一種pk細(xì)胞培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種無血清培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] PK(豬腎）細(xì)胞培養(yǎng)基是指不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外長時間生長和 繁殖的合成培養(yǎng)基，由多種氨基酸、維生素、微量元素以及無機化合物組成，為動物細(xì)胞提 供最優(yōu)化的生長環(huán)境。PK細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)屬于生物醫(yī)藥行業(yè)的基礎(chǔ)產(chǎn)品。隨著生物制藥和 生物醫(yī)療行業(yè)技術(shù)的更新?lián)Q代，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也在不斷進(jìn)化，血清用量逐漸減少直至停止 使用血清培養(yǎng)動物細(xì)胞。生產(chǎn)企業(yè)需要不斷創(chuàng)新技術(shù)，開發(fā)高質(zhì)量PK細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品滿足 下游客戶需求。如今市場上PK細(xì)胞培養(yǎng)基用料較復(fù)雜，成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種PK細(xì)胞培養(yǎng)基，以解決上述技術(shù)問題。
[0004] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題可以采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：
[0005] -種PK細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，以終濃度計，配方包括：4_羥乙基哌嗪乙磺酸 3000mg/L~4000mg/L、氣化納 6000mg/L~7000mg/L、D-(+)-葡萄糖 3000mg/L~4000mg/ L、碳酸氫鈉1000mg/L~2000mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~10mg/L、梓檬酸鐵銨 0? 001mg/L~10mg/L和尿啼啶 0? 01mg/L-10mg/L。
[0006] 本發(fā)明在配方中加入了所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸和所述碳酸氫鈉充當(dāng)緩沖劑能 夠維持培養(yǎng)基內(nèi)PH值的恒定。所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸為緩沖劑，所述D- (+)-葡萄糖在 培養(yǎng)基中起到還原劑的作用。所述氯化鈉的作用為維持培養(yǎng)基內(nèi)的滲透壓。本發(fā)明優(yōu)化了 傳統(tǒng)一種PK細(xì)胞培養(yǎng)基的配方，節(jié)約了成產(chǎn)成本，更適宜動物細(xì)胞的生長，提高細(xì)胞培養(yǎng) 的效率。本發(fā)明適用于VER0,PK15,MAC145細(xì)胞，適用性強。
[0007] 所述配方包括所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸3500mg/L~3600mg/L、所述氯化鈉 6900mg/L~7000mg/L、所述D_(+)_ 葡萄糖 3100mg/L~3200mg/L、所述碳酸氫鈉1000 mg/ L~1300mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~lmg/L、梓檬酸鐵銨0? 01mg/L~lmg/L和尿啼 啶0? 01mg/L-lmg/L;所述配方中還包括：葉酸2mg/L~3mg/L、煙酰胺2mg/L~3mg/L、甘氨 酸 10mg/L~20mg/L、氯化鎂 20mg/L~30mg/L、氯化|丐 100mg/L~200mg/L和核黃素 0? 2mg/ L~0? 5mg/L〇
[0008] 本發(fā)明通過在配方中加入葉酸和核黃素能促進(jìn)細(xì)胞的分裂和再生。煙酰胺可促進(jìn) 生物氧化過程和組織新陳代謝。
[0009] 所述配方中還包括硫酸銅五水合物0? 001mg/L~0? 002mg/L、生物素0? 003mg/L~ 0? 004mg/L、亞油酸0? 04mg/L~0? 05mg/L、硝酸鐵九水合物0?lmg/L~0? 2mg/L和硫辛酸 0.lmg/L~0. 2mg/L。所述生物素促進(jìn)脂肪和蛋白質(zhì)正常代謝。
[0010] 所述配方中還包括氯化鉀300mg/L~400mg/L、胸苷0? 3mg/L~0? 4mg/L、硫酸亞 鐵七水合物0. 4mg/L~0. 5mg/L、硫酸鋅七水合物0. 4mg/L~0. 5mg/L、維生素B12為0. 6mg/ L~0. 7mg/L和鹽酸吡咳醇2mg/L~3mg/L。所述胸苷在培養(yǎng)基中充當(dāng)藥物中間體，所述維 生素B12起到促進(jìn)細(xì)胞再生的作用，所述鹽酸吡哆醇刺激白細(xì)胞的生長，是形成血紅蛋白 所需要的物質(zhì)。
[0011] 所述配方中還包括鹽酸硫胺2mg/L~3mg/L、泛酸媽2mg/L~3mg/L、L-丙氨酸 4mg/L~5mg/L、L-天冬氨酸6mg/L~7mg/L、L-谷氨酸7mg/L~8mg/L和L-天冬酰胺一 水合物7mg/L~8mg/L。泛酸鈣和L-谷氨酸在培養(yǎng)基中參與蛋白質(zhì)、脂肪和糖類的新城代 謝，促進(jìn)氧化過程；L-丙氨酸為培養(yǎng)基提供養(yǎng)分。
[0012] 所述配方中還包括氯化膽堿8mg/L~9mg/L、L-色氨酸9mg/L~10mg/L、內(nèi)消旋肌 醇 12mg/L~13mg/L、L-甲硫氨酸 17mg/L~18mg/L、L-脯氨酸 17mg/L~18mg/L和L-半 胱氨酸鹽酸鹽一水合物17mg/L~18mg/L。L-脯氨酸促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。
[0013] 所述配方中還包括L-絲氨酸26mg/L~27mg/L、L-胱氨酸二鹽酸鹽31mg/L~ 32mg/L、一水合組氨酸鹽酸鹽31mg/L~32mg/L、L-苯丙氨酸35mg/L~36mg/L、硫酸鎂 48mg/L~49mg/L和L-繳氨酸52mg/L~53mg/L。所述硫酸鎂促進(jìn)培養(yǎng)基中糖和蛋白質(zhì)的 代謝。
[0014] 所述配方中還包括L-蘇氨酸53mg/L~54mg/L、L-異亮氨酸54mg/L~55mg/L、 丙酮酸鈉55mg/L~56mg/L、L_酪氨酸二鈉鹽二水合物55mg/L~56mg/L、L_亮氨酸59mg/ L~60mg/L、磷酸二氫鈉一水合物62mg/L~63mg/L和磷酸氫二鈉71mg/L~72mg/L。所述 磷酸氫二鈉在培養(yǎng)基中起到中和劑的作用。
[0015] 所述配方中還包括L-賴氨酸鹽酸鹽91mg/L~92mg/L、L-鹽酸精氨酸147mg/L~ 148mg/L、L-谷氨酰胺 360mg/L~370mg/L、碘化鉀 0? 000001mg/L~0? 001mg/L、氯化亞錫 0? 000001mg/L~0? 001mg/L和硝酸銀0? 000001mg/L~0? 001mg/L。所述碘化鉀在培養(yǎng)基 中起到穩(wěn)定劑的作用，穩(wěn)定培養(yǎng)基中的化學(xué)平衡，所述氯化亞錫在培養(yǎng)基中起到還原劑的 作用。
[0016] 所述配方中還包括溴化鉀0? 000001mg/L~0? 001mg/L、二氧化鍺0? 00001mg/L~ 0? 01mg/L、硫酸鎳 0? 00001mg/L~0? 01mg/L、氯化鉻 0? 00001mg/L~0? 01mg/L、氯化錳 0? 00001mg/L~0? 01mg/L和氯化銣0? 00001mg/L~0? 01mg/L。所述二氧化鍺、所述硫酸鎳 和所述氯化鉻在培養(yǎng)基中起到催化劑的作用。
[0017] 所述配方中還包括偏釩酸鈉0. 00001mg/L~0. 01mg/L、三氯化鋁0.OOOOlmg/ L~0? 01mg/L、氟化鈉 0? 0001mg/L~0?lmg/L、氯化錦 0? 0001mg/L~0?lmg/L、氯化鈷 0? 0001mg/L~0?lmg/L和氯氧化錯0? 0001mg/L~0?lmg/L。所述偏f凡酸鈉、三氯化錯、氯 化鈷和氯氧化鋯在培養(yǎng)基中起到催化劑的作用。
[0018] 所述配方中余量為蒸餾水。
[0019] 作為一種優(yōu)選方案，一種PK細(xì)胞培養(yǎng)基的配方如下：
[0020]










[0033] 其中，D-(+)-葡萄糖別名為D-無水葡萄糖、D-葡糖、a-D-葡萄糖、D-(+)-葡萄 糖（無水）、右旋糖。
【具體實施方式】
[0034] 為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面進(jìn) 一步闡述本發(fā)明。
[0035] 一種PK細(xì)胞培養(yǎng)基，以終濃度計，配方包括：4_羥乙基哌嗪乙磺酸3000mg/L~ 4000mg/L、氯化鈉 6000mg/L~7000mg/L、D_(+)_ 葡萄糖 3000mg/L~4000mg/L、碳酸氫 鈉1000mg/L~2000mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~10mg/L、梓檬酸鐵銨0? 001mg/L~ 10mg/L和尿啼啶0. 01mg/L-10mg/L。本發(fā)明在配方中加入了 4-輕乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氫 鈉充當(dāng)緩沖劑能夠維持培養(yǎng)基內(nèi)PH值的恒定。4-羥乙基哌嗪乙磺酸為緩沖劑，D-(+)_葡 萄糖在培養(yǎng)基中起到還原劑的作用。氯化鈉的作用為維持培養(yǎng)基內(nèi)的滲透壓。本發(fā)明優(yōu) 化了傳統(tǒng)一種PK細(xì)胞培養(yǎng)基的配方，節(jié)約了成產(chǎn)成本，更適宜動物細(xì)胞的生長，提高細(xì)胞 培養(yǎng)的效率。本發(fā)明適用于VER0，PK15，MAC145細(xì)胞，適用性強。配方包括4-羥乙基哌嗪 乙橫酸 3500mg/L~3600mg/L、氣化納 6900mg/L~7000mg/L、D_(+)_ 葡萄糖 3100mg/L~ 3200mg/L、碳酸氫鈉1000mg/L~1300mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~lmg/L、梓檬酸鐵 銨0? 01mg/L~lmg/L和尿啼啶0? 01mg/L-lmg/L;配方中還包括：葉酸2mg/L~3mg/L、煙酰 胺 2mg/L~3mg/L、甘氨酸 10mg/L~20mg/L、氯化鎂 20mg/L~30mg/L、氯化|丐 100mg/L~ 200mg/L和核黃素 0? 2mg/L~0? 5mg/L。
[0036] 配方中還包括硫酸銅五水合物0? 001mg/L~0? 002mg/L、生物素0? 003