攝病的短短小芽抱桿菌TW菌株的制劑，該制劑對 水稻稻攝病的防治效果在60%-80%間。陸燕君等分離到一株短小芽抱桿菌A3對泡桐黑腐皮 殼的菌絲及分生抱子均有較強的括抗作用，A3的發(fā)酵液對泡桐黑腐皮殼病防治效果可達到 97.8%。李聯(lián)泰等在專利號2013101282710中公開了一種短小芽抱桿菌E4及基培養(yǎng)方法與在 抑制弧菌上的應用。連玲麗等分離得到一株短小芽抱桿菌EN16,其可誘導番茄對細菌性青 枯病的抗性。黃海東等在專利號2012102903742中公開了一株短小芽抱桿菌LD-bl的發(fā)酵工 藝及其在防治黃瓜褐斑病，黃瓜灰霉病，黃瓜菌核病，蘋果腐爛病，茄子枯萎病，小麥赤霉 病，白菜黑斑病和番茄灰霉病上的應用。曲發(fā)斌等考察了短小芽抱桿菌發(fā)酵液對番茄種子 萌發(fā)及幼苗生長的影響，結(jié)果表明：短小芽抱桿菌發(fā)酵液對番茄種子萌發(fā)，根芽生長及幼苗 的株高和株重具有明顯的促進作用，其中W50倍稀釋液的效果最為顯著，而在幼苗施用方 式上葉面噴施的效果明顯優(yōu)于灌根和浸種。但還未有具體的有關短小芽抱桿菌的可濕性粉 劑的制備方法公開。
[0007] 雖然W芽抱桿菌為主制備的微生物農(nóng)藥產(chǎn)品不少，其劑型有水劑，粉劑，可濕性粉 劑，水分散粒劑，但目前芽抱桿菌的劑型W可濕性粉劑為主，運種劑型雖然便于儲存和運 輸，但在生產(chǎn)應用中存在很多制約因子。如施用的可濕性粉劑中大部份W芽抱作為衡量產(chǎn) 品中有效成分的惟一標準，若芽抱不能及時萌發(fā)，施用效果則不佳，如王倩利用枯草芽抱桿 菌TR21防治己西蕉枯萎病時，前期試驗利用TR21菌株NB發(fā)酵液灌根和葉蔽接種都能有效防 治枯萎病，但是利用芽抱制備可濕性粉劑的灌根與葉蔽效果卻不理想，證明了去掉發(fā)酵液 后的純芽抱可能因為萌發(fā)困難而使防效下降。
[0008] 芽抱桿菌在自然界中分布廣泛，當外部條件適合生長時，芽胞會由休眠狀態(tài)經(jīng)過 一系列復雜生理生化反應成長為營養(yǎng)體并恢復新陳代謝作用，運個過程稱為萌發(fā) (germination)。自然界中芽抱萌發(fā)受外源營養(yǎng)物質(zhì)的影響，運類營養(yǎng)物質(zhì)被稱之為"萌發(fā) 劑"，通常營養(yǎng)誘導芽抱萌發(fā)包括氨基酸、糖類和嚷吟核巧的單一作用，也包括它們的協(xié)同 作用（例如:AGFK;A:L-天冬獻胺;G:葡萄糖;F:果糖;K:鐘離子）。當營養(yǎng)物質(zhì)接觸到芽抱 時，芽抱內(nèi)部會發(fā)生一系列變化，（1 )、芽抱核內(nèi)部H+和Zn2+釋放出來，致使芽抱核內(nèi)部抑由 弱酸性上升至弱堿性；（2)、芽抱核內(nèi)部化h--DPA的大量釋放；（3)、芽抱核水合，內(nèi)部化 2+- DPA被水所替代，芽抱的耐熱性下降；（4)、芽抱皮層的芽抱膚聚糖層水解，芽抱核膨脹；（5)、 芽抱核進一步水合，芽抱核內(nèi)部蛋白質(zhì)流動性增強，酶活性加強，合成ATP; (6)、降解SASP蛋 白，W釋放芽抱DNA，進而引導芽抱生長過程中RNA、蛋白質(zhì)、DNA的合成。
[0009] 芽抱和促進萌發(fā)的芽抱萌發(fā)劑混合后數(shù)秒鐘之內(nèi)，萌發(fā)劑快速跨過芽抱衣和皮層 到達芽抱內(nèi)膜的表面，與位于芽抱內(nèi)膜上的受體蛋白相互作用，激發(fā)芽抱進入萌發(fā)狀態(tài)，接 著啟動一連串萌發(fā)事件，之后的萌發(fā)過程不會因移走萌發(fā)劑而停止。
[0010] 在芽胞桿菌屬中，枯草芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭痘芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌 因與人類的生產(chǎn)生活息息相關而備受關注。研究表明，枯草芽胞桿菌的基因組包含一系列 與 抗生素及重要工業(yè)用酶相關的基因簇，炭痘芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌對人畜均有很強 的致病性，由于前者用于制造生物武器，而后者產(chǎn)生致人嘔吐和腹瀉的毒素，因此兩者時刻 威脅著人類的健康和生命安全，當處于芽胞狀態(tài)時它們均不具備感染能力，但當進入萌發(fā) 狀態(tài)后開始具有感染人畜的能力，并最終產(chǎn)生致病甚至致人死亡的毒素;而昆蟲的病原細 菌蘇云金芽胞 桿菌對昆蟲具有特異的毒殺作用，在寄主體內(nèi)的芽胞萌發(fā)后能夠引起敗血癥，并且它 們的芽胞能夠有效提高殺蟲晶體蛋白的毒力，芽胞的萌發(fā)在增效作用中可能是必要的。因 此，對芽胞桿菌萌發(fā)過程的研究為抑制其致病性，維護人類健康及生命安全具有至關重要 的理論意義與實際應用價值，因此運四種芽抱對其萌發(fā)機理與相關的萌發(fā)劑研究得比較 多，但有關短小芽抱桿菌的芽抱萌發(fā)劑還未見公開。也未有在短小芽抱桿菌可濕性粉劑中 加入芽抱萌發(fā)劑的研究的報道。
[0011] 另外，由于不同的芽抱桿菌與濕潤劑，分散劑等助劑的相容性，載體對各類芽抱桿 菌吸附性各不相同，將現(xiàn)有的芽抱桿菌可濕性粉劑的配方或制備工藝無法用于制備含芽抱 萌發(fā)劑的短小芽抱桿菌可濕性粉劑;可濕性粉劑中有效菌的吸附量，存活率，對有害菌的防 治效果及可濕性粉劑量的穩(wěn)定性差異較大，其整個可濕性粉劑的制備方法必須全盤考慮各 載體吸附能力，對短小芽抱桿菌的干燥過程中保護作用，濕潤劑，分散劑對可濕性粉劑的懸 浮率，濕潤時間的影響，并且對芽抱萌發(fā)劑進行全面的篩選才能夠得到濕潤時間短，懸浮率 高，芽抱保存時間久，使用后芽抱能快速萌發(fā)的，防效好的短小芽抱桿菌可濕性粉劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明所要解決的技術問題是:針對上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一種含有 芽抱萌發(fā)劑的短小芽抱桿菌可濕性粉劑及其制備方法，芽抱萌發(fā)劑能使短小芽抱桿菌可濕 性粉劑融入水后，短小芽抱能快速萌發(fā)，大大提高短小芽抱的萌發(fā)率，其制備的短小芽抱桿 菌可濕性粉劑芽抱含量為不低于200億CFU/克，懸浮率不低于75%，潤濕時間不高于85S，細 度粉碎過400目篩，水分含量不高于5%，制備方法穩(wěn)定，短