專利名稱：適于nso細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基的制作方法
適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及現(xiàn)代生物技術(shù)之培養(yǎng)基研發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種適 于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基。技術(shù)背景
現(xiàn)代生物技術(shù)是21世紀(jì)重點發(fā)展的前沿技術(shù)之一。其中，利用動物細(xì)胞 培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價值的生長因子、疫苗和單抗等已成為醫(yī)藥生物 高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要組成部分。為完善動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，人們非常關(guān)注對培 養(yǎng)動物細(xì)胞的培養(yǎng)基的研究，因為，培養(yǎng)基是動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)和關(guān) 鍵要素之一。在過去幾十年里，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，動物細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)歷了 采用有血清培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基的幾個階段。
動物細(xì)胞培養(yǎng)是生產(chǎn)基因工程產(chǎn)品中的重要環(huán)節(jié)，研究發(fā)現(xiàn)，采用含有
血清的細(xì)胞培養(yǎng)基會給生產(chǎn)及科研帶來許多不利因素第一，影響細(xì)胞生長 及產(chǎn)品質(zhì)量，存在批間差異；第二，易被支原體和病毒污染；第三，成分復(fù) 雜且不確定，給產(chǎn)物的分離純化帶來極大的困難；第四，血清的價格非常昂 貴，其費用通常占到培養(yǎng)基整體費用的50%以上，致使生產(chǎn)成本大幅度提高。 因此，血清在動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中的使用己受到了限制。
二十世紀(jì)50年代初，人們開始了對無血清培養(yǎng)基的研究；80年代后，無 血清培養(yǎng)基的研究取得了迅速的發(fā)展，多種能支持不同種類細(xì)胞生長的無血 清培養(yǎng)基見諸報端；80年代末90年代初，具有商業(yè)應(yīng)用價值的無血清培養(yǎng)基 紛紛上市，其中有
Darfler等人開發(fā)的CITTL無血清培養(yǎng)基(以DMEM/F12 (1:1)為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，添加了 5mg/L的過氧化氫酶、1.5mg/L的胰島素、1. 5 3. 0mg/L的轉(zhuǎn)鐵 蛋白、2nmol/L睪酮、0. 5mg/L的二亞油酰磷脂膽堿和1. 5mg/L的e -甘油磷 酸)，該無血清培養(yǎng)基可支持s49細(xì)胞的生長，也可用于雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。 Chang等人(19S0)用所報道的無血清培養(yǎng)基成功地培養(yǎng)了幾株雜交瘤細(xì)胞。Murakami等人開發(fā)的無血清培養(yǎng)基〔以DMEM/F12 (1:1)為基礎(chǔ)，添加了 5mg/L胰島素、2 35mg/L轉(zhuǎn)鐵蛋白、20陶ol/L乙醇胺和lnmol/L亞硒酸鈉等 物質(zhì))，這就是現(xiàn)在被廣泛使用的DMEM/F12-ITES配方。
Kover和Frank開發(fā)的無血清培養(yǎng)基〔以RPMI 1640為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添 加了 10mg/L胰島素、5mg/L轉(zhuǎn)鐵蛋白、20Wnol/L乙醇胺、5mg/L亞油酸、lg/L 牛血清蛋白、3mg/L抗壞血酸、2Pg氫化可的松和12種微量元素〕，這一培養(yǎng) 基適合幾種細(xì)胞的生長。
但是，研究中發(fā)現(xiàn)，無血清培養(yǎng)基中添加的蛋白成分價格太貴，且有的 成分，如牛血清蛋白，含有很多種雜質(zhì)，給后期的分離純化帶來較大困難， 而且目前的新藥審批對此方面的要求也越來越嚴(yán)格。因此，在商用無血清培 養(yǎng)基之后，科學(xué)家們又開始了對無蛋白培養(yǎng)基的研究，從動物細(xì)胞的培養(yǎng)基 中去掉蛋白成分。
在對細(xì)胞營養(yǎng)需求研究的基礎(chǔ)上，美國專利5， 045， 468公開了一種適合 雜交瘤細(xì)胞生長的無蛋白培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基通過添加亞硝基鐵氰化物、EDTA、 二氧化硒或亞硒酸鈉等化合物有效取代了培養(yǎng)基中的蛋白成分。美國專利 5，804，420公開了一種適合B服細(xì)胞表達(dá)重組因子Vin的無蛋白培養(yǎng)基，其 中添加了嵌段式聚醚F68 (PluronicF-68)、硫酸銅、硫酸亞鐵、EDTA、錳、 鉬、硅、鋰、鉻等成分。另有報道，Jinyou Zhang等人成功地開發(fā)了一種適 合NSO細(xì)胞生長的無蛋白培養(yǎng)基，但由于其成分復(fù)雜、還包含了一種價格昂 貴、且化學(xué)成分未明確的商業(yè)混合脂，因此，不適用NSO細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng) 及抗體生產(chǎn)。
目前，在無蛋白培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，以Gibco、 Hyclone、 JRH等為代表的 商業(yè)無血清、無蛋白培養(yǎng)基己相繼問世，近年來眾多研究所報道的培養(yǎng)基大 多采用這些商業(yè)無蛋白培養(yǎng)基，它們對某些細(xì)胞株具有良好的效果；但是， 它們同樣也存在一些明顯的缺點，將其用于某些研究和大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與抗 體生產(chǎn)過程會有不少困難，其主要問題是第一，價格昂貴，只適合一部分 實驗室小規(guī)模研究，不適合大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)；第二，大多成分復(fù) 雜，并且添加了不確定的化學(xué)成分，給科研和生產(chǎn)過程帶來困難；第三，有些培養(yǎng)基雖能很好地支持細(xì)胞生長，但卻使細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物的能力降低，甚至 喪失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適于NS0細(xì)胞大規(guī)模 培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基，以適應(yīng)NS0細(xì)胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)及抗體生 產(chǎn)產(chǎn)業(yè)化的需要。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為
采用氨基酸、維生素、鹽類、脂類和小分子激素等物質(zhì)代替?zhèn)鹘y(tǒng)無血清 培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)和水解物，采用鋅離子、EDTA、鐵離子和檸檬酸等代替?zhèn)?統(tǒng)無血清培養(yǎng)基中的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白，開發(fā)出一種適于NS0細(xì)胞 大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基。
一種適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基，包括氨基酸、 維生素、鹽類、脂類、微量元素、激素、緩沖劑及葡萄糖、檸檬酸、?；撬?、 胸苷、腺嘌呤、次黃嘌吟、酚紅、巰基乙醇、Pluronic F-68，不含蛋白質(zhì)及 水解物的組合物。
所述的氨基酸為丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱 氨酸、谷氨酸、谷胺酰胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、 甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。
所述的維生素為生物素、維生素B12、氯化膽堿、葉酸、肌醇、煙酰胺、 泛酸鈣、維生素B6、核黃素、維生素B1、腐胺、維生素C、維生素E。
所述的鹽類為氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂、氯化鉀、'磷酸氫二鈉、氯化鈉、 磷酸二氫鈉、丙酮酸鈉。
所述的脂類為膽固醇、硫辛酸、亞油酸、乙醇胺。
所述的微量元素為硫酸銅、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硝酸鐵、亞硒酸鈉、 EDTA. 2Na。
所述的激素為孕酮。 所述的緩沖劑為碳酸氫鈉和H印es。 所述無蛋白培養(yǎng)基中各種成分的含量為(mg/L)g (L_Alanine) g (L-Arginine HCI) 天冬酰胺(L-Asparagine.H20) 天冬氨酸(L-Aspartic Acid) 半胱氨酸(L-Cysteine. HCI.H20) 胱氨酸(L-Cystine.2HCI) 谷氨酸a-Glutamic Acid Sodium) 谷胺酰胺(L-Glutamine) 甘氨酸(Glycine) 組氨酸(L-Histidine.HCI. H20) 異亮氨酸(X-lsoleucine) 亮氨酸(L -Leucine) 賴氨酸(L-Lysine.HCI) 甲硫L氨酸(L-Methionine) 苯丙氨酸(X-Phenylalanine 脯氨酸a-Proline) 絲氨酸(L-Serine) 蘇氨酸(L-Threonine) 色氨酸(L-Tryptophan) 酪氨酸(L-Tyrosine. 2Na. 2H20) '纈氨酸(L-Valine) 葡萄糖(D-Glucose) 生物素(Biotin) 維生素B12 (B12Cobalamin) 氯化膽堿(Choline Chloride) 葉酸(Folic Acid) 肌醇(I-inositol) 煙酰胺(Niacinamide)
80. 5 104. 45 280. 5 301.2 150. 5 202. 5 70 106. 65 55. 56 67. 56 57 75. 73 800 1191 230 292 57 68. 75 55 73. 48 80. 34 106. 87 83 111.45 130 163. 75 25 32. 34 50 68. 48 66. 45 84. 50 80 100 70 101.05 15. 20 19. 22 70 108. 26 80! 45 99. 65 3500 4320
0. 08 0. 17
1. 0 2. 0 6. 9 21 1.4 4. 2 9 36
3. 3 13泛酸轉(zhuǎn)(D-Calcium Pantothenate)1. 8 7
維生素(B6Pyridoxine Hydrochloride )0. 1 0. 5
核黃素(Riboflavin)0. 11 0. 46
維生素(BlThiamine Hydrochloride)1. 1 4.4
胸苷(Thymidine)0. 4 1. 6
腺嘌呤(Adenine)0. 2 1
腐胺P (utrescine. 2HC1)0. 08 0. 4
丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate)165 330
氯化韓(Calcium Chloride)81. 6 152
氯化鎂(Magnesium chloride)40. 3 74. 8
酸鎂(Magnesium sulfate)34. 2 63. 4
氯化鉀(Potassium Chloride)218 404
磷酸氫二鈉(Sodium Phosophate Dibasic) 397.39氯化鈉(Sodium Chloride)6999. 5
磷酸二氫鈉(Sodium Phosphate Monobasic. H20). 62.碳酸氫鈉(Sodium Bicarbonate)2438
Hepes2000 5000
次黃嘌呤(Na Hypoxanthine)2. 04 8. 16
酚紅(Phenol Red)8. 1
硫酸銅(Cupric Sulfate. 5H20)0. 004 0. 012
硫酸亞鐵(Ferrous Sulfate. 7H20)'0. 62 0. 96
維生素(C Ascorbic acid)4 10
?；撬?Taurine)20 50
維生素(E a-Tocopherol acetate)1 4
膽固醇(Cholesterol)3. 5 6. 0
硫辛酸(Xipoic acid)0. 08 0. 20
亞油酸(Linoleic acid)0. 06 0. 15
硫酸鋅(Zinc Sulfate. 7H20)7. 1 14. 1石肖酸鐵(Ferric Nitrate) EDTA 二鈉(EDTA. 2Na) 檸檬酸(Citric acid. H20) 亞硒酸鈉(Na2Se03) 乙醇胺(Ethanolamine) 巰基乙醇(P -mercaptoethnol) 嵌段式聚醚F68 (Pluronic F-68) 孕酮(Progesterone)
0. 003 0. 012
0 6. 66
0. 002 0. 008
500 2000
0 1. 53
0. 85 1.21
5. 0 20
1. 0 5. 2
本發(fā)明所述的無蛋白培養(yǎng)基采用常規(guī)的制備方法將上述組分溶解于無 熱源超純水即可配制而成。
本發(fā)明所述的無蛋白培養(yǎng)基的使用方法也為常規(guī)方法。
本發(fā)明適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基的積極效果
是-
(1) 能良好地支持NSO細(xì)胞的正常生長，其最高細(xì)胞密度及抗體產(chǎn)量均超 過已知的商業(yè)培養(yǎng)基；
(2) 完全不含蛋白、蛋白水解物成分，不舍動物來源成分，是一種化學(xué)成 分確定的培養(yǎng)基，有利于產(chǎn)物的分離純化，提高產(chǎn)品的品質(zhì)；
(3) 支持NS0細(xì)胞長期傳代培養(yǎng)，無需適應(yīng)即可使用；
(4) 成分明確、配制方便，適合于大規(guī)模生產(chǎn)。

附圖1為NS0細(xì)胞在本發(fā)明無蛋白培養(yǎng)基批培養(yǎng)中生長曲線的坐標(biāo)圖； 附圖2為NS0細(xì)胞在本發(fā)明無蛋白培養(yǎng)基批培養(yǎng)中產(chǎn)物表達(dá)曲線的坐標(biāo)圖。
具體實施方式
以下通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行具體地描述，但本發(fā)明不限于以下的實施例。
一種適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基，包括氨基酸、 維生素、鹽類、脂類、微量元素、激素、緩沖劑及葡萄糖、檸檬酸、牛磺酸、胸苷、腺嘌呤、次黃嘌呤、酚紅、巰基乙醇、Pluronic F-68，不含蛋白質(zhì)及 水解物的組合物，其各種成分的含量為(mg/L)
丙氨酸(L-Alanine) 104.45
精氨酸(L-Arginine HCI) 301.2
天冬酰胺(L-Asparagine. H20 ) 202. 5
天冬氨酸(L-Aspartic Acid) 106.65
半胱氨酸(L-Cysteine. HCI. H20 ) 67 . 56
胱氨酸(L-Cystine. 2HCI) 75.73 谷氨酸(L-Glutamic Acid Sodium) 1191.00
谷胺酰胺(L-Glutamine) 292.00
甘氨酸(Glycine) 68.75
組氨酸(L-Histidine.HCI. H20 ) 73 . 48
異亮氨酸(L-lsoleucine) 106.87
亮氨酸(L -Leucine) 111.45
賴氨酸(L-Lysine.HCI) 163.75
甲硫氨酸(L-Methionine) 32.34
苯丙氨酸(L-Phenylalanine 68.48
脯氨酸(L-Proline) 84.50
絲氨酸(L-Serine) 100.00 ,
蘇氨酸(L-Threonine) 101.05
色氨酸(L-Tryptophan) ■ 19. 22
酪氨酸(L-Tyrosine. 2Na. 2H20) 108 . 26
纈氨酸(L-Valine) 99.65
葡萄糖(D-Glucose) 4320.00
生物素(Biotin) 0. 11
維生素(B12Cobalamin) 1.36
氯化膽堿(Choline Chloride) 13.96
葉酸(Folic Acid) 2.65肌醇(I-inositol) 18
煙酰胺(Niacinamide) 6.5
泛酸拷(D-Calcium Pantothenate) 3.5
維生素(B6Pyridoxine Hydrochloride) 0. 2
核黃素(Riboflavin) 0.22
維生素(BlThiamine Hydrochloride) 2.17
胸苷(Thymidine) 0.8
腺嘌呤(Adenine) 0.4
腐胺P (utrescine. 2HC1) 0.16
丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate) 165
氯化鈣(Calcium Chloride) 116.6
氯化鎂(Magnesium chloride) 57.6
硫酸鎂(Magnesium sulfate) 48.84
氯化鉀(Potassium Chloride) 311.8
磷酸氫二鈉(Sodium Phosophate Dibasic) 397.39
氯化鈉(Sodium Chloride) 6999,5
磷酸二氫鈉(Sodium Phosphate Monobasic. H20 )62 .5
碳酸氫鈉(Sodium Bicarbonate) 2438'
H印es 3570
次黃嘌呤(Na HypQxanthine) 4.08
酚紅(Phenol Red) ' 8. 1
硫酸銅(Cupric Sulfate. 5H20) 0.0051
硫酸亞鐵(Ferrous Sulfate. 7H20 ) 0. 8 34
維生素(C Ascorbic acid) 5
牛磺酸(Taurine) 30
維生素(E a-Tocopherol acetate) 2
膽固醇(Cholesterol) 4.5
硫辛酸(Lipoic acid) 0. 11亞油酸(Xinoleic acid)0. 084
硫酸鋅(Zinc Sulfate. 7H20)10. 58
石肖酸鐵(Ferric Nitrate)1. 011
EDTA 二鈉(EDTA. 2Na)3. 72
檸檬酸(Citric acid. H20)19. 2
亞硒酸鈉(Na2Se03)0. 0052
乙醇胺(Ethanolamine)1. 53
巰基乙醇(P-mercaptoethnol)6. 66
嵌段式聚醚F68 (Pluronic F-68)1000
孕酮(Progesterone)o. 003
將上述組分溶解于無熱源超純水中即可配制成適合NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng) 及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基。
將表達(dá)抗CD25嵌合單克隆抗體的NS0細(xì)胞(從上海某醫(yī)藥研究有限公司 獲得)在本發(fā)明所述的培養(yǎng)基中傳代適應(yīng)后，在德國B. Braim公司2升生物 反應(yīng)器中接種，接種密度4. 08X 105細(xì)胞/毫升，細(xì)胞活性維持90%以上，最大 比生長速率為0.92/天，最大活細(xì)胞密度為32. 14X105細(xì)胞/毫升，細(xì)胞擴(kuò)增 近8倍，最大單抗?jié)舛葹?10毫克/升。
附圖1為NSO細(xì)胞在本發(fā)明無蛋白培養(yǎng)基批培養(yǎng)中的生長曲線的坐標(biāo)圖， 附中，l為活細(xì)胞密度曲線，2為細(xì)胞活性曲線。附圖2為NS0細(xì)胞在本發(fā)明 無蛋白培養(yǎng)基批培養(yǎng)中的產(chǎn)物表達(dá)曲線的坐標(biāo)圖，附中，3為單抗?jié)舛惹€。 從附圖的曲線可以得知，本發(fā)明適于NSO細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋 白培養(yǎng)基能良好地支持NSO細(xì)胞的正常生長，其最高細(xì)胞密度及抗體產(chǎn)量均 已達(dá)到或超過目前已知的商業(yè)培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1、一種適于NSO細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基，其特征在于，包括氨基酸、維生素、鹽類、脂類、微量元素、激素、緩沖劑及葡萄糖、檸檬酸、?；撬帷⑿剀?、腺嘌呤、次黃嘌呤、酚紅、巰基乙醇、Pluronic F-68。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的氨基酸為丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨 酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷胺酰胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、 亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、 酪氨酸、纈氨酸。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的維生素為生物素、維生素B12、氯化膽堿、葉酸、 肌醇、煙酰胺、泛酸鈣、維生素B6、核黃素、維生素B1、腐胺、維生素C、 維生素E。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的鹽類為氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂、氯化鉀、磷 酸氫二鈉、氯化鈉、磷酸二氫鈉、丙酮酸鈉。 '
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的脂類為膽固醇、硫辛酸、亞油酸、乙醇胺。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的微量元素為硫酸銅、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硝酸 鐵、亞硒酸鈉、EDTA. 2Na。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NSO細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的激素為孕酮。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，所述的緩沖劑為碳酸氫鈉和H印es。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于NS0細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白 培養(yǎng)基，其特征在于，其各種成分的含量為mg/L丙氨酸 80. 5 104. 45精氨酸 280. 5 301. 2天冬酰胺 150. 5 202. 5天冬氨酸 70 106.65半胱氨酸 55. 56 67. 56胱氨酸 57 75.73谷氨酸 800 1191谷胺酰胺 230 292甘氨酸 57 68.75組氨酸 55 73.48異亮氨酸 80. 34 106. 87亮氨酸 83 111.45賴氨酸 130 163.75甲硫氨酸 25 32.34苯丙氨酸 50 68.48脯氨酸 66. 45 84. 50絲氨酸 80 100蘇氨酸 70 101.05色氨酸 15. 20 19. 22酪氨酸 70 108.26纈氨酸 80. 45 99. 65葡萄糖 3500 4320生物素 0.08 0. 17維生素B12 1.0 2.0氯化膽堿 6.9 21葉酸 1.4 4.2肌醇 9 36煙酰胺 3.3 13泛酸鈣 1.8 7維生素 0. 1 0. 5核黃素 0. 11 0. 46維生素 1. 1 4.4 .胸苷 0.4 1.6腺嘌呤 0.2 1腐胺P 0. 08 0. 4丙酮酸鈉 165 330氯化鈣 81.6 152氯化鎂 40. 3 74. 8硫酸鎂 34. 2 63. 4氯化鉀 218 404磷酸氫二鈉 397.39氯化鈉 6999.5磷酸二氫鈉 62.5碳酸氫鈉 2438H印es 2000 5000次黃嘌呤 2. 04 8. 16'酚紅 8.1硫酸銅 0. 004 0. 012硫酸亞鐵 0. 62 0. 96維生素 4 10?；撬?20 50維生素 1 4膽固醇 3.5 6.0硫辛酸 0. 08 0. 20亞油酸0. 06 0. 15硫酸鋅7. 1 14. 1硝酸鐵0. 85 1. 21EDTA 二鈉1. 0 5. 2擰檬酸5. 0 20亞硒酸鈉0. 002 0. 008乙醇胺0 1. 53巰基乙醇0 6. 66嵌段式聚醚F685000 2000孕酮0. 003 0. 01全文摘要
本發(fā)明適于NSO細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)的無蛋白培養(yǎng)基為一種化學(xué)成分明確的無蛋白培養(yǎng)基，其組合物中包括21種氨基酸、13種維生素、8種鹽類、4種脂類、6種微量元素，以及孕酮、碳酸氫鈉、Hepes、葡萄糖、檸檬酸、?；撬帷⑿剀?、腺嘌呤、次黃嘌呤、酚紅、巰基乙醇、Pluronic F-68；本發(fā)明的積極效果是無需適應(yīng)即可支持NSO細(xì)胞的長期傳代培養(yǎng)，能良好地支持NSO細(xì)胞的正常生長及抗體表達(dá)；不含蛋白、各種水解物及動物來源成分，化學(xué)成分明確，有利于產(chǎn)物的分離純化，提高醫(yī)藥生物制品的品質(zhì)；配制方便，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
文檔編號C12P21/08GK101418330SQ20081003930
公開日2009年4月29日 申請日期2008年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月20日
發(fā)明者燕 周, 牛紅星, 里 范, 譚文松, 亮 趙 申請人:華東理工大學(xué)