專(zhuān)利名稱(chēng)：用于細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)品。更準(zhǔn)確地講，本發(fā)明涉及包含無(wú)動(dòng)物蛋白涂層的細(xì)胞生長(zhǎng)表面。所述涂層衍生自植物蛋白，優(yōu)選大豆蛋白胨。
背景技術(shù)：
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為研究動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能和分化以及用于生產(chǎn)許多重要 生物材料的必不可少的技術(shù)，所述生物材料例如病毒疫苗、酶、激素、抗體、干擾素、 用于基因治療的核酸和病毒載體。細(xì)胞培養(yǎng)的另一重要領(lǐng)域就是自小細(xì)胞群體向大細(xì)胞 群體的細(xì)胞擴(kuò)增。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)，在細(xì)胞粘附表面上生長(zhǎng)細(xì)胞是常規(guī)的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)哺乳動(dòng)物細(xì) 胞和某些其它細(xì)胞要貼壁才能生長(zhǎng)。在組織培養(yǎng)處理瓶或其它小管中的常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn) 生有限得率的貼壁細(xì)胞，因?yàn)橹挥行”砻娣e可利用。微載體培養(yǎng)引入了新的可能性，并首次使貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)用高得率成為可 能。在微載體培養(yǎng)中，細(xì)胞在小球表面呈單層生長(zhǎng)，所述小球通常通過(guò)溫和攪拌而懸浮 于培養(yǎng)基中。通過(guò)使用簡(jiǎn)單懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中的微載體，可以得到每毫升幾百萬(wàn)細(xì)胞的得 率而且系統(tǒng)容易升級(jí)。在微載體方法中，用轉(zhuǎn)瓶中的小珠或填充在柱中的小珠(灌注培養(yǎng))來(lái)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞 培養(yǎng)。微載體是例如基于葡聚糖、纖維素或聚乙烯的產(chǎn)物。通常提供具有衍生自動(dòng)物蛋白涂層例如豬或牛的明膠涂層的微載體。動(dòng)物蛋白 從常規(guī)微載體培養(yǎng)基中滲漏出來(lái)是個(gè)問(wèn)題，尤其是在生產(chǎn)細(xì)胞和疫苗用于治療時(shí)。因 此，期望具有無(wú)動(dòng)物蛋白的微載體產(chǎn)物替代含有動(dòng)物蛋白的產(chǎn)物，例如豬膠原蛋白涂覆 的微載體。US 6214618描述了無(wú)蛋白的微載體，其包含附著在小珠表面的交聯(lián)苯乙烯單體 核和二乙烯基苯和三甲胺。小珠有助于細(xì)胞吸引和附著。該專(zhuān)利也提及ProNectinF( — 種基因工程蛋白)涂覆的聚苯乙烯珠，其在表面采用了來(lái)自纖連蛋白的多拷貝細(xì)胞附著 配體(RGD)。細(xì)胞培養(yǎng)的常見(jiàn)營(yíng)養(yǎng)物包括例如不同的生長(zhǎng)因子、激素、碳水化合物、氨基 酸、維生素、脂質(zhì)和礦物質(zhì)。傳統(tǒng)上，源自不同種類(lèi)動(dòng)物的血清用于幫助提供這些營(yíng)養(yǎng) 物?，F(xiàn)在，通常使用無(wú)動(dòng)物組分的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，其中不同種類(lèi)的植物水解產(chǎn)物 用于替代血清[Enhancing performance in cell culture(細(xì)胞培養(yǎng)中的增強(qiáng)性能)，Babcock 等，Tutorial Bioprocessing, 2007]。發(fā)明概述本發(fā)明提供用于貼壁細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)表面，其中所述表面具有外層或涂層，該 外層或涂層具有結(jié)合的細(xì)胞附著和細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)特性，并包含無(wú)動(dòng)物的材料。因此，本發(fā)明涉及用于細(xì)胞培養(yǎng)的新產(chǎn)品。所述產(chǎn)品包含表面，所述表面象例 如微載體，該微載體提供有衍生自植物蛋白的涂層。優(yōu)選的植物蛋白是大豆蛋白，經(jīng)水 解形成大豆蛋白胨。令人驚奇的是，已知作為細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)的大豆蛋白胨可以附著在細(xì)胞培養(yǎng)表面(例如微載體珠)，并且其具有細(xì)胞吸引特性。植物蛋白沒(méi)有動(dòng)物 蛋白相關(guān)的缺陷。此外，與重組蛋白相比，植物蛋白能更容 易和更廉價(jià)地用于微載體生產(chǎn)工藝。第一方面，本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含細(xì)胞培養(yǎng)表面，該細(xì)胞培 養(yǎng)表面提供有衍生自植物蛋白的酶水解產(chǎn)物即蛋白胨的涂層。所述表面可以是用于粘附 細(xì)胞培養(yǎng)物的任何表面，例如微量滴定板、滾瓶或微載體，而且所述涂層是作為覆蓋所 述表面的外層或區(qū)段而提供的。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述表面是微載體。表面可以是合成來(lái)源，例如玻璃或合成聚合物，例如聚苯乙烯；或者是天然來(lái) 源，例如葡聚糖、纖維素或瓊脂糖或其它天然聚合物。優(yōu)選，植物蛋白是大豆蛋白、豌豆蛋白、水稻蛋白或小麥蛋白。最優(yōu)選的蛋白 胨是與表面化學(xué)偶聯(lián)的大豆蛋白胨。優(yōu)選，植物蛋白來(lái)源的涂層或蛋白胨是作為表面上 的配體而提供的。配體可通過(guò)不同活化化學(xué)而連接到表面，例如使用表氯醇(ECH)的環(huán) 氧基活化(epoxy activation)、烯丙基化、NHS-活化和通過(guò)基團(tuán)偶聯(lián)。如果在開(kāi)始時(shí)所述表面是相對(duì)惰性的，就可通過(guò)例如血漿處理而在其上引入某 些基團(tuán)例如胺和羧酸，使其活化。然后，使用較早提及的某些偶聯(lián)化學(xué)，使這些基團(tuán)可 用于進(jìn)一步活化表面和偶聯(lián)配體。也可先用某些聚合物層對(duì)表面進(jìn)行涂層，所述聚合物 例如葡聚糖或含有能使配體活化，然后可使配體偶聯(lián)到聚合物層的基團(tuán)的環(huán)氧硅烷。表 面活化和偶聯(lián)后的化學(xué)因此是眾所周知的。已經(jīng)描述了大量不同技術(shù)，例如[Polymer surface modification for the attachment of bioactive compounds (用于生物活性化合物連接的 聚合物表面修飾)，Goodard 等，Progress in Polymer Science, 32 (2007) 698-725]。第二方面，本發(fā)明涉及使用細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含細(xì)胞生長(zhǎng)表面，該細(xì) 胞生長(zhǎng)表面提供有植物蛋白來(lái)源的涂層，用于粘附細(xì)胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)，其中所述植物蛋 白來(lái)源的涂層包含蛋白胨，并具有細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)以及細(xì)胞吸引特性。所述細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品將用 于培養(yǎng)任何貼壁細(xì)胞。發(fā)明詳述實(shí)驗(yàn)部分現(xiàn)在，將結(jié)合一些實(shí)施例，更完全地描述本發(fā)明，所述實(shí)施例不得視為對(duì)本發(fā) 明的限制。測(cè)試了例如細(xì)胞連接、細(xì)胞生長(zhǎng)和分離的參數(shù)。表1.材料
權(quán)利要求
1.一種細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含細(xì)胞生長(zhǎng)表面，該細(xì)胞生長(zhǎng)表面提供有源自植 物蛋白酶水解產(chǎn)物即蛋白胨的涂層。
2.權(quán)利要求1的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，其中所述細(xì)胞生長(zhǎng)表面是微載體表面、容器表面、傳 感器表面、微量滴定板表面、滾瓶表面或生物芯片表面。
3.權(quán)利要求1或2的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，其中所述細(xì)胞生長(zhǎng)表面是包含多糖的微載體。
4.前述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，其中所述蛋白胨衍生自大豆蛋白、 小麥蛋白、水稻蛋白或豌豆蛋白。
5.前述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，其中所述蛋白胨與所述細(xì)胞生長(zhǎng)表 面化學(xué)偶聯(lián)。
6.前述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，其中所述蛋白胨作為所述細(xì)胞生長(zhǎng) 表面上的配體提供。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品在粘附細(xì)胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)中的用途。
8.權(quán)利要求7的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品的用途，所述用途用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。
9.制備細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品的方法，所述方法包括提供具有涂層的細(xì)胞生長(zhǎng)表面，所述涂 層源自植物蛋白酶水解產(chǎn)物即蛋白胨。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述細(xì)胞生長(zhǎng)表面是微載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)品。具體地講，本發(fā)明涉及具有包括無(wú)動(dòng)物蛋白涂層在內(nèi)的涂層的細(xì)胞生長(zhǎng)表面。所述涂層衍生自植物蛋白的酶水解產(chǎn)物，優(yōu)選大豆蛋白胨。所述細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品優(yōu)選用于任何貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的微載體。
文檔編號(hào)C12N5/00GK102015999SQ200980115917
公開(kāi)日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月28日
發(fā)明者A·布爾林, M·阿爾戈茨森 申請(qǐng)人:通用電氣健康護(hù)理生物科學(xué)股份公司