專利名稱：組織工程化周圍神經(jīng)移植物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種外科移植物，特別是用于修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的神經(jīng)移植物。
背景技術(shù)：
周圍神經(jīng)損傷及損傷后導(dǎo)致的神經(jīng)缺損，是臨床常見的致殘性疾病。對(duì)于因各種意外事故引起的周圍神經(jīng)損傷的修復(fù)，一直是神經(jīng)外科治療的一個(gè)難題。我國(guó)每年新增的病例近100萬例，其中，需要通過植入神經(jīng)移植物來修復(fù)損傷神經(jīng)的約45萬例。目前，神經(jīng)移植物的來源非常匱乏，急需研究和開發(fā)神經(jīng)替代物。
國(guó)內(nèi)外對(duì)神經(jīng)移植物的研制一直停留在仿神經(jīng)結(jié)構(gòu)的導(dǎo)管上，目前所開發(fā)的人工產(chǎn)品均為將神經(jīng)的兩個(gè)斷端連接起來的管狀醫(yī)用材料，即所謂的“人造神經(jīng)管”或“人造神經(jīng)移植物”。在中國(guó)專利“醫(yī)用人造神經(jīng)移植物及其制備方法”(專利號(hào)01108208.9)中揭示了一種由殼聚糖材料制成的生物導(dǎo)管，生物導(dǎo)管嵌有纖維支架，纖維支架材料為聚乙醇酸或聚乳酸；在中國(guó)專利申請(qǐng)“人工神經(jīng)管”(申請(qǐng)?zhí)?0810000.4)、“人造神經(jīng)管”(申請(qǐng)?zhí)?9807035.1)、“人工神經(jīng)管”(申請(qǐng)?zhí)?7199928.7)中都揭示了由生物體內(nèi)分解吸收材料形成的管，其內(nèi)腔中具有微細(xì)纖維化膠原體，其空隙中填充有昆布氨酸。
上述現(xiàn)有產(chǎn)品都是用可降解的生物材料制成的導(dǎo)管，能在植入體內(nèi)后“橋接”缺損的神經(jīng)，但是，上述產(chǎn)品僅僅是為再生神經(jīng)軸突的生長(zhǎng)提供了一條“橋梁”或“通道”，本身沒有生物活性，不能提供神經(jīng)生長(zhǎng)所必要的內(nèi)環(huán)境，也沒有促進(jìn)神經(jīng)再生的作用。
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)證實(shí)，許旺細(xì)胞在人體神經(jīng)生長(zhǎng)過程中有極為重要的作用，它們附著并包圍軸突形成髓鞘，促進(jìn)軸突的延伸和成熟。因?yàn)樯鲜霈F(xiàn)有產(chǎn)品沒有提供神經(jīng)再生所必需的許旺細(xì)胞或具有類似功能的活性細(xì)胞，在近斷端長(zhǎng)出新生軸突時(shí)，只能依賴機(jī)體本身的許旺細(xì)胞連帶一齊長(zhǎng)過來，這個(gè)過程就不僅很緩慢，而且機(jī)體本身的許旺細(xì)胞的遷移有一定限度，如果許旺細(xì)胞進(jìn)不去，或者進(jìn)得很少，神經(jīng)的生長(zhǎng)就大受影響，如果應(yīng)用于臨床，僅能修復(fù)短距離的神經(jīng)缺損，一般不超過15毫米，臨床上對(duì)如此短距離的神經(jīng)缺損往往可以直接縫合，而不需要借助這些神經(jīng)移植物。對(duì)更長(zhǎng)距離的神經(jīng)缺損，即使“橋接”上述導(dǎo)管，再生的神經(jīng)軸突也不能到達(dá)遠(yuǎn)斷端，不能恢復(fù)損傷神經(jīng)的功能，因而修復(fù)效果十分不理想。
近年來，組織工程學(xué)的出現(xiàn)為組織損傷的修復(fù)帶來了新希望。組織工程學(xué)是一門運(yùn)用工程學(xué)與生命科學(xué)的原理和方法，研究正常及病變的哺乳動(dòng)物組織形態(tài)和功能的相互關(guān)系，開發(fā)修復(fù)損傷組織形態(tài)和功能的生物替代物的科學(xué)，是生物技術(shù)領(lǐng)域的重要內(nèi)容。具體來說是利用仿生學(xué)的原理，制備具有特定的三維結(jié)構(gòu)和生物活性的復(fù)合體，營(yíng)造出有正常生理功能的組織，可用于替代人體缺損組織的形態(tài)與功能。組織工程學(xué)的出現(xiàn)標(biāo)志著醫(yī)學(xué)將從現(xiàn)有的自體或異體組織和器官移植的模式，進(jìn)入用人工制造的組織和器官移植修復(fù)缺損和重建功能的新階段。
上述現(xiàn)有產(chǎn)品沒有生物活性，都不是真正意義上的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，這是導(dǎo)致現(xiàn)有產(chǎn)品在神經(jīng)修復(fù)中效果不理想的根本原因。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種組織工程化周圍神經(jīng)移植物，用于修復(fù)周圍神經(jīng)損傷后出現(xiàn)的神經(jīng)缺損。
本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，包括用于連接神經(jīng)兩斷端的支架和具有促進(jìn)神經(jīng)再生功能的種子細(xì)胞，種子細(xì)胞附著于支架上，形成具有仿神經(jīng)三維結(jié)構(gòu)和生物活性的復(fù)合體。
所述的支架為生物降解材料制備的由微絲組成的束狀微絲結(jié)構(gòu)，其外表面包覆一層膜，形成管狀支架。
用于制備支架的生物降解材料可以是合成降解材料，或者天然生物降解材料，或者兩者組合制備的材料。所述的合成降解材料選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚己內(nèi)酯及其共聚物的一種或一種以上的組合；所述的天然生物降解材料選自膠原、殼聚糖、海藻酸的一種或一種以上的組合。
為進(jìn)一步增強(qiáng)支架對(duì)種子細(xì)胞的粘附性，并促進(jìn)神經(jīng)再生和移植物的血管化過程，所述的微絲表面可以涂有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)。
另一方案是在微絲的制備中，使微絲中含有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)，該物質(zhì)可在微絲降解過程中逐漸釋放出來。
上述的能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)可以為細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，包括膠原、氨基聚糖、糖蛋白三大類；也可以是各種生長(zhǎng)因子。
所述的微絲的直徑為5～50μm。優(yōu)選為10～20μm。根據(jù)患者所需修復(fù)神經(jīng)的直徑，選用由合適直徑和合適數(shù)量的微絲組成束狀微絲結(jié)構(gòu)，既可為種子細(xì)胞提供充足的附著位點(diǎn)，又不妨礙再生神經(jīng)軸突的長(zhǎng)入。
所述的膜可以為半透膜。該膜可讓營(yíng)養(yǎng)成分如氧分子、蛋白質(zhì)、碳水化合物等進(jìn)入膜內(nèi)，而使膜內(nèi)的組織代謝廢物以及微絲的降解產(chǎn)物排出膜外，同時(shí)阻止體內(nèi)纖維結(jié)締組織的長(zhǎng)入，避免對(duì)神經(jīng)再生的不良影響。
所述的膜也可以為生物降解材料制備的膜。所述的生物降解材料可以是合成降解材料，或者天然生物降解材料，或者兩者組合制備的材料。所述的合成降解材料選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚己內(nèi)酯及其共聚物的一種或一種以上的組合；所述的天然生物降解材料選自膠原、殼聚糖、海藻酸的一種或一種以上的組合。該膜為具有一定通透性的多孔膜，孔徑優(yōu)選為5～25μm，可讓營(yíng)養(yǎng)成分如氧分子、蛋白質(zhì)、碳水化合物等進(jìn)入膜內(nèi)，而使膜內(nèi)的組織代謝廢物以及微絲的降解產(chǎn)物排出膜外，同時(shí)阻止體內(nèi)纖維結(jié)締組織的長(zhǎng)入，避免對(duì)神經(jīng)再生的不良影響。
所述的種子細(xì)胞是成體干細(xì)胞。優(yōu)選為骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，或者脂肪干細(xì)胞。
周圍神經(jīng)由神經(jīng)細(xì)胞、許旺細(xì)胞、結(jié)締組織、血管、淋巴管以及特殊支持細(xì)胞組成。神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)又是由胞體部分和突起的胞突構(gòu)成，胞突的末端反復(fù)分支后與神經(jīng)元接觸，軸突是其中的一個(gè)最長(zhǎng)和最重要的胞突，可伸延至效應(yīng)器。許旺細(xì)胞包繞軸突形成神經(jīng)纖維。上萬條纖維集中在一起形成神經(jīng)束，一個(gè)或數(shù)個(gè)神經(jīng)束由結(jié)締組織聯(lián)系在一起，就組成了周圍神經(jīng)。當(dāng)周圍神經(jīng)斷裂并出現(xiàn)缺損后，需要用移植物來“橋接”缺損的神經(jīng)段，新生的神經(jīng)軸突從近斷端長(zhǎng)入移植物，在許旺細(xì)胞的引導(dǎo)下向遠(yuǎn)斷端生長(zhǎng)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)證實(shí)，許旺細(xì)胞在人體神經(jīng)生長(zhǎng)過程中具有極其重要的作用，它們附著并包圍軸突形成髓鞘，促進(jìn)軸突的延伸和成熟。發(fā)明人已成功將成體干細(xì)胞附著于支架一并移植到體內(nèi)，在體內(nèi)環(huán)境中使成體干細(xì)胞誘導(dǎo)成為具有許旺細(xì)胞形態(tài)和功能特征的細(xì)胞，命名為“類許旺細(xì)胞”，這些細(xì)胞應(yīng)是人類周圍神經(jīng)損傷修復(fù)所設(shè)計(jì)的組織工程化神經(jīng)所采用的種子細(xì)胞中最為合適的細(xì)胞之一，其在體內(nèi)的增殖為神經(jīng)軸突的再生鋪平了道路。
現(xiàn)有的所謂“人造神經(jīng)管”或“人造神經(jīng)移植物”僅僅是為再生神經(jīng)軸突的生長(zhǎng)提供的“橋梁”或“通道”，而本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物具有突破性的優(yōu)點(diǎn)，即采用了在連接神經(jīng)斷端的支架上“種植”具有生物學(xué)活性的種子細(xì)胞，該種子細(xì)胞在體內(nèi)環(huán)境中可被促使分化為具有許旺細(xì)胞(Schwann’scells)形態(tài)和功能特征的“類許旺細(xì)胞”，細(xì)胞有貼附生長(zhǎng)的特性，類許旺細(xì)胞可在支架表面粘附、遷移、增殖，形成具有特殊三維結(jié)構(gòu)和活性細(xì)胞的人造神經(jīng)組織。支架和種子細(xì)胞都是本發(fā)明所述的周圍神經(jīng)移植物必不可少的組成部分，由此構(gòu)成了真正意義上的組織工程化周圍神經(jīng)移植物。
本發(fā)明在應(yīng)用時(shí)，將所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物植入人體的神經(jīng)缺損部位，從神經(jīng)斷端長(zhǎng)出的新生軸突開始長(zhǎng)進(jìn)支架內(nèi)并在支架內(nèi)延伸和成熟。在這個(gè)過程中，附著于支架上的種子細(xì)胞則按再生軸突的生長(zhǎng)方向不斷增殖、遷移，形成“類許旺細(xì)胞”的細(xì)胞帶，等候著新生軸突的到來，在新生神經(jīng)軸突生長(zhǎng)的過程中，種子細(xì)胞相當(dāng)于“迎接”新生軸突的“引路人”，提供了必要的營(yíng)養(yǎng)作用和誘導(dǎo)作用。新生的周圍神經(jīng)軸突就有一個(gè)接一個(gè)的類許旺細(xì)胞去“迎接”它，并包圍軸突，形成髓鞘，并使之達(dá)到功能上的成熟。同時(shí)，由生物降解材料制備的支架也在不斷降解，讓出給神經(jīng)纖維生長(zhǎng)的空間，并最終被新生的神經(jīng)纖維所取代。支架的體內(nèi)降解速度與神經(jīng)纖維的生長(zhǎng)速度相匹配，避免對(duì)神經(jīng)纖維造成卡壓。以半透膜制備的膜也能被機(jī)體完全吸收。
因?yàn)橹車窠?jīng)生長(zhǎng)一定需要許旺細(xì)胞的“保駕護(hù)航”?，F(xiàn)有的神經(jīng)移植物產(chǎn)品僅提供支架而不提供許旺細(xì)胞或具有類似功能的活性細(xì)胞，在近斷端長(zhǎng)出新生軸突時(shí)，只能依賴機(jī)體本身的許旺細(xì)胞連帶一齊長(zhǎng)過來，這個(gè)過程就不僅很緩慢，而且機(jī)體本身的許旺細(xì)胞的遷移有一定限度，如果許旺細(xì)胞進(jìn)不去，或者進(jìn)得很少，神經(jīng)的生長(zhǎng)就大受影響，如果應(yīng)用于臨床，僅能修復(fù)短距離的神經(jīng)缺損，一般不超過15毫米，臨床上對(duì)如此短距離的神經(jīng)缺損往往可以直接縫合，而不需要借助這些神經(jīng)移植物。對(duì)更長(zhǎng)距離如3厘米以上的神經(jīng)缺損，即使“橋接”上述導(dǎo)管，再生的神經(jīng)軸突也不能到達(dá)遠(yuǎn)斷端，難以恢復(fù)損傷神經(jīng)的功能，因而修復(fù)效果十分不理想。而本發(fā)明采用種子細(xì)胞與支架相結(jié)合的結(jié)構(gòu)，不僅為再生的神經(jīng)纖維通過神經(jīng)缺損區(qū)提供了仿生化的通道，而且其內(nèi)在的種子細(xì)胞對(duì)神經(jīng)再生有促進(jìn)作用，因此可用于修復(fù)更長(zhǎng)距離的神經(jīng)缺損，神經(jīng)修復(fù)效果顯著提高，臨床應(yīng)用范圍更廣。


圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2為圖1的A-A剖面示意圖。
圖3為圖2中B部位的放大示意圖。
圖4為圖1中C部位的放大示意圖。
圖5為本發(fā)明的應(yīng)用示意圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，如圖1至圖3所示，包括用于連接神經(jīng)兩斷端的支架1和具有促進(jìn)神經(jīng)再生功能的種子細(xì)胞2，種子細(xì)胞2附著于支架1上，形成具有仿神經(jīng)三維結(jié)構(gòu)和生物活性的復(fù)合體。支架1為生物降解材料制備的由微絲13組成的束狀微絲結(jié)構(gòu)11，其外表面包覆一層膜12，形成管狀支架。如圖4所示，種子細(xì)胞2主要附著于微絲13表面。在實(shí)際產(chǎn)品中，種子細(xì)胞2也可以附著于支架1的其他部位，如膜12上。如圖5所示，當(dāng)修復(fù)神經(jīng)缺損時(shí)，將本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物植入近斷端3與遠(yuǎn)斷端4之間。
在實(shí)際產(chǎn)品中，束狀微絲結(jié)構(gòu)所含有的微絲極小，圖1至圖5均為微觀示意圖，其比例不代表實(shí)際產(chǎn)品的比例。
本發(fā)明所述的種子細(xì)胞2為成體干細(xì)胞。成體干細(xì)胞包括有多種干細(xì)胞，如骨髓間質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞等，以下實(shí)施例以骨髓間質(zhì)干細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞分別作為種子細(xì)胞加以說明
實(shí)施例一采用生物降解材料制備成微絲13，并裝配成束狀微絲結(jié)構(gòu)11，另用生物降解材料或半透膜制備成膜12，將膜12包覆束狀微絲結(jié)構(gòu)11形成支架1，滅菌后備用。在患者體內(nèi)(如髂骨、脛骨)抽取骨髓，分離出骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，將分離后的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞2與滅菌后的束狀微絲結(jié)構(gòu)11在體外共同培養(yǎng)，使種子細(xì)胞2均勻分布在束狀微絲結(jié)構(gòu)11上，最后用膜12包覆束狀微絲結(jié)構(gòu)11，形成管狀結(jié)構(gòu)，即得到了本發(fā)明所述的由骨髓間質(zhì)干細(xì)胞與生物降解材料構(gòu)造的組織工程化周圍神經(jīng)移植物。臨床使用時(shí)，將本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物植入到要修復(fù)的周圍神經(jīng)缺損處，在體內(nèi)環(huán)境中促使成體干細(xì)胞分化成“類許旺細(xì)胞”，該類許旺細(xì)胞沿再生軸突的生長(zhǎng)方向增殖、遷移。周圍神經(jīng)斷裂后，新生軸突從神經(jīng)的近斷端3長(zhǎng)出來，靠近類許旺細(xì)胞，類許旺細(xì)胞包圍軸突，形成髓鞘，向軸突提供營(yíng)養(yǎng)，并引導(dǎo)軸突向神經(jīng)的遠(yuǎn)端生長(zhǎng)，同神經(jīng)纖維的遠(yuǎn)斷端4相連接。在這個(gè)過程中，類許旺細(xì)胞發(fā)揮許旺細(xì)胞的功能，而支架1則在不斷降解或被機(jī)體吸收，最終被再生的神經(jīng)纖維所取代。
本實(shí)施例中，所述的生物降解材料是由合成降解材料，或者天然生物降解材料，或者兩者的組合材料制備而成的。所述的合成降解材料選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚己內(nèi)酯及其共聚物的一種或一種以上的組合。所述的天然生物降解材料選自膠原、殼聚糖、海藻酸的一種或一種以上的組合。
本實(shí)施例中，根據(jù)患者所需修復(fù)神經(jīng)的直徑，選用由合適直徑和合適數(shù)量的微絲組成束狀微絲結(jié)構(gòu)，這樣既可為種子細(xì)胞提供充足的附著位點(diǎn)，又不妨礙再生神經(jīng)軸突的長(zhǎng)入。
本發(fā)明在應(yīng)用時(shí)，所選用的微絲直徑與所修復(fù)神經(jīng)的直徑無關(guān)，而是根據(jù)所修復(fù)神經(jīng)的直徑和神經(jīng)缺損的長(zhǎng)度來決定組成束狀微絲結(jié)構(gòu)所需微絲的數(shù)目和長(zhǎng)度。微絲的直徑通常設(shè)計(jì)為5～50μm。
為進(jìn)一步增強(qiáng)支架對(duì)種子細(xì)胞的粘附性，并促進(jìn)神經(jīng)再生和移植物的血管化過程，本實(shí)施例中所述的微絲表面可以涂有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)。
本實(shí)施例中，也可在微絲的制備中，使微絲中含有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)，該物質(zhì)可在微絲降解過程中逐漸釋放出來。
上述的能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)可以為細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，包括膠原、氨基聚糖、糖蛋白三大類；也可以是各種生長(zhǎng)因子。
實(shí)施例二采用生物降解材料制備成微絲13，并裝配成束狀微絲結(jié)構(gòu)11，另用生物降解材料或半透膜制備成膜12，將膜12包覆束狀微絲結(jié)構(gòu)11形成支架1，滅菌后備用。在患者體內(nèi)脂肪較豐富處(如腹壁)抽取脂肪組織，分離脂肪干細(xì)胞，將分離后脂肪干細(xì)胞作為種子細(xì)胞2與滅菌后的束狀微絲結(jié)構(gòu)11在體外共同培養(yǎng)，使種子細(xì)胞2均勻分布在束狀微絲結(jié)構(gòu)11上，最后用膜12包覆束狀微絲結(jié)構(gòu)11，形成管狀結(jié)構(gòu)，即得到了本發(fā)明所述的由脂肪干細(xì)胞與生物降解材料構(gòu)造的組織工程化周圍神經(jīng)移植物。臨床使用時(shí)，將本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物植入到要修復(fù)的周圍神經(jīng)缺損處，在體內(nèi)環(huán)境中促使成體干細(xì)胞分化成“類許旺細(xì)胞”，該類許旺細(xì)胞沿再生軸突的生長(zhǎng)方向增殖、遷移。周圍神經(jīng)斷裂后，新生軸突從神經(jīng)的近斷端3長(zhǎng)出來，靠近類許旺細(xì)胞，類許旺細(xì)胞包圍軸突，形成髓鞘，向軸突提供營(yíng)養(yǎng)，并引導(dǎo)軸突向神經(jīng)的遠(yuǎn)端生長(zhǎng)，同神經(jīng)纖維的遠(yuǎn)斷端4相連接。在這個(gè)過程中，類許旺細(xì)胞發(fā)揮許旺細(xì)胞的功能，而支架1則在不斷降解或被機(jī)體吸收，最終被再生的神經(jīng)纖維所取代。
本實(shí)施例中，所述的生物降解材料是由合成降解材料，或者天然生物降解材料，或者兩者的組合材料制備而成的。所述的合成降解材料選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚己內(nèi)酯及其共聚物的一種或一種以上的組合。所述的天然生物降解材料選自膠原、殼聚糖、海藻酸的一種或一種以上的組合。
本實(shí)施例中，根據(jù)患者所需修復(fù)神經(jīng)的直徑，選用由合適直徑和合適數(shù)量的微絲組成束狀微絲結(jié)構(gòu)，這樣既可為種子細(xì)胞提供充足的附著位點(diǎn)，又不妨礙再生神經(jīng)軸突的長(zhǎng)入。
本發(fā)明在應(yīng)用時(shí)，所選用的微絲直徑與所修復(fù)神經(jīng)的直徑無關(guān)，而是根據(jù)所修復(fù)神經(jīng)的直徑和神經(jīng)缺損的長(zhǎng)度來決定組成束狀微絲結(jié)構(gòu)所需微絲的數(shù)目和長(zhǎng)度。微絲的直徑通常設(shè)計(jì)為5～50μm。
為進(jìn)一步增強(qiáng)支架對(duì)種子細(xì)胞的粘附性，并促進(jìn)神經(jīng)再生和移植物的血管化過程，本實(shí)施例中所述的微絲表面可以涂有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)。
本實(shí)施例中，也可在微絲的制備中，使微絲中含有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)，該物質(zhì)可在微絲降解過程中逐漸釋放出來。
上述的能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)可以為細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，包括膠原、氨基聚糖、糖蛋白三大類；也可以是各種生長(zhǎng)因子。
上列詳細(xì)說明是針對(duì)本發(fā)明的可行實(shí)施例的具體說明，但該實(shí)施例并非用以限制本發(fā)明的專利范圍，凡未脫離本發(fā)明精神所為的等效實(shí)施或變更，均應(yīng)包含于本發(fā)明的專利范圍中。
權(quán)利要求
1.組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于包括用于連接神經(jīng)兩斷端的支架(1)和具有促進(jìn)神經(jīng)再生功能的種子細(xì)胞(2)，種子細(xì)胞(2)附著于支架(1)上，形成具有仿神經(jīng)三維結(jié)構(gòu)和生物活性的復(fù)合體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的支架(1)為生物降解材料制備的由微絲(13)組成的束狀微絲結(jié)構(gòu)(11)，其外表面包覆一層膜(12)，形成管狀支架。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的微絲(13)表面涂有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)，或者微絲(13)中含有能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的能促進(jìn)細(xì)胞粘附、神經(jīng)再生和移植物血管化的物質(zhì)為細(xì)胞外基質(zhì)或者生長(zhǎng)因子。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的微絲(13)的直徑為5～50μm。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的膜(12)為半透膜，或者為生物降解材料制備的膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或6所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的生物降解材料是合成降解材料，或者天然生物降解材料，或者兩者組合制備的材料。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的合成降解材料選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚己內(nèi)酯及其共聚物的一種或一種以上的組合；所述的天然生物降解材料選自膠原、殼聚糖、海藻酸的一種或一種以上的組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的種子細(xì)胞(2)是成體干細(xì)胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，其特征在于所述的成體干細(xì)胞是骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，或者脂肪干細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種組織工程化周圍神經(jīng)移植物，以提供適用范圍更廣和質(zhì)量更好的修復(fù)神經(jīng)缺損的外科移植物。本發(fā)明所述的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，包括用于連接神經(jīng)兩斷端的支架和具有促進(jìn)神經(jīng)再生功能的種子細(xì)胞，種子細(xì)胞附著于支架上，形成具有仿神經(jīng)三維結(jié)構(gòu)和生物活性的復(fù)合體。所述的支架為生物降解材料制備的由微絲組成的束狀微絲結(jié)構(gòu)，其外表面包覆一層膜，形成管狀支架。所述的種子細(xì)胞是成體干細(xì)胞。本發(fā)明是真正意義上的組織工程化周圍神經(jīng)移植物，不僅為再生的神經(jīng)纖維通過神經(jīng)缺損區(qū)提供了仿生化的通道，而且其內(nèi)在的種子細(xì)胞對(duì)神經(jīng)再生有促進(jìn)作用，因此可用于修復(fù)更長(zhǎng)距離的神經(jīng)缺損，神經(jīng)修復(fù)效果顯著提高，臨床應(yīng)用范圍更廣。
文檔編號(hào)C12N5/0775GK1580253SQ20041002722
公開日2005年2月16日 申請(qǐng)日期2004年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月18日
發(fā)明者朱家愷, 劉小林, 朱慶棠, 勞鎮(zhèn)國(guó), 許揚(yáng)濱 申請(qǐng)人:中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院