專利名稱：用于培養(yǎng)細(xì)胞的系統(tǒng)和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的方法。本發(fā)明也涉及 包括多層細(xì)胞工廠的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
多層細(xì)胞工廠廣泛地用作試驗室細(xì)胞工作的部分。細(xì)胞工廠可從不同的供貨商處獲得，例如N露A/S， Roskilde, Denmark和Corning Incorporated Life Sciences, Acton, MA 01720, USA。可以獲得不 同尺寸的帶有不同層數(shù)的適合于不同用途的細(xì)胞工廠(cell factory )。例如，這些細(xì)胞工廠的10疊(十層)形式被發(fā)現(xiàn)是特別 地有用的，因為可以以相對地少的額外工作、設(shè)備或空間來產(chǎn)生大量 的細(xì)胞。然而，當(dāng)前用于填充這些細(xì)胞工廠的標(biāo)準(zhǔn)方法具有一些問題， 這導(dǎo)致了高的時間和勞動成本和/或?qū)е虏粷M意的填充和收獲，這意 味著比其他方式可能的低的細(xì)胞產(chǎn)量。即使當(dāng)前的標(biāo)準(zhǔn)方法可以被改進(jìn)以用于具有不同層數(shù)的細(xì)胞工 廠，但現(xiàn)在為簡化起見僅將描述用于十層細(xì)胞工廠的基本的接種和收 獲過程。所給出的數(shù)字應(yīng)看作合適的例子。為將細(xì)胞接種到十層細(xì)胞工廠內(nèi)，將1500 ml的使用合適的介質(zhì) 的具有希望的每毫升細(xì)胞濃度的細(xì)胞懸浮液引入到細(xì)胞工廠內(nèi)。細(xì)胞 應(yīng)處于完全均質(zhì)的懸浮液內(nèi)且大致同時均勻地進(jìn)入到所有層內(nèi)，以避 免在不同層內(nèi)的不同細(xì)胞個數(shù)。待接種到細(xì)胞工廠內(nèi)的細(xì)胞最初在組織培養(yǎng)燒瓶內(nèi)生長。當(dāng)細(xì)胞 從組織培養(yǎng)燒并瓦中被收獲時，它們懸浮在合適的介質(zhì)中。細(xì)胞和介質(zhì) (細(xì)胞懸浮液)被轉(zhuǎn)移到小瓶內(nèi)。對于十層細(xì)胞工廠， 一般地從組織 培養(yǎng)燒瓶準(zhǔn)備三瓶每瓶500 ml的細(xì)胞懸浮液。三個瓶將每個大體上 包含相同的細(xì)胞個數(shù)。細(xì)胞懸浮液從三個瓶轉(zhuǎn)移到中間容器中，在中 間容器中保持細(xì)胞懸浮液直至為接種細(xì)胞而將其引入到細(xì)胞工廠。根 據(jù)一個現(xiàn)有技術(shù)方法，中間容器可以具有大瓶形式或根據(jù)另一個現(xiàn)有 技術(shù)方法，具有移液管形式，這將在以下更詳細(xì)描述。
為收獲細(xì)胞，首先將介質(zhì)從細(xì)胞工廠去除而細(xì)胞保持接附到每層的底片。然后，將200至500 ml的例如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的沖 洗物質(zhì)引入到細(xì)胞工廠以從細(xì)胞沖洗殘余的介質(zhì)。然后去除沖洗物質(zhì) 且將100至150 ml的例如AccutaseTM或Trypsin的解離酶引入到細(xì) 胞工廠的層且將細(xì)胞工廠在37。C下溫育數(shù)分鐘。當(dāng)細(xì)胞已分離時，將 200至400 ml的介質(zhì)引入到細(xì)胞工廠內(nèi)以停止酶的作用。此停止酶反 應(yīng)的功能是以上所迷使用沖洗物質(zhì)從細(xì)胞沖洗殘余介質(zhì)的 一個原因。 如果不使用沖洗物質(zhì)，則解離酶將不有效地工作。存在兩個目前用于接種和收獲10疊細(xì)胞工廠的現(xiàn)有技術(shù)方法。 第一個方法在附圖的圖1中圖示。根據(jù)此第一方法，大瓶2包含待引 入到多層(例如10層)細(xì)胞工廠4內(nèi)的所有細(xì)胞懸浮液。細(xì)胞懸浮 液經(jīng)由連接到大瓶2的底部部分的管道6被引入到細(xì)胞工廠4內(nèi)。夾 7控制了細(xì)胞懸浮液的流動。為具有通過管道6的細(xì)胞懸浮液的有效 流動，大瓶2放置在大塊8上，使得當(dāng)夾打開時，重力將導(dǎo)致細(xì)胞懸 浮液從大瓶流到細(xì)胞工廠4。細(xì)胞工廠4的十層10a至10j通過通道 相互連接。此現(xiàn)有技術(shù)方法的優(yōu)點是細(xì)胞工廠4可以放置為使得層10a 至10j垂直地站立，如在圖1中示出。這使得層10a至10j大體上同 時被填充，因為相互連接的通道將迅速地將細(xì)胞懸浮液從一個垂直站 立的層擴展到下一個垂直站立的鄰近的層。然而，此方法存在一些缺 點。細(xì)胞必須小心處理，所以為無菌性原因，當(dāng)以細(xì)胞懸浮液填充大 瓶2時，它必須保持在層流空氣流(LAF)臺內(nèi)。也因為大且重的瓶2 需要塊8來保持包含細(xì)胞懸浮液的大瓶，所以大瓶2相對于細(xì)胞工廠 4的高度不可調(diào)整。因此， 一方面大瓶2必須提升足夠高，使其底部 部分位于借助于重力填充細(xì)胞工廠4的滿意的高度水平，且另一方面 大瓶2的位置越高，則對于操作者瓶的填充越不便，操作者將不得不 努力使其臂在LAF臺的罩下方以能將細(xì)胞懸浮液引入到大瓶2內(nèi)。即 使在將大瓶2放置在塊8上前填充大瓶2也是非常困難的，且對于操 作者是勞累的。此外，大塊8和瓶2因其龐大性可能危及LAF臺內(nèi)的 空氣流動。旋轉(zhuǎn)大瓶2內(nèi)的細(xì)胞懸浮液以獲得均質(zhì)性也是非常困難的。 此方法的另一個缺點是，它要求將整個大瓶連同接附的管道6 —起高 壓滅菌。此方法的再另 一個缺點是不容易允許隨后添加沖洗物質(zhì)或 酶。
已變得流行的第二個方法是使用移液管來將細(xì)胞懸浮液引入到細(xì) 胞工廠內(nèi)。雖然操作相對地小的移液管可能比大瓶更容易，但此第二方法也具有一些缺點。為以1500 ml的細(xì)力包懸浮液填充十層細(xì)力包工廠 要求填充和排空50 ml的移液管30次或100 ml的移液管15次(更 大的移液管將難于操作)。這樣的移液不僅費時而且耗體力。填充可 能典型地需要20分鐘。因為細(xì)胞工廠的工作方式，使用如此長的時 間來接種細(xì)胞工廠可能導(dǎo)致細(xì)胞在層內(nèi)非常不均勻地分布。其發(fā)生原 因是為在細(xì)胞懸浮液內(nèi)移液，細(xì)胞工廠必須在其背部是平的，使得填 充孔向上，即垂直于圖1中示出的第一方法的定向。這意味著根據(jù)第 二方法向具有水平對齊的層的細(xì)胞工廠內(nèi)的移液將導(dǎo)致細(xì)胞懸浮液直 接行進(jìn)到底部層且在一些時間后僅非常緩慢地開始填充其他層，使得 頂部層接收如果有也很少的細(xì)胞。在移液進(jìn)整個細(xì)胞懸浮液(細(xì)胞和 介質(zhì))所用的時間內(nèi)，細(xì)胞已經(jīng)開始沉淀到底部，因此導(dǎo)致工廠內(nèi)細(xì) 胞的非均勻分層。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是減輕現(xiàn)有技術(shù)方法的缺點。本發(fā)明的另一個目的 是在多層細(xì)胞工廠內(nèi)完成容易和快速的接種和收獲過程。這些和其他 的將在下文中變得顯見的目的通過由獨立權(quán)利要求限定的方法、細(xì)胞 培養(yǎng)系統(tǒng)和使用來實現(xiàn)。本發(fā)明基于這樣的見解，即將物質(zhì)更有效地處理和引入到多層細(xì) 胞工廠內(nèi)可以通過允許排除例如根據(jù)所描述的第 一現(xiàn)有技術(shù)方法的大 瓶，或根據(jù)所描述的第二現(xiàn)有技術(shù)方法的移液管的中間容器來實現(xiàn)。 換言之，本發(fā)明允許將物質(zhì)直接引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)而不需要中間 容器來保持物質(zhì)直至將其輸送到細(xì)胞工廠內(nèi)。本發(fā)明也基于這樣的見解，即通過再引導(dǎo)具有垂直地站立的層的 多層細(xì)胞工廠的流體連通入口接口 ，可以獲得快速和均勻的細(xì)胞工廠 的層的填充。因此，通過在細(xì)胞工廠處于垂直地站立位置時再引導(dǎo)多 層細(xì)胞工廠的流體連通入口 4矣口為面向上，允許將細(xì)胞懸浮液或其他 物質(zhì)灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)。灌注動作可以與現(xiàn)有技術(shù)方法相反更快速且 允許更容易地操作。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的
方法。方法包括將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口 、將細(xì)胞工廠 布置為使得細(xì)胞工廠的層大體上垂直地延伸，其中所述的布置在將物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口之前、之后或同時進(jìn)行，且將物質(zhì) 從獨立容器通過直接將物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注。因此，本發(fā)明的第一方面允許利用垂直延伸的層來均勻地填充層 且將其與將物質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備直接灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)組合。換言之，物質(zhì)可以從獨立容器以連續(xù)流而不停止地輸送到細(xì)胞工廠內(nèi)。因 此避免了現(xiàn)有技術(shù)的中間物質(zhì)保持容器且使得能快速填充。獨立容器 應(yīng)看作孤立容器，它不必結(jié)構(gòu)上連接到細(xì)胞工廠或物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備，但 如果希望它可以保持為不與任何其他系統(tǒng)部件接觸。這從操作和無菌 性角度看是有利的。獨立容器可以是從其灌注物質(zhì)的任何類型的器皿、燒瓶、瓶或其 他裝置。例如，在物質(zhì)是包含待接種在細(xì)胞工廠內(nèi)的細(xì)胞的細(xì)胞懸浮 液的情況中，獨立容器可以是小瓶，從組織培養(yǎng)燒瓶內(nèi)將收荻的細(xì)胞 轉(zhuǎn)移到該小瓶內(nèi)，如在"背景技術(shù)"中事先描述。在物質(zhì)是沖洗物質(zhì) 或懸浮的解離酶的情況下，獨立容器可以是瓶，由供貨商將溶液或懸 浮液提供到該瓶內(nèi)。灌注的動作不僅允許了更快速的填充，而且也更不消耗操作者的 體力。處理小瓶比處理連接到管道的笨拙的大瓶更方便。同樣，不同 于引入了因重復(fù)移液導(dǎo)致的污染的風(fēng)險的耗費體力的從瓶的重復(fù)移 液，從這樣的瓶的單次灌注動作較不費力且可能從無菌性角度更安 全。用于將細(xì)胞接種到細(xì)胞工廠內(nèi)或從細(xì)胞工廠收獲細(xì)胞所要求的總 時間可能對總的細(xì)胞健康有影響。良好的細(xì)胞活性經(jīng)常取決于盡可能快地使細(xì)胞返回到其家環(huán)境(例如潮濕的37X:溫育器)。本發(fā)明使得能比以上所述的現(xiàn)有技術(shù)顯著地更快地在工廠內(nèi)處理細(xì)胞。在本申請中，在雙重的情況下，垂直地延伸層在此意味著層相互 靠近站立，使得所有層具有距細(xì)胞工廠放置其上的"地面高度水平" 大體上相同的距離。與垂直地延伸層相反，水平地延伸層將一個位于 另 一個上方且每一個具有距地面高度水平不同的距離。如先前所提及，本發(fā)明基于再引導(dǎo)多層細(xì)胞工廠的流體連通入口 接口的可能性的見解。這在本發(fā)明的第二方面中設(shè)想。根據(jù)本發(fā)明的 第二方面，提供了用于將物質(zhì)引入到具有用于接收物質(zhì)的入口的多層
細(xì)胞工廠的方法。方法包括將包括其自己的用于接收物質(zhì)的入口的物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口且直接將物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠的入 口 。方法也包括當(dāng)物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口的開口面積面向與細(xì)胞工廠的 入口的開口面積不同的另 一個方向時，將物質(zhì)灌注到物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的 入口內(nèi)。有利地，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口可以相對于細(xì)胞工廠的入口可 移動。換言之，如果物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備具有連接到細(xì)胞工廠的入口的第一 端部和代表了物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口的第二端部，則第二端部可以相對 于第一端部可移動，以使得第一端部能以非零度的角度相對于第二端 部布置。應(yīng)注意的是，根據(jù)此方面的方法也適合于且包括根據(jù)本發(fā)明的第 一方面將物質(zhì)引入到垂直地延伸的層內(nèi)的構(gòu)思。根據(jù)本發(fā)明的第二方 面執(zhí)行的物質(zhì)灌注也可以適合于從如先前解釋的獨立的容器執(zhí)行。對于本發(fā)明的第一方面和第二方面，通過將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備合適地 定尺寸可以使得物質(zhì)灌注的動作更安全且更快速。因此，根據(jù)本發(fā)明 的至少一個實施例，將物質(zhì)灌注到具有比細(xì)胞工廠的入口更大的開口 面積的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口內(nèi)。對流體連通入口接口的此放大也在本發(fā)明的分開的第三方面中表 達(dá)。根據(jù)本發(fā)明的此第三方面，提供了用于將物質(zhì)引入到具有用于接 收物質(zhì)的入口的多層細(xì)胞工廠的方法，所述的入口具有第一開口面 積。方法包括將包括具有大于所述的第 一開口面積的第二開口面積的 入口的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口 ，將細(xì)胞工廠布置為使得 細(xì)胞工廠的層大體上垂直地延伸，其中所述的布置在將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備 連接到細(xì)胞工廠的入口前、后或同時進(jìn)行，和將物質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè) 備的入口灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)。具有大于細(xì)胞工廠的入口的4矣收入口的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備可以看作放 大了開口且因此便于將物質(zhì)灌注到放大的開口內(nèi)的適配器。類似于先 前的方面，才艮據(jù)第三方面的灌注從獨立的容器合適地進(jìn)行。此外，為進(jìn)一步便于物質(zhì)的灌注，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的尺寸不僅相對 于細(xì)胞工廠入口而且相對于灌注源合適的考慮。因此，在所有以上所 述的方面的范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的至少一個實施例，在從獨立的容器 灌注的情況中，灌注物體的動作包括將物質(zhì)從獨立的容器的出口灌注 到具有比所述的出口的開口面積更大的開口面積的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入
口內(nèi)。 -合適地，所述的獨立的容器是瓶，其中物質(zhì)可以從瓶的頂部部分 灌注出。應(yīng)注意的是，從瓶的頂部部分的灌注一般地意P未著從瓶頸的 頂部的灌注。然而，開口可能位于獨立的容器的頂部部分的其他部位。 在容器的頂部部分，例如在瓶頸的頂部具有開口的優(yōu)點是容器不需要 提供有閥或密封件來防止包含在其內(nèi)的物質(zhì)流出。這可以與圖1中示 出的現(xiàn)有技術(shù)的中間大瓶相比較，在現(xiàn)有技術(shù)中必須打開閥以抽出物 質(zhì)而非根據(jù)本發(fā)明的簡單的灌注。應(yīng)進(jìn)一步注意的是，不僅是瓶，而 且具有從其可以灌注物質(zhì)的頂部部分的任何其他類型的容器代表了可構(gòu)想的替代。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有利的是使用漏斗來實現(xiàn)所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口 ， 其具有比細(xì)胞工廠的入口更大的開口面積。也發(fā)現(xiàn)有利的是，使用漏 斗來實現(xiàn)所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口 ，其具有比獨立容器的出口更大 的開口面積。漏斗可以實現(xiàn)兩個關(guān)系，即它可以提供比細(xì)胞工廠的入 口和獨立容器的出口更大的開口面積。因此，根據(jù)對于所有以上方面 可構(gòu)想的本發(fā)明的至少 一個實施例，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備包括漏斗或空心的 且其入口開口比其出口開口更大或更寬的類似的用具，其中物質(zhì)的灌 注或引入的動作包括將物質(zhì)灌注到漏斗內(nèi)。漏斗的出口側(cè)合適地連接到一些類型的導(dǎo)管，例如可以用于將物 質(zhì)引導(dǎo)到細(xì)胞工廠的入口內(nèi)的管道。為實現(xiàn)位置可變性且允許細(xì)胞工 廠的垂直地站立的層通過細(xì)胞工廠的水平地面向的入口接收物質(zhì)，導(dǎo) 管或其至少部分合適地相對于細(xì)胞工廠的入口可移動。這允許漏斗入 口大體上面向上以^接收待灌注的物質(zhì)。替4戈地，漏斗可以相對于導(dǎo)管 可移動，例如可樞轉(zhuǎn)。因此， 一旦漏斗和導(dǎo)管已連接到入口以此使漏 斗的入口獲得了接口的功能，則最初由細(xì)胞工廠的入口所代表的細(xì)胞 工廠的流體連通入口 4矣口可以以多種方式乂人大體上水平地面向再引導(dǎo) 為大體上垂直地面向。然而，當(dāng)前考慮為有利且簡單的是使用柔性和 可彎曲的管道，管道在其端部的一個處連接到漏斗且在其另一個端部 處連接到細(xì)胞工廠。如果要求，則連4^到細(xì)胞工廠的管道的端部包括 或接附到配合細(xì)胞工廠的入口的適配器。使用柔性管道的優(yōu)點，除其在實際接種和/或收獲過程期間的益 處外，在于管道可以折疊以在高壓滅菌時僅要求小的空間。在管道和漏斗被高壓滅菌前折疊的管道可以合適地連接到漏斗。應(yīng)理解的是，作為使用例如可連接到漏斗的柔性管道的分開的導(dǎo) 管的替代，漏斗和導(dǎo)管可以形成為一件。在這樣的情況中，漏斗和導(dǎo) 管合適地由相同的材料制成，例如由塑料材料制成。如果漏斗和導(dǎo)管 制成為分開的件，則它們可以由不同的材料形成，例如玻璃漏斗可連 接到塑料或硅樹脂導(dǎo)管。從上文應(yīng)清楚的是，本發(fā)明的放大的接收開口和導(dǎo)管的組合，其 中放大的接收開口和導(dǎo)管的至少一個可相對于多層細(xì)胞工廠的入口移 動，使得操作者能容易地將物質(zhì)經(jīng)由所述的放大的接收開口和導(dǎo)管灌 注到細(xì)胞工廠內(nèi)。在連接到柔性管道的漏斗的情況中，可獲得另外的 優(yōu)點。優(yōu)點在于，由于管道的柔性和緊湊性，它可以作為單元與細(xì)胞 工廠包裝。應(yīng)用于本發(fā)明所包括的所有類型的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的另一個優(yōu)點是，容 易灌注入大量的不同類型的液體而不必在罩內(nèi)同時操縱大瓶。因此，在將細(xì)胞懸浮液灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)后，可以使用同 一 個物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備 來添加其他試劑而不移除它或不必向大弁瓦添加試劑。進(jìn)一步的優(yōu)點是，例如接附到管道的漏斗的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的相對小的尺寸不危及LAF 臺內(nèi)的空氣流。根據(jù)本發(fā)明的至少 一 個實施例，在物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備包括漏斗的情況 中，提供保持器設(shè)備用于保持漏斗。通過調(diào)整漏斗可安裝到其上的保 持器設(shè)備可將漏斗布置在細(xì)胞工廠的入口上方希望的高度處。保持器 設(shè)備可以包括任何合適的高度可調(diào)整的機構(gòu)，例如臂在其上可上下位 移的垂直臺。臂可以包括爪或環(huán)或其他裝置以用于保持漏斗。作為使 用垂直臺的替代，可構(gòu)想在希望的高度處將漏斗安裝到UF臺的側(cè)。 高度可調(diào)整的保持器設(shè)備的使用不限制于保持漏斗，而是可以應(yīng)用于 本發(fā)明所包括的任何物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備，因此允許控制物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的物 質(zhì)接收入口的高度，即垂直高度水平。標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞工廠一 l義地包括可以相同地起作用的兩個開口 。如果物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備被固定地保持，則它可以在整個收獲過程期間保持連接到 細(xì)月包工廠的開口的 一個。細(xì)胞工廠的其他開口則可以用于灌注出物質(zhì) 而與物質(zhì)轉(zhuǎn)移i殳備連^妾的開口可以用于添加新的試劑。
在細(xì)胞工廠上使用 一個作為入口且另 一個作為出口的兩個開口或 連通口，使得能有效地且快速地操作整個接種和收獲過程。因此，根 據(jù)本發(fā)明的不限制于漏斗和管道的實施例的至少 一 個實施例，在將任 何物質(zhì)引入到細(xì)月包工廠內(nèi)前，包含在細(xì)胞工廠內(nèi)的材料可以通過與細(xì) 胞工廠的入口分開的細(xì)胞工廠的出口去除。在此情況中，所述的材料 可以例如是當(dāng)接種細(xì)胞到細(xì)胞工廠內(nèi)時細(xì)胞懸浮在其內(nèi)的介質(zhì)、用于 沖洗細(xì)胞的沖洗物質(zhì)、用于分離細(xì)胞的酶等。在有利的情況中，當(dāng)物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備柔性地連接到細(xì)胞工廠時，在物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的開口和工廠 之間的連接的柔性允許去除物質(zhì)而不干擾物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的開口 ?，F(xiàn)在從上文應(yīng)清楚的是，根據(jù)本發(fā)明的任何方面的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備 可以合適地用于將細(xì)胞接種到細(xì)胞工廠內(nèi)和用于將例如沖洗溶液或解 離酶的其他試劑作為從細(xì)胞工廠收獲細(xì)胞的部分插入。因此，根據(jù)本發(fā)明的至少一個實施例，物質(zhì)包括用于在細(xì)胞工廠 內(nèi)接種細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液。細(xì)胞懸浮液包括懸浮在介質(zhì)中的細(xì)胞。商用介質(zhì)的例子包括DMEM和MEM等。 一般地，在細(xì)胞工廠培養(yǎng)哺乳動 物細(xì)胞，然而也可以在細(xì)胞工廠內(nèi)培養(yǎng)其他類型的細(xì)胞。物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的內(nèi)部體積合適地小于在細(xì)胞工廠內(nèi)待接種的細(xì)胞 懸浮液的總體積。因為物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備不需保智任何物質(zhì)而相反將物質(zhì) 直4姿通向細(xì)胞工廠內(nèi)，所以這是可以的。例如組合的漏斗和管道的物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備因此可以看作細(xì)胞工廠的入口的延伸。所述的小的內(nèi)部體 積特別地與細(xì)胞懸浮液的量有關(guān)，因為細(xì)胞懸浮液通常具有比其他可 通過物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)相當(dāng)?shù)馗蟮捏w積。然 而，如果希望，則物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備可以選擇為使其內(nèi)部體積小于在接種 和收獲過程中所使用的任何其他物質(zhì)的體積。如已提及，可以通過物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注的其他物質(zhì)包括沖洗物 質(zhì)、解離物質(zhì)和用于懸浮被接種、沖洗或分離的細(xì)胞的添加的介質(zhì)， 即任何涉及培養(yǎng)細(xì)月包的液體。因此，4艮據(jù)本發(fā)明的至少一個實施例， 所述的物質(zhì)包括例如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的用于沖洗已接種到細(xì) 胞工廠內(nèi)的細(xì)胞的沖洗物質(zhì)，或例如AccutaseTM或Trypsin的用于松 開附著的細(xì)胞的解離酶，或用于供皇合水^開的細(xì)胞且停止解離酶的任何 酶作用的介質(zhì)。如果希望，則在引入解離酶后，可以將細(xì)胞工廠連同 細(xì)胞和解離酶在溫育器內(nèi)溫育。合適地，在溫育前，將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備
從細(xì)胞工廠分離且在溫育后再連接，以允許灌注入介質(zhì)。物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的例如管道的端部的已分離部分合適地以非接觸方式在LAF臺內(nèi)保 持，以避免污染，因此允許再連接。在管道的情況中，管道的部分可 接附，例如綁到鄰近的結(jié)構(gòu)，例如綁到包括在先前所描述的保持器設(shè) 備內(nèi)的垂直臺或臂，同時保持使管道的端部不接觸所述的結(jié)構(gòu)或任何 其他附近的結(jié)構(gòu)。作為替代，可以在溫育后使用另一個物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備。應(yīng)注意的是，本發(fā)明的所有方面可應(yīng)用于將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞 工廠內(nèi)。即使為簡化起見將背景描述保持為十層細(xì)胞工廠，但本發(fā)明 也可應(yīng)用于具有其他層數(shù)的多層細(xì)胞工廠。例如，當(dāng)前存在具有單層、 兩層、四層、十層或四十層的商用細(xì)胞工廠。本發(fā)明可應(yīng)用于這些替 代中的任一個，以及在此范圍內(nèi)或甚至超過此范圍的任何將來的層 數(shù)，例如五十層?，F(xiàn)在已根據(jù)本發(fā)明的至少三個方面描述了將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞 工廠內(nèi)的方法。另外，也存在涉及細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的本發(fā)明的第四方面。 因此，根據(jù)本發(fā)明的第四方面提供了細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。系統(tǒng)包括具有用 于接收物質(zhì)的入口的多層細(xì)胞工廠。系統(tǒng)也包括具有可連接到細(xì)胞工 廠的入口的第一端部和具有用于接收物質(zhì)的入口的第二端部的物質(zhì)轉(zhuǎn) 移設(shè)備。已接收的物質(zhì)被直接轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠內(nèi)。物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入 口具有比細(xì)胞工廠的入口更大的開口面積，且所述的第二端部可相對 于所述的第一端部移動以使得所述的第一端部能相對于所述的第二端 部以非零度的角度布置。如先前所i侖述，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口可以合適地垂直地朝向(向 上)而細(xì)胞工廠的入口可以水平i也朝向(側(cè)向)。因此，當(dāng)物質(zhì)經(jīng)由 物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備被引入到細(xì)胞工廠內(nèi)時，所述的非零度的角度可以有利 地為大約90度。然而，也可以構(gòu)想其他的非零度的角度。細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)也可以合適地包括物質(zhì)可從其灌注的獨立容器。細(xì) 胞培養(yǎng)系統(tǒng)也可以包括高度可調(diào)整的保持器設(shè)備。獨立容器、物質(zhì)轉(zhuǎn) 移設(shè)備和保持器設(shè)備可以具有先前所描述的特征的任一個。因此，本 發(fā)明的第四方面包括結(jié)合本發(fā)明的先前所描述的方面所描述的任何實 施例或任何特征，只要這些實施例或特征與所述的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)相 答。根據(jù)本發(fā)明的第五方面提供了在多層細(xì)胞工廠內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞的方
法。根據(jù)第五方面的方法包括將物質(zhì)以與先前所描述的方面類似的方 式引入，且因此應(yīng)理解為包括結(jié)合本發(fā)明的先前所描述的方面所描述 的任何實施例或任何特征，只要這些實施例或特征與此方法相容。根據(jù)本發(fā)明的第五方面的方法包括-將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口 ，-將細(xì)胞工廠布置為使得細(xì)胞工廠的層大體上垂直地延伸，其中 連接和布置可以以任何次序執(zhí)4亍，-將細(xì)胞懸浮液通過直接轉(zhuǎn)移介質(zhì)和細(xì)胞到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn) 移設(shè)備灌注，和-將介質(zhì)合適地以保持連接到細(xì)胞工廠的入口的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備從 細(xì)胞工廠灌注出。此方法包括其中關(guān)心對介質(zhì)的分析且其中不要求灌注出細(xì)胞的情 況。然而，此方法也包括其中細(xì)胞懸浮在灌注出的介質(zhì)中的情況。方 法也包括使用任何其他物質(zhì)，例如以下描述的沖洗物質(zhì)或解離物質(zhì)。因此，4艮據(jù)第五方面的方法可以選擇地也包括-將例如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的沖洗物質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備 灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)以沖洗層，和-將沖洗物質(zhì)從細(xì)胞工廠灌注出。一般地，希望從細(xì)胞沖洗殘余介質(zhì)，然而在一些情況中這可能不 是必需的，且因此以上的使用沖洗物質(zhì)的步驟是選擇的。此外，根據(jù)第五方面的方法可以選擇地也包括-將例如AccutaseTM或Trypsin的解離酶經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注 到細(xì)胞工廠內(nèi)以使細(xì)胞從層壁松開，-斷開物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備，-將具有細(xì)胞和解離酶的細(xì)胞工廠在溫育器內(nèi)溫育， -再連接物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備或替代地將另 一個物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì) l包工廠的入口 ，-將介質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)以停止酶反應(yīng)和供 纟會細(xì)力包，和-將介質(zhì)從細(xì)胞工廠灌注出，其內(nèi)合適地包括有懸浮細(xì)胞。 一般地，希望以酶將細(xì)胞解離。然而， 一些細(xì)胞可能不以解離酶 分離且因此以上使用解離酶的步驟是選擇的。 現(xiàn)在從上文應(yīng)清楚的是，本發(fā)明使得操作者將物質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移 設(shè)備直接灌注到布置為使其層垂直地站立的多層細(xì)胞工廠內(nèi)，而不需 要中間物質(zhì)保持容器。有利的實施例是管道與漏斗的組合，然而如以 上所解釋，其他替代也是由本發(fā)明可構(gòu)想和設(shè)想的。概括地，物質(zhì)轉(zhuǎn) 移設(shè)備可以看作具有至少兩個部分。 一個部分相對于另一個部分可移 動或可樞轉(zhuǎn)。這允許通向垂直地站立的層的大體上水平地面向的入口 被轉(zhuǎn)變或延伸為物質(zhì)可灌注到其內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的大體上面向上的 入口 ?？紤]到管道和漏斗的組合，這合并到本發(fā)明的第六方面中。根據(jù) 此第六方面提供了漏斗的使用。特別地，連接到管道的一個端部的漏 斗的使用以將物質(zhì)在管道的另一個端部處引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)。本 發(fā)明的第六方面包括結(jié)合本發(fā)明的先前所描述的方面所描述的任何實 施例或任何特征，只要這些實施例或特征與使用連接到管道的漏斗相


圖1示意性地圖示了根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的用于將細(xì)胞接種到多層細(xì)胞 工廠內(nèi)的方法。圖2和圖3示意性地圖示了根據(jù)本發(fā)明的至少一個實施例的細(xì)胞 培養(yǎng)系統(tǒng)。圖4示意性地圖示了根據(jù)本發(fā)明的至少一個實施例的其中操作者 將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的方法。
具體實施方式
在圖1中圖示的現(xiàn)有技術(shù)方法在"背景技術(shù)"中已事先論述，對 此在此進(jìn)行參考而不進(jìn)行任何進(jìn)一 步論述。參考圖2和圖3,圖中示意性地圖示了根據(jù)本發(fā)明的至少一個實 施例的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)20。細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)20包4舌多層細(xì)月包工廠22、在 此圖示為連接到管道46的漏斗44的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備42和用于保持物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備42的保持器設(shè)備62。在此圖示的多層細(xì)胞工廠22具有十層24a至24j,然而也可以構(gòu) 想其他的層數(shù)。每層24a至24j具有由兩個對置的相對地寬的板狀矩
形壁側(cè)25和在所述的對置的矩形壁側(cè)的邊緣部分相互連接的四個相 對地窄的條形壁側(cè)26限定的流體接收體積。矩形幾何形狀僅是例子， 且也可構(gòu)想其他幾何形狀。 一個或多個通道(未示出)允許層相互流 體連通。多層細(xì)胞工廠分別提供有第一流體連通口 28和第二流體連通口 30,它們二者可以用作入口或出口 。在圖示的例子中，僅第一流體連 通口28用作入口。第二流體連通口 30提供有塞32，塞32可去除以 將第二流體連通口 30用作出口。兩個口 28、 30與所述的一個或多個 通道流體連通， 一個或多個通道又與層24a至24j流體連通。如在圖 中圖示，細(xì)胞工廠22的層24a至24j垂直地站立，這意味著由所述 的相對地寬的板狀矩形壁側(cè)25的每一個所限定的幾何平面垂直于細(xì) 胞工廠22居于其上的水平地面。在多層細(xì)胞工廠22的此位置，流體 連通口 28、 30的開口水平面向，即它們從細(xì)胞工廠22沿平行于水平 地面的線延伸。因此，通過用作入口的第一連通口 28的流動的方向 將大體上是到細(xì)胞工廠22內(nèi)的水平流動。物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備42在此圖示為連接到其內(nèi)灌注物質(zhì)的漏斗44的管 道46，然而其他替代也是可以的。例如，作為漏斗的替代，替代的是 使用具有例如U形或V形截面的鞘或滑動件，其中滑動件向下向細(xì)胞 工廠傾斜或向已連接的管道傾斜，且其中物質(zhì)可以灌注到U形或V形 的開口內(nèi)且沿滑動件經(jīng)由管道或直接向下流動到細(xì)胞工廠內(nèi)。另一個 替代是筒單地使用具有連接到細(xì)胞工廠的入口的一個端部和提供有裂另一個端部的管i。
、0 - p、八、'化 、現(xiàn)在轉(zhuǎn)回到圖2和圖3，且特別地轉(zhuǎn)回到圖2,其中管道的端部 部分的一個提供有適配器48以將管道連接到待用作到細(xì)胞工廠22內(nèi) 的入口的第一連通開口 28。管道46的長度應(yīng)選擇為使得一方面可獲 得有效的物質(zhì)流動且另一方面當(dāng)其被轉(zhuǎn)動或旋轉(zhuǎn)時可允許細(xì)胞工廠22 的容易的操作，以保證被引入的物質(zhì)到達(dá)層24a至24j的所有內(nèi)壁側(cè) (例如用于保證來自細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞將變得接附到所有內(nèi)壁側(cè)且大 體上均勻地沿所有內(nèi)壁側(cè)分布)。漏斗44連接到管道46的另一端。 漏斗44在此例子中具有帶從較小的端部延伸且延伸到管道內(nèi)的管部 分的空心錐形形式。漏斗44定尺寸且構(gòu)造為捕獲待灌注到其內(nèi)的物
質(zhì)且引導(dǎo)物質(zhì)向下到管道46內(nèi)。如從圖中可見，漏斗44的大的流體 接收開口 ，即翻轉(zhuǎn)的錐形形狀的幾何底部面向上且垂直于水平地面平 面，且因此當(dāng)細(xì)胞工廠22定位為使得層24a至24j垂直地站立時， 也垂直于流體連通口 28、 30面向的方向。也可以注意的是，漏斗44 的開口面積，即翻轉(zhuǎn)的錐形形狀的幾何底部的面積相當(dāng)?shù)卮笥诹黧w連 通口 28、 30的開口面積。漏斗44被保持器設(shè)備62保持在細(xì)胞工廠22的入口 28上方的垂 直高度水平處，因此使得重力能有利地影響從漏斗44經(jīng)由管道46且 到細(xì)胞工廠22內(nèi)的物質(zhì)流動。保持器設(shè)備62在此圖示為包括穩(wěn)定底 板64的臺，垂直導(dǎo)向桿66/人底板64延伸。包括夾緊端部7 0的水平 延伸的臂68可沿垂直導(dǎo)向桿66上下移動，以此夾緊端部70的垂直 高度水平可調(diào)整。漏斗44由臂68的夾緊端部70保持，以此漏斗44 相對于細(xì)胞工廠22的入口 28的高度可調(diào)整。圖3圖示了如何將管道46合適地接附到保持器設(shè)備62而無污染 待再連接到細(xì)胞工廠22的管道端部的風(fēng)險，例如在細(xì)胞工廠22及其 內(nèi)含物已溫育后。在此圖中圖示了管道46已綁到臂68的部分72,部 分72位于導(dǎo)向桿66的與夾緊端部7Q側(cè)對置的另一個側(cè)上。注意到 管道46的接附點略^f效從管道端部分開，以允許管道端部無任何接觸 直至它再連接到細(xì)胞工廠22。圖4示意性地圖示了根據(jù)本發(fā)明的至少一個實施例的其中操作者 將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞工廠22內(nèi)的方法。在圖2和圖3中圖示的細(xì) 胞培養(yǎng)系統(tǒng)現(xiàn)在放置在標(biāo)準(zhǔn)LAF臺80內(nèi)。為設(shè)置細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)可能 需要大約五分鐘，且將例如150Q ml的細(xì)胞懸浮液經(jīng)由漏斗44和管 道46灌注到細(xì)胞工廠22內(nèi)也可能需要大約五分鐘。這可以與典型地 需要至少20分鐘來將相同的量引入到細(xì)胞工廠22的現(xiàn)有技術(shù)方法相 比較。如在圖中示出，操作者可以容易地將其臂插入到LAF臺80的 罩82下方，以將物質(zhì)從獨立的并瓦84灌注到漏斗44內(nèi)。取決于待引 入到細(xì)胞工廠22內(nèi)的物質(zhì)的體積，可以使用不同個數(shù)的瓶。例如， 當(dāng)最初從常規(guī)的組織培養(yǎng)燒瓶收獲細(xì)胞時，常規(guī)的是將1500 ml的細(xì) 胞懸浮液合適地分為三瓶。當(dāng)操作者將第一瓶排空時，他或她容易地 取到下一瓶且將其內(nèi)含物向下灌注到漏斗內(nèi)，等等。對于沖洗或解離 物質(zhì)，通常4吏用單一的弁瓦等則足矣。應(yīng)注意的是，漏斗可以比4寺灌注
到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)的體積相當(dāng)?shù)匦?。這是因為漏斗僅用于捕獲且引 導(dǎo)被灌注的物質(zhì)而非包含它。因此，漏斗可以放置在賦予有效流動的高度處且這對于操作者灌注仍是方便的，盡管LAF臺的屏蔽罩。從上文應(yīng)清楚的是，本發(fā)明提供了將物質(zhì)向多層細(xì)胞工廠內(nèi)的快 速引入，這導(dǎo)致了物質(zhì)在所有層上的有效和均勻的分布。在接種細(xì)胞 時這是特別地有利的，因為細(xì)胞應(yīng)優(yōu)選地均勻地接附且分布在所有層 內(nèi)。也應(yīng)清楚的是，整個過程是方便的，因為同一個物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備可 以用于所有待引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)。實際上，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備 可以保持連接到細(xì)胞工廠，同時將物質(zhì)從細(xì)胞工廠去除以允許隨后將 新的物質(zhì)引入而無任何寶貴的時間的損失。
權(quán)利要求
1.一種將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的方法，其包括將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口，將細(xì)胞工廠布置為使得細(xì)胞工廠的層大體上垂直地延伸，其中所述的布置在將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口前、后或同時進(jìn)行，以及將物質(zhì)從獨立容器經(jīng)由直接將物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)。
2. —種將物質(zhì)引入到具有用于接收物質(zhì)的入口的多層細(xì)胞工廠 內(nèi)的方法，其包括將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口 ，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備包括其自 己的入口，用于接收物質(zhì)，且直接將物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠的入口，和當(dāng)物質(zhì)轉(zhuǎn)移i殳備的入口的開口區(qū)面向與細(xì)月包工廠的入口的開口區(qū) 不同的另一個方向時，將物質(zhì)灌注到物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口內(nèi)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中灌注物質(zhì)的動作包括 將物質(zhì)灌注到具有比細(xì)胞工廠的入口更大的開口面積的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備 的入口內(nèi)。
4. 一種將物質(zhì)引入到具有用于接收物質(zhì)的入口的多層細(xì)胞工廠 內(nèi)的方法，所述的入口具有第一開口面積，該方法包4舌將包括具有大于所述的第 一 開口面積的第二開口面積的入口的物 質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口，將細(xì)胞工廠布置為使得細(xì)胞工廠的層大體上垂直地延伸，其中所 述的布置在將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口前、后或同時進(jìn) 行，和將物質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的方法，其中灌注物質(zhì)的動作包括 將物質(zhì)從獨立容器灌注到直接將物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè) 備內(nèi)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中從獨立容器灌注物質(zhì) 的動作包括將物質(zhì)從獨立容器的出口灌注到具有比所述的出口的開口 面積更大的開口面積的物質(zhì)轉(zhuǎn)移i殳備的入口內(nèi)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的獨立容器是瓶，其 中從獨立容器的出口灌注物質(zhì)的動作包括將物質(zhì)從瓶的頂部部分灌注 出。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7的任一項所述的方法，其中所迷的物質(zhì) 轉(zhuǎn)移設(shè)備包括漏斗，其中灌注或引入物質(zhì)的動作包括將物質(zhì)灌注到漏 斗內(nèi)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備包括 在其端部的一個處連接到漏斗的管道，其中連接物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的動作 包括將管道的另一個端部連接到細(xì)胞工廠的入口 。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，包括調(diào)整用于在細(xì)胞工廠 的入口上方的選擇的高度處保持漏斗的保持器設(shè)備，且將漏斗安裝到 保持器設(shè)備，使得漏斗位于選擇的高度處，其中調(diào)整和安裝的動作可 以以任何次序進(jìn)行。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1至10的任一項所述的方法，其中所述的物 質(zhì)包括用于在細(xì)胞工廠內(nèi)接種細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的內(nèi)部體 積小于在細(xì)胞工廠內(nèi)待接種的細(xì)胞懸浮液的總體積。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1至10的任一項所述的方法，其中所迷的物 質(zhì)包括例如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的沖洗物質(zhì)，以用于沖洗已接種 在細(xì)胞工廠內(nèi)的細(xì)胞。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1至10的任一項所述的方法，其中所述的物 質(zhì)包括例如AccutaseTM或Trypsin的解離酶，以用于使已接種的細(xì)胞 從層壁松開。
15. 根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的方法，包括在將所述的物質(zhì)引 入到細(xì)胞工廠前，通過與細(xì)胞工廠的入口分開的細(xì)月包工廠的出口去除 包含在細(xì)胞工廠內(nèi)的其他材料。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備在 去除所述的其他材料的動作期間保持連接到細(xì)胞工廠的入口 。
17. —種細(xì)J]包培養(yǎng)系統(tǒng)，其包括具有用于接收物質(zhì)的入口的多層細(xì)胞工廠，和 物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備，具有 可連4妻到細(xì)胞工廠的入口的第一端部，和具有用于^t矣收物質(zhì)的入口的第二端部，以此將4矣收到的物質(zhì)直4妄 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞工廠內(nèi)，其中物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口具有比細(xì)胞工廠的入口大的開口面積， 且其中所述的第二端部可相對于所述的第一端部移動，以使得所述的 第一端部能相對于所述的第二端部以非零度的角度布置。
18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的系統(tǒng)，其中所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備包 括漏斗，其中物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口為漏斗的較寬開口。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的系統(tǒng)，其中所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備包 括在其端部的一個處可連接到漏斗的管道，其中管道的另一個端部是 可連接到細(xì)胞工廠的入口所述的第一端部。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的系統(tǒng)，包括高度可調(diào)整的保持 器設(shè)備，以將漏斗保持在細(xì)胞工廠的入口上方的選擇的高度處。
21. 根據(jù)權(quán)利要求17至20的任一項所述的系統(tǒng)，包括具有出口 的獨立容器，物質(zhì)可從出口灌注到物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備內(nèi)以直接轉(zhuǎn)移到細(xì)胞 工廠內(nèi)。
22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的系統(tǒng)，其中物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備的入口具 有比獨立容器的所述的出口的開口面積更大的開口面積。
23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的系統(tǒng)，其中所述的獨立容器是瓶， 且其中獨立容器的出口位于瓶的頂部部分處。
24. 根據(jù)權(quán)利要求17至23的任一項所述的系統(tǒng)，其中所述的細(xì) 胞工廠包括與細(xì)胞工廠的入口分開的出口 ，以使得在物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連 接到細(xì)胞工廠的入口時能從細(xì)胞工廠移除物質(zhì)。
25. —種在多層細(xì)胞工廠內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞的方法，其包括 將物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞工廠的入口 ，將細(xì)胞工廠布置為使得細(xì)胞工廠的層大體上垂直地延伸，其中連 接和布置可以以任何次序執(zhí)4亍，將細(xì)胞懸浮液通過直接轉(zhuǎn)移介質(zhì)和細(xì)胞到細(xì)胞工廠內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)移 設(shè)備灌注，和將介質(zhì)從細(xì)胞工廠灌注出。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，包括將例如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的沖洗物質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌 注到細(xì)胞工廠內(nèi)以沖洗層，和將沖洗物質(zhì)從細(xì)胞工廠灌注出。
27. 根據(jù)權(quán)利要求25或26所述的方法，包括將例如AccutaseTM或Trypsin的解離酶經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注到 細(xì)胞工廠內(nèi)以使細(xì)胞從層壁松開， 斷開物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備，將具有細(xì)胞和解離酶的細(xì)胞工廠在溫育器內(nèi)溫育， 再連接物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備或替代地將另 一個物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備連接到細(xì)胞 工廠的入口 ，將介質(zhì)經(jīng)由物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備灌注到細(xì)胞工廠內(nèi)，以停止酶反應(yīng)和供 《合細(xì)力包，和將介質(zhì)從細(xì)胞工廠灌注出，其內(nèi)合適地包括有懸浮細(xì)胞。
28. 根據(jù)權(quán)利要求25至27的任何一項所述的方法，其中在將沖 洗物質(zhì)或介質(zhì)從細(xì)胞工廠灌注出的動作期間，所述的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備保 持連4妻到細(xì)胞工廠的入口 。
29. 連接到管道的一個端部用于在管道的另一個端部處將物質(zhì)引 入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的漏斗的使用。
30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的使用，包括進(jìn)行在根據(jù)權(quán)利要求1 至16或25至28中的任一項所述的方法內(nèi)限定的動作。
31. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的使用，其中所述的漏斗、管道和多 層細(xì)胞工廠形成了根據(jù)權(quán)利要求17至24的任一項所述的細(xì)胞培養(yǎng)系 統(tǒng)的部分。
全文摘要
本發(fā)明涉及將物質(zhì)引入到多層細(xì)胞工廠內(nèi)的方法。將物質(zhì)灌注到例如連接到細(xì)胞工廠的漏斗和管道的物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備內(nèi)，物質(zhì)轉(zhuǎn)移設(shè)備將物質(zhì)直接轉(zhuǎn)移到布置為使其層大體上垂直延伸的細(xì)胞工廠內(nèi)。本發(fā)明也涉及細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。
文檔編號C12M3/04GK101155909SQ200680011672
公開日2008年4月2日 申請日期2006年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月12日
發(fā)明者A·孫德伯格, L·桑德 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司