專利名稱：：與免疫球蛋白g結(jié)合的核酸及其利用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及對免疫球蛋白G(IgG)具有結(jié)合活性的核酸。通過該核酸使通用抗體的純化、標(biāo)記、固定化、修飾等成為可能。
背景技術(shù)：
：IgG為血清的主要蛋白質(zhì)之一，在免疫系統(tǒng)中擔(dān)任識別異物、引導(dǎo)排除的重要角色?；钣迷撎匦詫⑵鋺?yīng)用至各種疾病的治療藥、診斷藥或試劑中的研究正在廣泛進(jìn)行。其中之一是在對癌癥的抗體療法中，正在進(jìn)行以下方面的開發(fā)利用依賴抗體的細(xì)胞毒性(ADCC)或依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒性(CDC)的療法，用抗體特異性阻斷癌細(xì)胞中表達(dá)的受體等進(jìn)行饑餓策略(starvationtactics)的分子靶向藥物，或者利用癌細(xì)胞特異性抗體中結(jié)合有抗癌劑的抗體的導(dǎo)彈(missle)療法等。其中，抗HER2受體人化單克隆抗體作為乳腺癌等惡性腫瘤的治療劑被開發(fā)上市(商品名赫賽汀(Herceptin))。另外，利用其與抗原特異性結(jié)合的性質(zhì)，IgG被用作以免疫學(xué)測定為代表的細(xì)胞或蛋白質(zhì)的功能解析、基因的表達(dá)篩選等各種生化學(xué)實(shí)驗(yàn)的必需工具。IgG為2條H鏈與2條L鏈以二硫鍵(S-S鍵)結(jié)合的Y字形結(jié)構(gòu)。若將IgG用作為蛋白質(zhì)分解酶的木瓜蛋白酶分解，則可分為由恒定區(qū)組成的Fc片段及含有抗原結(jié)合部位的Fab片段。另外，IgG有亞群存在，對于人IgG有IgGl、IgG2、IgG3、IgG4四種?？贵w為使用抗體純化用柱從血清或雜交瘤(hybridoma)細(xì)胞培養(yǎng)上清液純化而得。通常在第一階段的純化中使用ProteinA作為配體。ProteinA為金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)產(chǎn)生的分子量42kDa的蛋白質(zhì)，牢固結(jié)合于IgG的Fc區(qū)域。ProteinA價(jià)格高，且根據(jù)動(dòng)物種或亞群的不同有不能獲得高純度抗體的情況，或在使用了ProteinA的純化條件下有抗體變性的情況，目前正在尋求性能超過ProteinA的新型分離劑。由螢光物質(zhì)或酶標(biāo)記的抗體被用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)、組織染色、ELISA、蛋白質(zhì)印跡法、流式細(xì)胞術(shù)等各種實(shí)驗(yàn)。例如在組織染色中，可以通過使用結(jié)合有FITC等螢光物質(zhì)的抗體來研究目標(biāo)蛋白質(zhì)的組織定位。另外，在ELISA或蛋白質(zhì)印跡法等的測定中，首先使一抗與欲檢測的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，接著使與該一抗結(jié)合的經(jīng)標(biāo)記的二抗發(fā)生反應(yīng)，藉此進(jìn)行更高感度的測定。例如，在GE醫(yī)療(healthcare)公司的ECL系統(tǒng)中，使用結(jié)合有辣根過氧化物酶的抗體作為二抗，通過其催化作用使魯米諾氧化，發(fā)光，藉此檢測目標(biāo)物質(zhì)。但是，通過化學(xué)修飾使標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合于抗體費(fèi)時(shí)費(fèi)力，根據(jù)情況的不同抗體有時(shí)會變性，需要開發(fā)新的抗體標(biāo)記技術(shù)。另外，也期待有更便宜且高感度的經(jīng)標(biāo)記化了的二抗。作為針對各種疾病的診斷用芯片，正在進(jìn)行抗體芯片的開發(fā)。其課題之一是在抗體對基板的固定方法中，使抗體的抗原結(jié)合部位在表面以高活性狀態(tài)高密度地排列的方法的開發(fā)。在利用非特異性吸附的固定法或利用氨基的固定法中，抗體無秩序地排列不能獲得充分的靈敏度。作為對于癌或風(fēng)濕病等疾病的分子靶向治療藥，抗體的開發(fā)研究被急速推進(jìn)，至今已有約20種抗體藥物被實(shí)用化，另外全世界正在實(shí)施約300種候選抗體藥物的臨床試驗(yàn)。開發(fā)之初，使用小鼠單克隆抗體作為抗體藥物，但是，小鼠抗體在人免疫系統(tǒng)被識別為異物，誘導(dǎo)人抗小鼠抗體的產(chǎn)生，因此不能充分提高治療效果。因而使用基因重組技術(shù)，開發(fā)了將小鼠抗體的恒定區(qū)域置換成人抗體的恒定區(qū)域的嵌合體抗體或?qū)⒊∈罂贵w的互補(bǔ)性決定區(qū)域以外的部分全部置換為人抗體的人化抗體。另外，亦正在開發(fā)使用了產(chǎn)生人抗體的小鼠(KM小鼠)的人單克隆抗體的制作方法?？贵w療法中使用的單克隆抗體藥物之一為通過使抗癌劑或毒素結(jié)合于特異性識別癌細(xì)胞的抗體，使其內(nèi)化(intemalization)到靶細(xì)胞，將靶細(xì)胞殺死?？拱﹦┗蚨舅乇粌?nèi)化后需從抗體脫離。因此，想使抗體與抗癌劑或毒素結(jié)合的連接基中含有蛋白酶識別部位等，在被內(nèi)化后實(shí)施使抗癌劑或毒素從抗體脫離之類的操作。例如作為急性骨髓性白血病的治療藥而開發(fā)的gemtuzumabozogamicin(吉妥單抗(Mylotarg))為將加利車霉素(calicheamicin)衍生物結(jié)合于人化抗CD33單克隆抗體的藥物，因此若將吉妥單抗結(jié)合于CD33，在細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化，則加利車霉素衍生物發(fā)生游離，將細(xì)胞殺死。因此，將抗體與抗癌劑或毒素結(jié)合的連接基的設(shè)計(jì)很重要，為了引出更高的藥效，正在進(jìn)行新型連接基的開發(fā)。近年來，RNA適配體(aptamer)在治療藥、診斷藥、試劑的應(yīng)用受到注目，有幾個(gè)RNA適配體己進(jìn)入臨床階段或?qū)嵱没A段。于2004年12月，美國承認(rèn)了世界首創(chuàng)的為RNA適配體藥物的瑪庫根(Macugen)作為老年性黃斑變性癥的治療藥。RNA適配體是指與蛋白質(zhì)等目標(biāo)物質(zhì)特異性結(jié)合的RNA，可使用SELEX法(指數(shù)級富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment))審!j備(Ellington等，(1990)Nature,346,818-822;Tuerk等，(1990)Science,249,505-510)。SELEX法是指從約10"的具有不同核苷酸序列的RNA池(pool)中篩選與目標(biāo)物質(zhì)特異性結(jié)合的RNA的方法。使用的RNA為約40個(gè)殘基左右的隨機(jī)序列夾在引物序列之間的結(jié)構(gòu)。使該RNA池與目標(biāo)物質(zhì)合并，使用過濾器等只回收與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合的RNA。將回收的RNA用RT-PCR擴(kuò)增，將其用作以后循環(huán)的模板。通過將該作業(yè)反復(fù)進(jìn)行約10次，可以獲得與目標(biāo)物質(zhì)特異性結(jié)合的RNA適配體。當(dāng)獲得的RNA適配體促進(jìn)或抑制目標(biāo)物質(zhì)的功能時(shí)，可將該RNA適配體應(yīng)用于藥品等。實(shí)際上，使用SELEX法制備與作為人翻譯起始因子的elF4A(日本專利特開2002-300885號公報(bào)，Oguro等，(2003)RNA9,394-407)或elF4E(日本專利特開2004-344008號公報(bào)，Mochizuki等，(2005)RNA11,77-89)、與骨代謝相關(guān)的受體RANK(ReceptorActivatorofNF-KB、Mori等，(2004)NucleicAcidsRes.32,6120-6128)等特異性結(jié)合的RNA適配體。也有關(guān)于通過抗DNA自身抗體的抗原識別部位結(jié)合的RNA適配體的報(bào)道(Kim等,(2003)BiochemicalandBiophysicalResearchCommunication300,516-523)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于，提供針對IgG的適配體及其利用方法等。本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果成功制備了針對IgG高度設(shè)計(jì)的優(yōu)良適配體，因而完成本發(fā)明。亦即，本發(fā)明提供以下的發(fā)明等。[1〗結(jié)合于IgG的Fc部分的適配體。[2]上述[l]的適配體，其中，與作為IgG的Fc部分的人IgG的Fc部分特異性結(jié)合。[3]上述[1]或[2]的適配體，其中，構(gòu)成適配體的總核苷酸數(shù)為40個(gè)以下。[4]上述[1]至[3]中任何一種適配體，其中，適配體中含有的至少一種核苷酸為在核糖的2'位含有選自氫原子、氟原子、羥基及-O-Me基的至少2種基團(tuán)的核苷酸。[5]上述[3]的適配體，其中，含有GGUG(C/A)(U/T)所示的核苷酸序列。[6]上述[5]的適配體，其中，GGUG(C/A)(U/T)中第3個(gè)的U是在核糖的2'位羥基被氟原子取代的核苷酸。[7]上述[6]的適配體，其中，GGUG(C/A)(U/T)中的各核苷酸(除了第3個(gè)的U之外)分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。[8]上述[5]的適配體，其中，GGUG(C/A)(U/T)為GGUGCU或GGUGAU。[9]上述[5]的適配體，其中，還含有ANC(N為選自A、G、C、U及T的核苷酸)所示的核苷酸序列。[10]上述[9]的適配體，其中，ANC中的各核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。[11]上述[9]的適配體，為以下(i)至(iii)中的任一者(i)于GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGA，且于ANC的3，側(cè)含有UCC;(ii)于GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGNxlA，且于ANC的3'側(cè)含有UNx2CC(Nx,、Nx2分別為選自A、G、C、U及T的核苷酸)；或，(iii)于GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGNx3Nx4A，且于ANC的3，側(cè)含有UNx5Nx6CC(Nx3、Nx4、Nx5、Nx6分別為選自A、G、C、U及T的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>[式中，N1、N2、N3、N4、N5分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T的核苷酸、>^及1^3為互相互補(bǔ)的核苷酸、N"及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸、(i)GGUG(C/A)(U/T)中的各核苷酸(除了第3個(gè)的U之外)、(ii)AN1。中的各核苷酸、(iii)N^NS的各核苷酸分別為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸]。[14]上述[ll]的適配體，其中，環(huán)(loop)結(jié)構(gòu)中的所有核苷酸的于核糖的2'位的羥基被氫原子取代。[15]上述[13]的適配體，其中，具有(I)至(III)中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)的適配體具有以下(r)至(nr)中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)核苷酸)。[12]上述[ll]的適配體，其中，GGA、GGNxlA或GGNx3Nx4A含有的GG以及UCC、UNx2CC或UNx5Nx6CC含有的CC分別為于核糖的2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸。[13]上述[6]的適配體，其中，具有以下(I)至(III)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)(!)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>(r)[式中，N1、N2、N3、N4、N5的意義分別與上述[13灘同]。[16]上述[3]的適配體，其中，是含有用AGGUG(C/A)(U/T)C表示的核苷酸序列，AGGUG(C/A)(U/T)C中的第4個(gè)的U為于核糖的2'位的羥基被氟原子取代的核苷酸，AGGUG(C/A)(U/T)C中的各核苷酸(除了第4個(gè)的U之外)分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。[17]上述[16]的適配體，其中，還含有GANCU(N為選自A、G、C、U及T的核苷酸)表示的核苷酸序列，GANCU中的各核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。[18]上述[6]的適配體，其中，具有以下(Ia)至(IIIa)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>[式中，N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T的核苷酸、W及N3為互相互補(bǔ)的核苷酸、N"及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸、#及1^7為互相互補(bǔ)的核苷酸、(i)GGUG(C/A)(U/T)中的各核苷酸(除了第3個(gè)的U之外)、(ii)AN'C中的各核苷酸、(iii)N2至W的各核苷酸分別為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸]。[19]上述[18]的適配體，其中，具有(Ia)至(IIIa)中任一項(xiàng)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)的適配體具有以下(Ia')至(IIIa')中任一項(xiàng)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>[式中，N1、N2、N3、N4、N5的意義分別與上述[18]相同]。[20]上述[19]的適配體，其中，N4、W分別為于2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸，N5、N分別為于2，位含有羥基的核苷酸。[21]上述[19]的適配體，其中，具有(Ia')至(IIIa')中任一項(xiàng)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)的適配體具有以下(Ia"，)至(nia"')中任一項(xiàng)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)[22]上述[3]的適配體，為以下(a)至(c)中的任一者(a)由序列編號1至23中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列(尿嘧啶也可為胸腺嘧啶)組成的適配體；(b)由序列編號1至23中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列(尿嘧啶也可為胸腺嘧啶)表示的核苷酸序列中的1個(gè)或數(shù)個(gè)核苷酸經(jīng)取代、缺失、插入或附加后的核苷酸序列所組成的適配體；(c)選自該(a)的連結(jié)物、該(b)的連結(jié)物以及該(a)與(b)的連結(jié)物的連結(jié)物。[23]復(fù)合體，其中，含有上述[1]至[22]中任一項(xiàng)記載的適配體及與其結(jié)合的功能性物質(zhì)。[24]上述[23]的復(fù)合體，其中，功能性物質(zhì)為親和性物質(zhì)、標(biāo)記用物質(zhì)、酶、藥物、毒素或藥物傳遞介質(zhì)。[25]固相載體，其中，固定有上述[1]至[22]中任一項(xiàng)記載的適配體或者上述[23]或[24]的復(fù)合體。[26]上述[25]的固相載體，其中，固相載體為基板、樹脂、盤(plate)、過濾器、筒(cartridge)、柱或多孔質(zhì)材。[27]醫(yī)療用設(shè)備，其中，含有上述[25]或[26]的固相載體。[28]上述[27]的設(shè)備，其中，醫(yī)療用設(shè)備為血液凈化用設(shè)備。[29]診斷用或檢查用試劑，其中，含有上述[1]至[22]中任一項(xiàng)記載的適配體、上述[23]或[24]的復(fù)合體或者上述[25]或[26]的固相載體。[30]藥物，其中，含有上述[1]至[22]中任一項(xiàng)記載的適配體，或者上述[23]或[24]的復(fù)合體。[31]抗體純化或濃縮方法，其中，包括使IgG抗體吸附到上述[25]或[26]的固相載體，再通過洗脫液使所吸附的IgG抗體洗脫的步驟。[32]上述[31]的方法，其中，洗脫液為中性溶液。[33]純化抗體的制造方法，其中，包括制備IgG抗體，再將制備的IgG抗體通過上述[25]或[26]的固相載體純化的步驟。[34]IgG檢測及/或定量方法，其中，包括使用上述[1]至[22]中任一項(xiàng)記載的適配體、上述[23]或[24]的復(fù)合體或者上述[25]或[26]的固相載體，測定試樣中有無IgG及/或IgG的量的步驟。圖1表示序列編號1所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖2表示序列編號2所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖3表示序列編號3所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖4表示序列編號4所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖5表示序列編號5所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖6表示序列編號6所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖7表示序列編號7所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖8表示序列編號8所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖9表示序列編號9所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖10表示序列編號10所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖11表示序列編號11所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖12表示序列編號12所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖13表示序列編號13所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖14表示序列編號14所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖15表示序列編號15所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖16表示序列編號16所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖17表示序列編號17所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖18表示序列編號18所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖19表示序列編號19所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖20表示序列編號20所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖21表示序列編號21所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖22表示序列編號22所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖23表示序列編號23所示的RNA的預(yù)測二級結(jié)構(gòu)。圖24顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號1所示的RNA與人IgG-Fc的結(jié)合狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgG-Fc，觀察與RNA的相互作用?？v軸的RU表示相對單位(RelativeUnit)，Resp.Diff.表示反應(yīng)差異(ResponseDifferences)。橫軸表示時(shí)間(秒)?？v軸、橫軸中的這些符號在以下的圖25至圖31、42中也相同。圖25顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號3所示的RNA與人IgG-Fc結(jié)合的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgG-Fc，觀察與RNA的相互作用。圖26顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示隨機(jī)序列的RNA池與人IgG-Fc結(jié)合的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgG-Fc，觀察與RNA的相互作用。圖27顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號1所示的RNA與人IgGl及人FqRI的復(fù)合體形成的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PdyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgGl將其結(jié)合于RNA，接著噴射FcyRI，觀察與IgGl的相互作用。圖28顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示含有隨機(jī)序列的RNA池與人IgGl及人FcYR結(jié)合的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgGl，再噴射Fc萍。圖29顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號1所示的RNA與人IgGl及ProteinA的復(fù)合體形成的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgGl將其結(jié)合于RNA，接著噴射ProteinA，觀察與IgGl的相互作用。圖30顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號1所示的RNA適配體與ProteinA結(jié)合的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射ProteinA，觀察與RNA的相互作用。圖31顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號17-2所示的RNA適配體與人IgGl結(jié)合的狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射IgGl，觀察與RNA的相互作用。圖32表示將序列編號15及17所示的RNA作為抗體純化用分離劑的配體使用而將IgGl下拉(pulldown)時(shí)的SDS-PAGE的結(jié)果。將結(jié)合有Poly(A)的RNA固定于結(jié)合有Poly(dT)的珠，進(jìn)行人IgGl的下拉。泳道1:為將序列編號15所示的RNA作為配體使用的情況。泳道2:為將序列編號17所示的RNA作為配體使用的情況。泳道3:為將ProteinA作為配體使用的情況。泳道4:為將rProteinA作為配體使用的情況。圖33表示將序列編號15所示的RNA作為抗體純化用分離劑的配體使用，從人血清純化人IgG時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。將結(jié)合有生物素的RNA固定于抗生蛋白鏈菌素(Streptavidin)的珠，從人血清將IgG下拉。使用3種中性洗脫液洗脫結(jié)合于RNA的IgG。為了確認(rèn)中性的洗脫液是否可將IgG高效洗脫，向完成洗脫的珠中加入試樣緩沖液，進(jìn)行加熱，用SDS-PAGE進(jìn)行分析。泳道l:分子量標(biāo)記(marker)蛋白質(zhì)。泳道2:用由200mM氯化鉀及10mMEDTA組成的洗脫液從使用RNA作為配體的珠洗脫的IgG。泳道3:用由200mM氯化鉀、10mMEDTA及10%甘油組成的洗脫液從使用RNA作為配體的珠洗脫的IgG。泳道4:用由600mM氯化鉀、10mMEDTA及10%甘油組成的洗脫液從使用RNA作為配體的珠洗脫的IgG。泳道5:使用rProteinA瓊脂糖珠(Sepharosebeads)將IgG下拉時(shí)，用pH3甘氨酸緩沖液洗脫的IgG。泳道6:結(jié)合于用泳道2的洗脫液處理后的珠的IgG。泳道7:結(jié)合于用泳道3的洗脫液處理后的珠的IgG。泳道8:結(jié)合于用泳道4的洗脫液處理后的珠的IgG。泳道9:對于使用RNA作為配體的珠，不進(jìn)行洗脫處理，而直接向珠加入試樣緩沖液回收的IgG。泳道10:結(jié)合于用泳道5的洗脫液處理后的珠的IgG。圖34表示在進(jìn)行序列編號15所示的RNA是否可反復(fù)作為抗體純化用分離劑的配體使用的試驗(yàn)時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。將結(jié)合有在抗體純化中使用了一次的RNA的分離劑用尿素清洗，再次進(jìn)行抗體純化。反復(fù)操作2次。泳道l:分子量標(biāo)記蛋白質(zhì)。泳道2:第一次純化獲得的IgG。泳道3:第二次純化獲得的IgG。泳道4:第三次純化獲得的IgG。圖35表示將序列編號16及序列編號17-2所示的RNA作為抗體純化用分離劑的配體使用，從人血清純化人IgG時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。泳道1:分子量標(biāo)記蛋白質(zhì)。泳道2:使用序列編號15所示的RNA作為配體時(shí)被下拉的IgG。泳道3:使用序列編號16所示的RNA作為配體時(shí)被下拉的IgG。泳道4:使用序列編號17-2所示的RNA作為配體時(shí)被下拉的IgG。泳道5:使用rProteinA作為配體時(shí)下拉的IgG。泳道6:人血清。圖36表示使用經(jīng)硫醇偶合劑固定的RNA適配體進(jìn)行抗體純化時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。泳道l:分子量標(biāo)記蛋白質(zhì)。泳道2:使用序列編號15所示的RNA作為配體，加入5nL人血清時(shí)被下拉的IgG。泳道3:使用序列編號15所示的RNA作為配體，加10pL人血清時(shí)被下拉的IgG。泳道4:對照組(blank)(向沒有結(jié)合配體的珠中加入5pL人血清時(shí)被下拉的血清蛋白)。泳道5:使用rProteinA珠，加入5pL人血清時(shí)被下拉的IgG。泳道6:標(biāo)準(zhǔn)人IgGl。泳道7:人血清。圖37表示使用經(jīng)氨基偶合劑固定的RNA適配體，迸行抗體純化時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。加樣半量的回收試樣。泳道l:分子量標(biāo)記蛋白質(zhì)。泳道2:使用序列編號15所示的RNA(固定化量25嗎)作為配體，從10pL的人血清回收的IgG。泳道3:使用序列編號15所示的RNA(固定化量75嗎)作為配體，從10iaL的人血清回收的IgG。圖38表示使用經(jīng)氨基偶合劑固定的RNA適配體，進(jìn)行抗體純化時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。下拉中使用10nL的人血清。泳道l:分子量標(biāo)記蛋白質(zhì)。泳道2:使用序列編號17-7所示的RNA作為配體的情況。泳道3:使用序列編號17-8所示的RNA作為配體的情況。泳道4:使用序列編號17-7-107所示的RNA作為配體的情況。泳道5:使用序列編號15所示的RNA作為配體的情況。泳道6:使用rProteinA樹脂的情況。泳道7:標(biāo)準(zhǔn)人IgGl(6昭)。泳道8:人血清(0,2pL)。圖39表示使用各種洗脫液洗脫時(shí)的SDS-PAGE結(jié)果。泳道1:分子量標(biāo)記蛋白質(zhì)。泳道2:200mM氯化鉀+10mMEDTA+pH7.6的10mMTris。泳道3:200mM氯化鉀+pH7.6的10mMTris。泳道4:300mM氯化鈉+10mMEDTA+pH7.6的10mMTris。泳道5:10mMEDTA+pH7.6的10mMTris。圖40表示為了評估經(jīng)加熱再生的適配體樹脂的特性而進(jìn)行的SDS-PAGE的結(jié)果。將已使用3次的適配體樹脂10|iL用2種方法進(jìn)行加熱處理，再次使用IOjiL人血清，進(jìn)行下拉實(shí)驗(yàn)。將中性洗脫級分用SDS-PAGE分析。泳道1:序列編號17-18所示的適配體樹脂在超純水中，于85'C加熱5分鐘。泳道2:序列編號17-17所示的適配體樹脂在6M尿素中，于65'C加熱15分鐘。圖41表示對經(jīng)樹脂結(jié)合型oligo純化的IgG進(jìn)行SDS-PAGE的結(jié)果。向共價(jià)結(jié)合有序列編號15所示的RNA的樹脂結(jié)合型oligo10|iL中加入10|aL的人血清，對由中性洗脫液洗脫的級分用SDS-PAGE分析。圖42顯示通過表面等離振子共振分析獲得的傳感圖，該圖表示序列編號17-7所示的RNA與作為抗體藥品的利妥昔單抗(Rituxan)的結(jié)合狀態(tài)。將于3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA用A-dT鍵固定于傳感芯片，噴射利妥昔單抗，觀察與RNA的相互作用。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供針對免疫球蛋白G(IgG)的適配體。所謂的適配體是對規(guī)定的目標(biāo)分子具有結(jié)合活性的核酸分子。適配體通過與規(guī)定的目標(biāo)分子結(jié)合，也可具有抑制規(guī)定的目標(biāo)分子活性的作用。本發(fā)明的適配體可為RNA、DNA、修飾核酸或它們的混合物。本發(fā)明的適配體可為直鏈狀或環(huán)狀的形態(tài)。本發(fā)明的適配體可以特異地結(jié)合在IgG的Fc部分。本發(fā)明的適配體可以結(jié)合的IgG，列舉例如人IgG(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、倉鼠IgG、豬IgG。本發(fā)明的適配體可以結(jié)合到IgG的Fc部分的任意部分。IgG的Fc部分己知對在巨噬細(xì)胞或中性白細(xì)胞等免疫細(xì)胞中表達(dá)的受體蛋白質(zhì)(FcyR)進(jìn)行結(jié)合，本發(fā)明的適配體也可以結(jié)合到與擔(dān)任結(jié)合FcyR作用的Fc部分所不同的Fc部分。另外，已知ProteinA結(jié)合于IgG的Fc部分，本發(fā)明的適配體也可以結(jié)合到與擔(dān)任結(jié)合ProteinA作用的Fc部分所不同的Fc部分。本發(fā)明的適配體只要可以與IgG結(jié)合，就沒有特別的限定，例如，以解離常數(shù)(Kd值)為基礎(chǔ)進(jìn)行評估時(shí)，可具有約lxlO_6M以下，優(yōu)選約lxlO^M以下，更優(yōu)選約lxlO—SM以下的Kd。Kd值例如可以根據(jù)利用表面等離振子共振的方法算出。對本發(fā)明適配體的長度并無特別限定，通?？蔀榧s16至約200核苷酸，例如約100核苷酸以下，優(yōu)選約50核苷酸以下，更優(yōu)選約40核苷酸以下，再更優(yōu)選約30核苷酸以下，最優(yōu)選約25核苷酸以下。另外，本發(fā)明的適配體的長度也可在例如約18核苷酸以上，優(yōu)選約20核苷酸以上?？偤塑账釘?shù)越少，越容易化學(xué)合成及大量生產(chǎn)，且在成本方面的優(yōu)勢也大。另外，認(rèn)為化學(xué)修飾也容易，機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定性也高，毒性也低。本發(fā)明的適配體中含有的各核苷酸分別相同或不同，可以為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸(S卩，未取代的核苷酸)或是于核糖2'位的羥基被任意的原子或基團(tuán)取代的核苷酸。作為該任意的原子或基團(tuán)，可以舉出例如被氫原子、氟原子或-O-烷基(例如-O-Me基)、-O-?；?例如-O-CHO基)、氨基(例如-NH2基)取代的核苷酸。本發(fā)明的適配體可以含有以GGUG(C/A)(U/T)表示的核苷酸序列。作為GGUG(C/A)(U/T)，可以舉出例如GGUGCU、GGUGAU、GGUGCT、GGUGAT，但從RNA分子的觀點(diǎn)而言，優(yōu)選GGUGCU、GGUGAU。在本發(fā)明的適配體含有GGUG(C/A)(U/T)時(shí)，核酸中所含的GGUG(C/A)(U/T)的數(shù)可為1或多個(gè)(例如2或3個(gè))。本發(fā)明的適配體對于1個(gè)lgG可結(jié)合2個(gè)。本發(fā)明的適配體可以為GGUG(C/A)(U/T)中第3個(gè)的U的核糖2位被氟化后的適配體(S卩，2'-F修飾)，或者以可保持本發(fā)明的適配體對IgG的結(jié)合活性的方式對第3個(gè)的U的核糖2位施以氟化之外的修飾后的適配體。作為這樣的修飾，列舉例如-O-Me化、氨化(NH。。本發(fā)明的適配體還可為化學(xué)合成，在于5'末端可具有單磷酸酯基的方面，與經(jīng)轉(zhuǎn)錄(例如SELEX法)合成的于5，末端具有三磷酸酯基的適配體不同。本發(fā)明的適配體的至少1種(例如1、2、3或4種)核苷酸還可為于核糖的2'位含有羥基或者上述的任意的原子或基團(tuán)例如選自氫原子、氟原子、羥基及-0-Me基的至少2種(例如2、3或4種)的基團(tuán)的核苷酸。當(dāng)本發(fā)明的適配體含有以GGUG(C/A)(U/T)表示的核苷酸序列時(shí)，在其兩端可具有莖(stem)結(jié)構(gòu)。莖結(jié)構(gòu)可帶來突起結(jié)構(gòu)的充分穩(wěn)定化。例如，作為莖結(jié)構(gòu)，GGUG(C/A)(U/T)中5'末端的G(第1個(gè)核苷酸)與在5'側(cè)與其鄰接的1個(gè)以上的核苷酸、3'末端的U/T(第6個(gè)核苷酸)與在3'側(cè)與其鄰接的1個(gè)以上核苷酸可分別形成分子內(nèi)堿基對(basepair)。在5，側(cè)或3，側(cè)鄰接的核苷酸只要是1個(gè)以上，就沒有特別的限定，可以為2個(gè)以上，優(yōu)選3個(gè)以上。本發(fā)明的適配體除了上述的GGUG(C/A)(U/T)所示的核苷酸序列之外，還可含有ANC所示的核苷酸序列。ANC中的N可以為選自A、G、C、U及T的任意核苷酸，以A、G、C及U較佳，以A及G更佳，以A最佳。當(dāng)本發(fā)明的適配體含有GGUG(C/A)(U/T)及ANC所示的核苷酸序列時(shí)，可以是GGUG(C/A)(U/T)存在于5'側(cè)、ANC存在于3，側(cè)，或者可以是ANC存在于5'側(cè)、GGUG(C/A)(U/T)存在于3'側(cè)。本發(fā)明的適配體具有GGUG(C/A)(U/T)中5'末端的G與ANC的C可形成分子內(nèi)堿基對的結(jié)構(gòu)，及/或GGUG(C/A)(U/T)中3'末端的U/T與ANC的A可形成分子內(nèi)堿基對的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的適配體含有GGUG(C/A)(U/T)及ANC兩者時(shí)，適配體含有的GGUG(C/A)(U/T)及ANC的數(shù)量分別為1或多個(gè)(例如2或3個(gè))。本發(fā)明的適配體還可以為以下(i)至(iii)中的任一種(i)GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGA，并且ANC的3'側(cè)含有UCC;(ii)GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGNxlA，并且ANC的3'側(cè)含有UNx2CC(Nxl、Nx2分別為選自A、G、C、U及T的核苷酸)；或(m)GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGNx3Nx4A(^"t]GGACAG)，并且ANC的3，側(cè)含有UNx5Nx6CC(Nx3、Nx4、Nx5、Nx6分別為選自A、G、C、U及T的核苷酸)。GGA、GGNxlA或GGNx3Nx4A及UCC、UNx2CC或UNx5Nx6CC的所有核苷酸為核糖的2'位含有羥基的核苷酸(g卩，為未取代的核苷酸)，或者為于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸，從結(jié)合活性的觀點(diǎn)而言，以于2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸較佳。本發(fā)明的適配體還可以含有AGGUG(C/A)(U/T)C所示的核苷酸序列及/或GANCU(N為選自A、G、C、U及T的核苷酸)表示的核苷酸序列。AGGUG(C/A)(U/T)C中的第4個(gè)的U可以為于2'位的羥基被氟原子取代的核苷酸，或者以可保持本發(fā)明的適配體對IgG的結(jié)合活性的方式對第4個(gè)的U的核糖2'位施以除氟化之外的修飾后的核苷酸。上述U以外的核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸或?yàn)橛诤颂堑?'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。詳細(xì)地講，本發(fā)明的適配體具有潛在性二級結(jié)構(gòu)，該潛在性二級結(jié)構(gòu)含有突起結(jié)構(gòu)以及存在于該突起結(jié)構(gòu)兩端的2個(gè)莖結(jié)構(gòu)(S1、S2)及環(huán)(loop)結(jié)構(gòu)。于本說明書中使用時(shí)，所謂的"潛在性二級結(jié)構(gòu)"為可在生理?xiàng)l件下穩(wěn)定存在的二級結(jié)構(gòu)，例如，是否具有潛在性二級結(jié)構(gòu)可通過實(shí)施例記載的結(jié)構(gòu)預(yù)測方案來確定。環(huán)結(jié)構(gòu)中所有的核苷酸可以為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸(即，為未取代的核苷酸)，或是于核糖的2'位的羥基被任意的原子或基團(tuán)(例如氫原子、氟原子或-O-Me基)取代的核苷酸，從結(jié)合活性的觀點(diǎn)而言，以于核糖的2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸較佳。更詳言地講，本發(fā)明的適配體可具有以下(I)至(III)中任一項(xiàng)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>(I)S1S2[式中，N1、N2、N3、N4、N5分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T的核苷酸，且NZ及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸，NA及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸]。上述(1)至(III)中，實(shí)線(粗線)表示選自A、G、C、U及T的核苷酸以任意長度連結(jié)，實(shí)線(細(xì)線)表示潛在性具有互補(bǔ)結(jié)合(堿基配對)能。Sl、S2分別表示莖結(jié)構(gòu)。于S1、S2的莖結(jié)構(gòu)中，可堿基配對的核苷酸數(shù)量可以分別為1以上，也可以為2以上、3以上或4以上。曲線部表示環(huán)結(jié)構(gòu)。環(huán)結(jié)構(gòu)優(yōu)選由3個(gè)以上的核苷酸構(gòu)成，較好由4個(gè)核苷酸構(gòu)成。較好的是，上述(i)至(ni)表示的結(jié)構(gòu)可以為上述(r)至(nr)、下述(r)至(nr)或(r")至(m，")表示的結(jié)構(gòu)。另夕卜，GGUG(C/A)(U/T)中第3個(gè)的U可為于核糖的2'位被氟原子取代的核苷酸，本發(fā)明的適配體中含有的其他核苷酸(除上述U之外)分別相同或不同，可以為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸或是于核糖2'位的羥基被任意的原子或基團(tuán)(例如氫原子、氟原子或-O-Me基)取代的核苷酸。本發(fā)明的適配體可具有以下(Ia)至(IIIa)中任一項(xiàng)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)[式中，N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T的核苷酸，且NZ及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸，W及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸，W及N〒為互相互補(bǔ)的核苷酸]。上述(Ia庫(IIIa)中，實(shí)線(粗線)表示選自A、G、C、U及T的核苷酸以任意長度連結(jié)，實(shí)線(細(xì)線)表示潛在性具有互補(bǔ)結(jié)合(堿基配對)能。Sl、S2分別表示莖結(jié)構(gòu)。于S1、S2的莖結(jié)構(gòu)中，可堿基配對的核苷酸數(shù)量可以分別為1以上，也可以為2以上、3以上或4以上。曲線部表示環(huán)結(jié)構(gòu)。環(huán)結(jié)構(gòu)優(yōu)選由3個(gè)以上核苷酸構(gòu)成，以由4個(gè)核苷酸構(gòu)成較佳。較好的是，上述(Ia)至(IIIa)表示的結(jié)構(gòu)可為上述(Ia，)至(IIIa，)、下述(Ia")至(ma")或(Ia"，)至(nia"，)表示的結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>另外，GGUG(C/A)(U/T)中第3個(gè)的U可為于核糖的2'位被氟原子取代的核苷酸，本發(fā)明的適配體中含有的其他核苷酸(除上述U之外)分別相同或不同，可以為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸或是于核糖2'位的羥基被任意的原子或基團(tuán)(例如氫原子、氟原子或-O-Me基)取代的核苷酸。從結(jié)合活性的觀點(diǎn)而言，優(yōu)選的是，N4、NS分別是于核糖的2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸、且N5、N〒分別為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸。本發(fā)明的適配體可以為(a)由序列編號1至23中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列(尿嘧啶也可為胸腺嘧啶)組成的適配體；(b)在序列編號1至23中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列(尿嘧啶也可為胸腺嘧啶)表示的核苷酸序列中的1個(gè)或數(shù)個(gè)核苷酸經(jīng)取代、缺失、插入或附加后的核苷酸序列所組成的適配體；(c)選自上述(a)的多個(gè)連結(jié)物、上述(b)的多個(gè)連結(jié)物、上述(a)和(b)的多個(gè)連結(jié)物的連結(jié)物。上述(b)中，取代、缺失、插入或附加的核苷酸數(shù)量只要為數(shù)個(gè)就沒有特別的限定，可以例如約10個(gè)以下，較好約8個(gè)以下，更好約6個(gè)以下，再更好約5個(gè)以下，最好為4個(gè)、3個(gè)、2個(gè)或l個(gè)。上述(c)中連結(jié)可通過串級式(tandem)結(jié)合來進(jìn)行。另外，連結(jié)時(shí)也可利用連接基(linker)。作為連接基，列舉核苷酸鏈(例如1至約20個(gè)核苷酸)、非核苷酸鏈(例如-(CH2)n-連接基、-(0120120)11-連接基、六甘醇連<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>接基、TEG連接基、含肽的連接基、含-S-S-鍵的連接基、含-CONH-鍵的連接基、含-OP03-鍵的連接基)。上述多個(gè)連結(jié)物中的多個(gè)只要在2以上就沒有特別的限定，例如可以為2至4個(gè)。上述(a)至(c)中的各核苷酸分別相同或不同，可以為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸或是于核糖2'位的羥基被任意的基團(tuán)(例如氫原子、氟原子或-O-Me基)取代的核苷酸。本發(fā)明的適配體還可經(jīng)加熱處理再生、滅菌。作為這樣的加熱處理，例如可以舉出在65至85"C下進(jìn)行數(shù)分鐘(例如5至15分鐘)的處理。為了提高對IgG的結(jié)合性、穩(wěn)定性、藥物傳遞性等，本發(fā)明的適配體的各核苷酸的糖殘基(例如核糖)也可以被修飾。作為糖殘基中被修飾的部位，例如可以舉出將糖殘基的2'位、3'位及/或4'位的氧原子取代成其他原子等。作為修飾的種類，例如可以舉出氟化、O-垸基化(例如O-甲基化、O-乙基化)、O-烯丙基化、S-垸基化(例如S-甲基化、S-乙基化)、S-烯丙基化、氨基化(例如-NH2)。這樣的糖殘基的改變可根據(jù)本身已知的方法進(jìn)行(參照例如Sproat等,(1991)Nucle.Acid.Res.19,733-738;Cotton等，(1991)Nucl.Acid.Res.19，2629-2635;Hobbs等，(1973)Biochemistry12,5138-5145)。另外，為了提高對于IgG的結(jié)合性等，本發(fā)明的適配體的嘌呤、嘧啶也可以改變(例如化學(xué)性取代)者。作為該改變，例如可以舉出5位嘧啶改變、8位嘌呤改變、環(huán)外胺的改變、4-硫代尿苷的取代、以5-溴或5-碘尿嘧啶的取代。另外，為了使對核酸酶及水解具有耐性，也可改變本發(fā)明的適配體中含有的磷酸基。例如P(O)O基也可以被P(O)S(硫代酸酯)、P(S)S(二硫代酸酯)、P(0)NR2(酰胺化物)、P(O)R、R(O)OR'、CO或CH2(甲基縮醛咸3，-胺(-NH-CH2-CH2-)取代[此處，各R或R，各自獨(dú)立，為氫原子、或經(jīng)取代或未經(jīng)取代的垸基(例如甲基、乙基)]。連結(jié)基可通過-O-、-N-或-S-連結(jié)，結(jié)合于鄰接的核苷酸。改變還可包括加帽(capping)之類的3，及5，的改變。改變還可經(jīng)將聚乙二醇或其他脂質(zhì)附加到末端來進(jìn)行。該改變參照美國專利第5660985號、美國專利第5756703號。本發(fā)明的適配體可根據(jù)本說明書中的公開內(nèi)容及在該
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)常識進(jìn)行化學(xué)合成。作為本發(fā)明的適配體，例如還可以舉出含有GGUG(C/A)(U/T)所示的核苷酸序列(及必要時(shí)的ANC所示的核苷酸序列)的適配體，這樣的適配體利用SELEX法及其他改良法(例如Ellington等，(1990)Nature,346，818-822;Tuerk等，(1990)Science,249，505-510)可高度設(shè)計(jì)。例如使用由下述弓I物用序列(i)-(N)a-GGUG(C/A)(U/T)-(N)b-引物用序列(ii)[上述中，(N)a表示由a個(gè)N組成的核苷酸鏈，(N)b表示由b個(gè)N組成的核苷酸鏈，N分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T(較好為A、G、C及U)的核苷酸。a、b分別相同或不同，可為任意的數(shù)，例如為l至約100個(gè)，較好為1至約50個(gè)，更好為1至約30個(gè)，再更好為1至約20個(gè)或1至約IO個(gè)]所示的核苷酸序列組成的單一種的核酸分子或多種的核酸分子(例如a、b的數(shù)等不同的核酸分子的文庫(libraiy))及引物用序列(i)、(ii)分別對應(yīng)的引物對，由此可高度設(shè)計(jì)含有GGUG(C/A)(U/T)所示的核苷酸序列的本發(fā)明的適配體。本發(fā)明還提供該可高度設(shè)計(jì)的適配體的制造方法。本發(fā)明的適配體可用作例如作為抗體純化用分離劑的配體、將抗體與標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合的連接基、抗體的固定劑、將抗體與修飾物質(zhì)結(jié)合的連接基。作為抗體純化用分離劑的配體的具體利用法與使用ProteinA的抗體純化方法幾乎相同，但由于可用中性溶液洗脫抗體，因此與需要用酸性溶液洗脫抗體的使用了ProteinA的方法相比，具有可以防止抗體變性的優(yōu)點(diǎn)。將本發(fā)明的適配體作為將抗體與標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合的連接基使用時(shí)，本發(fā)明的適配體需有不會從抗體離解的程度的高結(jié)合活性。另一方面，作為抗體純化用分離劑使用時(shí)，由于必須將一次吸附的抗體洗脫，因此未必結(jié)合活性越高越好。本發(fā)明中通過使用不同序列、不同長度及不同修飾方法，提供具有對IgG有不同的結(jié)合力或穩(wěn)定性且便宜等利點(diǎn)的適配體。本發(fā)明的適配體還具有后述的各種有用性。本發(fā)明還提供含有本發(fā)明的適配體及與其結(jié)合了的功能性物質(zhì)的復(fù)合體。本發(fā)明的復(fù)合體中的適配體與功能性物質(zhì)之間的結(jié)合可以為共價(jià)結(jié)合或非共價(jià)結(jié)合。本發(fā)明的復(fù)合體可以為本發(fā)明的適配體與1個(gè)以上(例如2或3個(gè))的同種或異種的功能性物質(zhì)相結(jié)合而成。作為功能性物質(zhì)，例如可以舉出蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、脂質(zhì)、糖質(zhì)、單糖、聚核苷酸、核苷酸。作為功能性物質(zhì)，例如還可以舉出親和性物質(zhì)、標(biāo)記用物質(zhì)、酶、藥物、毒素、藥物傳遞介質(zhì)。作為親和性物質(zhì)，列舉例如生物素、鏈霉抗生物素蛋白、對于目標(biāo)互補(bǔ)序列具有親和性的聚核苷酸、抗體、谷胱甘肽瓊脂糖(glutathionesepharose)、組氨酸。作為標(biāo)記用物質(zhì)，列舉例如螢光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、放射性同位素。作為螢光物質(zhì)，列舉例如SYBR綠I(SYBRGreen1)、SYBR綠II、SYBR金(SYBRGold)、SYPRO寶石紅(SYPRORuby)、SYPRO桔色(SYPROOrange)、SYPRO橘色(SYPROTangerine)、FITC、FAM、EGFP、ECFP、AttoPhos、SYPRO紅(SYPRORed)、Cy3、TAMRA、ROX、HEX、Alexa熒光532(AlexaFluor532)、Alexa熒光546、深紫(DeepPurple)、Pro-QDiamond、若丹明紅、BODIPY576/589、NED、R-藻紅蛋白、RFP、HNPP、Alexa熒光633、Alexa熒光635、Alexa熒光647、Cy5、氟硼熒(BODIPY)650/665、DiD、TOTO-3、磷酸DDAO、溴化乙錠、SYPRO玫瑰紅(SYPRORose)、Cy7、螢光素。作為發(fā)光物質(zhì)，列舉例如魯米諾(luminol)、蟲螢光素(luciferin)、光澤精(Lucigenin)。作為放射性同位素，列舉例如3H、"C、32p35g9。y123工125工131工作為酶，列舉例如西洋辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶(alkaliphosphatase)。作為藥物，例如可以舉出抗癌劑。作為抗癌劑，列舉例如加利車霉素或迪歐卡霉素(duocarmycin)等導(dǎo)彈(missile)療法中使用的藥物，環(huán)磷酰胺、馬法蘭(merphalan)、異磷酰胺(ifosfamide)或氯乙環(huán)磷酰胺(trofosfamide)等氮芥(nitrogenmustard)類似物，三胺硫磷(thio-TEPA)等乙撐亞胺類，卡氮芥(carmustine)等亞硝基脲，替莫唑胺(temozolomide)或達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)等reast齊U，氨甲喋呤(methotrexate)或雷替曲塞等葉酸類代謝拮抗劑，硫鳥嘌呤(thioguanine)、克拉屈濱(cladribin)或氟達(dá)拉濱(fludarabine)等嘌呤類似物，氟尿嘧啶(fluorouracil)、替加氟(tegafUr)或吉西他濱(gemcitabine)等嘧啶類似物，長春堿(vinblastine)、長春新堿(vincristine)或長春瑞濱(Vinorelbin)等長春生物堿及其類似物，依托泊苷(etoposide)、紫杉醇(taxane)、多西紫杉醇(docetaxel)或紫杉醇(paclitaxel)等鬼臼毒素(podophyllotoxin)衍生物，多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epimbicin)、伊達(dá)比星(edambicin)及米托蒽醌(mitoxantrone)等蒽環(huán)類抗生素(anthracycline)類及類似物，爭光霉素(bleomycin)及絲裂霉素(mitomycin)等其他細(xì)胞毒性抗生素，順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)及奧沙利鈾(oxaliplatin)等鉑化合物，噴司他丁(pentostatin)、米替福新(miltefocin)、雌莫司汀(estramstin)、托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)及比卡魯胺(bicaltamide)等其他抗腫瘤劑。作為毒素，列舉例如蓖麻毒素(Ricin)、利亞毒素(U7毒素)。作為藥物傳遞介質(zhì)，列舉例如核糖體、微球體(microsphere)、聚乙二醇、膽固醇、肽。本發(fā)明的適配體及/或本發(fā)明的復(fù)合體，可作為例如藥物或試劑(例如診斷藥、檢查藥(包括實(shí)驗(yàn)用試劑))使用。例如本發(fā)明的醫(yī)藥或診斷藥，例如可用于以異常IgG及/或IgG的過度表達(dá)為原因的疾病(例如風(fēng)濕病、腎炎、卡斯盧曼病(Castleman'sdisease)、韋格納氏(Wegener's)肉芽腫、腎小球硬化癥、腎小球疾病、多發(fā)性動(dòng)脈炎、紫斑病、紅斑狼瘡(erythematosus).器官移殖的排斥反應(yīng))、與IgG產(chǎn)生相關(guān)的疾病(例如B細(xì)胞淋巴瘤)等包括自身免疫疾病的IgG相關(guān)疾?。换蛘甙┑闹委熁蛟\斷(例如病情把握、治療效果的監(jiān)控)。另外，在癌的治療中，使用本發(fā)明的復(fù)合體(例如使結(jié)合于抗癌劑或毒素的本發(fā)明的適配體結(jié)合于抗體藥物而得的復(fù)合體)，可將癌細(xì)胞殺死。本發(fā)明的試劑除了使用本發(fā)明的適配體代替抗體之外，可通過與免疫學(xué)方法相同的方法使用。因此，通過使用本發(fā)明的適配體代替抗體，經(jīng)與酶免疫測定法(EIA)(例如直接競爭ELISA、間接競爭ELISA、三明治法ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、螢光免疫測定法(FIA)、免疫層析法、發(fā)光免疫測定法、旋轉(zhuǎn)免疫測定法、蛋白質(zhì)印跡法(例如替代蛋白質(zhì)印跡法的二次抗體使用)、免疫組織化學(xué)染色法、細(xì)胞分選法(cellsorting)等方法相同的方法，可進(jìn)行上述疾病的診斷或后述的IgG檢測定量。本發(fā)明也提供使用本發(fā)明診斷用試劑的方法，此時(shí)，也可使用本發(fā)明的固相載體。本發(fā)明的藥物可以摻有醫(yī)藥上可接受的載體。作為醫(yī)藥上可接受的載體，列舉例如蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石、磷酸鈣、碳酸鈣等賦形劑，纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇、蔗糖、淀粉等粘合劑，淀粉、羧甲基纖維素、羥丙基淀粉、鈉-乙二醇-淀粉、碳酸氫鈉、磷酸鈣、檸檬酸鈣等崩解劑，硬脂酸鎂、氣溶膠(aerosol)、滑石、十二垸基硫酸鈉等潤滑劑，檸檬酸、薄荷醇、甘草酸(glycyrrhizin)銨鹽、甘氨酸、桔子粉等芳香劑，苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯等保存劑，檸檬酸、檸檬酸鈉、乙酸等穩(wěn)定劑，甲基纖維素、聚乙烯吡咯垸酮、硬脂酸鋁等懸濁劑，表面活性劑等分散劑，水、生理鹽水、桔子汁等稀釋劑，可可脂、聚乙二醇、煤油等基質(zhì)蠟等，但不限于此。經(jīng)口給藥的理想制劑為使有效量的配體溶解于水、生理鹽水、桔子汁之類的稀釋液后的液體制劑，含有將有效量的配體作成固體或顆粒的膠囊劑、顆粒劑或片劑，將有效量的有效成分懸浮于適當(dāng)分散介質(zhì)中的懸浮液制劑，使溶解有有效量的有效成分的溶液分散于適當(dāng)分散介質(zhì)中乳化的乳劑等。非經(jīng)口給藥(例如靜脈內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、局部注入、腹腔內(nèi)給藥等)的理想制劑為水性及非水性的等滲無菌的注射液體制劑，其中也可含有抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑、等滲劑等。另外，可列舉水性及非水性的無菌懸浮液劑，其中也可含有懸浮劑、增溶劑、增粘劑、穩(wěn)定劑、防腐劑等。可以將該制劑以單位給藥量或多次給藥量封入安瓿或小瓶之類的容器中。另外，可以將有效成分及醫(yī)藥上可接受的載體冷凍干燥，以在臨使用前只要溶解或懸浮于適當(dāng)?shù)臒o菌媒介物中即可得的狀態(tài)保存。本發(fā)明的藥物的給藥量根據(jù)有效成分的種類活性、疾病的嚴(yán)重度、給藥對象的物種、給藥對象的藥物耐受性、體重、年齡等的不同而不同，通常成人每日的有效成分量可為約0.0001至約2.0g/kg，例如約0.0001至約0.1g/kg，較好約0.005至約0.05g/kg。本發(fā)明還提供固定化有本發(fā)明的適配體及/或本發(fā)明的復(fù)合體的固相載體。作為固相載體，列舉例如基板、樹脂、板(例如多孔板)、過濾器、筒、柱、多孔質(zhì)材。基板可為DNA芯片或蛋白質(zhì)芯片等中使用的基板等，例如鎳-PTFE(聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene))基板或玻璃基板、磷灰石基板、硅基板、氧化鋁基板等，以及在這些基板上實(shí)施聚合物等的涂敷后的板。作為樹脂，列舉例如填充于抗體純化層析法或?qū)⒖贵w作為配體的親和層析法等中使用的柱中的樹脂及用于以分批法將抗體純化或固定化的樹脂，另外，包括各種濃度的瓊脂糖粒子或經(jīng)高度交聯(lián)的瓊脂糖粒子、二氧化硅粒子、丙烯酰胺與N,N，-亞甲基雙丙烯酰胺的共聚物、聚苯乙烯交聯(lián)二乙烯苯粒子、將葡聚糖用表氯醇交聯(lián)后的粒子、纖維素纖維、烯丙基葡聚糖與N,N'-亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)聚合物、單分散系合成聚合物、單分散系親水性聚合物、Sepharose(商品名)瓊脂糖、Toyopearl(商品名)層析樹脂等，還包括使各種官能基團(tuán)結(jié)合到這些樹脂后的樹脂。本發(fā)明的適配體及/或本發(fā)明的復(fù)合體可由本身已知的方法固定于固相載體。列舉例如將親和性物質(zhì)(例如上述的親和性物質(zhì))或規(guī)定的官能基團(tuán)導(dǎo)入本發(fā)明的適配體及/或本發(fā)明的復(fù)合體，再利用該親和性物質(zhì)或規(guī)定的官能基團(tuán)，固定于固相載體的方法。本發(fā)明提供這樣的方法。規(guī)定的官能基團(tuán)可以為能供給偶合反應(yīng)的官能基團(tuán)，列舉例如氨基、硫醇基、羥基、羧基。本發(fā)明還提供導(dǎo)入該官能基團(tuán)的適配體。本發(fā)明的固相載體可用于例如IgG的純化及IgG的檢測、定量。本發(fā)明的固相載體還可利用于治療上述的異常IgG或IgG過剩表達(dá)為原因的疾病。使用送液泵，從患者血管將血液流入本發(fā)明的固相載體(例如筒)，吸附除去規(guī)定量的IgG后將凈化的血液返回至患者。此時(shí)，有益的是添加抗血液凝固劑使血液不凝固。IgG的除去量可根據(jù)透過血液量及本發(fā)明固相載體的吸附容量來調(diào)節(jié)。本發(fā)明的固相載體可以通過用中性洗脫液清洗，經(jīng)加熱或紫外線照射等進(jìn)行滅菌，進(jìn)行再生。在血液的凈化中利用本發(fā)明的固相載體時(shí)，關(guān)于詳細(xì)的使用方法或治療效果可參考透析療法或使用作為用了ProteinA的IgG除去劑的Prosorba(商品名，費(fèi)森尤斯公司制造)及Immunosorba(商品名；費(fèi)森尤斯公司制造)的血液凈化法來進(jìn)行。因此，本發(fā)明還提供可將該血液凈化的含有本發(fā)明固相載體的醫(yī)療用設(shè)備。本發(fā)明提供抗體的純化及/或濃縮方法。本發(fā)明的純化及/或濃縮方法可包括將IgG抗體吸附于本發(fā)明的固相載體，再通過洗脫液使吸附的IgG抗體洗脫的步驟。本發(fā)明的純化及/或濃縮方法還可為將本發(fā)明的固相載體填充于容器(例如燒瓶、試驗(yàn)管、試管)進(jìn)行純化或濃縮的靜態(tài)方法，以及將含有IgG的溶液送至本發(fā)明的固相載體(例如柱)進(jìn)行純化或濃縮的動(dòng)態(tài)方法。IgG抗體在本發(fā)明固相載體的吸附可根據(jù)本身已知的方法來進(jìn)行。例如將含有IgG的試樣(例如血液、血漿、血清、腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織提取液)導(dǎo)入至本發(fā)明的固相載體或填充有固相載體的容器或載體。靜態(tài)方法時(shí)，為通過邊攪拌邊在室溫放置約1至60分鐘左右將IgG結(jié)合于本發(fā)明的固相載體。動(dòng)態(tài)方法時(shí)，為通過以約O.l至20mL/分鐘左右的流速導(dǎo)入試樣，將IgG結(jié)合于本發(fā)明的固相載體。也可在被導(dǎo)入至本發(fā)明的固相載體前將含有IgG的試樣稀釋。稀釋優(yōu)選使用含有氯化鈉及氯化鎂的溶液。IgG結(jié)合于本發(fā)明的固相載體后，為了除去雜質(zhì)，用清洗液清洗本發(fā)明的固相載體。清洗液優(yōu)選含有氯化鈉及氯化鎂的溶液。IgG抗體的洗脫可使用中性溶液進(jìn)行。在IgG抗體的純化中，使用ProteinA的以往的方法中，由于必須用酸性溶液進(jìn)行洗脫，因此有抗體容易變性的缺點(diǎn)。另一方面，本發(fā)明的適配體可用中性溶液進(jìn)行洗脫，因此，與以往的方法不同，具有可防止抗體變性的優(yōu)點(diǎn)。對于中性洗脫液并無特別限制，可為例如pH約6至約9，較好約6.5至8.5，更好約7至約8。另外，中性溶液包括鉀鹽(例如氯化鉀(KCl))、乙酸鉀、甲酸鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸三鉀、硝酸鉀、硫酸鉀、亞硫酸鉀、高氯酸鉀、檸檬酸鉀、蘋果酸鉀、草酸鉀、氰化鉀)、鎂鹽(例如氯化鎂、乙酸鎂、甲酸鎂、硫酸鎂、草酸鎂)、鈣鹽(例如氯化鈣、乙酸鈣、甲酸鈣、硫酸鈣、草酸鈣)、銨鹽(例如氯化銨、乙酸銨、甲酸銨、磷酸銨、硝酸銨、硫酸銨、亞硫酸銨、高氯酸銨、檸檬酸銨、氰化銨、草酸銨)、螯合劑(例如乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸鈉等檸檬酸鹽、蘋果酸鈉等蘋果酸鹽、草酸鈉等草酸鹽、乙二胺、乙?；阴ｂc、EGTA)、改性劑或表面活性劑(胍、SDS、Tween20、NP-40、TritonX-100)，從成本方面而言，以含有氯化鉀較佳。氯化鉀溶液的濃度為100至1000mM，較好200至800mM，更好300至600mM。EDTA溶液的濃度為1至100mM，較好5至50mM，更好10至20mM。本發(fā)明的純化方法還可包括在IgG抗體吸附后將固相載體清洗的步驟。清洗液列舉例如含有尿素、強(qiáng)堿(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀)、弱堿(例如氨)、強(qiáng)酸(例如鹽酸、硝酸、硫酸、三氟乙酸)、弱酸(例如乙酸、甲酸)的溶液。尿素可為例如1至IOM。強(qiáng)堿及弱堿較好為0.01至ION，更好為0.01至1N，再更好為0.01至O.IN。強(qiáng)酸及弱堿較好為0.01至ION，更好為0.01至1N，再更好為0.01至O.IN。本發(fā)明的純化方法還可以包括對固相載體進(jìn)行加熱處理的步驟。通過所述工序，固相載體可再生、滅菌。該加熱處理列舉例如于約50至約100°C，較好約60至約90°C，更好約65至85。C進(jìn)行數(shù)分鐘例如1至30分鐘，較好1至20分鐘，更好5至15分鐘的處理。加熱處理可在尿素(例如1至IOM)中進(jìn)行。本發(fā)明還提供純化抗體的制造方法。本發(fā)明的制造方法可以包括制備IgG抗體，利用本發(fā)明的適配體及復(fù)合體(例如通過使用本發(fā)明的固相載體)將制得的IgG抗體純化的步驟。經(jīng)本發(fā)明的制造方法制備的抗體可為IgG?？贵w可以為多克隆抗體或單克隆抗體。多克隆抗體或單克隆抗體可通過本身已知的方法來制備。抗體還可為人化抗體或人抗體，以人化抗體或人抗體較佳。人化抗體可參考例如日本專利特表平4-506458號公報(bào)、日本專利特開昭62-296890號公報(bào)等制備，人抗體可參照例如"NatureGenetics,Vol.15，p.146-156，1997"、"NatureGenetics,Vol.7，p.13-21,1994"、日本專利特表平4-504365號公報(bào)、國際申請公開W094/25585號公報(bào)、"日經(jīng)科學(xué)，6月號，第40至第50頁、1995年"、"Nature,Vol.368，p.856-859，1994"、日本專利特表平6-500233號公報(bào)等來制備。接著，制得的抗體可使用適配體純化。純化的詳細(xì)方法與本發(fā)明的純化方法相同。本發(fā)明還提供IgG的檢測及/或定量方法。本發(fā)明的檢測及/或定量方法包括利用本發(fā)明的適配體(例如通過使用本發(fā)明的復(fù)合體及/或固相載體)來測定IgG的步驟。該方法如在本發(fā)明的診斷用試劑的內(nèi)容所述，除了使用本發(fā)明的適配體替代抗體之外，通過與免疫學(xué)的方法相同的方法進(jìn)行檢測及/或定量。本發(fā)明還提供抗體的修飾方法。本發(fā)明的修飾方法可包括通過本發(fā)明的適配體，使功能性物質(zhì)與抗體結(jié)合的步驟。本發(fā)明還提供通過該修飾方法制得的修飾抗體。包含本說明書中列舉的專利及專利申請說明書的所有刊物記載的內(nèi)容通過在本說明書的引用，全部以與明示同程度地引入本說明書中。以下列舉實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明，本發(fā)明不受下述實(shí)施例等的任何限定。[實(shí)施例][實(shí)施例l]與IgG特異性結(jié)合的核酸的制備使用SELEX法制作與IgG特異性結(jié)合的核酸。SELEX為將Ellington等人的方法(Ellington和Szostak,Nature346,818-822,1990)及Tuker等人的方法(Tuerk和Gold,Science249，505-510，1990)改良進(jìn)行。目標(biāo)物質(zhì)使用附有組氨酸標(biāo)記(tag)的人IgGl的Fc部分(Pro100至Lys330)及RANK(NF-kB的受體激活子(Receptoractivator))的嵌合體(IgGl-Fc,安迪生物公司制造)。該嵌合體為使用小鼠骨髓瘤細(xì)胞而表達(dá)的。最初回合使用的RNA是使用DuraScribeT7轉(zhuǎn)錄試劑盒(艾匹森特(Epicentre)公司制造)將化學(xué)合成獲得的DNA轉(zhuǎn)錄而得。經(jīng)該方法獲得的RNA，其含有嘧啶堿基的核苷酸的核糖體的2'位被氟化。DNA模板使用在40殘基的隨機(jī)序列兩側(cè)具有引物序列的長度90殘基的DNA。DNA模板及引物由化學(xué)合成制得(博奧公司制造)。DNA模板的序列及引物序列如下所示。DNA模板5'-ctctcatgtcggccgtta-40N-cgtccattgtgtccctatagtgagtcgtatta-3，(序歹!j編號24)弓I物-A:5'-taatacgactcactatagggacacaatggacg-3，(序歹U編號25)引物-B:5'-ctctcatgtcggccgtta-3，(序列編號26)引物A含有T7RNA聚合酶的啟動(dòng)子序列。最初回合使用的RNA池的變異(variation)在理論上為1014。使作為目標(biāo)物質(zhì)的IgGl-Fc吸附于Ni-NTA親和性樹脂(洽根(Qiagen)公司制造)或BDTalonTM親和性樹脂(BD生物科學(xué)公司制造)而固定，向其中加入RNA池，于室溫下保持30分鐘后將未結(jié)合于IgGl-Fc的RNA用溶液A沖洗。在此的溶液A為145mM氯化鈉、5.4mM氯化鉀、1.8mM氯化鈣、0.8mM氯化鎂、20mMpH7.6Tris的混合溶液。對結(jié)合于IgGl-Fc的RNA加入洗脫液，回收，通過RT-PCR擴(kuò)增后，用DuraScribeT7轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)錄，用于下一回合。洗脫液使用在溶液A中加入250mM咪唑的溶液。第7回合及第10回合完成后，將PCR產(chǎn)物在pGEM-TEasy載體(vector)(普洛麥格公司制造)中克隆(Cloning)，在大腸桿菌株DH5a(東洋紡公司制造)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。從單克隆中將質(zhì)粒提取后，用DNA定序器(ABIPRISM3100，ABI公司制造)確定核苷酸序列。具有序列編號l所示的序列的克隆為48個(gè)克隆中IO個(gè)克隆。另外，具有序列編號2、3、4、5、6、7、8所示的序列的克隆在48個(gè)克隆中分別存在2個(gè)、7個(gè)、14個(gè)、2個(gè)、5個(gè)、4個(gè)、4個(gè)克隆。使用MFOLD程序預(yù)測序列編號1至8所示的RNA的二級結(jié)構(gòu)(M.Zuker,Mfoldwebserverofnucleicacidfoldingandhybridizationprediction-NucleicAcidsRes.31(13),3406-15，(2003))。其結(jié)構(gòu)示于圖1至圖8。如圖所示，該RNA含有GGUGCU的共同序列，該共同序列形成突起。改變引物組合，通過與上述相同的方法再次進(jìn)行SELEX。引物序列如下所述。弓I物C:5，-taatacgactcactatagggccacagcgag-3，(序歹!j編號27)引物D:5'-ccgaccacacgcg-3，(序列編號28)第8回合完成后，序列編號9所示的RNA在考察序列的48個(gè)克隆中存在1個(gè)克隆。該RNA與人IgGl特異性結(jié)合，存在GGUGCU的序列。使用MFOLD程序預(yù)測該RNA的二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果不存在GGUGCU的突起結(jié)構(gòu)。使用vsfold4程序aittp:〃www.ma.it-chiba.ac.b/vsfold4/)預(yù)測序歹i」編號9所示的RNA的二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GGUGCU的突起結(jié)構(gòu)(圖9)。另一方面，其他的47個(gè)克隆不與IgGl結(jié)合。接著，通過氨基偶合進(jìn)行固定有IgG的Fc片段(IgG-Fc)的SELEX。將100嗎的人IgG-Fc(阿森斯研究科技(AthensResearch&Technology)公司制造)固定于30|^L的NHS-活化的瓊脂糖珠(activatedSepharosebeads)(安瑪西亞生物科學(xué)公司(AmershamBioscience)制造)。購買的IgG-Fc溶液由于含有Tris緩沖液，因此要置換為20mMHEPES緩沖液(西格馬公司制造)之后再進(jìn)行偶合。偶合根據(jù)說明書來進(jìn)行。固定化量通過用SDS-PAGE考察固定化前的IgG-Fc溶液與剛固定化后的上清液來確認(rèn)。如果沒有從上清液檢測到IgG-Fc的譜帶，則認(rèn)為使用的IgG-Fc幾乎全被偶合。RNA使用與上述相同的含有嘧啶堿基的核苷酸的核糖的2'位經(jīng)氟化后的RNA。作為用于制備RNA初期池的DNA模板，使用利用下述的引物序列夾持40殘基的隨機(jī)序列后的序列。弓l物E:5'-taatacgactcactatagggtacgagtctggacttgcaa-3，(序歹!j編號29)引物F:5'-gcctgttgtgagcctca-3，(序列編號30)第7回合完成后，序列編號19、20、21所示的RNA在考察序列的48個(gè)克隆中分別有13個(gè)、9個(gè)、6個(gè)克隆。這些RNA含有GGUGCU的共同序列。使用MFOLD程序預(yù)測該二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果序列編號20及21的RNA含有與序列編號1的RNA相同的突起結(jié)構(gòu)，而序列編號19的RNA則未含有(圖19至圖21)。接著，對于48個(gè)克隆中只存在1個(gè)克隆的RNA序列進(jìn)行詳細(xì)的考察，結(jié)果序列編號22及23所示的RNA含有GGUGCU的共同序列。使用MFOLD程序預(yù)測二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果序列編號22的RNA含有同樣的突起結(jié)構(gòu)，序列編號23的RNA則未含有。其他的1個(gè)克隆有15個(gè)序列。他們?nèi)疾缓珿GUGCU?？疾爝@些序列中8個(gè)序列的結(jié)合活性，結(jié)果均無結(jié)合活性。使用由核糖的2'位被氟化的含有嘧啶堿基的核苷酸及天然型的含嘌呤堿基核苷酸而得的RNA，進(jìn)行3次不同的SELEX，從其中的任一種中選擇含有GGUGCU共同序列的RNA。在該共同序列兩側(cè)的序列無特別的特征，預(yù)測在與IgG的結(jié)合中GGUGCU起重要作用。使用MFOLD程序預(yù)測二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果所選擇的RNA幾乎都含有GGUGCU的突起結(jié)構(gòu)，預(yù)測具有共同序列的所有RNA均具有GGUGCU的突起結(jié)構(gòu)。[實(shí)施例2]結(jié)合活性的評估以表面等離振子共振法研究序列編號1至9所示的RNA對人IgG-Fc的結(jié)合活性。測定使用比阿克(BIAcore)公司制造的BIAcore2000。傳感芯片使用將鏈霉抗生物素蛋白固定化的SA芯片。在其上結(jié)合1000RU左右的于5'末端結(jié)合有生物素的16殘基的PolydT。成為配體的RNA在3'末端附加16殘基的PolyA，通過dT與A的結(jié)合固定于SA芯片上。其固定化量為以0.01^g^L濃度噴射60iiL使之成為約1000RU。分析用的IgG-Fc(阿森斯研究科技公司制造)為將濃度調(diào)整為0.6pM的物質(zhì)噴射70|iL。使用的運(yùn)行緩沖液(RunningBuffer)的成分與SELEX所用的溶液A相同。固定序列編號1或3所示的RNA噴射IgG-Fc噴射時(shí)的傳感圖分別表示于圖24或圖25。顯示RNA與IgG-Fc結(jié)合的狀態(tài)。對照組進(jìn)行將含有隨機(jī)序列的RNA池固定化的測定，結(jié)果沒有結(jié)合IgG-Fc(圖26)。對于序列編號2至9所示的RNA進(jìn)行相同的測定，結(jié)果全都與IgG-Fc結(jié)合。接著，用同樣的方法考察與全長的人IgGl的結(jié)合活性。序列編號l至9所示的RNA全都與IgGl結(jié)合。另外，含有隨機(jī)序列的RNA池未顯示結(jié)合活性。接著，使用濃度不同的IgG(0.6^iM至0.05pM)，進(jìn)行速度論的分析，求出各RNA適配體的解離常數(shù)(Kd)。解離常數(shù)通過以下方法求得利用A-dT鍵將在3'末端附加有16殘基的PolyA的RNA固體化于傳感芯片，噴射濃度不同的IgG(0.6nM至0.05jim)，經(jīng)表面等離振子共振法求出。結(jié)果示于表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>用表面等離振子共振法考察序列編號19至23所示的RNA與人IgGl的結(jié)合活性。由結(jié)果可知，所有的RNA對IgGl具有結(jié)合活性。使用MFOLD程序預(yù)測的序列編號19及23所示的RNA的二級結(jié)構(gòu)不含有共同的突起結(jié)構(gòu)，但均對人IgGl具有結(jié)合活性。使用Biacore2000(商品名)(比阿克公司制造)測定適配體的結(jié)合活性。Biacore2000中組裝有速度論的解析軟件，通過將獲得的傳感圖的形狀與理論式擬合(fitting),可求出解離常數(shù)。序列編號1至9及19至23所示的長適配體十分符合h1結(jié)合模型的理論式，對于序列編號17等短適配體，更適合l:2結(jié)合模型的Bivalent模型的理論式?？贵w由于為對稱性的結(jié)構(gòu)，因此通常認(rèn)為一個(gè)抗體結(jié)合兩個(gè)適配體。由以上確認(rèn)了，由SELEX法制備的序列編號1至9及19至23所示的RNA具有對人IgG的結(jié)合活性。這表示共同序列GGUGCU對與IgG的結(jié)合很重要。[實(shí)施例3]RNA適配體的小型化序列編號1至9及19至23所示的RNA長度為約70殘基，若能縮短至約40殘基以下的長度，則RNA適配體可由化學(xué)合成制備。嘗試了將序列編號1至9及19至23所示的RNA小型化。在此，序列編號1至9及19至23所示的RNA的含有嘧啶堿基的核苷酸(U、C)的核糖2'位被氟化，含有嘌呤堿基的核苷酸(A、G)為天然的RNA型。另外，本實(shí)施例中新制備的短RNA的所有嘧啶堿基的核糖2'位被氟化。首先將序列編號1所示的RNA作為基礎(chǔ)嘗試小型化。序列編號10所示的RNA為將序列編號1所示的RNA的5'末端的GGGACAC以及3'末端的GAGAG切斷，再為了轉(zhuǎn)錄在5'末端附加GG。序列編號11所示的RNA為將序列編號10所示的RNA的5'末端的GGAAU以及3'末端的ACAU切斷而得。序列編號12所示的RNA為將序列編號11所示的RNA的5'末端的GGACGAGUU以及3'末端的AACGGCCG切斷，于5'末端附加GG以及在3'末端附加CC而得。序列編號13所示的RNA為在序列編號12所示的RNA的GGUGCU突起的后面的莖環(huán)結(jié)構(gòu)換為序列編號2所示的RNA的莖環(huán)結(jié)構(gòu)而得。序列編號14所示的RNA為將序列編號13所示的RNA的環(huán)部分換為GAAA四核苷酸環(huán)而得。序列編號15所示的RNA為從序列編號13所示的RNA最初的莖除去2個(gè)堿基對縮短莖而得。序列編號16所示的RNA為從序列編號13所示的RNA的第2個(gè)莖除去3個(gè)堿基對縮短莖而得。序列編號17所示的RNA為從序列編號16所示的RNA最初的莖除去2個(gè)堿基對縮短莖而得。序列編號18所示的RNA為從序列編號17所示的RNA的第2個(gè)莖除去1個(gè)堿基對縮短莖而得。使用表面等離振子共振法來確認(rèn)經(jīng)小型化的RNA的結(jié)合活性。測定與實(shí)施例1相同，利用A-pT鍵將附加有16殘基的PolyA的RNA固定，在其上噴射IgG。由結(jié)果可知，序列編號10至18所示的含有GGUGCU共同序列的RNA對人IgGl具有結(jié)合活性。其中，序列編號18所示的RNA由21殘基形成。它們的解離常數(shù)分別示于表l。制備將序列編號17表示的RNA第8個(gè)核苷酸的C置換為U的變異體。該C為共同序列GGUGCU的C。由表面等離振子共振分析的結(jié)果可知，該變異體對人IgGl不具有結(jié)合活性。該事實(shí)表示作為共同序列的GGUGCU對與IgG的結(jié)合十分重要。根據(jù)上述通過將序列編號1所示的RNA小型化，可制作能化學(xué)合成的長度的RNA適配體。另外，只要存在作為共同序列的GGUGCU的突起結(jié)構(gòu)，就可保持與IgG的結(jié)合活性。[實(shí)施例4]種特異性的評估使用表面等離振子共振法研究所制作的RNA適配體對于人IgGl以外的亞型IgG或人以外的動(dòng)物的IgG是否也具有結(jié)合性。測定與實(shí)施例1相同，利用A-pT鍵將附加有16殘基的PolyA的核酸固定，在其上噴射IgG。RNA適配體使用序列編號l及17所示的核酸?？贵w使用人IgGl(卡爾生物化學(xué)(Calbiochem)公司制造)、人IgG2(卡爾生物化學(xué)公司制造)、人IgG3(卡爾生物化學(xué)公司制造)、人IgG4(卡爾生物化學(xué)公司制造)、小鼠IgGl(卡米康國際(ChemiconInternational)公司制造)、小鼠IgG2a(卡米康國際公司制造)、小鼠IgG2b(孜梅德試驗(yàn)(ZymedLaboratories)公司制造)、小鼠IgG3(倍士爾試驗(yàn)(BethylLaboratories)公司制造)、大鼠IgGl(安迪生物公司制造)、大鼠IgG2a(孜梅德試驗(yàn)公司制造)、大鼠IgG2b(孜梅德試驗(yàn)公司制造)、大鼠IgG2c(英國血清科技(UK-Serotec)公司制造)、兔子IgG(孜梅德試驗(yàn)公司制造)、牛IgGl(倍士爾試驗(yàn)公司制造)、牛IgG2(倍士爾試驗(yàn)公司制造)、雞IgG(羅克蘭(Rockland)公司制造)、狗IgG(羅克蘭公司制造)、貓IgG(倍士爾試驗(yàn)公司制造)、豚鼠IgG(生物基因(Biogenesis)公司制造)、倉鼠IgG(羅克蘭公司制造)、豬IgG(羅克蘭公司制造)。結(jié)果表示于表2。序列編號HumanIgGlHrnnanIgG2HumanIgG3HumanIgG4HumanIgAHumanIgDHumanIgEMouseIgGlMouse〖gG2aMouseIgG2bMouseIgG3RatIgGlRatIgG2aRatIgG2bRatIgG2cRabbitIgGBovineIgGlBovineIgG2ChickenIgGDogIgGCatIgGGuineapigIgGHamsterIgGSwineIgG<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>-ProteinA的數(shù)據(jù)引用安瑪西亞生物科學(xué)公司的說明書。+表示結(jié)合的強(qiáng)度，+多者表示結(jié)合強(qiáng)。-表示未結(jié)合。nd表示未測定。由表2可知，雖然序列編號1及17所示的RNA對人IgGl、人IgG2、人lgG3、人lgG4、倉鼠IgG、豬IgG具有結(jié)合活性，但是對其他種動(dòng)物則不具有結(jié)合活性。另外，序列編號l及17所示的核酸對人IgD(生物基因公司制造)及人IgE(卡爾生物化學(xué)公司制造)不具有結(jié)合活性。序列編號17所示的核酸雖然對人IgA(倍士爾試驗(yàn)公司制造)不具有結(jié)合活性，但是對人IgM(卡米康國際公司制造)顯示非常弱的結(jié)合活性。由上可知，本發(fā)明提供的RNA適配體為與人、倉鼠、豬的IgG特異性結(jié)合的RNA。另外，可知關(guān)于人IgG與亞型無關(guān)，與lgGl至IgG4均結(jié)合。這是與作為現(xiàn)在[實(shí)施例5]RNA適配體結(jié)合部位的考察1(FcyR)IgG的Fc部分結(jié)合于在巨噬細(xì)胞或中性白細(xì)胞等免疫細(xì)胞中表達(dá)的受體蛋白質(zhì)(Fc力，促進(jìn)細(xì)胞的活化或抑制。使用表面等離振子共振法考察本發(fā)明提供的RNA是否結(jié)合在IgG的FcYR結(jié)合部位。首先，將附加有16殘基的PolyA的RNA適配體用與實(shí)施例1相同的方法固定，在其上噴射人IgG使之與RNA適配體結(jié)合后，噴射FeyR。若IgG的RNA適配體結(jié)合部位與FeyR的結(jié)合部位全部或主要部分重復(fù)，則可認(rèn)為R不能結(jié)合于與RNA適配體相結(jié)合的IgG。另外，當(dāng)IgG與FcryR的結(jié)合力比IgG與RNA適配體的結(jié)合力強(qiáng)，引起RNA適配體與FeyR的置換反應(yīng)時(shí)，推測IgG從被固定的RNA適配體解離，與FcyR形成夏合體流出。使用序列編號1所示的RNA作為RNA適配體、人IgG-Fc(阿森斯研究科技公司制造)作為IgG、人FcYRI(R&DSystems公司制造)作為FcYR進(jìn)行測定。結(jié)果觀察到IgG-Fc結(jié)合后由Fq/RI的結(jié)合產(chǎn)生的信號上升(圖27)，因此可知，形成RNA適配體、IgG-Fc、Fc7RI三者的復(fù)合體。另夕卜，對照組使用含有隨機(jī)序列的RNA池時(shí)，IgG-Fc與FcYRI都沒有結(jié)合(圖28)。由上可知，RNA適配體結(jié)合在與IgG的Fc丫RI結(jié)合部位所不同的部分。[實(shí)施例6]RNA適配體結(jié)合部位的考察2(ProteinA)作為結(jié)合于IgG-Fc的其他物質(zhì)，熟知有ProteinA。ProteinA由于與IgG的Fc部分特異性結(jié)合，因此被用作抗體純化用分離劑的配體。通過與實(shí)施例5相同的方法考察本發(fā)明提供的RNA是否結(jié)合于IgG的ProteinA結(jié)合部位。首先，將在3'末端附加有16殘基的PolyA的序列編號1所示的RNA適配體通過與實(shí)施例l相同的方法固定，向其流入人IgGl(卡爾生物化學(xué)公司制造)使之結(jié)合于RNA適配體后，噴射ProteinA(MPBiomedicals公司制造)。結(jié)果觀察到IgGl結(jié)合后由ProteinA的結(jié)合產(chǎn)生的信號上升(圖29)，因此可知形成RNA適配體、IgGl、ProteinA三者的復(fù)合體。另外，對照組進(jìn)行將序列編號l所示的RNA適配體固定后噴射ProteinA的測定，結(jié)果未見ProteinA的結(jié)合(圖30)。由上可知，RNA適配體結(jié)合于與IgG-Fc的ProteinA結(jié)合部位所不同的部分。[實(shí)施例7]RNA適配體的2'修飾方法及對IgG的結(jié)合活性實(shí)施例1制備的RNA適配體的含有嘧啶堿基的核苷酸的核糖2'位被氟化。本實(shí)施例中，制備與核糖2'位的修飾方法不同的RNA，使用表面等離振子共振法考察對IgG的結(jié)合活性。首先，制作序列編號11及13所示的天然型RNA，考察對IgG的結(jié)合活性。天然型RNA通過化學(xué)合成模板DNA(歐貝隆公司制造)、使用T7RNA聚合酶(寶生物公司制造)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄而制得。結(jié)合活性與實(shí)施例1相同，由表面等離振子共振法測定。使用人IgGl(卡爾生物化學(xué)公司制造)作為IgG。由結(jié)果可知，IgGl的結(jié)合量降低，序列編號11及13表示的天然型RNA對IgG具有結(jié)合活性。接著，以序列編號17為基礎(chǔ)，制作如下所述修飾不同的序列編號17-1至17-14所示的RNA。序列編號17H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號17-1(23F1)H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號17-2(23F2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>G(OMe)G(OMe)A(OH)G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(F)U(F)C(F〉C(F)G(OMe)A(OMe)A(OMe)A(OMe)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F)U(F〉C(OMe)C(OMe)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號17-9(23F32)(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號I7-10(23F33)(OMe(H〉A(chǔ)(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號17-11(23F41)G(OMe)G(OMe)A(OH)G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(F)U(OMe)C(F)C(F)G(OMe)A(OMe)A(OMe)A(OMe)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F)U(F)C(OMe)C(OMe)A(H)A(H〉A(chǔ)(H)A(H)A(H〉A(chǔ)(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號17-12(23F42)G(OMe)G(OMe)A(OH)G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(F)U(F〉C(OMe)C(F)G(OMe)A(OMe)A(OMe)A(OMe)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F)U(F)C(OMe)C(OMe)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A00序列編號17-13(23F43)G(OMe)G(OMe)A(OH)G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(F)U(F)C(F)C(OMe)G(OMe)A(OMe)A(OMe)A(OMe)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F)U(F)C(OMe)C(OMe)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)A(H)序列編號17-14(23F31)200680032429.2說明書第42/53頁G(H〉G(H)A(OH)G(OH)G(0H〉U(F)G(OH)C(H)U(OMe)C(H)C(H)G(H)A(H)A(H)A(H)G(OHA(H)A(H)A(H)A(H〉A(chǔ)(H)A(H)RNA由化學(xué)合成制得(GeneDesign公司制造)。結(jié)合活性與實(shí)施例1相同，由表面等離振子共振法測定。IgG使用人IgGl(卡爾生物化學(xué)公司制造)。測定結(jié)果為序列編號17-1所示的RNA與序列編號17所示的RNA顯示相同程度的結(jié)合活性。另外，序列編號17-2、17-4至17-14所示的RNA的結(jié)合活性比序列編號17所示的RNA更高。另一方面，序列編號17-3所示的RNA的結(jié)合活性比序列編號17所示的RNA低。以序列編號15所示的核酸為基礎(chǔ)同樣操作制備修飾改變體，考察其對人IgG的結(jié)合活性。序列編號15序列編號15-1(30F-1)C(H)C(H)A(H)C(F)G(OH)C(F)G(OH)G(OH)A卿A(OH)C(F)U(F)C(H)C(H)序列編號15-2(30F-2)C(H)C(H)A(H)C(H)G(OH)C(H)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F)U(F)C(H)C(H)序列編號15-3(30F-3)C(H)C(H)A(H)C(H)G(OH)C(H)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F)U(F)C(H)C(H)序列編號15-4(30F-4)A(H)A(H)C(H)G(OH)C(H)G(OH)G(OH)A(OH)A(OH)C(F〉U(F)C(H)C(H)由用表面等離振子共振法測定的結(jié)果可知，序列編號15-1至15-3所示的核酸具有與序列編號15所示的核酸同等的結(jié)合活性。總結(jié)以上結(jié)果并示于表3-1及表3-2。表3中用+表示結(jié)合活性的高度，+數(shù)越多表示活性越高。另外，將序列編號17-2表示的RNA與IgG結(jié)合的狀態(tài)示于圖31。表3-l<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>表3-2<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>[實(shí)施例8]GGUGCU的突起結(jié)構(gòu)為了考察GGUGCU以外的序列是否為與IgG具有親和性的序列，進(jìn)行最適化SELEX。最初的池使用將GGUGCU的部分隨機(jī)排列的RNA。該RNA池由以下述所示的化學(xué)合成制得的DNA為模板，使用DUraSCribeTMT7轉(zhuǎn)錄試劑盒(艾匹森特公司制造)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄而制得。DNA模板5，-tgtcggccgttacagttccggtttcccgg-6N-tgtaactcgtccattgtccc畫3，(序列編號31)弓I物G:5，-taatacgactcactatagggacaatggacgagttac-3，(序歹ll編號32)引物H:5'-tgtcggccgttacagttc-3，(序列編號33)RNA池的理論上的變異為4096。以說明書為基礎(chǔ)，將40嗎的人IgG(孜梅德試驗(yàn))固定于40)iL的NHS-活化的瓊脂糖珠(安瑪西亞生物科學(xué)公司制造)。SELEX與實(shí)施例l相同地進(jìn)行。考察3回合完成后的序列，結(jié)果48序列中36序列含有GGUGCU。使用MFOLD程序考察二級結(jié)構(gòu)，不存在以與GGUGCU不同序列形成與GGUGCU相同的突起結(jié)構(gòu)。另外，使用表面等離振子共振法考察結(jié)合活性，結(jié)果不存在為與GGUGCU不同的序列、且對人IgG具有結(jié)合活性的序列。接著，對于第2回合完成后的序列考察48個(gè)序列。含有GGUGCU的序列存在1個(gè)序列。使用MFOLD程序預(yù)測所有序列的二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果含有GGUGAU的序列形成與GGUGCU相同的突起結(jié)構(gòu)。使用表面等離振子共振法考察該克隆與IgG的親和性，結(jié)果可知該克隆對IgG具有結(jié)合活性。另外，ACCGAC序列雖可見于2個(gè)克隆，但該序列未結(jié)合于IgG。若使用MFOLD程序，則發(fā)現(xiàn)除了GGUGCU及GGUGAU以外還形成與GGUGCU相同的突起結(jié)構(gòu)的序列?；瘜W(xué)合成含有這樣的序列來代替序列編號17-7所示的核酸的GGUGCU的核酸，使用表面等離振子共振法測定與人IgGl的結(jié)合活性。代替GGUGCU使用的序列如下所述。序列編號17-7突起部分的序列g(shù)(oh)g(oh)u(f)g(oh)c(h)u(oh;)序列編號17-7-1突起部分的序列G(OH)A(OH)U(F)G(OH)C(H)U(OH)序列編號17-7-2突起部分的序列G(OH)C(F)U(F)G(OH)C(H)U(OH)序列編號17-7-3突起部分的序列G(OH)G(OH)C(F)G(OH)C(H)U(OH)序列編號17-7-4突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)A(OH)C(H)U(OH)序列編號17-7-5突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)U(F)C(H)U(OH)序列編號17-7-1至17-7-5中不存在對人IgG具有結(jié)合活性的序列。序列編號17-7所示的核酸的GGUGCU如G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(F)U(F)所示，含有嘧啶堿基的核苷酸的核糖2'位被氟化?？疾炖闷渌揎椃椒ㄊ欠翊嬖趯θ薎gG具有結(jié)合活性的序列。實(shí)驗(yàn)使用的核酸如下所述，經(jīng)化學(xué)合成制得。使用表面等離振子共振法考察對人IgGl的結(jié)合活性。序列編號17-7突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(H)U(F)序列編號17-7-101突起部分的序列G(OH)G(F)U(F)G(OH)C(H)U(F)序列編號17-7-102突起部分的序列G(OH)G(OH)U(OH)G(OH)C(H)U(巧序列編號17-7-103突起部分的序列G(OH)G(OH)U(H)G(OH)C(H)U(F)序列編號17-7-104突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)G(F)C(H)U(F)序列編號17-7-105突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(OH)U(F)序列編號17-7-106突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(H)U(OH)序列編號17-7-107突起部分的序列G(OH)G(OH)U(F)G(OH)C(H)U(OMe)由結(jié)合活性的測定結(jié)果可知，17-7-101、17-7-104至107具有與17-7同等的結(jié)合活性。另外，17-7-102及17-7-103不具有結(jié)合活性。將以上歸納于表4。表4中用+表示結(jié)合活性的高度，+數(shù)越多表示活性越高。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>由上可知，GGUGCU及GGUGAU的突起結(jié)構(gòu)對于與IgG的結(jié)合很重要。另外，還可知，天然的核糖核苷酸(核糖的2'位為OH)或去氧核糖核苷酸(核糖的2'位為H)時(shí)，GGUGCU的第3個(gè)的U的結(jié)合活性消失。[實(shí)施例9]使用了RNA適配體的IgG純化法的相關(guān)實(shí)驗(yàn)將序列編號15及17所示的RNA固定于珠上，進(jìn)行人IgGl的下拉(pull-down)實(shí)驗(yàn)。在各200pL的管(愛思進(jìn)公司制造)中放入低聚(dT)-纖維素珠(Oligo(dT)-Cellulosebeads)(安瑪西亞生物科學(xué)公司制造)10u1，用牛血清白蛋白(博凌特曼海姆(BoehringetMannheim)公司制造)涂敷。向其中加入在3'末端附有16個(gè)A的RNA約10|ig進(jìn)行固定。RNA通過化學(xué)合成DNA模板及引物(博奧公司制造)，再使用DuraScribeT7轉(zhuǎn)錄試劑盒(艾匹森特公司制造)對其轉(zhuǎn)錄而制得。通過用溶液A清洗將未結(jié)合的RNA除去后，加入20嗎的人IgGl(卡爾生物化學(xué))，于室溫下保持30分鐘。用溶液A將未結(jié)合于RNA的人IgGl清洗除去。接著，在珠中加入試樣緩沖液，于65'C下加熱15分鐘，利用SDS-PAGE進(jìn)行分析。6x試樣緩沖液是混合1.3g十二垸基硫酸鈉(SDS)、3mL2-巰基乙醇、4.2mL丙三醇、1.5mg溴苯酚藍(lán)而制備。SDS-PAGE的結(jié)果表示于圖32。泳道1為配體使用序列編號15的適配體的情況，泳道2使用序列編號17的適配體的情況。上面的帶為IgG的重鏈(H鏈)的帶，下面的帶為輕鏈(L鏈)的帶?？芍?，通過將序列編號15或17表示的RNA作為抗體純化用分離劑的配體使用，可將IgG下拉。取結(jié)合有ProteinA的珠(安瑪西亞生物科學(xué)公司制造)以及結(jié)合有由基因重組除去了白蛋白結(jié)合區(qū)域的ProteinA(rProteinA)的珠(安瑪西亞生物科學(xué)公司制造)10pL，加入20嗎的人IgGl，同樣地進(jìn)行IgG的純化。使用pH3甘氨酸緩沖液作為洗脫液。利用SDS-PAGE分析洗脫液的結(jié)果示于圖32。泳道3為將ProteinA作為配體的情況，泳道2為將rProteinA作為配體的情況。適配體能夠以與ProteinA同等的性能將IgG下拉?？疾焓欠窨墒褂眯蛄芯幪?5表示的RNA從人血清純化人IgG。另外，還考察中性洗脫液是否可將IgG洗脫。向每個(gè)200pL的管(愛思進(jìn)公司制造)中放入結(jié)合有鏈霉抗生物素蛋白的瓊脂糖珠(安瑪西亞生物科學(xué)公司制造)10^L，以牛血清白蛋白涂敷。向其中加入在5'末端結(jié)合有生物素的RNA(基因設(shè)計(jì)公司制造)約lO)ag進(jìn)行固定。除去未結(jié)合的RNA后加入20pL的人血清(卡米康國際公司制造)，于室溫保持30分鐘。用氯化鈉-氯化鎂緩沖液清洗除去未結(jié)合于RNA的人血清成分。氯化鈉-氯化鎂緩沖液為150mM氯化鈉、2.5mM氯化鎂、pH7.6的20mMTris緩沖液。用中性洗脫液洗脫結(jié)合于RNA的IgG。中性洗脫液使用(l)200mM氯化鉀+10mMEDTA的混合溶液、(2)200mM氯化鉀+10mMEDTA+10X甘油的混合溶液、(3)600mM氯化鉀+10mMEDTA+10X甘油的混合溶液。為了研究回收的IgG量，利用SDS-PAGE分析洗脫液。另外為了考察沒有被洗脫而結(jié)合于珠的IgG量，向去除洗脫液后的珠中加入試樣緩沖液，于65。C加熱15分鐘，利用SDS-PAGE進(jìn)行分析。將SDS-PAGE的結(jié)果示于圖33。由泳道2至4可知使用適配體樹脂，可從血清將人IgG以高純度下拉。另外，由泳道6至8幾乎未檢測到IgG可知，通過使用中性洗脫液可以洗脫人IgG。取結(jié)合有rProteinA的珠10pL，加入人血清20iiL，同樣進(jìn)行IgG的純化。洗脫液使用pH3的甘氨酸緩沖液。將利用SDS-PAGE分析洗脫液及珠的結(jié)果示于圖33。可知，IgG的吸附容量雖有差異，但適配體樹脂能夠以與rProtdnA樹脂同程度的純度將IgG純化。從使用適配體樹脂時(shí)可在中性洗脫IgG的方面來看，適配體樹脂比rProteinA樹脂優(yōu)越。使用小鼠血清(卡米康國際公司制造)進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)。使用rProteinA時(shí)IgG可下拉，而使用序列編號15所示的RNA時(shí)則不能下拉。可知，本發(fā)明的抗體純化用RNA配體只能夠以高純度純化人抗體。對于序列編號15所示的RNA是否可反復(fù)作為抗體純化用分離劑的配體使用進(jìn)行試驗(yàn)。如上所述，將結(jié)合有生物素的約10pig的RNA固定于lO(iL的鏈霉抗生物素蛋白的珠上，加入人血清，用中性溶液洗脫IgG。之后，用50pL6M尿素將珠清洗3次，為了除去尿素，用氯化鈉-氯化鎂緩沖液再將珠清洗3次后，再次加入人血清204L，用中性溶液洗脫IgG。將此步驟再進(jìn)行一次，利用SDS-PAGE確認(rèn)3次的抗體純化中IgG的回收量(圖34)。由其結(jié)果可知，經(jīng)下拉的IgG的量在3次的抗體純化中并無大差異。由此表示抗體純化用的RNA配體可以用尿素清洗、再生。同樣地用0.1M氫氧化鈉進(jìn)行清洗。重復(fù)操作3次進(jìn)行純化，IgG的回收量并無大幅度減少。接著，在序列編號16所示的RNA與序列編號17-2表示的RNA的5'末端結(jié)合生物素，如上所述，從人血清將IgG純化。由其結(jié)果可知使用該RNA配體，可高純度純化IgG(圖35)。由上可知，通過將RNA適配體作為配體使用，可以在中性條件下從人血清高效且高純度地純化IgG。[實(shí)施例10]使用了由硫醇偶合劑固定的RNA適配體的IgG純化法的相關(guān)實(shí)驗(yàn)將序列編號15所示的RNA以硫醇偶合劑固定于珠，進(jìn)行與實(shí)施例9相同的下拉實(shí)驗(yàn)。在序列編號15所示的RNA的5'末端C18的連接基，使之與硫醇基結(jié)合(基因設(shè)計(jì)公司制造)。將該RNA約20嗎固定于活化的瓊脂糖珠(安瑪西亞生物科學(xué)公司制造)10pL。固定根據(jù)說明書來進(jìn)行。固定量通過利用吸光度計(jì)測定固定前的RNA量與剛固定后的上清液中RNA量來估計(jì)。由其結(jié)果可知，偶合使用的RNA中90%以上的RNA被固定。使用該RNA適配體珠，進(jìn)行與實(shí)施例9相同的下拉實(shí)驗(yàn)。向珠IO嗎加入人血清5pL及l(fā)(HiL，進(jìn)行清洗、基于中性洗脫液的洗脫，利用SDS-PAGE進(jìn)行分析(圖36)。由其結(jié)果可知IgG被高純度下拉(圖36泳道2、3)。與實(shí)施例9同樣操作，進(jìn)行使用rProteinA珠的下拉實(shí)驗(yàn)。向rProteinA珠10|iL加入人血清5|iL，清洗后加入SDS-PAGE用試樣緩沖液，于65'C加熱15分鐘，利用SDS-PAGE進(jìn)行分析(圖36泳道5)。由該下拉實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可知，通過使用經(jīng)硫醇偶合劑固定的RNA適配體珠，可以在中性條件下，從人血清中高效且高純度地純化IgG。[實(shí)施例ll]使用了經(jīng)氨基偶合而固定的RNA適配體的IgG純化法的相關(guān)實(shí)驗(yàn)在RNA的5'末端插入C12的連接基，使之與氨基結(jié)合，由氨基偶合將RNA固定在樹脂上。結(jié)合有氨基的RNA經(jīng)由化學(xué)合成制作(基因設(shè)計(jì)公司制造)。RNA的固定使用Tresyl-TOYOPEARL樹脂(東曹公司制造)。每lmL樹脂使用10mg的RNA，將約8mg的RNA固定。固定量通過吸光度計(jì)測定偶合前后的上清液中RNA的量而求得。使用該適配體樹脂，與實(shí)施例9同樣操作，進(jìn)行從人血清下拉IgG的實(shí)驗(yàn)。配體使用序列編號15(圖37)及序列編號17-7、17-8、17-7-107、15所示的RNA(圖38)。其結(jié)果顯示從這些的任何適配體樹脂，均以與rProteinA樹脂同等的純度將IgG下拉(圖37、38)。當(dāng)實(shí)施例9中使用適配體樹脂時(shí)，顯示出以200mM氯化鉀+10mMEDTA的中性洗脫液可將IgG洗脫。在此，使用經(jīng)氨基偶合而固定的序列編號17-7表示的適配體樹脂，進(jìn)行基于不同成分的中性洗脫液的IgG洗脫實(shí)驗(yàn)。洗脫液使用(l)200mM氯化鉀+10mMEDTA+pH7.6的10mMTris、(2)200mM氯化鉀+pH7.6的10mMTris、(3)300mM氯化鈉+10mMEDTA+pH7.6的10mMTris、(4)10mMEDTA+pH7.6的10mMTris。與實(shí)施例9同樣操作，將IgG從人血清下拉，使用SDS-PAGE分析用上述洗脫液洗脫的洗脫物。由其結(jié)果可知，只用氯化鉀或EDTA可將IgG洗脫(圖39)。考察用lM氯化鈉溶液是否可將IgG洗脫。由于核酸帶有負(fù)電荷，因此一般認(rèn)為在與蛋白質(zhì)的結(jié)合中主要是離子鍵。因而，要將與蛋白質(zhì)的結(jié)合分開只要使用高鹽濃度的溶液即可。使用1M氯化鈉溶液作為洗脫液，進(jìn)行與上述相同的實(shí)驗(yàn)，但洗脫液中未檢測到IgG，幾乎全吸附于適配體樹脂。為了確認(rèn)高濃度的氯化鈉存在下適配體與IgG的結(jié)合，進(jìn)行使用表面等離振子共振法的實(shí)驗(yàn)。運(yùn)行緩沖液使用500mM氯化鈉+2mM氯化鎂+10mMpH7.6的Tris混合液。由其結(jié)果可知，即使存在500mM的氯化鈉，所有結(jié)合活性均未降低。由上可知，結(jié)合于適配體樹脂的IgG可以用200mM氯化鉀溶液洗脫，但不能用1M氯化鈉溶液洗脫。接著，進(jìn)行適配體樹脂經(jīng)加熱的再生及滅菌的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。將已經(jīng)使用3次的序列編號17-17或17-18所示的適配體樹脂(l)加入超純水，于85"C加熱5分鐘或(2)加入6M尿素，于65"C加熱15分鐘，再次進(jìn)行下拉的實(shí)驗(yàn)。使用10pL的人血清，洗脫液使用200mM氯化鉀+10mMEDTA+pH7.6的10mMTris溶液。利用SDS-PAGE分析洗脫液，結(jié)果可知，經(jīng)(1)及(2)的加熱處理，適配體樹脂幾乎未惡化(圖40)?？疾煸趧?dòng)的狀態(tài)下是否可純化IgG。將適配體樹脂100|aL填充于小型柱(摩比科技公司(MoBiTec)的mobicols),加入人血清100|_iL。之后馬上用注射筒加入溶液A，清洗樹脂(溶液A:4mL，流速約lmL/分鐘)。接著，使用中性洗脫液，將結(jié)合于適配體配體的IgG洗脫(中性洗脫液2mL，流速約lmL/分鐘)。用SDS-PAGE考察洗脫的級分，結(jié)果確認(rèn)IgG被洗脫。另外，測定各級分的吸光度，求出IgG的動(dòng)態(tài)純化量，結(jié)果可知，通過1次純化，每lmL樹脂可純化3.5mg的IgG。[實(shí)施例12]使用樹脂結(jié)合型oligo的IgG下拉實(shí)驗(yàn)至此為止，將化學(xué)合成制作的適配體經(jīng)由polyA-polydT結(jié)合、生物素-鏈霉抗生物素蛋白結(jié)合、硫醇偶合、氨基偶合固定于樹脂上使用。核酸以固定于樹脂的狀態(tài)合成，合成后從樹脂分離再使用。以縮短從樹脂分離和再結(jié)合到樹脂的過程為目的，合成完成后不將核酸從樹脂分離，而直接用于下拉實(shí)驗(yàn)(樹脂結(jié)合型oligo)。樹脂結(jié)合型oligo使用將序列編號15所示的RNA在低親和性支持物(Oligoaffinitysupport)(高恩研究(GlenResearch)公司制造)上合成的(基因設(shè)計(jì)公司制造)。在樹脂lOpL中加入人血清10pL將IgG下拉，用中性洗脫液洗脫，結(jié)果IgG以高純度被純化(圖41)。[實(shí)施例13]評估對嵌合體抗體的結(jié)合活性使用表面等離振子共振法確認(rèn)本適配體對于使用基因重組技術(shù)制得的醫(yī)藥品用的抗體是否具有結(jié)合活性?？贵w使用作為醫(yī)藥品使用的利妥昔單抗(羅氏公司制造)，配體使用序列編號17-7所示的核酸。由測定的結(jié)果可知，序列編號17-7所示的核酸對利妥昔單抗具有結(jié)合活性(圖42)。[工業(yè)上的可利用性]本發(fā)明提供對IgG具有結(jié)合能的核酸配體。本發(fā)明提供的核酸配體對IgG保持高結(jié)合活性及特異性。另外，由于可以化學(xué)合成，因此可容易地改變核苷酸序列，或者增加修飾。因而，將抗體利用于醫(yī)藥*試劑*診斷藥時(shí)，可容易地根據(jù)各種需要，改變結(jié)合活性或穩(wěn)定性，或者使之結(jié)合螢光物質(zhì)或抗癌劑等增加新的功能。近年來將人化的單克隆抗體作為分子靶向藥物而實(shí)用化，進(jìn)行世界性抗體制劑的開發(fā)。因此，期待開發(fā)替代現(xiàn)在抗體純化使用的ProteinA樹脂分離劑的高功能性分離劑，該分離劑市場預(yù)測達(dá)到約500億日元左右。本發(fā)明提供的核酸配體可作為抗體純化用分離劑的配體使用，在中性條件下可簡便高純度地純化目標(biāo)抗體。這與以往的使用ProteinA的在酸性條件下的純化大大不同，純化中抗體失活的可能性小。另外，本發(fā)明提供的核酸配體可廣泛用作用于結(jié)合抗體與螢光物質(zhì)或酶的新型連接基、用于將抗體固定于基板或樹脂的新型固定化劑、用于將抗體與抗癌劑或毒素結(jié)合的新型連接基。本發(fā)明可期待廣泛用作與抗體相關(guān)的新型分離劑、試劑、醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化及研究用工具，其經(jīng)濟(jì)效果也大。本專利申請以2005年7月5日在日本提出專利申請的2005-195717及2005年12月12日在美國提出申請的美國臨時(shí)申請US60/749026為基礎(chǔ)，其內(nèi)容援用于本說明書中。權(quán)利要求1.一種適配體，其特征在于，結(jié)合于IgG的Fc部分。2.如權(quán)利要求1所述的適配體，其特征在于，與作為IgG的Fc部分的人IgG的Fc部分特異性結(jié)合。3.如權(quán)利要求1或2所述的適配體，其特征在于，構(gòu)成適配體的總核苷酸數(shù)為40個(gè)以下。4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的適配體，其特征在于，所述適配體含有的至少一種核苷酸為于核糖的2'位含有選自氫原子、氟原子、羥基及-O-Me基的至少2種基團(tuán)的核苷酸。5.如權(quán)利要求3所述的適配體，其特征在于，所述適配體含有GGUG(C/A)(U/T)所示的核苷酸序列。6.如權(quán)利要求5所述的適配體，其特征在于，所述GGUG(C/AXU/T)中第3個(gè)的U為于核糖的2'位的羥基被氟原子取代的核苷酸。7.如權(quán)利要求6所述的適配體，其特征在于，所述GGUG(C/A)(U/T)中的除第3個(gè)的U之外的各核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。8.如權(quán)利要求5所述的適配體，其特征在于，所述GGUG(C/A)(U/T)為GGUGCU或GGUGAU。9.如權(quán)利要求5所述的適配體，其特征在于，還含有ANC所示的核苷酸序列，其中N為選自A、G、C、U及T的核苷酸。10.如權(quán)利要求9所述的適配體，其特征在于，ANC中的各核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2，位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2，位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。11.如權(quán)利要求9所述的適配體，其特征在于，所述適配體為以下(i)至(iii)中的任一者(i)于GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGA，且于ANC的3，側(cè)含有UCC;(ii)于GGUG(C/AXU/T)的5'側(cè)含有GGNxlA，且于ANC的3'側(cè)含有UNx2CC，其中，Nxl、Nx分別為選自A、G、C、U及T的核苷酸；或，(iii)于GGUG(C/A)(U/T)的5'側(cè)含有GGNx3Nx4A，且于ANC的3，側(cè)含有UNxsNx6CC，其中，Nx3、Nx4、Nx5、Nx6分另U為選自A、G、C、U及T的核苷酸。12.如權(quán)利要求11所述的適配體，其特征在于，所述GGA、GGNxlA或GGNx3Nx4A中含有的GG，以及所述UCC、UNx2CC或UNx5Nx6CC中含有的CC分別為于核糖的2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸。13.如權(quán)利要求6所述的適配體，其特征在于，具有以下(I)至(III)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu)式中，N1、N2、N3、N4、N5分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T的核苷酸，NZ及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸，W及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸，(i)GGUG(C/A)(U/T)中的除第3個(gè)的U之外的各核苷酸、(ii)AN'C中的各核苷酸、(iii^至N5的各核苷酸分別為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。14.如權(quán)利要求11所述的適配體，其特征在于，環(huán)結(jié)構(gòu)中的所有核苷酸于核糖的2'位的羥基被氫原子取代。15.如權(quán)利要求13所述的適配體，其特征在于，具有(I)至(III)中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)的適配體具有以下(r)至(m')中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>式中，N1、N2、N3、N4、NS的意義分別與權(quán)利要求13的相同。16.如權(quán)利要求3所述的適配體，其特征在于，含有AGGUG(C/A)(U/T)C所示的核苷酸序列，AGGUG(C/A)(U/T)C中第4個(gè)的U為于核糖的2'位的羥基被氟原子取代的核苷酸，AGGUG(C/A)(U/T)C中的除第4個(gè)的U之外的各核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。17.如權(quán)利要求16所述的適配體，其特征在于，還含有GANCU所示的核苷酸序列，GANCU中的各核苷酸分別相同或不同，為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸，其中，N為選自A、G、C、U及T的核苷酸。18.如權(quán)利要求6所述的適配體，其特征在于，具有以下(Ia)至(IIIa)表示的潛在性二級結(jié)構(gòu):式中，N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7分別相同或不同，為選自A、G、C、U及T的核苷酸，W及NS為互相互補(bǔ)的核苷酸，W及N5為互相互補(bǔ)的核苷酸，NS及N〒為互相互補(bǔ)的核苷酸，(i)GGUG(C/A)(U/T)中的除第3個(gè)的U之外的核苷酸、(ii)AN10的各核苷酸、(iii)NZ至N〒的各核苷酸分別為于核糖的2'位含有羥基的核苷酸，或于核糖的2'位的羥基被氫原子、氟原子或-O-Me基取代的核苷酸。19.如權(quán)利要求18所述的適配體，其特征在于，具有(Ia)至(IIIa)中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)的適配體具有以下(Ia')至(IIIa')中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>Ga')式中，N1、N2、N3、N4、NS的意義與權(quán)利要求18的相同。20.如權(quán)利要求19所述的適配體，其特征在于，所述N4、NS分別為于2'位的羥基被氫原子取代的核苷酸，所述N5、:^分別為于2'位含有羥基的核苷酸。21.如權(quán)利要求19的適配體，其特征在于，具有(Ia')至(IIIa')中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)的適配體具有以下(Ia"')至(IIIa"')中任一項(xiàng)所示的潛在性二級結(jié)構(gòu)22.如權(quán)利要求3所述的適配體，其特征在于，為以下(a)至(c)中的任一者(a)由序列編號1至23中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列組成的適配體，其中，尿嘧啶也可為胸腺嘧啶；(b)由序列編號1至23中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列所示的核苷酸序列中的1個(gè)或數(shù)個(gè)核苷酸經(jīng)取代、缺失或附加后的核苷酸序列所組成的適配體，其中，尿噴啶也可為胸腺嘧啶；(c)選自所述(a)的連結(jié)物、所述(b)的連結(jié)物及所述(a)與(b)的連結(jié)物的連結(jié)物。23.—種復(fù)合體，其特征在于，含有權(quán)利要求1至22中任一項(xiàng)所述的適配體及與所述適配體結(jié)合的功能性物質(zhì)。24.如權(quán)利要求23所述的復(fù)合體，其特征在于，所述功能性物質(zhì)為親和性物質(zhì)、標(biāo)記用物質(zhì)、酶、藥物、毒素或藥物傳遞介質(zhì)。25.—種固相載體，其特征在于，固定有權(quán)利要求1至22中任一項(xiàng)所述的適配體或者權(quán)利要求23或24所述的復(fù)合體。26.如權(quán)利要求25所述的固相載體，其特征在于，所述固相載體為基板、樹脂、板、過濾器、筒、柱或多孔質(zhì)材。27.—種醫(yī)療用設(shè)備，其特征在于，含有權(quán)利要求25或26所述的固相載體。28.如權(quán)利要求27所述的設(shè)備，其特征在于，所述醫(yī)療用設(shè)備為血液凈化用設(shè)備。29.—種診斷用或檢查用試劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1至22中任一項(xiàng)所述的適配體、權(quán)利要求23或24所述的復(fù)合體或者權(quán)利要求25或26所述的固相載體。30.—種藥物，其特征在于，含有權(quán)利要求1至22中任一項(xiàng)所述的適配體或者權(quán)利要求23或24所述的復(fù)合體。31.—種抗體純化或濃縮方法，其特征在于，包括使IgG抗體吸附至權(quán)利要求25或26所述的固相載體，再用洗脫液使所吸附的IgG抗體洗脫的步驟。32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，洗脫液為中性溶液。33.—種純化抗體的制造方法，其特征在于，包括制備IgG抗體，再將制備的IgG抗體通過權(quán)利要求25或26所述的固相載體純化的步驟。34.—種IgG的檢測及/或定量方法，其特征在于，包括使用權(quán)利要求1至22中任一項(xiàng)所述的適配體、權(quán)利要求23或24所述的復(fù)合體或者權(quán)利要求25或26所述的固相載體，測定試樣中有無IgG及/或IgG的量的步驟。全文摘要本發(fā)明提供了針對IgG的新型適配體及其利用方法等。更詳細(xì)地說，本發(fā)明提供了與IgG(例如人IgG)的Fc部分結(jié)合的適配體；含有適配體和與其結(jié)合的功能性物質(zhì)(例如，親和性物質(zhì)、標(biāo)記用物質(zhì)、酶、藥物、藥物傳遞介質(zhì))的復(fù)合體；固定有適配體或復(fù)合體的固相載體；含有固相載體的醫(yī)療器械；抗體純化方法，其中包括使IgG抗體吸附到固相載體，再用洗脫液使吸附的IgG抗體洗脫的步驟；純化抗體的制造方法，其中包括制備IgG抗體，再通過固相載體將制得的IgG抗體純化的步驟。文檔編號C12N15/09GK101258241SQ200680032429公開日2008年9月3日申請日期2006年7月5日優(yōu)先權(quán)日2005年7月5日發(fā)明者中村義一,宮川伸申請人:力博美科股份有限公司