專利名稱：固、液二步發(fā)酵工藝生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及以解脂假絲酵母的固體發(fā)酵和 嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵二步工藝，生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌的方法。
背景技術(shù)：
詞用微生物活菌制劑，能維持、調(diào)整動(dòng)物腸道內(nèi)微生態(tài)平衡，直接或間接 對(duì)病原菌起干擾、排除、拮抗作用，從而提高抗病能力，提高動(dòng)物生產(chǎn)水平。 由于具有無(wú)抗藥性、無(wú)殘留，且具有提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和預(yù)防疾病的作用，可 克服長(zhǎng)期大量使用抗生素造成的一些不良后果，被認(rèn)為是抗生素潛在的、天然 的、對(duì)環(huán)境和健康無(wú)害的替代物。嗜酸乳桿菌具有較強(qiáng)的耐酸、耐鹽和耐膽汁 鹽能力，不用任何處理就能順利通過(guò)胃腸環(huán)境而有效定殖于動(dòng)物腸道內(nèi)形成優(yōu) 勢(shì)種群，而且其產(chǎn)的乳酸和乳酸菌素可直接作用于病源細(xì)菌。這是其它飼用微 生物活菌劑無(wú)法比擬的。嗜酸乳桿菌這種獨(dú)特的生理、生化特性被認(rèn)為是最理 想的促生長(zhǎng)替代抗生素的活菌劑，具有廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。由于嗜酸乳桿菌的營(yíng)養(yǎng)條件要求苛刻，目前主要是以牛奶為基本培養(yǎng)基，再添加牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖等物質(zhì)，或以MRS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng) 基，再添加一些生長(zhǎng)刺激物，但因這些用來(lái)做培養(yǎng)基的物質(zhì)，市場(chǎng)售價(jià)較麩皮、 豆粕、玉米粉等普通農(nóng)副產(chǎn)品貴出許多倍，用這些物質(zhì)來(lái)生產(chǎn)嗜酸乳桿菌，其 成本對(duì)醫(yī)藥行業(yè)來(lái)說(shuō)尚能接受，但對(duì)養(yǎng)殖行業(yè)作為飼料添加劑來(lái)說(shuō)難以承受。 而其它有些方法生產(chǎn)成本雖然不高，如采用紅糖或葡萄糖再加上蛋白胨和無(wú)機(jī) 鹽等，但發(fā)酵水平極低，菌數(shù)只有或小于108級(jí)別，達(dá)不到好的應(yīng)用效果。這些 問(wèn)題均阻礙了嗜酸乳桿菌的生產(chǎn)與在養(yǎng)殖行業(yè)的推廣、應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于，針對(duì)目前嗜酸乳桿菌發(fā)酵生產(chǎn)中所存在的，或效果雖好 但生產(chǎn)成本過(guò)高，或雖成本不高但其發(fā)酵水平太低，達(dá)不到飼料工業(yè)應(yīng)用效果等缺陷，提供一種以價(jià)格低廉、材料易得的農(nóng)副產(chǎn)品為原料，輔以合理的發(fā)酵 工藝，達(dá)到提高發(fā)酵水平、降低生產(chǎn)成本的生產(chǎn)詞用嗜酸乳桿菌的方法。 本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)。固、液二步發(fā)酵工藝生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌的方法，該方法按以下步驟進(jìn)行:(1) 解脂假絲酵母(rarrow'a h》o^"ca y>的菌種培養(yǎng)① 液體試管種子培養(yǎng)采用10。Bx糖化麥芽汁為培養(yǎng)基，12rC、 20分鐘滅 菌后，接入解脂假絲酵母原始斜面菌種，28 3(TC靜止培養(yǎng)24 30h后，于0 4'C保存，備用；② 三角瓶種子培養(yǎng)500ml的三角瓶中裝由麩皮、玉米粉和磷酸氫二銨按重 量份70 90 : 20 30 : 0. 5 1比例配制而成的培養(yǎng)基20 30g，加水量為固形 物重量的1 1.5倍，經(jīng)O. 1Mpa滅菌30min后，每瓶接種步驟(1)①液體試管 種子2ml， 28 30。C培養(yǎng)36 42h后，于0 4。C保存，備用；(2) 解脂假絲酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)固體發(fā)酵培養(yǎng)基為豆粕、麩皮、玉米粉和磷酸氫二銨按重量份30 60 : 30 60 : 10 30 : 0.5 1比例配制而成，加與固形物同等重量水，O. 1Mpa滅菌30min; 將步驟(1)②每三角瓶種子加150 300ml無(wú)菌水充分?jǐn)嚢韬?，按每瓶種子 以固形物重量計(jì)的10 20公斤固體發(fā)酵培養(yǎng)基比例接種，于25 3(TC室溫條件 下進(jìn)行曲盤(pán)固體發(fā)酵，發(fā)酵物料厚度為2-3cm，培養(yǎng)24 30h，至細(xì)胞數(shù)達(dá)到每 克干物質(zhì)60億時(shí)停止發(fā)酵，將發(fā)酵物65'C下烘干、粉碎、儲(chǔ)存，備用；(3) 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)的菌種培養(yǎng)① 一級(jí)菌種培養(yǎng)在300ml三角瓶中裝入200ml液體MRS培養(yǎng)基，121°C、 15分鐘滅菌后接入嗜酸乳桿菌原種斜面菌種，經(jīng)37 4(TC培養(yǎng)30 36h后，于 0 4"C保存，備用；② 二級(jí)菌種培養(yǎng)取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡 萄糖及水按6 10 : 1 4 : 100的比例，拌勻、調(diào)槳后，加熱至85 100°C，保 持5min滅菌；冷卻至4(TC，按發(fā)酵體積2 3%的用量接入步驟(3)①一級(jí)菌 種，于37 4(TC靜止培養(yǎng)8 10h時(shí)攪拌一次，再繼續(xù)培養(yǎng)4 6h至嗜酸乳桿菌 活菌數(shù)達(dá)50億CFU/ml以上時(shí)終止培養(yǎng)，室溫保存，備用；(4) 嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵培養(yǎng) 取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按6 10 :1 4 : 100的比例，拌勻、調(diào)漿后，加熱至85 100°C，保持5min滅菌；培養(yǎng) 液冷卻到40。C,按發(fā)酵體積3 5%的用量接入步驟(3)②二級(jí)菌種子，于37 4(TC靜止培養(yǎng)6 8h時(shí)攪拌一次，再繼續(xù)培養(yǎng)6 8h至嗜酸乳桿菌活菌數(shù)達(dá)55 80億CFU/ml時(shí)發(fā)酵結(jié)束；(5) 嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的吸附處理與包裝將步驟(4)嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵物和以碳酸鈣、玉米粉和色拉油按重量份 10 20 : 75 80 : 1 5比例配制而成的吸附劑，按體積、重量1 L : 1 2 Kg比 例進(jìn)行吸附處理后，在不高于4(TC條件下烘干、粉碎、包裝成產(chǎn)品。本發(fā)明的有益效果是，以豆粕、麩皮、玉米粉等廉價(jià)、易得農(nóng)付產(chǎn)品為原 料，經(jīng)解脂假絲酵母發(fā)酵后所得到的分解產(chǎn)物和代謝物作為嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物的固、液二步發(fā)酵法來(lái)生產(chǎn)詞用嗜酸乳桿菌，具有生產(chǎn)成 本低，50億CFU/g的產(chǎn)品生產(chǎn)成本小于10元/Kg;且生長(zhǎng)繁殖快，12 1 6小 時(shí)嗜酸乳桿菌繁殖完成；產(chǎn)量高，發(fā)酵水平達(dá)到5 5 8 0億/ml的特點(diǎn)，克服了以往由于以MRS為發(fā)酵培養(yǎng)基或在MRS培養(yǎng)基中再添加其它物質(zhì)來(lái)生產(chǎn)嗜酸 乳桿菌而導(dǎo)致生產(chǎn)成本高，阻礙其在飼料工業(yè)上推廣應(yīng)用的難題，能極大地推 動(dòng)嗜酸乳桿菌的廣泛應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但其發(fā)明內(nèi)容并不受這些 內(nèi)容所限止。本發(fā)明從中國(guó)微生物保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)引進(jìn)解脂假 絲酵母(j^rrow'a ij'po〗y(tǒng)"ca 2. 2087)、嗜酸乳桿菌(Za"o6acj'"ws sc^/o/ 力j7ws 1. 1854)葡萄糖廈門同永興化工有限公司食品級(jí)磷酸氫二銨太倉(cāng)市創(chuàng)利化工有限公司(NH4)2HP04含量98.5%碳酸鈣長(zhǎng)興縣玉峰微粉廠CaC03含量99%實(shí)施例1:(生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌方法1) 本發(fā)明具體工藝如下(1)解脂假絲酵母(rsJYYWJ'ah》^7"c3 y>的菌種培養(yǎng)① 液體試管種子培養(yǎng)采用10°BX糖化麥芽汁培養(yǎng)基取大麥芽一定數(shù)量，粉碎，加4倍于麥芽重量的6(TC水，在55 6(TC保溫糖化，不斷攪拌，經(jīng)3 4小時(shí)后，用紗布過(guò) 濾，除去殘?jiān)蠓泻笥脼V紙過(guò)濾一次，即得澄清麥芽汁，再加水稀釋成10。Bx 麥芽汁；試管液體麥芽汁培養(yǎng)基121°C、 20分鐘滅菌后，挑取少許保存的解脂 假絲酵母原始菌種接種至麥芽汁培養(yǎng)基中，28 3(TC靜止培養(yǎng)24 30h后，于 0 4"C保存，備用；② 三角瓶種子培養(yǎng)每個(gè)500ml的三角瓶中裝入由麩皮，玉米粉和磷酸氫二銨按重量份70 : 30 : 0. 5比例配制而成的固形物20克，并按固形物重1. 5倍加水30ml，拌勻， 0. IMpa滅菌30min后，每瓶接種步驟(1)①解脂假絲酵母菌液體試管種子2ml， 28 30。C培養(yǎng)36-42h后，于0 4。C保存，備用；(2) 解脂假絲酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)固體發(fā)酵培養(yǎng)基為豆粕、麩皮、玉米粉和磷酸氫二銨按重量份30 : 60 : io :0.5比例配制而成，加等重量水后，0. 1Mpa滅菌30min，將步驟(1)②每三角 瓶種子加150ml無(wú)菌水，經(jīng)充分?jǐn)嚢韬?，按每瓶種子以固形物重量計(jì)10公斤 固體發(fā)酵培養(yǎng)基的比例接種，發(fā)酵物料厚度為2cm，于25 3(TC室溫條件下進(jìn) 行曲盤(pán)固體發(fā)酵，培養(yǎng)24 30h，至細(xì)胞數(shù)達(dá)到每克干物質(zhì)60億時(shí)停止發(fā)酵， 將發(fā)酵物65'C下烘干、粉碎、儲(chǔ)存，備用；(3) 嗜酸乳桿菌(Lg"o/7acj77ws aciflbp力j7^s)的菌種培養(yǎng)① 一級(jí)菌種培養(yǎng)培養(yǎng)基采用MRS培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨IO，牛肉膏IO，酵母浸膏5，乙酸 鈉5，檸檬酸氫二銨2，葡萄糖20，磷酸氫二鉀2，硫酸鎂0.58，硫酸錳0.25， 吐溫lml， 121。C滅菌15min;在300ml的三角瓶中，裝MRS培養(yǎng)基200ml，挑取少許保存的嗜酸乳桿菌原 種斜面培養(yǎng)物接入MRS培養(yǎng)基，37 40。C培養(yǎng)30 36h后，于0 4。C保存，備 用；② 二級(jí)菌種培養(yǎng)在4升的種子發(fā)酵罐中，取步驟(2)干粉狀的解脂假絲 酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按重量6:4: 100的比例，拌勻、調(diào)漿后， 加熱至85 10(TC，保持5min滅菌；冷卻至4(TC，按發(fā)酵體積2 %的用量接入 步驟(3)①一級(jí)菌種，于37 4(TC靜止培養(yǎng)8 10h時(shí)攪拌一次，再繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)達(dá)50億CFU/ml以上時(shí)終止培養(yǎng)，室溫保存，備用；(4) 嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)在70升發(fā)酵罐中，取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和 葡萄糖及水按重量6 : 4 : 100的比例，拌勻、調(diào)漿后，加熱至85 10(TC，保持 5min滅菌；培養(yǎng)液冷卻到40'C，按發(fā)酵體積3 %的用量接入步驟(3)②二級(jí)菌 種子，于37 4(TC靜止培養(yǎng)6 8h時(shí)攪拌一次，再繼續(xù)培養(yǎng)6 8h至嗜酸乳桿 菌活菌數(shù)達(dá)55 80億CFU/ml時(shí)發(fā)酵結(jié)束；(5) 嗜酸乳桿菌發(fā)酵物的處理與包裝將步驟(4)嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵物和以碳酸鈣、玉米粉和色拉油按重量份io : 80 : i比例配制而成的吸附劑，按體積與重量(L/Kg) i : 2比例進(jìn)行吸附處理后，在不高于4(TC條件下烘干、粉碎成40目后、包裝成產(chǎn)品。 實(shí)施例2:(生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌方法2 )本例中，(1)解脂假絲酵母(r^row's h'/^y"ca,的菌種培養(yǎng)②三 角瓶種子培養(yǎng)每個(gè)500ml的三角瓶中裝入由麩皮，玉米粉和磷酸氫二銨按重 量份80 : 25 : 0.8比例配制而成的固形物為25克，并按固形物重1.3倍加水 32. 5ml;(2) 解脂假絲酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)固體發(fā)酵培養(yǎng)基為豆粕、麩皮、玉米粉和磷酸氫二銨按重量份45 : 45 : 20 : 0.8比例配制而成，加等重量水后，0. 1Mpa滅菌30min，將步驟(1)②每三角瓶種子加200ml無(wú)菌水，經(jīng)充分?jǐn)嚢?后，按每瓶種子以固形物重量計(jì)15公斤固體發(fā)酵培養(yǎng)基的比例接種，發(fā)酵物 料厚度為2. 5cm;(3) 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)的菌種培養(yǎng)②二級(jí)菌 種培養(yǎng)在4升的種子發(fā)酵罐中，取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)培養(yǎng)物和葡萄糖及水按重量8 : 3 : 100的比例，拌勻、調(diào)漿后，加熱至85 100 °C，保持5min滅菌；冷卻至40。C，按發(fā)酵體積2. 5 %的用量接入步驟(3)① 一級(jí)菌種；(4) 嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)在70升發(fā)酵罐中，取步驟(2)干粉狀 的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按重量8 : 3 : 100的比例，拌勻、 調(diào)漿后，加熱至85 10(TC，保持5min滅菌；培養(yǎng)液冷卻到40。C,按發(fā)酵體積 4 %的用量接入步驟(3)②二級(jí)菌種子；(5) 嗜酸乳桿菌發(fā)酵物的處理與包裝將步驟(4)嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵 物和以碳酸鈣、玉米粉和色拉油按重量份15 : 78 : 3比例配制而成的吸附劑， 按體積與重量(L/Kg) 1:1.5比例進(jìn)行吸附處理。其余工藝、步驟同實(shí)施例l。 實(shí)施例3:(生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌方法3)本例中，(1)解脂假絲酵母(rarro^a ,的菌種培養(yǎng)②三角瓶種子培養(yǎng)每個(gè)500ml的三角瓶中裝入由麩皮，玉米粉和磷酸氫二銨按重 量份90 : 20 : 1比例配制而成的固形物為30克，并按固形物重1倍加水30ml;(2) 解脂假絲酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)固體發(fā)酵培養(yǎng)基為豆粕、麩皮、玉米 粉和磷酸氫二銨按重量份60 : 30 : 30: 1比例配制而成，加等重量水后，0. lMpa 滅菌30min，將步驟(1)②每三角瓶種子加300ml無(wú)菌水，經(jīng)充分?jǐn)嚢韬螅?每瓶種子以固形物重量計(jì)20公斤固體發(fā)酵培養(yǎng)基的比例接種，發(fā)酵物料厚度 為3cm;(3) 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)的菌種培養(yǎng)②二級(jí)菌 種培養(yǎng)在4升的種子發(fā)酵罐中，取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按重量io : i: ioo的比例，拌勻、調(diào)漿后，加熱至85 100°C，保持5min滅菌；冷卻至40°C，按發(fā)酵體積3 %的用量接入步驟(3)①一 級(jí)菌種；(4) 嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)在70升發(fā)酵罐中，取步驟(2)干粉狀 的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按重量IO : 1 : IOO的比例，拌勻、 調(diào)漿后，加熱至85 100。C，保持5min滅菌；培養(yǎng)液冷卻到40。C，按發(fā)酵體積 5 %的用量接入步驟(3)②二級(jí)菌種子；(5) 嗜酸乳桿菌發(fā)酵物的處理與包裝將步驟(4)嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵 物和以碳酸鈣、玉米粉和色拉油按重量份20 : 75 : 5比例配制而成的吸附劑， 按體積與重量(L/Kg) 1 : 1比例進(jìn)行吸附處理。其余工藝、步驟同實(shí)施例l。
權(quán)利要求
1. 固、液二步發(fā)酵工藝生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌的方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行(1)解脂假絲酵母(Yarrowia lipolytica)的菌種培養(yǎng)①液體試管種子培養(yǎng)采用10°Bx糖化麥芽汁為培養(yǎng)基，121℃、20分鐘滅菌后，接入解脂假絲酵母原始斜面菌種，28～30℃靜止培養(yǎng)24～30h后，于0～4℃保存，備用；②三角瓶種子培養(yǎng)500ml的三角瓶中裝由麩皮、玉米粉和磷酸氫二銨按重量份70～90∶20～30∶0.5～1比例配制而成的培養(yǎng)基20～30g，加水量為固形物重量的1～1.5倍，經(jīng)0.1Mpa滅菌30min后，每瓶接種步驟(1)①液體試管種子2ml，28～30℃培養(yǎng)36～42h后，于0～4℃保存，備用；(2)解脂假絲酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)固體發(fā)酵培養(yǎng)基為豆粕、麩皮、玉米粉和磷酸氫二銨按重量份30～60∶30～60∶10～30∶0.5～1比例配制而成，加與固形物同等重量水，0.1Mpa滅菌30min；將步驟(1)②每三角瓶種子加150～300ml無(wú)菌水充分?jǐn)嚢韬螅疵科糠N子以固形物重量計(jì)的10～20公斤固體發(fā)酵培養(yǎng)基比例接種，于25～30℃室溫條件下進(jìn)行曲盤(pán)固體發(fā)酵，發(fā)酵物料厚度為2-3cm，培養(yǎng)24～30h，至細(xì)胞數(shù)達(dá)到每克干物質(zhì)60億時(shí)停止發(fā)酵，將發(fā)酵物65℃下烘干、粉碎、儲(chǔ)存，備用；(3)嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)的菌種培養(yǎng)①一級(jí)菌種培養(yǎng)在300ml三角瓶中裝入200ml液體MRS培養(yǎng)基，121℃、15分鐘滅菌后接入嗜酸乳桿菌原種斜面菌種，經(jīng)37～40℃培養(yǎng)30～36h后，于0～4℃保存，備用；②二級(jí)菌種培養(yǎng)取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按6～10∶1～4∶100的比例，拌勻、調(diào)漿后，加熱至85～100℃，保持5min滅菌；冷卻至40℃，按發(fā)酵體積2～3％的用量接入步驟(3)①一級(jí)菌種，于37～40℃靜止培養(yǎng)8～10h時(shí)攪拌一次，再繼續(xù)培養(yǎng)4～6h至嗜酸乳桿菌活菌數(shù)達(dá)50億CFU/m1以上時(shí)終止培養(yǎng)，室溫保存，備用；(4)嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)取步驟(2)干粉狀的解脂假絲酵母固體發(fā)酵培養(yǎng)物和葡萄糖及水按重量6～10∶1～4∶100的比例，拌勻、調(diào)漿后，加熱至85～100℃，保持5min滅菌；培養(yǎng)液冷卻到40℃，按發(fā)酵體積3～5％的用量接入步驟(3)②二級(jí)菌種子，于37～40℃靜止培養(yǎng)6～8h時(shí)攪拌一次，再繼續(xù)培養(yǎng)6～8h至嗜酸乳桿菌活菌數(shù)達(dá)55～80億CFU/ml時(shí)發(fā)酵結(jié)束；(5)嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的吸附處理與包裝將步驟(4)嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵物和以碳酸鈣、玉米粉和色拉油按重量份10～20∶75～80∶1～5比例配制而成的吸附劑，按體積與重量1L∶1～2Kg比例進(jìn)行吸附處理后，在不高于40℃條件下烘干、粉碎、包裝成產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了固、液二步發(fā)酵工藝生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌的方法，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括(1)解脂假絲酵母(Yarrowia lipolytica)的菌種培養(yǎng)；(2)解脂假絲酵母的固體發(fā)酵培養(yǎng)；(3)嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)的菌種培養(yǎng)；(4)嗜酸乳桿菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)；(5)嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的吸附處理與包裝等步驟。本發(fā)明以豆粕、麩皮、玉米粉等廉價(jià)、易得農(nóng)付產(chǎn)品為原料，經(jīng)固、液二步發(fā)酵生產(chǎn)飼用嗜酸乳桿菌，具有生產(chǎn)成本低；生長(zhǎng)繁殖快，產(chǎn)量高等特點(diǎn)，克服了以往飼用嗜酸乳桿菌生產(chǎn)成本過(guò)高的難題，可在畜、禽飼料生產(chǎn)企業(yè)中推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101250493SQ20081006050
公開(kāi)日2008年8月27日 申請(qǐng)日期2008年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月1日
發(fā)明者葉琪明, 李孝輝, 李艷麗, 許少春, 許堯興, 兵 陳 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院