專利名稱：隱藏嗜酸菌DX1-1菌株積累聚-β-羥基丁酸酯的條件的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及隱藏嗜酸菌(A^V^/^7^yz7C2T/^咖)DX1-l菌 株積累聚-e-羥基丁酸酯(PHB)的條件。
背景技術(shù)：
聚0 -羥基丁酸酯(PHB)是P -羥基丁酸首尾酯化反應(yīng)得到 的一種高分子聚合酯類。它除了具有高聚物的基本性質(zhì)如質(zhì)輕、彈性好、可 塑性大、耐磨性高、抗射線強(qiáng)等外,還具有生物可降解性和生物相容性，因此 PHB作為一種新型的可生物降解高分子材料具有廣泛的應(yīng)用前景。目前使用 的PHB大部分來源于微生物積累，用于產(chǎn)生PHB顆?；騊HB類似物的原核生 物既有革蘭氏陰性菌、也有革蘭氏陽(yáng)性菌。在營(yíng)養(yǎng)均衡的情況下，微生物不 會(huì)合成PHB，但在碳、氮營(yíng)養(yǎng)失衡(如碳源過剩、而其它如氮、磷、硫等營(yíng)養(yǎng) 限制)的情況下，某些微生物就會(huì)合成PHB。因此研究P朋積累菌的營(yíng)養(yǎng)條件， 對(duì)提高PHB產(chǎn)量具有重要的意義。生產(chǎn)PHB時(shí)不同的菌種有不同的營(yíng)養(yǎng)要求 和培養(yǎng)條件要求，現(xiàn)在研究較多的是碳源、氮源、溫度和pH。常用的碳源為 葡萄糖，常用的氮源為銨鹽，溫度和pH則因菌種的不同相差較遠(yuǎn)。發(fā)明內(nèi)容為了提高隱藏嗜酸菌DX1-1菌株P(guān)HB的產(chǎn)量，本發(fā)明提供該 菌生產(chǎn)PHB的較為有利的生長(zhǎng)條件。自然界中的隱藏嗜酸菌"cA/y/ / ih'"/z ciy/^鵬) 一般存在于酸性礦坑 水中，與生物浸礦密切相關(guān)。隱藏嗜酸菌DX1-1菌株，16SrRNA基因序列已 登錄于Genbank，登錄號(hào)為DQ168464。其保藏號(hào)為CCTCC NO:M 208056。該 菌既可以氧化低價(jià)態(tài)硫獲取能量進(jìn)行自養(yǎng)生長(zhǎng)，又可以利用有機(jī)質(zhì)進(jìn)行異養(yǎng) 生長(zhǎng)。同時(shí)，該菌異養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)，不僅生長(zhǎng)迅速，而且胞內(nèi)能產(chǎn)生大量聚合物顆粒，該聚合物經(jīng)紅外和紫外光譜檢測(cè)證實(shí)為raB，具有進(jìn)一步開發(fā)成PHB新型生產(chǎn)菌的潛力。而目前關(guān)于該菌積累PHB的條件開展的研究工作較少， 因此研究該菌積累PHB的條件如碳源、氮源、溫度和pH對(duì)實(shí)現(xiàn)該菌生產(chǎn)PHB 的工業(yè)化是必不可少的的。隱藏嗜酸菌DX1-1菌株積累聚-P -羥基丁酸酯的條件，以KC1 0. lg/L， K2HP04 0. 5g/L， MgS04 7H20 0. 5g/L， Ca(N03)2 0. Olg/L為基鹽，加入葡萄糖 12 17g/L，硝酸銨5 7g/L， pH 2.8 3.2。本發(fā)明大大提高了DX1-1菌株P(guān)HB的產(chǎn)量，最高達(dá)到19. 75g/L，是優(yōu)化 前PHB產(chǎn)量的4.5倍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例11菌種的培養(yǎng)和收集將1W/Mi力'^ "y/ z^z菌DX1-1菌株在不同營(yíng)養(yǎng)條件和pH的培養(yǎng)環(huán) 境進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)數(shù)后期10000r/min離心10min收集菌體，用無菌水(pH3. 0) 清洗菌體2次。2樣品處理在1中所得的樣品中加入10mL無菌水懸浮，超聲波處理5 min。取lmL 12， 000 g離心5min 。去上清后向試管沉淀物中加入5 mL氯仿-乙醇混合物 (v/v二2/l)進(jìn)行抽提，然后40° C干燥。加入10mL濃硫酸，100° C水浴加 熱10min。使其降解為巴豆酸。最后，樣品稀釋十倍，樣品中的PHB已降解 為巴豆酸。冷卻至室溫后，紫外分光光度計(jì)波長(zhǎng)235 nm處測(cè)量吸光度。3 PHB含量檢測(cè)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品PHB與吸光度關(guān)系計(jì)算樣品中PHB含量。 4.優(yōu)化結(jié)果的驗(yàn)證在培養(yǎng)條件的范圍內(nèi)，對(duì)不同配比的培養(yǎng)條件效果的驗(yàn)證結(jié)果如下培養(yǎng)條件的效果驗(yàn)證培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件PHB產(chǎn)量 Cg/L)產(chǎn)量提 高倍數(shù)葡萄糖12g/L、硝酸鉀7g/L、 pH2.818.714.26葡萄糖13 g/L、硝酸鉀6.5 g/L、 pH3.219.214.38葡萄糖14g/L、硝酸鉀6g/L、 pH3.019.534.44葡萄糖16g/L、硝酸鉀5g/L、 pH2.919.324.40葡萄糖15g/L、硝酸鉀6g/L、 pH3.019.754.5葡萄糖17g/L、硝酸鉀6.5g/L、 pH3.119.144.36葡萄糖14g/L、硝酸鉀7g/L、 pH3.219.024.33葡萄糖16g/L、硝酸鉀5.5g/L、 pH3.019.444.43葡萄糖10g/L、硝酸鉀3g/L、 pH3.5 (優(yōu)化前)4.391結(jié)果顯示其中以葡萄糖15g/L，硝酸鉀6g/L， pH 3.(L4cj'力'p/L^f鵬 cjy;^咖DX1-1積累PHB的量最大，可達(dá)到19. 75g/L，是條件優(yōu)化前的4.5倍。權(quán)利要求
1.隱藏嗜酸菌DX1-1菌株積累聚-β-羥基丁酸酯的條件，以KCl 0.1g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，Ca(NO3)2 0.01g/L為基鹽，加入葡萄糖12～17g/L，硝酸銨5～7g/L，pH 2.8～3.2。
全文摘要
隱藏嗜酸菌(Acidiphilium cryptum)DX1-1菌株積累聚-β-羥基丁酸酯(PHB)培養(yǎng)條件。其培養(yǎng)基配方組成為KCl 0.1g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，Ca(NO₃)₂ 0.01g/L，葡萄糖12～17g/L，硝酸鉀5～7g/L，pH 2.8～3.2。經(jīng)過驗(yàn)證，該培養(yǎng)基配方可以使Acidiphilium cryptum DX1-1菌株積累PHB的量增加至優(yōu)化前的4.5倍。
文檔編號(hào)C12P7/62GK101328488SQ20081003148
公開日2008年12月24日 申請(qǐng)日期2008年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月13日
發(fā)明者麗 歷, 夏金蘭, 帥 張, 張燕飛, 徐愛玲, 宇 楊, 邱冠周 申請(qǐng)人:中南大學(xué)