專(zhuān)利名稱：一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及用于奶牛飼料的生物添加劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
牛奶被譽(yù)為“綠色食品、白色血液”。近年來(lái)，隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)持續(xù)、穩(wěn)定的發(fā)展和人均生活水平的不斷提高，國(guó)家和各地方紛紛把奶業(yè)列入了突出發(fā)展的產(chǎn)業(yè)。近幾年來(lái)，國(guó)內(nèi)乳品市場(chǎng)的規(guī)模大幅度增長(zhǎng)，從2000年到2005年，奶類(lèi)產(chǎn)量增長(zhǎng)了211.7％，但與發(fā)達(dá)國(guó)家相比，我國(guó)奶業(yè)的整體發(fā)展水平還不高。據(jù)權(quán)威機(jī)構(gòu)分析，我國(guó)城鎮(zhèn)居民人均消費(fèi)每年也只有20公斤左右，是世界平均水平的1/5，而發(fā)達(dá)國(guó)家人均每年消費(fèi)量則達(dá)到320公斤，是我國(guó)的16倍，差距極大。牛奶的產(chǎn)量和消費(fèi)量直接體現(xiàn)了一個(gè)國(guó)家的國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)優(yōu)化程度和國(guó)民的營(yíng)養(yǎng)狀況。我國(guó)奶業(yè)目前的生產(chǎn)與消費(fèi)水平，與我國(guó)整體的經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平是不相符的，根據(jù)我國(guó)的產(chǎn)業(yè)發(fā)展政策及經(jīng)濟(jì)發(fā)展預(yù)測(cè)，未來(lái)的10年中，中國(guó)將成為世界上最大的牛奶消費(fèi)市場(chǎng)。我國(guó)奶業(yè)的發(fā)展存在著極大潛力和市場(chǎng)空間。
乳脂肪是牛奶的主要成分之一，在牛奶中含量一般為3％-5％。由于乳脂率與乳蛋白率、干物質(zhì)和熱能含量等均呈正相關(guān)，而且乳脂是左右乳制品風(fēng)味的主要因子，所以通常把乳脂率視為乳質(zhì)量的標(biāo)志。在我國(guó)，除黑龍江、內(nèi)蒙古等地乳脂率可達(dá)3.4％-3.6％，其它地區(qū)大多在3.0％-3.2％，而在日本目前平均含脂率已達(dá)3.8％。而從奶牛單產(chǎn)水平來(lái)看，目前我國(guó)奶牛年平均單產(chǎn)只有4000千克左右，約為美國(guó)奶牛年單產(chǎn)的一半水平。因此，我國(guó)奶牛產(chǎn)奶量及奶質(zhì)與發(fā)達(dá)國(guó)家及地區(qū)存在著較大的差距。提高奶牛的產(chǎn)奶量和乳脂率已成為我國(guó)當(dāng)前奶牛產(chǎn)業(yè)亟需要解決的問(wèn)題。
目前在奶牛養(yǎng)殖中，主要通過(guò)下面幾種方式來(lái)提高奶質(zhì)和奶牛單產(chǎn)一是通過(guò)育種手段來(lái)提高奶牛的種質(zhì)質(zhì)量；二是添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，改善日糧結(jié)構(gòu)，提高飼養(yǎng)水平；三是通過(guò)添加適量?jī)?yōu)質(zhì)安全的飼料添加劑，調(diào)整奶牛的瘤胃內(nèi)環(huán)境，以改善營(yíng)養(yǎng)利用和能量轉(zhuǎn)換。因?yàn)槟膛ＩL(zhǎng)所需的50％-80％的蛋白質(zhì)和約80％的能量均由瘤胃內(nèi)微生物菌群對(duì)飼料進(jìn)行分解后所提供，因此調(diào)控瘤胃內(nèi)環(huán)境或直接改變瘤胃微生物的組成是提高奶牛生產(chǎn)性能的重要途徑之一。國(guó)內(nèi)外大量的研究表明，在相同的營(yíng)養(yǎng)條件和飼養(yǎng)水平下，日糧中添加適量奶牛專(zhuān)用的酵母培養(yǎng)物，能有效地促進(jìn)奶牛瘤胃中微生物總量的增加，尤其是可以有效促進(jìn)瘤胃中纖維素分解菌和乳酸利用菌的濃度，以加快纖維消化速率和促進(jìn)瘤胃中pH穩(wěn)定性，提高飼料的轉(zhuǎn)化及奶牛的采食量，改善揮發(fā)性脂肪酸比例，增加氨的利用，增加微生物蛋白質(zhì)量，提高蛋白質(zhì)品質(zhì)，從而提高奶牛的產(chǎn)奶量及奶質(zhì)。國(guó)外大量的應(yīng)用試驗(yàn)已證明，在奶牛日糧中添加酵母培養(yǎng)物，可提高奶牛的產(chǎn)奶量和乳脂率。同時(shí)酵母培養(yǎng)物中，含有豐富的氨基酸、維生素、酶及一些重要的輔助因子，可以有效提高家畜對(duì)飼料中粗蛋白、粗纖維、礦物元素、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分及能量的消化、吸收；而作為直接飼用活菌制劑，酵母培養(yǎng)物還能促進(jìn)幼、病奶牛胃腸發(fā)育和功能的恢復(fù)提高，進(jìn)而增強(qiáng)畜體免疫力和抗病力，減少環(huán)境應(yīng)激和生理應(yīng)激所帶來(lái)的不利影響，提高奶牛的生產(chǎn)性能。因此，酵母培養(yǎng)物在牛奶生產(chǎn)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值和意義。
近十年來(lái)，酵母培養(yǎng)物作為一種直接飼用的微生物類(lèi)飼料添加劑，用以提高反芻動(dòng)物生產(chǎn)性能，在國(guó)內(nèi)得到較多的關(guān)注其中，有研究利用啤酒糟(啤酒酵母)飼喂奶牛，對(duì)奶牛產(chǎn)奶有較好的促進(jìn)作用；中科院畜牧所研究了酵母培養(yǎng)物對(duì)瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系及日糧發(fā)酵的影響，對(duì)酵母培養(yǎng)物對(duì)反芻動(dòng)物的作用機(jī)理進(jìn)行了探討；東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，申請(qǐng)?zhí)枮?00510009950.1，名稱為“改善奶牛生產(chǎn)性能的酵母培養(yǎng)物及其培養(yǎng)方法”的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)，對(duì)以扣囊復(fù)膜孢酵母為菌種發(fā)酵所制得的產(chǎn)品，有特定的使用時(shí)期，主要應(yīng)用于奶牛泌乳前期(0-140d)，同時(shí)其作用僅局限于提高產(chǎn)奶量而未涉及提高奶品質(zhì)-乳脂率。在國(guó)外，如美國(guó)，酵母培養(yǎng)物已存在50多年，是一種被廣泛接受的飼料產(chǎn)品。據(jù)調(diào)查，50％的美國(guó)奶牛改良協(xié)會(huì)的頂級(jí)牛群和全美國(guó)35％以上的商品奶牛在其一種或幾種日糧中添加酵母培養(yǎng)物或酵母產(chǎn)品。而在歐盟、澳大利亞、韓國(guó)等許多國(guó)家在酵母培養(yǎng)的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用上都開(kāi)展了廣泛的研究，并均已形成了物化產(chǎn)品。目前，許多國(guó)外生產(chǎn)的奶牛用酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品已進(jìn)入我國(guó)市場(chǎng)，如韓國(guó)生產(chǎn)的賽克靈、YC-100，美國(guó)的益康“XP”等。這些產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)進(jìn)行了應(yīng)用效果試驗(yàn)，在特定的日糧條件下，對(duì)提高奶產(chǎn)量及奶質(zhì)均有較明顯的作用，但國(guó)外產(chǎn)品也同時(shí)存在下列問(wèn)題一是價(jià)格比較昂貴，如益康“XP”的價(jià)格為每噸10000多元；二是不同酵母培養(yǎng)物的作用往往受不同日糧類(lèi)型及組成的影響較大，而目前國(guó)內(nèi)外的奶牛在日糧類(lèi)型及飼養(yǎng)水平上還存在著很大的差異，因此盡快地選育出當(dāng)?shù)氐慕湍妇N并輔以最佳的制備工藝，開(kāi)發(fā)出能適應(yīng)我國(guó)目前奶牛日糧條件和飼養(yǎng)水平的奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑，有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對(duì)國(guó)外奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑所存在的價(jià)格比較昂貴與其作用不適應(yīng)我國(guó)目前奶牛日糧類(lèi)型及組成等問(wèn)題，提供一種能適應(yīng)我國(guó)目前奶牛飼料類(lèi)型及組成的，菌數(shù)含量高，原材料豐富，價(jià)格低廉，質(zhì)量穩(wěn)定，能有效提高產(chǎn)奶量與乳脂率的奶牛專(zhuān)用飼料酵母培養(yǎng)物添加劑；本發(fā)明的另一目的是提供制備該添加劑的高效酵母菌株；本發(fā)明的再一目的是提供該添加劑的具體制備方法。
本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)本發(fā)明釀酒酵母菌菌株的分離、篩選與保藏于2001年從杭州、金華及北京、沈陽(yáng)、南京等不同地區(qū)采集堆積牛糞、豬糞、雞糞的土壤樣品，利用不同類(lèi)菌種常規(guī)培養(yǎng)基從中定向分離出酵母菌、放線菌和芽孢桿菌共71株，并進(jìn)行菌株純化，其中分離純化得到酵母菌共21株。將分離獲得的酵母菌株和實(shí)驗(yàn)室保藏及引進(jìn)的酵母菌株為對(duì)照，共53個(gè)分別在無(wú)菌操作下，取一環(huán)斜面菌種接入60ml PDA馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，于28℃，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分的搖床中，培養(yǎng)24小時(shí)；將培養(yǎng)好的液體菌種，按1％的接種量接入滅菌冷卻后的固體發(fā)酵培養(yǎng)基(豆粕86％，麩皮7.45％，葡萄糖3.5％，尿素1.0％，K2HPO42.0％，生物素0.05％，)中，攪拌均勻，于28℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)64h，出料，于50℃烘干，粉碎后進(jìn)行有效活菌數(shù)測(cè)定，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果從自選的21株酵母菌中初篩得到15株菌數(shù)高的菌株。將這15株菌株按上述同樣條件發(fā)酵烘干后，粉碎，過(guò)60目篩，作為待測(cè)樣品；分別將待測(cè)樣品按2.5％的添加量(每管200mg)與日糧精粗比為40∶60的日糧(精糧組成10％豆粕、10％菜粕和80％玉米；粗糧組成20％青貯玉米和80％羊草)混合均勻后，加入瘤胃管中，加樣時(shí)把樣品直接送入管底，不能碰壁，以免造成誤差；另取當(dāng)天清晨瘺管羊的瘤胃液，與緩沖液(NH4HCO34.0g；NaHCO335.0g；加蒸餾水至1000ml)按1∶2混合均勻，按每管30ml混合液加入瘤胃管中，與待測(cè)樣品混勻后，排氣，于39℃水浴中，轉(zhuǎn)速為30rpm/min，進(jìn)行反應(yīng)，每個(gè)樣品重復(fù)3管，24h后管上的刻度讀數(shù)即為管內(nèi)菌株的產(chǎn)氣量；根據(jù)產(chǎn)氣量結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，其中，釀酒酵母菌株WY238與對(duì)照組有顯著差異，產(chǎn)氣量明顯高于對(duì)照組，因此確定菌株WY238為酵母培養(yǎng)物發(fā)酵用菌種并申請(qǐng)菌種保藏，該菌株取樣分離自浙江金華。
保藏菌株的形態(tài)、培養(yǎng)、生理、生化等特征菌株WY238屬釀酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Meyen exHansen)；在麥芽汁液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，細(xì)胞球形，卵形至橢圓形，大小為(4.8-7.2)×(4.8-9.6)um；在麥芽汁瓊脂斜面上培養(yǎng)時(shí)菌落奶酪狀，乳白色，表面平滑，邊緣整齊。
該菌株已于2007年4月20日，在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)CGMCC No.2013。
一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑，該添加劑可按以下方法制得(1)培養(yǎng)基的配制，其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號(hào)CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上于28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無(wú)菌操作下，取一環(huán)酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分的搖床中，培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無(wú)菌水中于室溫活化菌種1小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃培養(yǎng)間中，培養(yǎng)72小時(shí)后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產(chǎn)品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體菌種，放入無(wú)菌水中活化菌種一小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關(guān)閉門(mén)窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上后，打開(kāi)門(mén)窗、地上灑水或利用電風(fēng)扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時(shí)后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋后制成奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑。
一種制備所述奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑的方法，按以下步驟進(jìn)行(1)培養(yǎng)基的配制其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號(hào)CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上于28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無(wú)菌操作下，取一環(huán)酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分的搖床中，培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無(wú)菌水中于室溫活化菌種1小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃的培養(yǎng)間中，培養(yǎng)72小時(shí)后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產(chǎn)品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體菌種，放入無(wú)菌水中活化菌種一小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關(guān)閉門(mén)窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上時(shí)，打開(kāi)門(mén)窗、地上灑水或利用電風(fēng)扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時(shí)后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋即成產(chǎn)品。
本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明采用了自行分離、篩選與保藏的釀酒酵母菌株WY238為培養(yǎng)菌種，并通過(guò)對(duì)該菌的習(xí)性研究與各因素的影響試驗(yàn)，確定適合的C、N比，生長(zhǎng)溫度、接種量和培養(yǎng)基的配方，輔以最適宜的制備工藝與方法，所制菌劑產(chǎn)品能較好適應(yīng)我國(guó)目前奶牛飼料的類(lèi)型及組成，取得好的飼料添加劑效果。
2、本發(fā)明產(chǎn)品所用原料豐富，價(jià)格低廉，一噸產(chǎn)品的價(jià)格在5000元上下，較進(jìn)口產(chǎn)品如美國(guó)益康“XP”便宜一半左右；同時(shí)產(chǎn)品菌數(shù)含量較高，一般都在2-7×108個(gè)/克左右，而其它產(chǎn)品的菌數(shù)一般僅在幾千萬(wàn)個(gè)左右，產(chǎn)品的質(zhì)量也較穩(wěn)定。
3、奶牛飼料中添加本發(fā)明酵母培養(yǎng)物后取得了較理想的飼養(yǎng)效果，其中，能增加奶牛對(duì)干物質(zhì)的采食量0.76％-1.95％(見(jiàn)表3)；可提高奶牛產(chǎn)奶量6.97％-8.20％(見(jiàn)表4)，并延緩了產(chǎn)奶量的下降趨勢(shì)；提高乳脂率3.78％-5.23％，降低乳糖率3.09-4.19％，對(duì)乳蛋白率、總固體、非脂乳固體的影響較小(見(jiàn)表5)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1(本發(fā)明產(chǎn)品的配方與制備方法1)葡萄糖分析純，國(guó)產(chǎn)；尿素46％，國(guó)產(chǎn)；K2HPO4分析純，國(guó)產(chǎn)；生物素VB，國(guó)產(chǎn)。
奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑按以下方法步驟制備(1)培養(yǎng)基的配制，其中固體培養(yǎng)基的配制馬鈴薯200g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水1L，備用；液體培養(yǎng)基的配制馬鈴薯200g、葡萄糖2g、水1L，備用；固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕81％，麩皮15％，葡萄糖2.4％，尿素0.5％，K2HPO41.09％，生物素0.01％；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號(hào)CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)PDA斜面固體培養(yǎng)基上于28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無(wú)菌操作下，取一環(huán)酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)PDA液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分的搖床中，培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將步驟(1)固體菌種放大培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無(wú)菌水中于室溫中放置1個(gè)小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃的培養(yǎng)間中，培養(yǎng)72小時(shí)后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產(chǎn)品的制備將步驟(1)固體菌種批量產(chǎn)品培養(yǎng)基以1∶1的比例加水?dāng)嚢杈鶆?，?21℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出冷卻備用；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體菌種，放入無(wú)菌水中活化菌種一小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基，拌勻；放入培養(yǎng)間，關(guān)閉門(mén)窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上時(shí)，打開(kāi)門(mén)窗、地上灑水或利用電風(fēng)扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時(shí)后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋即成產(chǎn)品。
實(shí)施例2(本發(fā)明產(chǎn)品的配方與制備方法2)本實(shí)施例固體菌種放大培養(yǎng)基與固體菌種批量產(chǎn)品培養(yǎng)基，均按豆粕86％，麩皮7.45％，葡萄糖3.5％，尿素1％，K2HPO42％，生物素0.05％的比例進(jìn)行配比，其余制備方法均同于實(shí)施例1；實(shí)施例3(本發(fā)明產(chǎn)品的配方與制備方法3)批量產(chǎn)品制備時(shí)的固體菌種培養(yǎng)基，按豆粕88.5％，麩皮3％，葡萄糖4％，尿素1.4％，K2HPO43％，生物素0.10％的比例進(jìn)行配比外，其余制備方法均同于實(shí)施例1；試驗(yàn)例4(本發(fā)明產(chǎn)品與現(xiàn)有產(chǎn)品的應(yīng)用效果對(duì)比試驗(yàn))選擇健康的荷斯坦泌乳牛33頭，按年齡、胎次、泌乳天數(shù)與日產(chǎn)奶量相近的進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，分成試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組及CK，每組11頭，CK為對(duì)照組。預(yù)試期各組奶牛產(chǎn)奶量差異不顯著(p＞0.05)，詳見(jiàn)表1。
表1供試牛的基本情況

試驗(yàn)在浙江東興實(shí)業(yè)有限公司伊康乳業(yè)分公司的奶牛場(chǎng)內(nèi)進(jìn)行，于2006年10月21日開(kāi)始，預(yù)試期10天，11月1日進(jìn)入正試期，2007年1月1日結(jié)束，試驗(yàn)期60天。
三組營(yíng)養(yǎng)水平完全相同(見(jiàn)表2)。正試期開(kāi)始后，其它條件不變，試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組的日糧是在對(duì)照組日糧的基礎(chǔ)上分別添加實(shí)施例2的酵母培養(yǎng)物120g/頭·日和250g/頭·日，添加的酵母培養(yǎng)物與TMR混合后，每天一次性飼喂。對(duì)照組日糧中不添加任何抗生素或藥物添加劑。各組TMR配方完全相同，并且同一車(chē)攪拌完成。
表2試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ占Z配方及營(yíng)養(yǎng)水平

試驗(yàn)牛的飼養(yǎng)管理和生活環(huán)境完全相同，并有專(zhuān)人飼養(yǎng)、擠奶。牛只編號(hào)后在開(kāi)放式固定槽位栓系飼養(yǎng)，固定料桶飼喂，自由飲水。每天分早、中、晚三次定量定位飼喂，三次機(jī)械擠奶，每次擠奶后由專(zhuān)人負(fù)責(zé)稱量記錄；每5天收集奶樣(每天三次奶的混合)測(cè)定乳脂率、乳糖率、乳蛋白率、總固體、非脂乳固體；TMR(Total Mixed Ration)喂量每次飼喂前由專(zhuān)人負(fù)責(zé)稱量上槽，以組為單位每天記錄每組牛的采食量，并取樣測(cè)定含水量以計(jì)算每頭牛每天的平均干物質(zhì)采食量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表3添加YC對(duì)奶牛干物質(zhì)采食量和日增重的影響

注在任意三個(gè)均數(shù)后用相同字母，表示三者差異不顯著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差異顯著(p＜0.05)。
表4試驗(yàn)前后及試驗(yàn)各組產(chǎn)奶量的比較

注在任意三個(gè)均數(shù)后用相同字母，表示三者差異不顯著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差異顯著(p＜0.05＝。
表5添加YC對(duì)試驗(yàn)期乳成分的影響

注在任意三個(gè)均數(shù)后用相同字母，表示三者差異不顯著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差異顯著(p＜0.05)。
小結(jié)3.1日糧中添加酵母培養(yǎng)物能顯著提高奶牛日增重，酵母培養(yǎng)物通過(guò)維持瘤胃pH穩(wěn)定，從而增加纖維消化菌、乳酸利用菌等有益微生物的數(shù)量，提高飼料纖維消化率，增加可用營(yíng)養(yǎng)素，提高日增重。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組的日增重分別增加8.59％和15.04％，與對(duì)照組差異顯著。結(jié)果說(shuō)明，添加酵母培養(yǎng)物能提高奶牛日增重，促進(jìn)奶牛體重的恢復(fù)，添加量為250g/頭·日的試驗(yàn)II組效果更好。
3.2從試驗(yàn)結(jié)果可知，添加酵母培養(yǎng)物對(duì)奶牛產(chǎn)奶量有一定影響。試驗(yàn)期奶牛處于產(chǎn)奶中后期，產(chǎn)奶量呈逐漸下降的趨勢(shì)，對(duì)照組產(chǎn)奶量的下降幅度為8.42％，而添加酵母培養(yǎng)物的試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組的下降幅度分別為2.02％和0.86％，與對(duì)照組有顯著差異，說(shuō)明添加酵母培養(yǎng)物能延長(zhǎng)奶牛的泌乳高峰期，延緩產(chǎn)奶量的下降，從而增加奶牛的產(chǎn)奶量；試驗(yàn)期內(nèi)試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組的產(chǎn)奶量分別比對(duì)照組提高6.97％和8.20％，差異顯著，而日喂250g/頭·日的試驗(yàn)II組的效果更佳。
3.3添加酵母培養(yǎng)物對(duì)對(duì)提高奶牛的乳成分，特別是乳脂率有一定的促進(jìn)作用。試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組的乳脂率分別比對(duì)照組提高3.78％和5.23％，這可能是因?yàn)槭褂肶C后，牛瘤胃中幫助消化的有益細(xì)菌增加，纖維分解菌和乳酸利用菌的數(shù)量增加，改善了牛瘤胃內(nèi)的代謝，促進(jìn)了纖維素等消化，增加了乳脂的合成原料，從而增加牛乳乳脂率。對(duì)其它乳成分的影響不大。
權(quán)利要求
1.釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Meyen ex Hansen)菌株WY238，其菌株保藏號(hào)為CGMCC No.2013。
2.一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑，該添加劑可用下述方法制得(1)培養(yǎng)基的配制，其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號(hào)CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無(wú)菌操作下，取一環(huán)釀酒酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分，搖床培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，活化1個(gè)小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃培養(yǎng)間，培養(yǎng)72小時(shí)后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產(chǎn)品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體放大菌種，活化一小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關(guān)閉門(mén)窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上后，控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時(shí)后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋后制成奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑。
3.一種制備權(quán)利要求1所述添加劑的方法，其特征在于按以下步驟(1)培養(yǎng)基的配制其中a)斜面培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基，備用；b)液體菌種培養(yǎng)基的配制馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，備用；c)固體菌種培養(yǎng)基的配制豆粕80-93％，麩皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，備用；(2)斜面菌種的培養(yǎng)將保藏號(hào)CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏備用；(3)液體菌種的制備在無(wú)菌操作下，取一環(huán)釀酒酵母菌株WY238斜面菌種接入60ml步驟(1)液體菌種培養(yǎng)基中，于28℃，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分，搖床培養(yǎng)24小時(shí)，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4)固體菌種放大培養(yǎng)將固體培養(yǎng)基與水按1∶1比例混勻，放入滅菌鍋中121℃，0.1Mpa，滅菌30分鐘，取出自然冷卻；按固體培養(yǎng)基重1％吸取液體菌種，接入同等量的無(wú)菌水中于室溫活化菌種1小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；拌勻后放入30℃的培養(yǎng)間，培養(yǎng)72小時(shí)后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量產(chǎn)品的制備固體培養(yǎng)基按步驟(4)同樣比例條件加水拌勻、滅菌至冷卻；按制備菌劑重量的1％稱取步驟(4)的固體放大菌種，放入無(wú)菌水中活化菌種一小時(shí)后接入固體培養(yǎng)基；放入培養(yǎng)間，關(guān)閉門(mén)窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28℃-30℃，待料溫上升至40℃以上時(shí)，打開(kāi)門(mén)窗、地上灑水或利用電風(fēng)扇把料溫控制在40℃至50℃，培養(yǎng)72小時(shí)后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，裝袋即成產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種奶牛飼料酵母培養(yǎng)物添加劑及其制備方法，屬于奶牛飼料生物添加劑及其制備技術(shù)領(lǐng)域。該添加劑可用以下方法制備以菌株保藏號(hào)CGMCC No.2013的釀酒酵母菌株WY238為菌種，經(jīng)培養(yǎng)基的配制；斜面菌種與液體菌種的培養(yǎng)；固體菌種放大和批量產(chǎn)品的培養(yǎng)等步驟制備而成。本發(fā)明產(chǎn)品能較好適應(yīng)我國(guó)目前奶牛飼料的類(lèi)型及組成；所用原料豐富，價(jià)格低廉；產(chǎn)品菌數(shù)含量高，質(zhì)量穩(wěn)定，能增加奶牛對(duì)干物質(zhì)的采食量0.76％－1.95％，可提高奶牛產(chǎn)奶量6.97％－8.20％，并提高乳脂率3.78％－5.23％，取得較好的飼料添加劑效果?？稍谔砑觿┥a(chǎn)與奶牛飼養(yǎng)業(yè)推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A23L1/16GK101040691SQ200710068199
公開(kāi)日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2007年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月25日
發(fā)明者湯江武, 姚曉紅, 吳逸飛, 吳新民 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院