專(zhuān)利名稱(chēng)：納米TiO2顆粒在促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米Ti02顆粒在促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的應(yīng)用。發(fā)明背景納米材料被定義為至少在一維尺度上小于lOOnui的物質(zhì)，由于其尺寸很小，結(jié)構(gòu) 特殊，具有許多新的物理化學(xué)特性，如小尺寸效應(yīng)、大的比表面積、高的反應(yīng)活性、 量子效應(yīng)等。這些具有獨(dú)特物理化學(xué)性質(zhì)的納米材料，對(duì)人體健康以及環(huán)境將帶來(lái)的 潛在影響，已經(jīng)引起科學(xué)界和政府部門(mén)的高度關(guān)注。研究表明，納米Ti02顆?？梢?進(jìn)入到嗅球的外部嗅覺(jué)神經(jīng)層、內(nèi)部粒狀細(xì)胞層、嗅覺(jué)腦室區(qū)，并進(jìn)一步遷移至大腦 的皮質(zhì)、海馬和丘腦區(qū)，并對(duì)海馬神經(jīng)元細(xì)胞造成了一定的損傷。隨著神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSCs)在胚胎和成年神經(jīng)組織中的發(fā)現(xiàn)以 及對(duì)NSCs生物學(xué)特性和培養(yǎng)、分化研究的不斷深入，NSCs這種獨(dú)特?zé)o限增值和分化 潛能的性質(zhì)使得它被視為對(duì)神經(jīng)損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病治療的一個(gè)最有效方法。C17.2神經(jīng)干細(xì)胞系是來(lái)源于小鼠的性神經(jīng)干細(xì)胞，其本身帶有LacZ基因，其 表達(dá)的產(chǎn)物半乳糖苷酶的催化水解反應(yīng)能把5-溴-4-氫-3-剛哚-e-D-半乳糖苷 (X-Gal )水解成藍(lán)色的5-溴-4-氯-靛青。這為細(xì)胞移植后的免疫示蹤和鑒定提供 了支持。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供納米Ti02顆粒在促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的應(yīng)用。Cx43為細(xì)胞間隙連接中的關(guān)鍵蛋白。納米Ti02顆粒的加入通過(guò)Cx43去磷酸化而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖作用，而蛋白質(zhì)的總量沒(méi)有發(fā)生改變。


圖1為不同濃度的納米二氧化鈦，不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞c17.2增殖的作 用。(means ± S. D. ; *p < 0. 05;林p 〈 0. 001; Significance was calculated by Twoiay A麗A)圖2為C17. 2的Nestin熒光免疫組化圖。圖3為納米Ti02對(duì)Cx43磷酸化的影響。其中A為Western-blot結(jié)果，Cx43 由磷酸化狀態(tài)(2)變?yōu)槿チ谞顟B(tài)(3)，蛋白總量一致。B中e-actin作為內(nèi)參；1: Marker; 2:Contro1;3:Ti02。圖4 Cx43的實(shí)時(shí)定量PCR。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例一納米Ti02促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞珠C17. 2增殖 C17.2是一種神經(jīng)干細(xì)胞珠，其具有細(xì)胞周期短，復(fù)制快等特點(diǎn)。將不同濃度梯度 的Ti02稀釋液與C17. 2共培養(yǎng)1-5天，然后用MTT試劑盒去檢測(cè)細(xì)胞增殖率，參見(jiàn) 圖1，結(jié)果表明納米Ti02對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增值有很強(qiáng)的促進(jìn)作用。根據(jù)加入的Ti02 溶液的濃度不同，其促進(jìn)作用也有很大差別。當(dāng)Ti02濃度為150ug/ml時(shí)，其促進(jìn)作 用最顯著。同時(shí)，可以看到這種促進(jìn)作用在細(xì)胞生長(zhǎng)的第三天進(jìn)入對(duì)數(shù)期達(dá)到最大， 故并不影響細(xì)胞正常的生活周期。采用熒光免疫組織化學(xué)的方法，用Nestin這個(gè)神經(jīng)干細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白對(duì)增殖 中的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，其熒光標(biāo)記物為T(mén)RITC紅色熒光蛋白。Nestin陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量 明顯增多，證實(shí)納米二氧化鈦對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用，結(jié)果參見(jiàn)圖2。實(shí)施例二蛋白質(zhì)水平研究納米Ti02對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)遞方式 Cx43為細(xì)胞間隙連接中的關(guān)鍵蛋白。納米Ti02顆粒加入通過(guò)Cx43去磷酸化而 實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖作用，參見(jiàn)圖3A，而蛋白質(zhì)的總量沒(méi)有發(fā)生改變，參見(jiàn)圖3B。以e-actin為內(nèi)參，在納米二氧化鈦的作用下，在m脂A水平，考察Cx43的表達(dá) 量是否變化。結(jié)果參見(jiàn)圖4。
權(quán)利要求
1. 納米TiO2顆粒在促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及納米TiO2顆粒在促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的應(yīng)用。納米TiO2顆粒的加入通過(guò)Cx43去磷酸化而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖作用，而蛋白質(zhì)的總量沒(méi)有發(fā)生改變。根據(jù)加入的TiO2溶液的濃度不同，其促進(jìn)作用也有很大差別。當(dāng)TiO2濃度為150ug/ml時(shí)，其促進(jìn)作用最顯著。同時(shí)，可以看到這種促進(jìn)作用在細(xì)胞生長(zhǎng)的第三天進(jìn)入對(duì)數(shù)期達(dá)到最大，故并不影響細(xì)胞正常的生活周期。
文檔編號(hào)C12N5/06GK101260382SQ20081003637
公開(kāi)日2008年9月10日 申請(qǐng)日期2008年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月21日
發(fā)明者任秀芳, 劉元方, 呂森林, 吳明紅, 文鐵橋, 正 焦, 鄧小勇 申請(qǐng)人:上海大學(xué)