專利名稱：一株嗜酸乳桿菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株嗜酸乳桿菌及其應(yīng)用，特別涉及含有該嗜酸乳桿菌的嗜酸乳桿菌制劑、飼料、其制備方法及其用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
飼料中添加抗生素促進(jìn)動物生長已有50多年的歷史，對集約化畜牧業(yè)的發(fā)展做出了重大貢獻(xiàn)。隨著人們生活水平的提高和對健康的重視程度不斷加強(qiáng)，人們開始發(fā)現(xiàn)抗生素飼料添加劑在帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益的背后所隱藏的日益突出的負(fù)面效應(yīng)，如抗生素引起的內(nèi)源性感染和二重感染，耐藥性的產(chǎn)生，腸道正常菌群的破壞和畜產(chǎn)品及環(huán)境中的殘留等問題，這些都將對養(yǎng)殖業(yè)、飼料工業(yè)和動物帶來嚴(yán)重威脅，進(jìn)而通過食物鏈危及人類的健康。因此，禁止抗生素添加劑在畜牧業(yè)中使用的呼聲越來越高，研究和開發(fā)新的抗生素替代品的工作迫在眉睫。近年來，抗生素類替代品益生菌、酶制劑、酸制劑等的研究與開發(fā)成為近年來綠色飼料添加劑的熱點(diǎn)，其中益生菌備受關(guān)注。何明清等對病、健仔豬腸道菌群的研究發(fā)現(xiàn)腹瀉仔豬腸道中的乳酸桿菌(Lactobacillus)數(shù)量顯著下降，大腸桿菌數(shù)顯著上升。使用乳酸桿菌益生素可以調(diào)整胃腸道微生態(tài)平衡，所以乳酸桿菌是一種很有前途的益生素生產(chǎn)菌種。乳酸桿菌是一類能從可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的總稱，其中乳酸桿菌屬和雙歧桿菌屬是動物胃腸道中的優(yōu)勢菌群，這些菌屬的益生素制劑應(yīng)用歷史最早，種類很多，其中包括乳酸菌發(fā)酵飼料、乳酸菌粉及乳酸菌提取物。能夠作為飼料添加劑的乳酸桿菌有嗜酸乳酸桿菌、干酪乳酸桿菌、發(fā)酵乳酸桿菌、唾液乳酸桿菌、短小乳酸桿菌、萊氏乳酸桿菌、植物乳酸桿菌及纖維二糖乳酸桿菌。現(xiàn)代科技發(fā)展，使人們對乳酸桿菌優(yōu)良特征的認(rèn)識更加深入，對其開發(fā)利用的熱潮連綿不斷。在畜牧業(yè)中，乳酸桿菌的開發(fā)利用也不斷深化，結(jié)合乳酸桿菌的特征，開辟出各種應(yīng)用途徑。乳酸桿菌分布廣，在動物消化道中含有大量的乳酸桿菌。研究表明，有些乳酸桿菌可以在動物的消化道內(nèi)存活，對動物有益生作用。美國FDA和AAFCO在1989年公布的安全微生物品種共43種，其中乳酸桿菌占12種，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部1999年公布允許使用的12種飼用微生物中有3種是乳酸桿菌。在美國，益生素工業(yè)上應(yīng)用的產(chǎn)品57%含有乳酸桿菌屬。大連醫(yī)學(xué)院康白等開發(fā)研制的乳酶生，是一種乳酸桿菌的干燥制劑，保存期間穩(wěn)定性好，每克產(chǎn)品含活乳酸桿菌約IO7CFU,仔豬每日口服3-4克可以有效治療腹瀉。目前豬腸道的正常菌群的菌種有嗜酸乳酸桿菌(LactcAacillus acidophilus)、羅伊氏乳酸桿菌(L. reuteri)、短乳酸桿菌 (L. brevis)、纖維二糖乳酸桿菌(L. cellobiosus)、發(fā)酵乳酸桿菌(L. fermentum)、唾液乳酸桿菌(Lsalivirius)，其中最主要的是嗜酸乳酸桿菌和羅伊氏乳酸桿菌。乳酸桿菌的數(shù)量、種類和位置對于預(yù)防和控制疾病具有重要的作用。乳酸桿菌能合成維生素，輔助食物消化，促進(jìn)宿主代謝，克服腐敗過程，降低宿主血膽固醇水平，增強(qiáng)宿主對乳糖的耐受力等生理意義，而且不具有病原性。乳酸桿菌能抑制腸道腐敗菌活動，乳酸桿菌產(chǎn)生乳酸能夠降低 PH值，抑制其他微生物生長。
乳酸菌類產(chǎn)品的開發(fā)利用已成為飼料工業(yè)一個活躍領(lǐng)域，但也存在一些亟待解決的問題如產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、活菌數(shù)量不夠、消化率低和成本高等。因此，培養(yǎng)繁殖力強(qiáng)、耐受能力強(qiáng)、產(chǎn)生較高消化酶的菌種以生產(chǎn)出產(chǎn)量高、質(zhì)量穩(wěn)定、在體溫范圍內(nèi)具有較高活性的乳酸桿菌類產(chǎn)品，以提高其利用率，同時改進(jìn)工藝、降低生產(chǎn)成本、提高產(chǎn)品的市場競爭力以及對于畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康都非常有意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus) AI2021及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus) AI2021，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No. 4649。該嗜酸乳桿菌抗逆性強(qiáng)、抗雜菌能力強(qiáng)、具有益生特性。嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)AI2021 具有以下特性(1)、在ρΗ2· 0處理6小時之后的存活率為69. 3% ；(2)、在75°C水浴中15min中存活率為62. 7% ；(3)、在室溫下放置1個月后存活率分別為60%(4)、接種肉湯培養(yǎng)基在37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后M小時達(dá)到最高生長濃度為 10ncfu/ml (圖 1)。本發(fā)明的另一個目的是提供一種嗜酸乳桿菌制劑。該制劑能夠替代現(xiàn)有的飼用抗生素，并具有抗病、促生長的作用。本發(fā)明所提供的嗜酸乳桿菌制劑，它的活性成分為所述的嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus)AI2021。所述制劑具有下述至少一種用途1)制備調(diào)解動物腸內(nèi)微生態(tài)平衡的產(chǎn)品；2)制備增強(qiáng)非特異性免疫的產(chǎn)品；3)提高動物飼料轉(zhuǎn)化效率；4)促進(jìn)動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收；5)制備降低動物腹瀉發(fā)病率的產(chǎn)品；6)制備提高動物生產(chǎn)性能的產(chǎn)品。上述嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021或制劑可用于制備大腸桿菌抑制劑。所述大腸桿菌抑制劑中的大腸桿菌具體可為大腸桿菌K88、大腸桿菌K99或大腸桿菌987P。所述提高動物生產(chǎn)性能可為提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，具體體現(xiàn)為提高仔豬平均日增重和/或仔豬平均日采食量。所述降低動物腹瀉發(fā)病率具體可體現(xiàn)為降低大腸桿菌感染仔豬腹瀉率；所述降低腹瀉指數(shù)具體可體現(xiàn)為降低大腸桿菌感染仔豬腹瀉指數(shù)。所述制劑具體可由所述嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和載體組成；所述載體具體可為磷酸鈣、稻殼粉、麩皮、米糠、脫脂奶粉、麥芽糊精、蔗糖、甘油和淀
5粉中的至少一種。所述制劑中，所述嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和所述載體的配比可為=(IO7-IOltl)Cfu (0.3-5)克載體。所述載體可經(jīng)過微粉化處理。經(jīng)過微粉化處理后，90%的粉體粒度小于100 μ m，平均粒徑小于50 μ m,所述平均粒徑為50%粉體粒徑。所述制劑具體可為下述任一種A)由所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021和磷酸鈣組成的嗜酸乳桿菌制劑A，所述嗜酸乳桿菌制劑A中，二者的配比為5克磷酸鈣=(IO7-IOici)Cfu所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 ；B)由所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和稻殼粉組成的嗜酸乳桿菌制劑B，所述嗜酸乳桿菌制劑B中，二者的配比為0. 5克稻殼粉= (IO7-IOici)Cfu 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 ；C)由所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑C，所述嗜酸乳桿菌制劑C中，二者的配比為0. 3克所述載體(IO7-IOltl) cfu所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021 ；所述載體由稻殼粉和脫脂奶粉組成，所述稻殼粉和脫脂奶粉的質(zhì)量比為2 1 ；D)由所述嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑D，所述嗜酸乳桿菌制劑D中，二者的配比為0. 3克所述載體(IO7-IOltl) cfu 所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021 ；所述載體由稻殼粉、脫脂奶粉和麥芽糊精組成，所述稻殼粉、脫脂奶粉和麥芽糊精的質(zhì)量比為1 :1:1;E)由所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑E，所述嗜酸乳桿菌制劑E中，二者的配比為0. 3克所述載體(IO7-IOltl) cfu所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021 ；所述載體由脫脂奶粉和麩皮組成，所述脫脂奶粉和麩皮的質(zhì)量比為1 1;F)由所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑F，所述嗜酸乳桿菌制劑F中，二者的配比為0. 4克所述載體(IO7-IOltl) cfu所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus) AI2021 ；所述載體由稻殼粉、脫脂奶粉和麩皮組成，所述稻殼粉、脫脂奶粉和麩皮的質(zhì)量比為2 1 1。本發(fā)明所述嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021或所述制劑的動物飼料可以作為添加劑用于制備動物飼料，其中的動物包括但不限于豬、牛、羊、雞等各種動物。該飼料具有與抗生素飼料類似的功能，但無抗生素飼料的副作用。所述動物飼料中，每克所述動物飼料中具體可含有IO7CFU以上的所述嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus)AI2021。本發(fā)明的嗜酸乳桿菌及其嗜酸乳桿菌制劑主要作為動物的飼料添加劑，其可以替代現(xiàn)有動物日糧中的抗生素，調(diào)節(jié)動物腸內(nèi)微生態(tài)平衡，從而具有增強(qiáng)非特異性免疫功能來預(yù)防疾病的作用，同時還可以提供營養(yǎng)因子、促進(jìn)營養(yǎng)物的消化吸收、降低腹瀉、促進(jìn)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率、提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能。本發(fā)明的嗜酸乳桿菌及其嗜酸乳桿菌制劑對防治動物消化系統(tǒng)疾病起到保健作用，同時對幼年動物可刺激其胃腸道發(fā)育，所以將之作為飼料添加劑應(yīng)用在飼料中能起到抗病促生長的作用。同時，本發(fā)明的嗜酸乳桿菌及其嗜酸乳桿菌制劑無耐藥性和藥物在動物產(chǎn)品中殘留從而對人類的健康產(chǎn)生潛在的危害的可能，是一種有前途的綠色飼料添加劑。下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，所述實(shí)施利用于理解而不是限制本發(fā)明。保藏說明菌種名稱嗜酸乳桿菌Ji丁名 Lactobacillus acidophilus菌株編號AI2021保藏機(jī)構(gòu)中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏機(jī)構(gòu)簡稱CGMCC地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號保藏日期2011年3月11日保藏中心登記入冊編號CGMCC No. 4649


圖1為嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021的發(fā)酵生長曲線；圖2為嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus) AI2021抑制大腸桿菌實(shí)驗(yàn)的平板示意圖
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus) AI2021，可先接種于 Rogosa SL瓊脂的Himgates滾管培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得到的種子培養(yǎng)物再接種于Rogosa SL肉湯厭氧培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。其中的所述的瓊脂培養(yǎng)基為適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的任何培養(yǎng)基，本領(lǐng)域技術(shù)人員都知曉何種培養(yǎng)基適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)。具體可選用Rogosa SL瓊脂的Himgates滾管培養(yǎng)基，這里所述的Rogosa SL瓊脂的Hungates滾管培養(yǎng)基理解為在Rogosa SL完全選擇性培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，適當(dāng)修改的適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基。所述適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基可以為現(xiàn)有技術(shù)任何適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基，這為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉，具體可為胰蛋白胨l_20g，牛肉膏l(xiāng)_20g，酵母浸粉l_15g，葡萄糖l_20g，阿拉伯糖l_15g，蔗糖l_15g，醋酸鈉5-25g，枸櫞酸鈉l-10g，磷酸二氫鉀l_15g，七水硫酸鎂0. 1-1. 5g，四水硫酸錳 0. 1-1. 5g，硫酸亞鐵 0.01-0. 10g，吐溫-800. 1-2. OmL，瓊脂 5_20g，蒸餾水 100_2500mL ； 優(yōu)選為胰蛋白胨5-15g，牛肉膏5-15g，酵母浸粉3-10g，葡萄糖5_15g，阿拉伯糖3_10g，蔗糖3-10g，醋酸鈉10-20g，枸櫞酸鈉l_5g，磷酸二氫鉀l-10g，七水硫酸鎂0. Ι-lg,四水硫酸錳 0. Ι-lg,硫酸亞鐵 0. 01-0. 05g,吐溫-800. 5-1. 5mL,瓊脂 10_15g，蒸餾水 500_2000mL ；更優(yōu)選為胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸粉5g，葡萄糖10g，阿拉伯糖5g，蔗糖5g，醋酸鈉 15g，枸櫞酸鈉2g，磷酸二氫鉀6g，七水硫酸鎂0. 58g，四水硫酸錳0. 25g，硫酸亞鐵0. 03g,吐溫-80 ImL,瓊脂13g，蒸餾水IOOOmL0其中的液體培養(yǎng)基為適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的任何培養(yǎng)基，本領(lǐng)域技術(shù)人員也知曉這種液體培養(yǎng)基，其中可優(yōu)選肉湯厭氧培養(yǎng)基，這里所述的肉湯厭氧培養(yǎng)基理解為在普通肉湯厭氧培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，適當(dāng)修改的培養(yǎng)基，所述適當(dāng)修改的培養(yǎng)基可以為現(xiàn)有技術(shù)任何適合嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基，這為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉，優(yōu)選Rogosa SL肉湯厭氧培養(yǎng)基，其中培養(yǎng)基的配方為胰蛋白胨5-15g，酵母浸粉3-10g，葡萄糖5-15g，阿拉伯糖 3-10g，蔗糖3-10g，醋酸鈉10-20g，枸櫞酸鈉l_5g，磷酸二氫鉀l_10g，七水硫酸鎂0. I-Ig, 四水硫酸錳0. Ι-lg，硫酸亞鐵0. 01-0. 05g,吐溫-80 0. 5-1. 5mL,蒸餾水500_2000mL ；優(yōu)選為胰蛋白胨10g，酵母浸粉5g，葡萄糖10g，阿拉伯糖5g，蔗糖5g，醋酸鈉15g，枸櫞酸鈉2g， 磷酸二氫鉀6g，七水硫酸鎂0. 58g，四水硫酸錳0. 25g，硫酸亞鐵0. 03g,吐溫-80 ImL,蒸餾 7jC 1 OOOmL。應(yīng)用上述培養(yǎng)基，本領(lǐng)域技術(shù)人員一般都知曉具體培養(yǎng)過程，這里優(yōu)選為上述 Rogosa SL瓊脂培養(yǎng)基的Himgates滾管中培養(yǎng)，優(yōu)選在培養(yǎng)箱中，37°C下，培養(yǎng)15-72小時； 其中的嗜酸乳桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)優(yōu)選在R0g0sa SL肉湯厭氧培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)15-80小時。 上述培養(yǎng)基的PH值可為6-7。所述的嗜酸乳桿菌CGMCC No. 4649菌種液為經(jīng)過一次發(fā)酵、二次發(fā)酵或三次發(fā)酵所得的菌種液。其中所述的一次發(fā)酵、二次發(fā)酵或三次發(fā)酵的培養(yǎng)基中碳氮磷比為 100 5 10 0.5 5;優(yōu)選 100 10 2.8。所述的嗜酸乳桿菌制劑培養(yǎng)基，為任何適合制作嗜酸乳桿菌制劑的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基成分優(yōu)選為糖蜜、蔗糖、葡萄糖，三者的重量比為20-50份10-70份10-30份。所述的嗜酸乳桿菌制劑培養(yǎng)基，為任何適合制作嗜酸乳桿菌制劑的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基成分在上述培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上還包括蛋白胨，其與糖蜜的重量比為10-25份15-55份。所述的嗜酸乳桿菌制劑培養(yǎng)基，為任何適合制作嗜酸乳桿菌制劑的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基成分在上述培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上還包括磷酸和/或可溶性磷酸鹽，其與糖蜜的重量比為 10-25 15-55。所述的后處理為將嗜酸乳桿菌菌液經(jīng)過一次、二次、三次發(fā)酵擴(kuò)繁，將發(fā)酵菌液加入磷酸鹽緩沖液中，噴霧干燥即可，所述的磷酸鹽緩沖液的pH為6. 5 6. 7。本發(fā)明的動物飼料包括常用動物飼料和本發(fā)明的嗜酸乳桿菌制劑制劑。其中嗜酸乳桿菌制劑的含量至少為0. 001%，優(yōu)選為0. 001-3%，更優(yōu)選0.01% -2%，最優(yōu)選 0. 05% -0.2%。本發(fā)明的嗜酸乳桿菌制劑可以同目前市面上任何常用動物飼料進(jìn)行配合， 即本發(fā)明所述動物飼料保護(hù)范圍不為配合的常用動物飼料種類所限制。然而其中的常用動物飼料可優(yōu)選為日糧，進(jìn)一步優(yōu)選為豬用日糧、雞用日糧、反芻動物用日糧和水產(chǎn)動物用日糧。對于不同的動物，其日糧的配方各不相同，但是，現(xiàn)有技術(shù)中公開的任何日糧都可以作為本發(fā)明的動物飼料，其配方都是該領(lǐng)域的公知常識。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021的分離和鑒定嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021是從豬胃腸道粘膜中提取、分離、篩選、純化得到的。1. 1試驗(yàn)材料取健康仔豬胃腸道粘膜5cm2(胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸和結(jié)腸)，在滅菌杯中，用無菌生理鹽水沖洗粘膜上的食糜，將粘膜浸入裝有15mL HEPES緩沖液的燒杯中，用鑷子來回?fù)u動粘膜5min后，得到上清液。1. 2培養(yǎng)基1. 2. IRogosa SL 瓊脂的培養(yǎng)基胰蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸粉5g，葡萄糖10g，阿拉伯糖5g，蔗糖5g，醋酸鈉 15g，枸櫞酸鈉2g，磷酸二氫鉀6g，七水硫酸鎂0. 58g，四水硫酸錳0. 25g，硫酸亞鐵0. 03g,吐溫-80 lmL，瓊脂13g，用蒸餾水定容至lOOOmL。1. 2. 2Rogosa SL肉湯厭氧培養(yǎng)基胰蛋白胨10g，酵母浸粉5g，牛肉膏10g，葡萄糖10g，阿拉伯糖5g，蔗糖5g，醋酸鈉 15g，枸櫞酸鈉2g，磷酸二氫鉀6g，七水硫酸鎂0. 58g，四水硫酸錳0. 25g，硫酸亞鐵0. 03g,吐溫-80 lmL，用蒸餾水1000mL。1.3革蘭氏染色用無菌注射器吸取少量Rogosa SL肉湯培養(yǎng)物，滴在載玻片上，在酒精燈火焰上輕輕烘干固定。滴加結(jié)晶紫染色液，染lmin，水洗；滴加革蘭氏碘液媒染，作用lmin，水洗；滴加丙酮乙醇混合液(丙酮95%乙醇=3 7)脫色30s，水洗；滴加沙黃染色液復(fù)染lmin， 水洗，待干，在普通光學(xué)顯微鏡上觀察，菌體成紅色為陰性，紫色的為陽性。呈革蘭氏陽性形態(tài)一致的桿菌，進(jìn)一步進(jìn)行接觸酶試驗(yàn)。1. 4接觸酶試驗(yàn)作Rogosa SL斜面培養(yǎng)基，取培養(yǎng)物約0. 2m L注入裝有Rogosa SL培養(yǎng)基斜面， 5% CO2培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)Mh，長出菌落后，將3%過氧化氫溶液滴加到菌落上，若沒有氣泡產(chǎn)生說明是陰性，若有氣泡產(chǎn)生說明是陽性。通過Rogosa SL上厭氧培養(yǎng)的培養(yǎng)物經(jīng)革蘭氏染色陽性和接觸酶試驗(yàn)陰性可初步認(rèn)為是乳酸桿菌屬。1. 5耐酸性能選育制備含pH2. O和ρΗ2· 5、ρΗ3· O、ρΗ3· 5的Rogosa SL肉湯培養(yǎng)基，分別接種已培養(yǎng) 24h的菌種，接種量1%，于37°C培養(yǎng)24h后觀察。如果培養(yǎng)基變的渾濁，說明該菌株耐酸。 從接種開始和第他用無菌注射器取出ImL進(jìn)行梯度稀釋至10_5后，取0. 3mL稀釋液在MRS 瓊脂(pH5. 2)上均勻涂布，平皿放置在37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)Mh，計(jì)算存活率。然后鏡檢看是否染菌。能夠生長的嗜酸乳桿菌的最初分離樣品保存在_80°C冰箱備用。1. 6耐膽鹽性能選育制備含豬膽鹽0. 3%的麥芽汁培養(yǎng)基，接種已培養(yǎng)24h的菌種，接種量1 %，于培養(yǎng)24h后觀察。如果培養(yǎng)基變的渾濁，說明該菌株耐膽鹽。然后鏡檢看是否染菌。能夠生長的菌株的最初分離樣品保存在_80°C冰箱備用。1.7耐高銅性能選育制備含有0. 五水硫酸銅的肉湯培養(yǎng)基，接種已培養(yǎng)Mh的菌株培養(yǎng)物，接種量 1%，于培養(yǎng)12-7 后觀察。如果培養(yǎng)基變的渾濁，說明該菌株耐高銅。然后鏡檢看是否染菌。能夠生長的嗜酸乳桿菌的最初分離樣品保存在_80°C冰箱備用。1. 8耐高鋅性能選育制備含有氧化鋅的肉湯厭氧培養(yǎng)基，接種已培養(yǎng)24h的乳酸桿菌培養(yǎng)物，接種量1%，于培養(yǎng)12-7 后觀察。如果培養(yǎng)基變的渾濁，說明該菌株耐高鋅。然后鏡檢看是否染菌。能夠生長的嗜酸乳桿菌的最初分離樣品保存在_80°C冰箱備用。
2.結(jié)果與討論2. 1嗜酸乳桿菌的分離與鑒定本試驗(yàn)從健康仔豬胃腸道粘膜中利用經(jīng)過鹽酸校正后Rogosa SL完全選擇性培養(yǎng)基篩選出7009株乳酸桿菌株。將仔豬胃腸道粘膜在HEPES緩沖液中搖動5min，用無菌注射器吸取0. 2mL上清液裝入含Rogosa SL瓊脂的滾管中培養(yǎng)Mh，再挑去白色菌落在厭氧無菌Rogosa SL肉湯里進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)過革蘭氏染色和接觸酶試驗(yàn)，證明乳酸桿菌是健康仔豬胃腸道的優(yōu)勢菌群，說明經(jīng)鹽酸校正的Rogosa SL培養(yǎng)基適合分離胃腸道粘膜乳酸桿菌。菌種的篩選是及其煩瑣的過程。大多數(shù)乳酸菌的選育過程是從消化道上皮分離益生菌，這樣便可已獲得具有良好定植效果的菌種。2. 2耐酸性能選育通過耐酸性能選育，有573株乳酸桿菌可以在pH2. O的Rogosa SL培養(yǎng)基中生長繁殖，淘汰率為30%。這說明胃腸道的大多數(shù)嗜酸乳桿菌耐酸性能較好，有70%可以在仔豬的胃腸道中進(jìn)行繁殖。乳酸桿菌一般通過定植在消化道上皮發(fā)生益生特性。因此，如果菌種對胃酸沒有耐受性很難對動物的生產(chǎn)性能產(chǎn)生良好的作用。2. 3耐膽鹽性能選育將通過耐酸性能選育的573株乳酸桿菌進(jìn)行耐膽鹽性能選育，有95株乳酸桿菌可以在含膽鹽0.3^WR0g0sa SL培養(yǎng)基中生長繁殖，淘汰率為83%。研究表明，膽鹽是腸乳酸桿菌在動物胃腸道內(nèi)遇到的比胃酸更不利的因素。Chou和Weimer研究發(fā)現(xiàn)用膽鹽選擇性馴化乳酸桿菌對膽鹽的耐受力是有效的，經(jīng)過幾代膽鹽馴化之后得到的乳酸桿菌耐膽鹽的能力比親代乳酸桿菌強(qiáng)，乳酸桿菌容易對膽鹽性能產(chǎn)生耐受性，且具有一定的遺傳性，選育出耐膽鹽的菌在生產(chǎn)中具有重要的意義。2. 4耐高銅性能選育將通過耐膽鹽性能選育的95株乳酸桿菌進(jìn)行耐高銅性能選育，有79株乳酸桿菌可以在250mg/kg銅的Rogosa SL培養(yǎng)基中生長繁殖，淘汰率為17%。證明該乳酸桿菌具有較強(qiáng)的耐高銅特性。由于高銅日糧具有促生長的作用，是目前我國比較普遍使用的日糧，因此選擇具有耐高銅的嗜酸乳桿菌是極其必要的。2. 5耐高鋅性能選育將通過耐高銅性能選育的79株乳酸桿菌進(jìn)行耐高鋅性能選育，有71株乳酸桿菌可以在含氧化鋅的肉湯厭氧培養(yǎng)基中生長繁殖，淘汰率為10%。高鋅具有防止腹瀉、促進(jìn)生長的作用，因此在我國利用氧化鋅來配制仔豬飼料，尤其是斷奶仔豬飼料的廠家很多。 因此選育出耐高鋅的乳酸桿菌菌株也是必要的。3.小結(jié)通過本試驗(yàn)獲得71株來源于仔豬胃腸道粘膜，對消化道內(nèi)環(huán)境有一定抵抗能力的嗜酸乳桿菌菌株，這為以后的選種工作打下了基礎(chǔ)。實(shí)施例2、發(fā)酵乳酸桿菌的生物學(xué)特性的研究1.1生長曲線MRS肉湯蛋白胨，IOg;牛肉浸膏，IOg;酵母浸粉，5g;磷酸氫二鉀，2g;枸椽酸二銨，2g ；葡萄糖，20g ；七水硫酸鎂，0. 58g ；四水硫酸錳，0. 25g ；醋酸鈉，5g ；蒸餾水，lOOOmL， 在500mL錐形瓶里裝300mL MRS肉湯。按1 %接種量接種乳酸桿菌培養(yǎng)物，在前24h每隔lh，24h之后在第觀、32、36、40、44、4 1取樣，取ImL培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋后，在10_2 10_6 稀釋度取0. 3mL稀釋液在MRS瓊脂(pH5. 2)上均勻涂布，每個梯度做3個平行樣，平皿放置在37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)Mh，取平皿中的菌落數(shù)50 150的稀釋度作為計(jì)算用， 每個梯度做3個平行樣，以平均值表示結(jié)果。每毫升細(xì)菌濃度以對數(shù)值表示。1.2耐酸存活率MRS肉湯配方同實(shí)施例2中1. 1，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至5. 4，再用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)至 2.0。置于Himgates滾管中，每個管裝20mL肉湯，制成厭氧無菌肉湯。涼下來后每管中加 ImL乳酸桿菌16h的培養(yǎng)物，在開始時、2h、4hjh和他分別取樣，測定存活率。用無菌注射器取出ImL進(jìn)行梯度稀釋后，在10_4 10_7稀釋度取0. 3mL稀釋液在MRS瓊脂(pH5. 2)上均勻涂布，每個梯度做3個平行樣，平皿放置在37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)Mh，取平皿中的菌落數(shù)50 150的平皿計(jì)數(shù)，以平均值表示結(jié)果。存活率的計(jì)算公式為S 酸=nx/n0Sig為經(jīng)過pH2. 0處理后不同時間的乳酸桿菌存活率；Iitl為pH2. 0處理前每毫升活菌數(shù)；nx為PH2. 0處理2、4、6、他后每毫升活菌數(shù)。1.3耐熱存活率MRS肉湯配方同步驟1. 1，調(diào)節(jié)pH為6. 7，置于Hungates滾管中，每個管裝20mL肉湯，制成厭氧無菌肉湯。每管中加ImL乳酸桿菌培養(yǎng)1 !后的培養(yǎng)物，放置在37°C培養(yǎng)箱中 16h后，取樣進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)，同時將Himgates管迅速放置在75°C水浴中加熱15min，取樣進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。用無菌注射器取出ImL進(jìn)行梯度稀釋后，在10_4 10_7稀釋度取0. 3mL 稀釋液在MRS瓊脂(pH5. 2)上均勻涂布，每個梯度做3個平行樣，平皿放置在37°C，5% CO2 培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)Mh，取平皿中的菌落數(shù)為50 150的平皿計(jì)數(shù)，以平均值表示結(jié)果。存活率的計(jì)算公式為s 熱=Ii1Ai0;Ss為經(jīng)過75°C處理后的乳酸桿菌存活率；IItl為加熱處理前每毫升活菌數(shù)；ηι為加熱處理15min后每毫升活菌數(shù)。1.4貯藏存活率MRS肉湯配方同步驟1. 1，調(diào)節(jié)pH為6. 7，置于Hungates滾管中，每個管放置20mL 的MRS肉湯，制成厭氧無菌肉湯后，每管中加ImL乳酸桿菌培養(yǎng)16h的培養(yǎng)物，放置在37°C 培養(yǎng)箱中1 后，取樣ImL進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。室溫下放置1個月后，取樣ImL進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)。計(jì)數(shù)方法用無菌注射器取出ImL進(jìn)行梯度稀釋后，在10_4 10_7稀釋度取0.3mL稀釋液在MRS瓊脂(pH5. 2)上均勻涂布，每個梯度做3個平行樣，平皿放置在37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)Mh，取菌落數(shù)為50 150個的平皿計(jì)數(shù)，以平均值表示結(jié)果。存活率的計(jì)算公式為Se=Vn0Se為經(jīng)過1個月貯藏后的乳酸桿菌存活率；Iitl為貯藏前每毫升活菌數(shù)％為貯藏 1個月后每毫升活菌數(shù)。2統(tǒng)計(jì)方法采用中國均勻設(shè)計(jì)學(xué)會與香港浸會大學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)研究和咨詢中心共同開發(fā)的均勻設(shè)計(jì)軟件4. 0版，用二次回歸和逐步回歸的方法對各因素的解進(jìn)行最優(yōu)化。3結(jié)果與討論3. 1 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 生長曲線生長曲線主要反映一種微生物的生長特性，微生物的生長一般經(jīng)歷延遲期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段，這是一種典型的生長曲線模型。延遲期是微生物對新的生長環(huán)境的適應(yīng)過程，在這一過程中，微生物表現(xiàn)為數(shù)量不變或下降，對其自身的大分子和小分子的組成進(jìn)行調(diào)整，同時也會產(chǎn)生特定的物質(zhì)如酶等來適應(yīng)新的環(huán)境。對數(shù)生長期是微生物對新的環(huán)境適應(yīng)之后，生長繁殖速度呈幾何級數(shù)的階段，是數(shù)量增長最快的一個階段，表現(xiàn)為菌體數(shù)量和重量的增加。但是到了對數(shù)期的末期，由于菌體生長代謝對營養(yǎng)物質(zhì)的消耗和有毒產(chǎn)物的積累，細(xì)菌的生長繁殖速率下降。穩(wěn)定期是細(xì)菌生長速率與死亡速率趨于平衡的階段。衰亡期細(xì)菌數(shù)量明顯下降。測定生長曲線對于確定合適的發(fā)酵時間具有重要作用嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021的生長曲線如圖1所示，從圖 1可見，嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021的濃度在開始時緩慢上升，經(jīng)過 3h之后從IO5個數(shù)量級迅速上升，到第1 超過IO11個數(shù)量級，到第32h，細(xì)菌的數(shù)量級開始緩慢下降到IO11數(shù)量級以下，主要原因是培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)濃度下降和有害代謝產(chǎn)物增加弓I起菌體死亡增加，生長繁殖的菌體數(shù)量比死亡的菌體數(shù)量更多，導(dǎo)致總的活菌數(shù)量減少。 從生長曲線可以看出，嗜酸乳桿菌的最佳收獲期是在培養(yǎng)后18 23h，從圖中可以看出活菌數(shù)維持在IO11數(shù)量級達(dá)1 左右，而維持在101°數(shù)量級達(dá)2 左右。3. 2 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 耐酸存活率嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021經(jīng)pH2. 0處理不同時間的菌體濃度見表1。從表1可見，在ρΗ2· 0處理的前6h,嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021的數(shù)量下降緩慢，存活率從87. 9下降到69.3%。嗜酸乳桿菌(LactcAaciIlus acidophilus) AI2021是一株分離自仔豬空腸粘膜的菌種，這個存活率對于其耐過胃酸的抑制作用或殺滅作用應(yīng)是較為理想的，也表明該菌株可以有足夠數(shù)量的活菌數(shù)到達(dá)空腸。表1 pH2. 0處理不同時間對嗜酸乳桿菌活菌濃度的影響(單位CFU/ml)
項(xiàng)目時間Time(h)02468活菌濃度8.2x10s7.3x10s6.2><108 5.8x10s3.2χ106存活率(％)87.976.769.30.393. 3 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 耐熱存活率嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)AI2021 經(jīng)過75°C處理 15min之后的存活率達(dá)到62.7%。一般仔豬飼料的制粒溫度為70°C 85°C之間，耐高溫之后存活率低也是乳酸桿菌作為飼料添加劑的主要限制性因素之一，根據(jù)Fuller(1989)的研究，乳酸桿菌經(jīng)過75°C處理IOmin之后基本上沒有活菌。從耐熱存活率看，本試驗(yàn)選育的發(fā)酵乳酸桿菌可以耐受制粒時的高溫，作為飼料添加劑將會有較好的前途。3. 4 嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 耐C藏存活率
經(jīng)過一個月的貯藏之后，嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021的存活率為60%。4 小結(jié)嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)AI2021 在發(fā)酵后 18 到 23h 是合適的菌體收獲期。耐熱存活率為62.7%，耐貯藏存活率為60 %，耐酸存活率69. 3 %，綜合抗逆存活率25. 7%0實(shí)施例3、乳酸桿菌抗大腸桿菌的選育1. 1乳酸桿菌代謝產(chǎn)物抑制大腸桿菌能力的選育大腸桿菌(K88、K99和987P)購自中國獸藥監(jiān)察所。Κ88在中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心的保藏號為CMCC44742，K99在中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心的保藏號為CMCC44820， 987P在中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心的保藏號為CMCC44317。乳酸桿菌71株耐酸、耐高鋅、耐高銅和膽鹽的嗜酸乳桿菌。培養(yǎng)基麥康凱(MacConkay)培養(yǎng)基。在Hungates管里加MRS肉湯約15mL，充二氧化碳，制成無菌厭氧MRS肉湯。每個管中分別接種從健康仔豬胃里分離到的71株耐酸、耐高鋅耐高銅和膽鹽的嗜酸乳桿菌，乳酸桿菌經(jīng)1 培養(yǎng)后按接種于肉湯中，在37°C培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24h后，置4°C冰箱保存?zhèn)溆?。抑制大腸桿菌試驗(yàn)制作麥康凱培養(yǎng)基，加熱溶解后在121°C高壓滅菌15min后， 無菌傾倒平皿。用記號筆在平皿底部劃線將平皿分成三個平行的區(qū)域，每個區(qū)域用接種棒劃線接種大腸桿菌培養(yǎng)液G.0X108CFU/mL)于培養(yǎng)基表面，然后在距平皿中線約!Bem的地方挖一寬為0. 5em的溝，溝與接種劃線垂直，用熱接種棒補(bǔ)底，如圖2所示。分別用不同的乳酸桿菌培養(yǎng)物將溝填滿(不能溢出)，置普通培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)1 后，觀察出現(xiàn)大腸桿菌菌落的位置，大腸桿菌的菌落為紅色，測定離小溝最近的大腸桿菌菌落與小溝的距離。每個乳酸桿菌作兩個平行樣，以平均值表示結(jié)果。1. 2乳酸桿菌與大腸桿菌混合培養(yǎng)抑制作用選育大腸桿菌(K88、K99和987Ρ)來源與1. 1節(jié)同。乳酸桿菌71株腸代謝產(chǎn)物對大腸桿菌具有較強(qiáng)抑制作用的乳酸桿菌。大腸桿菌的檢測培養(yǎng)基麥康凱(MacConkay)培養(yǎng)基與1. 1同。乳酸桿菌接種于厭氧無菌MRS肉湯中，37°C培養(yǎng)24h后，置4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?. 3不同濃度乳酸桿菌對大腸桿菌的抑制隨機(jī)選擇一株乳酸桿菌，取5mL培養(yǎng)物(8. 2X109CFU/mL)分別與5、10、15mL營養(yǎng)肉湯混合，制成3個含不同乳酸桿菌培養(yǎng)物濃度的營養(yǎng)肉湯，接種大腸桿菌，接種量為培養(yǎng)液的5%，置37°C，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4、8和1 后，分別用無菌注射器取出培養(yǎng)液，培養(yǎng)液經(jīng)梯度稀釋成10_2 10_5后，每個稀釋度作4個平行樣，取0. 3mL稀釋液，用“L”棒均勻涂布于麥康凱瓊脂平板上，置于37°C，普通培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h，取菌落數(shù)在50 150個的平皿計(jì)數(shù)，以平均值表示結(jié)果，計(jì)算每毫升培養(yǎng)液中大腸桿菌的數(shù)量。2. 3. 2含1/4乳酸桿菌的營養(yǎng)肉湯中乳酸桿菌與大腸桿菌的數(shù)量關(guān)系取5mL乳酸桿菌培養(yǎng)物(108CFU/mL)分別與15mL營養(yǎng)肉湯混合，接種24h大腸桿菌培養(yǎng)物，接種量分別為培養(yǎng)液的10% (107CFU/mL)，起始混合液中乳酸桿菌的數(shù)量為大腸桿菌的10倍，用0. IN NaOH溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH為7. 0，置37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后，分別用無菌注射器取出培養(yǎng)液，培養(yǎng)液經(jīng)梯度稀釋至10_5，ΙΟ"6,10_7后，取0. 3mL稀釋液用“L”棒均勻涂布于MRS瓊脂培養(yǎng)基上，每個梯度的培養(yǎng)液作3個平行樣，MRS瓊脂培養(yǎng)基(pH5. 4) 置37°C、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h，取菌落數(shù)在50 150個的平皿計(jì)數(shù)，以平均值表示乳酸桿菌的數(shù)量，計(jì)算每毫升培養(yǎng)液中乳酸桿菌的數(shù)量。培養(yǎng)24h后直接用無菌注射器取ImL培養(yǎng)液經(jīng)梯度稀釋至10_2后，取0. 3mL稀釋液置于麥康凱瓊脂上，用“L”棒均勻涂布，每個管做3個平行樣，將平板置于37°C，普通培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h，計(jì)算每個平板的大腸桿菌菌落數(shù)，以平均值表示結(jié)果。2 結(jié)果2. 1乳酸桿菌代謝產(chǎn)物抑制大腸桿菌的選育乳酸桿菌代謝產(chǎn)物抑制大腸桿菌的效果以離小溝最近的大腸桿菌菌落與小溝的距離為指標(biāo)，距離越大，說明抑菌效果越好。本試驗(yàn)所采用的平皿挖溝法是對經(jīng)典的平皿挖孔法的改進(jìn)，基本原理是放置在溝中的抗菌物質(zhì)能滲透過瓊脂來抑制大腸桿菌，隨著離溝距離的增大，能滲透過去的抗菌物質(zhì)的濃度就越小。大腸桿菌菌落與小溝的距離越大，說明乳酸桿菌代謝產(chǎn)物所含抗菌物質(zhì)的抑菌能力越強(qiáng)。用平皿挖溝法在同一平皿可以同時測定乳酸桿菌代謝產(chǎn)物對3株大腸桿菌的抑制作用，而用平皿挖孔法在同一平皿只能測定對一株大腸桿菌的抑制作用。63株乳酸桿菌對大腸桿菌K88和K99的抑菌距離在1. 0 2. 6cm 之間。進(jìn)一步研究它們與大腸桿菌混合培養(yǎng)的數(shù)量關(guān)系。其中，嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus) AI2021 對大腸桿菌 K88、987P 和 Κ99 的抑菌距離分別為 2. 0cm、2. 3cm、1. 8cm。2. 2乳酸桿菌與大腸桿菌體外培養(yǎng)的數(shù)量關(guān)系2. 2. 1不同比例嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021培養(yǎng)物與大腸桿菌在混合培養(yǎng)條件下的數(shù)量關(guān)系結(jié)果見表2。表2 營養(yǎng)肉湯中含不同比例嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021 培養(yǎng)液對大腸桿菌的抑制作用(單位CFU/mL)
權(quán)利要求
1.嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No. 4649。
2.一種嗜酸乳桿菌制劑，其特征在于所述制劑的活性成分為權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其特征在于所述制劑具有下述至少一種用途1)制備調(diào)解動物腸內(nèi)微生態(tài)平衡的產(chǎn)品；2)制備增強(qiáng)非特異性免疫的產(chǎn)品；3)提高動物飼料轉(zhuǎn)化效率；4)促進(jìn)動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收；5)制備降低動物腹瀉發(fā)病率的產(chǎn)品；6)制備提高動物生產(chǎn)性能的產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的制劑，其特征在于所述制劑由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillus acidophilus)AI2021和載體組成；所述載體為磷酸鈣、稻殼粉、麩皮、米糠、脫脂奶粉、麥芽糊精、蔗糖、甘油和淀粉中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于所述制劑中，權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 和所述載體的配比為(IO7-IOiq) cfu (0.3-5) 克載體；所述制劑具體可為A)-F)中的任一種A)由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021和磷酸鈣組成的嗜酸乳桿菌制劑A，所述嗜酸乳桿菌制劑A中，二者的配比為5克磷酸鈣(IO7-IOiq) cfu 權(quán)利要求 1 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 ；B)由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021和稻殼粉組成的嗜酸乳桿菌制劑B，所述嗜酸乳桿菌制劑B中，二者的配比為0. 5克稻殼粉(IO7-IO10) cfu 權(quán)利要求 1 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 ；C)由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑C，所述嗜酸乳桿菌制劑C中，二者的配比為0. 3克所述載體 (IO7-IOiq) cfu 權(quán)利要求 1 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 ；所述載體由稻殼粉和脫脂奶粉組成，所述稻殼粉和脫脂奶粉的質(zhì)量比為2 1 ；D)由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑D，所述嗜酸乳桿菌制劑D中，二者的配比為0. 3克所述載體 (IO7-IOiq) cfu 權(quán)利要求 1 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 ；所述載體由稻殼粉、脫脂奶粉和麥芽糊精組成，所述稻殼粉、脫脂奶粉和麥芽糊精的質(zhì)量比為 1:1:1;E)由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑E，所述嗜酸乳桿菌制劑E中，二者的配比為0. 3克所述載體 (IO7-IOiq) cfu 權(quán)利要求 1 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 ；所述載體由脫脂奶粉和麩皮組成，所述脫脂奶粉和麩皮的質(zhì)量比為1 1;F)由權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021和所述載體組成的嗜酸乳桿菌制劑F，所述嗜酸乳桿菌制劑F中，二者的配比為0. 4克所述載體(IO7-IOiq) cfu 權(quán)利要求 1 所述的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) AI2021 ；所述載體由稻殼粉、脫脂奶粉和麩皮組成，所述稻殼粉、脫脂奶粉和麩皮的質(zhì)量比為2 1 1。
6.含有權(quán)利要求1所述嗜酸乳桿菌(LactcAacillusacidophilus)AI2021或權(quán)利要求 1-5中任一所述制劑的動物飼料，。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的動物飼料，其特征在于所述動物飼料中，每克所述動物飼料中含有IO7CFU以上的權(quán)利要求1所述嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)AI2021。
8.權(quán)利要求1所述嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)AI2021或權(quán)利要求1-5 中任一所述制劑的下述至少一種用途1)制備調(diào)解動物腸內(nèi)微生態(tài)平衡的產(chǎn)品；2)制備增強(qiáng)非特異性免疫的產(chǎn)品；3)提高動物飼料轉(zhuǎn)化效率；4)促進(jìn)動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收；5)制備降低動物腹瀉發(fā)病率的產(chǎn)品；6)制備提高動物生產(chǎn)性能的產(chǎn)品。
9.權(quán)利要求1所述嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)AI2021或權(quán)利要求1-5 中任一所述制劑在制備大腸桿菌抑制劑中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，所述大腸桿菌抑制劑中的大腸桿菌為大腸桿菌K88、 大腸桿菌K99或大腸桿菌987P。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株嗜酸乳桿菌及其應(yīng)用。該嗜酸乳桿菌為Lactobacillus acidophilus，2011年3月11日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏中心登記入冊編號CGMCC No.4649。本發(fā)明的嗜酸乳桿菌及其嗜酸乳桿菌制劑主要作為動物的飼料添加劑，其可以用于調(diào)節(jié)動物腸內(nèi)微生態(tài)平衡，從而具有增強(qiáng)非特異性免疫功能來預(yù)防疾病的作用，同時還可以提供營養(yǎng)因子、促進(jìn)營養(yǎng)物的消化吸收、促進(jìn)動物生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率。同時通過配方的篩選，使得本發(fā)明制劑成本低，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
文檔編號C12R1/23GK102212495SQ20111009511
公開日2011年10月12日 申請日期2011年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月15日
發(fā)明者丁修良, 宋青龍, 張海燕, 譙仕彥 申請人:北京龍科方舟生物工程技術(shù)中心