專利名稱：微生物快速檢測顯色碟片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物的檢測，更特別的涉及一種用于檢測微生物的碟片及其制備方法。
背景技術(shù)：
“食品安全”是12個(gè)“十五”國家重大科技專項(xiàng)之一，它關(guān)系到國計(jì)民生和人民生命安全與健康，是當(dāng)前國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展急需解決的問題。而食品中病源微生物引起的危害一直是食品安全中最大的威脅之一。近幾年，全球不斷爆發(fā)食源性疾病事件如歐洲的“口蹄疫事件”、“瘋牛病事件”，美國李斯特氏菌食物中毒事件，日本大腸桿菌O157:H7事件，美國奶粉的坂崎腸桿菌事件等，“食品安全”問題已成為全球關(guān)注的焦點(diǎn)。
目前，我國進(jìn)出口食品微生物檢測均采用傳統(tǒng)方法，其通常使用瓊脂糖培養(yǎng)基，雖然準(zhǔn)確性強(qiáng)，但存在檢測時(shí)間長、檢測步驟煩瑣、對檢測人員技術(shù)水平要求高等缺點(diǎn)。隨著經(jīng)濟(jì)全球化進(jìn)程的加快，國際食品貿(mào)易的迅速增加，傳統(tǒng)微生物檢測方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)越來越突出，檢測速度是除貿(mào)易壁壘以外影響出口的主要因素，因此，快速檢測方法越來越受到重視，快速檢測產(chǎn)品應(yīng)用也越來越廣泛。
目前國內(nèi)外已有多種基于快速酶觸反應(yīng)方法的產(chǎn)品，其中大部分是顯色(或熒光)培養(yǎng)基，目標(biāo)微生物在其上生長后具有特異的顏色，易于判別，但是由于其通常仍使用瓊脂，因此干粉顯色培養(yǎng)基仍需要進(jìn)行配制、高壓滅菌和鋪制平板等，耗費(fèi)一定的人力和時(shí)間。
顯而易見，一種能夠利用顯色培養(yǎng)基高特異性、高靈敏度、易于判別的優(yōu)點(diǎn)，又能避免繁瑣和較長時(shí)間操作的一次性新產(chǎn)品成為開發(fā)的熱點(diǎn)。本發(fā)明正是基于此點(diǎn)，致力于開發(fā)一種能夠適應(yīng)快速檢測微生物的新產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有微生物檢測中的缺陷，實(shí)現(xiàn)對微生物的快速大批量檢測，發(fā)明人進(jìn)行了研究，并開發(fā)了一種新型的微生物快速檢測顯色碟片及其制備方法。該產(chǎn)品集和了顯色培養(yǎng)基和便攜式一次性平板的優(yōu)點(diǎn)，采用快速酶促反應(yīng)顯色培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)，用無紡布和瓜爾膠體系代替了傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的瓊脂作為載體，將它們制備在便攜式一次性平皿內(nèi)，即時(shí)可用，方便快捷，且其保質(zhì)期長(至少為1年)。
該產(chǎn)品可以應(yīng)用于食品、飲料、化妝品、藥品和飲用水等方面的微生物衛(wèi)生質(zhì)量檢測，環(huán)境微生物污染的監(jiān)測，醫(yī)學(xué)臨床的疾病診斷、流行病學(xué)研究。
在本發(fā)明的一個(gè)方面中，提供了一種微生物快速檢測顯色碟片，其由以下幾個(gè)部分構(gòu)成主體是一次性培養(yǎng)皿，其由培養(yǎng)皿底和培養(yǎng)皿蓋組成，其材料可以是從由聚苯乙烯、聚苯丙稀、聚碳或其類似的所組成的組中選擇的高分子塑料；培養(yǎng)皿內(nèi)底部粘附有一層與培養(yǎng)皿底內(nèi)徑一致的具有通透性的無紡布，無紡布上均勻吸附有一層水溶性膠粘劑和水溶性可供微生物生長的基質(zhì)，其中，該基質(zhì)包括可供微生物生長的各種營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子、調(diào)解基質(zhì)pH值的碳酸鈉、抑制非目標(biāo)菌生長的抑制劑以及使微生物菌落著色的化學(xué)物質(zhì)或酶底物，其均為水溶性物質(zhì)，且不含有凝固劑。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，一次性培養(yǎng)皿是無色透明的，其由培養(yǎng)皿底和培養(yǎng)皿蓋組成，培養(yǎng)皿底主要部分包括圓形培養(yǎng)皿，直徑為60mm，以及長方形的可以用于標(biāo)記的突起部分，培養(yǎng)皿蓋為圓形，其可以與培養(yǎng)皿底圓形部分緊密吻合。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，無紡布為白色，材料為從聚酯纖維、木漿短纖維、粘膠纖維、滌綸、棉及其類似的所組成的組中選擇的，其外觀為細(xì)小網(wǎng)格狀，具有通透性，平方米克重為20～40g/m2，酸堿度為中性，斷裂強(qiáng)力縱向?yàn)橹辽?5N/5cm，橫向?yàn)橹辽?N/5cm，吸水量為10～15g/g。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，膠粘劑為瓜爾膠，其為水溶性天然植物膠。
基于該產(chǎn)品的特征，其優(yōu)勢是顯而易見的。由于無紡布和瓜爾膠體具有良好的通透性、疏松的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)及較大的表面積，因此更有利于微生物的生長。該產(chǎn)品無須配制和高壓滅菌，為一次性即時(shí)可用產(chǎn)品，因此用戶可以不用購置大量昂貴的微生物檢測儀器設(shè)備，不用投入大量的人力制備培養(yǎng)基和清洗培養(yǎng)器皿等。該產(chǎn)品經(jīng)過真空冷凍干燥，去除了95～99％的水分，克服了制備好的瓊脂平板易脫水、易染菌、不能長期保存的缺點(diǎn)。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，提供了一種制備微生物快速檢測顯色碟片的方法，其主要包括下列步驟a)將無紡布和培養(yǎng)皿進(jìn)行無菌處理；b)用激光切割的方法將上述無紡布裁剪成φ50mm的圓形，激光切割法可保證無紡布的橫向及縱向拉伸強(qiáng)度不發(fā)生改變，保證了無紡布的平均孔徑在0.4-1.2μm之間，因此可滿足微生物生長的需要；c)通過機(jī)械裝置采用負(fù)壓吸附及正壓放置實(shí)現(xiàn)將切割后的無紡布平整地貼附在培養(yǎng)皿底部；d)用冷水配制濃度范圍0.8-1.2％的瓜爾膠溶液，并采用濕熱滅菌的方法對膠溶液進(jìn)行無菌處理；e)采用步進(jìn)式多點(diǎn)點(diǎn)膠法將1ml d)中的瓜爾膠溶液均勻分散在c)中的無紡布上；f)采用電熱烘干法50±2℃烘干上述裝置，采用此法可以充分去除水分并保證無紡布與皿底的牢固粘合，倒置培養(yǎng)皿無紡布不脫落；g)將濕熱滅菌的基質(zhì)溶液1ml加入到步驟f)的裝置中，采用真空冷凍干燥法進(jìn)行干燥處理，其中所述基質(zhì)包括可供微生物生長的各種營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子、碳酸鈉、抑制非目標(biāo)菌生長的抑制劑以及使微生物菌落著色的化學(xué)物質(zhì)或酶底物，其均為水溶性物質(zhì)，采用真空冷凍干燥法可以保證干燥后無紡布體系的吸水性、通透性及更大的表面積，從而使得微生物與無紡布體系的接合更充分。采用這種干燥方法還可排除95～99％以上的水份，微生物的生長和酶的作用無法進(jìn)行，可保證干燥后的產(chǎn)品能長期保存；h)使用鋁箔袋包裝產(chǎn)品，且袋內(nèi)裝有干燥劑。
在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，在步驟a)中采用γ射線進(jìn)行滅菌處理。
在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，在步驟b)中被裁剪后無紡布的平均孔徑在0.4～1.2μm之間。
在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，在步驟d)中加入1％的無水乙醇，其會有助于瓜爾膠在冷水中的分散和溶解。
在發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，在步驟e)中采用機(jī)械不銹鋼壓膠裝置90度交叉按壓兩次，保證膠溶液與無紡布的充分均勻浸潤。
參考下面優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明其它的目的和優(yōu)點(diǎn)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
具體實(shí)施例方式
除非特別限定，本發(fā)明中所使用的所有的科技名詞與本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的術(shù)語是一樣的。需要說明的是這里所使用的材料、方法和實(shí)例僅是用來對發(fā)明進(jìn)行說明而不是為了對其進(jìn)行限制(除非作特別說明)。
在本發(fā)明中所使用的可供微生物生長的營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子是不受限制的，本領(lǐng)域中技術(shù)人員可以根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇，而這并不需要付出創(chuàng)造性勞動。
在本發(fā)明中所使用的微生物菌落著色的化學(xué)物質(zhì)或酶底物不受限制的，本領(lǐng)域中技術(shù)人員可以根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇，而這并不需要付出創(chuàng)造性勞動，例如但不限于TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α吡喃葡萄糖苷及其類似物。
實(shí)施例1微生物快速檢測顯色碟片的制備按照下列步驟制備微生物快速檢測顯色碟片并對微生物樣品進(jìn)行快速檢測1.利用γ射線對微生物培養(yǎng)皿進(jìn)行無菌處理；2.配制濃度0.8％的瓜爾膠溶液，利用濕熱蒸汽滅菌；3.使用激光器將無紡布片切割成直徑50mm的圓片，并通過機(jī)械系統(tǒng)放入培養(yǎng)皿中；4.利用機(jī)械點(diǎn)膠系統(tǒng)將1ml瓜爾膠溶液按照19點(diǎn)分布法均勻分散于微生物培養(yǎng)皿內(nèi)；5.在50±2℃下烘干上述培養(yǎng)裝置；6.按照下面的配方配制營養(yǎng)基質(zhì)溶液，并進(jìn)行濕熱滅菌處理蛋白胨10.0g
牛肉粉3.0gNaCl5.0g葡萄糖1.0gTTC0.2g水補(bǔ)足1000ml；7.將1ml無菌處理后的營養(yǎng)基質(zhì)溶液加入到烘干后的培養(yǎng)皿中，進(jìn)行真空冷凍干燥后得到了微生物快速檢測顯色碟片。
實(shí)施例2使用微生物快速檢測顯色碟片檢測微生物將幾株不同標(biāo)準(zhǔn)菌活化培養(yǎng)后的菌懸液進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋，選擇合適的稀釋度的稀釋液1ml接種于上面制備的微生物快速檢測顯色碟片中，35±1℃培養(yǎng)24h后，記錄紅色菌落數(shù)。將標(biāo)準(zhǔn)菌株的稀釋液同時(shí)接種營養(yǎng)瓊脂(NA)，按照GB/T4789.2-2003標(biāo)準(zhǔn)方法，35±1℃培養(yǎng)48h后，記錄結(jié)果。比對試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1標(biāo)準(zhǔn)菌檢測結(jié)果

將表2中所列的樣品按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋，選擇合適的稀釋度的稀釋液1ml接種于上面制備的微生物快速檢測顯色碟片中，35℃培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)紅色菌落，同時(shí)接種營養(yǎng)瓊脂(NA)，按照GB/T4789.2-2003標(biāo)準(zhǔn)方法，35±1℃培養(yǎng)48h后，記錄結(jié)果。對照試驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2不同樣品檢測結(jié)果

由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，使用本發(fā)明的微生物顯色碟片易于檢測樣品的試驗(yàn)、接種及培養(yǎng)。而且由于能夠簡便、快速、準(zhǔn)確的反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果，因此此裝置易于對各種微生物進(jìn)行檢測。
前面的說明在這里是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。然而，可以預(yù)期，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明可以做出改變和修飾，而不離開本發(fā)明的范圍。因此，前面的描述是為了覆蓋所有包括這些等價(jià)的變化和修飾，這都在本發(fā)明的主旨和范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種微生物快速檢測顯色碟片，其由以下幾個(gè)部分構(gòu)成主體是一次性培養(yǎng)皿，其由培養(yǎng)皿底和培養(yǎng)皿蓋組成，其材料可以是從由聚苯乙烯、聚苯丙稀、聚碳或其類似的所組成的組中選擇的高分子塑料；培養(yǎng)皿內(nèi)底部粘附有一層與培養(yǎng)皿底內(nèi)徑一致的具有通透性的無紡布，無紡布上均勻吸附有一層水溶性膠粘劑和水溶性可供微生物生長的基質(zhì)，其中，該基質(zhì)包括可供微生物生長的各種營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子、調(diào)解基質(zhì)pH值的碳酸鈉、抑制非目標(biāo)菌生長的抑制劑以及使微生物菌落著色的化學(xué)物質(zhì)或酶底物，其均為水溶性物質(zhì)，且不含有凝固劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物快速檢測顯色碟片，其中無紡布的材料為從聚酯纖維、木漿短纖維、粘膠纖維、滌綸、棉及其類似的所組成的組中選擇的，其外觀為細(xì)小網(wǎng)格狀，具有通透性，平方米克重為20～40g/m2，酸堿度為中性，斷裂強(qiáng)力縱向?yàn)橹辽?5N/5cm，橫向?yàn)橹辽?N/5cm，吸水量為10～15g/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物快速檢測顯色碟片，其中膠粘劑為瓜爾膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物快速檢測顯色碟片，其中基質(zhì)中含有TTC。
5.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1～4任何一項(xiàng)所述微生物快速檢測顯色碟片的方法，其主要由以下步驟組成a)將無紡布和培養(yǎng)皿進(jìn)行無菌處理；b)用激光切割的方法將上述無紡布裁剪成φ50mm的圓形；c)通過機(jī)械裝置采用負(fù)壓吸附及正壓放置實(shí)現(xiàn)將切割后的無紡布平整地貼附在培養(yǎng)皿底部；d)用冷水配制濃度范圍0.8-1.2％的瓜爾膠溶液，并采用濕熱滅菌的方法對膠溶液進(jìn)行無菌處理；e)采用步進(jìn)式多點(diǎn)點(diǎn)膠法將1ml d)中的瓜爾膠溶液均勻分散在c)中的無紡布上；f)采用電熱烘干法50±2℃烘干上述裝置；g)將濕熱滅菌的基質(zhì)溶液1ml加入到步驟f)的裝置中，采用真空冷凍干燥法進(jìn)行干燥處理，其中該基質(zhì)包括可供微生物生長的各種營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子、調(diào)解基質(zhì)pH值的碳酸鈉、抑制非目標(biāo)菌生長的抑制劑以及使微生物菌落著色的化學(xué)物質(zhì)或酶底物，其均為水溶性物質(zhì)，且不含有凝固劑；h)使用鋁箔袋包裝產(chǎn)品，且袋內(nèi)裝有干燥劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中在步驟a)中采用γ射線進(jìn)行滅菌處理。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中在步驟b)中被裁剪后無紡布的平均孔徑在0.4～1.2μm之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中在步驟d)中加入1％的無水乙醇以助于瓜爾膠在冷水中的分散和溶解。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中在步驟e)中采用機(jī)械不銹鋼壓膠裝置90度交叉按壓兩次，以保證膠溶液與無紡布的充分均勻浸潤。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的的制備方法，其中在步驟g)的基質(zhì)中含有TTC。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種微生物快速檢測顯色碟片及其制備方法，與傳統(tǒng)的瓊脂培養(yǎng)基相比，其以快速酶觸反應(yīng)顯色培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)，用無紡布和瓜爾膠體系代替了傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的瓊脂作為載體。其使用方便快捷，且其保質(zhì)期長(至少為1年)。
文檔編號C12Q1/04GK101070520SQ200610080710
公開日2007年11月14日 申請日期2006年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月12日
發(fā)明者牛春莉, 李瑾, 馬穎, 何艷玲, 王陸迪 申請人:北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司