專利名稱：一種抑制人乙型肝炎病毒感染的短肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種能抑制人乙型肝炎病毒感染細(xì)胞的短肽，以及該短肽在制備治療人乙型肝炎病毒感染或乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中國(guó)是人乙型肝炎病毒(簡(jiǎn)稱乙肝病毒)感染的高危區(qū)，人口的8%以上為乙肝病毒攜帶者，由乙肝病毒感染引起的慢性乙型肝炎易發(fā)展為肝硬化和肝癌。目前，慢性乙型肝炎的治療藥物僅有干擾素和核苷(酸)類似物。前者治療應(yīng)答率僅為30%左右,且 副作用大；后者為乙肝病毒聚合酶抑制劑，患者須接受長(zhǎng)期的抗病毒藥物治療，常出現(xiàn)嚴(yán)重的耐藥性。由于現(xiàn)有的抗病毒藥物作用靶點(diǎn)單一，一旦乙肝病毒對(duì)某種藥物產(chǎn)生耐藥性，極易造成對(duì)其他藥物的交叉耐藥性。因此需要尋找更多的抗乙肝病毒感染的藥物靶點(diǎn)并研發(fā)相關(guān)新藥。乙肝病毒入侵肝細(xì)胞始于病毒附著于肝細(xì)胞表面，起關(guān)鍵作用的是乙肝病毒顆粒包膜上的大表面蛋白的PreSl區(qū)。preSl全長(zhǎng)108或119氨基酸(D基因型為108氨基酸，其余基因型為119氨基酸)，與乙肝病毒感染性有密切關(guān)系的區(qū)段主要在preSl的氨基末端，核心位于殘基21-47(D基因型為10-36)，針對(duì)該位點(diǎn)的抗體能阻斷乙肝病毒附著于肝細(xì)胞表面，抑制病毒感染。此外，PreSl氨基末端甘氨酸的豆蘧?；軌蝻@著地提高乙肝病毒的感染性。根據(jù)以上研究結(jié)果，Urban等利用豆蘧?；膒reSl肽(D基因型preSl的2_48)可以競(jìng)爭(zhēng)性地阻斷乙肝病毒感染人肝細(xì)胞。體外研究乙肝病毒感染機(jī)制和抗乙肝病毒感染藥物需要利用能被乙肝病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)體系。目前國(guó)際公認(rèn)的研究乙肝病毒體外感染的細(xì)胞培養(yǎng)體系包括人原代培養(yǎng)肝細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞株IfepaRG以及樹(shù)駒原代培養(yǎng)肝細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抑制乙肝病毒感染肝細(xì)胞的短肽。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述短肽在制備治療乙肝病毒感染或乙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明中，基于噬菌體肽庫(kù)篩選得到了結(jié)合乙肝病毒大表面蛋白preSl區(qū)的短肽，證明該短肽結(jié)合于preSl的13-59(D基因型preSl的2_48)，并證明該短肽能有效地阻斷乙肝病毒結(jié)合人肝癌細(xì)胞株IfepG2以及抑制乙肝病毒感染樹(shù)駒原代培養(yǎng)肝細(xì)胞，從而顯示了該短肽在治療乙肝病毒感染或乙型肝炎中的應(yīng)用前景，完成了本發(fā)明。本發(fā)明第一方面提供了一種合成或表達(dá)的短肽，所述短肽包含以下氨基酸序列之
DN-亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-異亮氨酸-精氨酸-C (Leu-Arg-Asn-Ile-Arg,L-R-N-I-R)。2)1)中所示氨基酸序列中有1-2個(gè)氨基酸缺失且能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。3)1)中所示氨基酸序列中有1-2個(gè)氨基酸被替代且能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。4)1)中所示氨基酸序列中有I個(gè)或多個(gè)氨基酸插入且能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。5)1)-4)中所示氨基酸序列重復(fù)拼接且能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。本發(fā)明所述的短肽的氨基酸序列可以是I)所示氨基酸序列，或者I)所示氨基酸序列的重復(fù)拼接。所述的重復(fù)拼接可以采用氨基酸殘基GSG銜接各氨基酸序列單位。本發(fā)明的實(shí)施例中列舉了的短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO I、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3或者SEQ ID NO 4所示。
本發(fā)明還提供了含有所述的短肽的構(gòu)建物或者細(xì)胞。編碼所述的短肽的核酸序列，含有所述的核酸序列的構(gòu)建物或者細(xì)胞。本發(fā)明還提供了所述的短肽的制備方法，比如，按照其氨基酸序列人工合成。所述短肽對(duì)應(yīng)的核酸分子也可以利用人工合成的方法，按照其核苷酸編碼序列進(jìn)行制備。另一方面，本發(fā)明提供了所述的短肽在制備治療人乙型肝炎病毒感染或乙型肝炎的藥物中的用途。例如制備一種用于治療人乙型肝炎病毒或乙型肝炎的藥物，所述藥物包含上述的短肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。利用本發(fā)明提供的短肽，能有效地阻斷乙肝病毒感染肝細(xì)胞，從而為治療乙肝病毒感染或乙型肝炎提供了一種新的思路和方法。本發(fā)明的能夠結(jié)合preSl的短肽，利用樹(shù)駒原代培養(yǎng)肝細(xì)胞體系對(duì)該短肽抑制乙肝病毒感染的活性進(jìn)行了驗(yàn)證。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“缺失”指的是本發(fā)明所述的短肽序列(Leu-Arg-Asn-IIe-Arg)中缺少1-2個(gè)氨基酸，且仍能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“插入”指的是本發(fā)明所述的短肽序列(Leu-Arg-Asn-Ile-Arg)中插入I個(gè)或多個(gè)氨基酸，且仍能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“替代”指的是本發(fā)明所述的短肽序列(Leu-Arg-Asn-Ile-Arg)中1-2個(gè)氨基酸被其它氨基酸取代，且仍能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“重復(fù)拼接”指的是兩個(gè)以上本發(fā)明所述的短肽序列的連接，包括直接連接和通過(guò)間隔序列連接，且仍能抑制乙肝病毒感染的氨基酸序列。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“合成”指的是本發(fā)明所述的短肽可以氨基酸為原料，由多肽合成儀器或人工生成。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”指的是本發(fā)明所述的短肽可以通過(guò)將編碼該短肽氨基酸序列的核苷酸序列置于表達(dá)載體中，進(jìn)而在原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中表達(dá)出該短肽。編碼短肽氨基酸序列的核苷酸片段通常可以用人工合成的方法獲得。一旦獲得了有關(guān)序列，就可以用重組法來(lái)大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其插入克隆載體或表達(dá)載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過(guò)常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到有關(guān)序列。上述的“克隆載體”和“表達(dá)載體”指本領(lǐng)域熟知的原核或真核質(zhì)粒。通常包含一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記基因，以用于選擇轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞的表型，如大腸桿菌使用的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性、真核細(xì)胞使用的新霉素抗性等。在本發(fā)明中，使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法將包含本發(fā)明的編碼短肽氨基酸序列的核苷酸序列插入到載體中。這些方法包括但不限于體外重組DNA技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等(Sambrook, et al. Molecular Cloning,a Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory. New York, 1989)。上述表達(dá)質(zhì)?？捎糜谵D(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)脑思?xì)胞或真核細(xì)胞，以使其能夠轉(zhuǎn)錄出編碼短肽的核苷酸片段。宿主細(xì)胞如大腸桿菌DE3、哺乳動(dòng)物293細(xì)胞等?？刹捎玫霓D(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染方法包括但并不限于磷酸鈣共沉淀法、顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)等。如果需要，可利用短肽物理的、化學(xué)的和其它特性通過(guò)各種方法分離和純化表達(dá)產(chǎn)物。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于分離電泳、層析等。本發(fā)明還涉及短肽在制備治療乙肝病毒感染或乙型肝炎藥物中的用途，包括但不限于將其與藥學(xué)上可接受的物質(zhì)混合包括糖類，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纖維素及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和甲基纖維素；西黃蓍膠粉末；麥芽；明膠；滑石；固體潤(rùn)滑劑，如硬脂酸和硬脂酸鎂；硫酸鈣；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚 乙二醇；海藻酸；乳化劑，如Tween ;潤(rùn)濕劑，如月桂基硫酸鈉；著色劑；調(diào)味劑；壓片劑、穩(wěn)定劑；抗氧化劑；防腐劑；無(wú)熱原水；等滲鹽溶液；磷酸鹽緩沖液等。本發(fā)明提供了一種具有抑制人乙型肝炎病毒感染細(xì)胞功能的短肽，還包括該短肽的氨基酸序列、核苷酸編碼序列、構(gòu)建物和細(xì)胞及其應(yīng)用。所述短肽特異地結(jié)合乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的前表面抗原I區(qū)的殘基13-59，所述短肽能抑制人乙型肝炎病毒感染細(xì)胞。本發(fā)明的短肽針對(duì)較新的靶點(diǎn)，抑制效率高，特異性好，顯示出該短肽在制備治療人乙型肝炎病毒感染或乙型肝炎的藥物和制劑中的良好應(yīng)用前景。


圖I :短肽能夠結(jié)合preSl13_59。A :含有單個(gè)特征序列(Leu-Arg-Asn-Ile-Arg)的短肽STll-I能結(jié)合preSl13_59 ;含有三個(gè)重復(fù)特征序列(Leu-Arg-Asn-His-Arg)的短肽ST27-I與preSl13_59的結(jié)合能力為STll-I的近I. 8倍。其中，ST27-I中三個(gè)特征序列通過(guò)Gly-Ser-Gly序列間隔。圖2 :短肽在樹(shù)駒肝細(xì)胞模型中抑制乙肝病毒表面抗原的表達(dá)。肽的序列見(jiàn)表1， 1*必113_59含耶￥的受體結(jié)合位點(diǎn)，CP為特征序列內(nèi)2/4/5位氨基酸突變?yōu)楸彼岬耐蛔冸?，所用肽的濃度均為O. 05uM。Neg Ctrl和Pos Ctrl分別為HBsAg檢測(cè)試劑盒(科華公司)中自帶的陰性和陽(yáng)性對(duì)照。HBV/DMS0和HBV/wo DMSO分別表示在HBV感染樹(shù)駒肝細(xì)胞體系中加入用于溶解小肽的溶劑二甲基亞砜(DMSO)和不加入DMS0。實(shí)驗(yàn)中所使用的HBV顆粒數(shù)量均為lxlO6。圖3 :短肽在樹(shù)駒肝細(xì)胞模型中能夠抑制乙肝病毒e抗原的表達(dá)。肽的序列見(jiàn)表l，preSl13_59含HBV的受體結(jié)合位點(diǎn)，CP為特征序列內(nèi)2/4/5位氨基酸突變?yōu)楸彼岬耐蛔冸模秒牡臐舛染鶠镺. 05uM。Neg Ctrl為HBeAg檢測(cè)試劑盒(科華公司)中自帶的陰性對(duì)照。HBV/DMS0和HBV/wo DMSO分別表示在HBV感染樹(shù)駒肝細(xì)胞體系中加入用于溶解小肽的溶劑二甲基亞砜(DMSO)和不加入DMS0。實(shí)驗(yàn)中所使用的HBV顆粒數(shù)量均為lxlO6。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。除非另有描述，本發(fā)明的實(shí)施將采用分子生物學(xué)、微生物學(xué)和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些均是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些技術(shù)在下列文獻(xiàn)中有完整的描述例如，Sambrook《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》第2版(1989);《蛋白質(zhì)純化原理和實(shí)踐》第2版(Springer-Verlag，N. Y.)，以及《實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)手冊(cè)》I-IV卷(D. C. Weir和C. C.Blackwell編輯1986)?；蛘?，可按照試劑生產(chǎn)商所提供的說(shuō)明書進(jìn)行。表I、本發(fā)明實(shí)施例所涉及的短肽序列
名稱__序列(H，今Cf )_
STll-ISGSG LRMIR SI (SM ID NO I)
STl5-1LRMIR LRHIR LRMIR (SEQ ID MO 2) ST20-ILRNIR LRMIR LRNIR LRMR (SEQ ID NO 3)
ST27-I__SGSG LRMR GSG LRHIR GSG LRMIR ST (SEQ ID MO 4)
preSl U-B, Ciriyr) -GIlC SVHiPLGFFPDHQLDP AFGANSiJNPDWDFNP NKDfflPE刪3VG (SEQ ID NO 5)
CF (對(duì)雜)SGSG LANAA GSG LANAA GSG LAHAA ST (SEQ ID NO 6)
注這些短肽含有的特征氨基酸序列以下劃線標(biāo)示。表2氨基酸的縮寫符號(hào)
名稱I三字符號(hào)I單
丙氨酸 Ala A_
M氨酸G~g R
天冬氨酸 Asp_D_
半胱 €1~ Cys~C
谷氨酰胺Gln_Q_
谷氨酸 Glu/Gln E_
組氨酸His ~
異亮氨酸TTeI
甘氨酸 Gly_G_
天冬酰胺 Asn_N_
亮氨酸[eu L~
賴氨酸 LysK_
甲硫氨酸Met_M_
苯丙氨酸 Phe_F_
1甫氨酸P
絲氨酸 SerS_
麗酸Thr ~T
色氨酸 Trp_W_
酪氨酸 Tyr_Y_
繳氨酸|val |v
實(shí)施例I :短肽能夠結(jié)合preSl13_59。Biotin偶聯(lián)的短肽結(jié)合在包被Streptavidin的96孔板上，每孔加入50ug Biotin偶聯(lián)的短肽，IOOul PBS中4° C結(jié)合4小時(shí)。輕拍去PBS，PBS潤(rùn)洗一遍。重新加入IOOulPBS,并加入50ug豆蘧?；膒reSl13_59，4° C結(jié)合8 — 12小時(shí)。輕拍去PBS, PBS潤(rùn)洗一遍。加入200ul含O. 1% BSA的PBS，37° C結(jié)合I小時(shí)，PBST洗滌一遍，每次5秒。然后加入IOOul抗preSl單抗(I : 1000，含O. 1% BSA的PBS稀釋)，4° C結(jié)合4小時(shí)，之后PBST洗滌三遍，每次5秒。加入IOOul兔抗鼠二抗(I :1000，含O. 1% BSA的PBS稀釋)，4度結(jié)合2小時(shí)，之后PBST洗滌三遍，每次5秒。最后每孔加入IOOul TMB (預(yù)混合過(guò)氧化氫)，避光顯色45分鐘，每孔加終止液50ul終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀0D450讀數(shù)。如圖I所示，含有特征序列三聯(lián)體的短肽比僅含特征序列單體的短肽有更好的結(jié)合preSl13_59的能力。因此，后續(xù)的抑制乙肝病毒感染的研究采用含特征序列三聯(lián)體或四聯(lián)體的短肽進(jìn)行。實(shí)施例2 :短肽在樹(shù)駒原代肝細(xì)胞模型中能夠抑制乙肝病毒的感染 2. I樹(shù)駒原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)
樹(shù)駒購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。樹(shù)駒原代肝細(xì)胞采用兩步灌注法分離。選取成年樹(shù)駒，體重160-200克。飼養(yǎng)5-7天后，術(shù)前12小時(shí)禁食。麻醉每只肌肉 注射鹽酸氯胺酮5mg/100g體重,加甲苯噻嗪lmg/100g體重。灌注固定樹(shù)關(guān)于支架上,打開(kāi)腹腔，暴露門靜脈，插入導(dǎo)管，開(kāi)始灌注42° C預(yù)熱的Hanks ^IhmM EGTA，1%葡萄糖，50 u/ml 氨芐，100 μ g/ml 鏈霉素，IOOmM L-谷氨酰胺，15mM HEPES, pH7. 4),20 ml/分鐘，灌注5分鐘。接著灌注Hanks液II (Hanks液I加O. 5 mg/ml II型膠原酶)，消化15分
鐘。分離肝細(xì)胞將肝臟轉(zhuǎn)移到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，分散肝細(xì)胞，篩網(wǎng)過(guò)濾，收集濾過(guò)的細(xì)胞，用室溫Williams培養(yǎng)基洗兩遍，離心收集細(xì)胞，細(xì)胞沉淀用Williams培養(yǎng)基重懸。培養(yǎng)細(xì)胞接種到膠原預(yù)包被的6孔板(或48孔板)中，每孔約I X IO6細(xì)胞，37° C，5% 二氧化碳培養(yǎng)，6小時(shí)后換H印ato-SHM培養(yǎng)基，同時(shí)添加DMSO至終濃度2% (Glebe & Urban, Viraland cellular determinants involved in hepadnaviral entry. World J Gastroenterol2007，13(1) : 22-38)，之后每24小時(shí)換液。2.2制備乙肝病毒
收集AD38細(xì)胞(該細(xì)胞能夠持續(xù)產(chǎn)生和分泌乙肝病毒)培養(yǎng)上清，用PEG8000 (配制在25 mM Tris-HCl pH7. 5中，終濃度10%)在4° C下沉淀培養(yǎng)液中的乙肝病毒顆粒，在16，000g下離心30分鐘收集病毒顆粒，將病毒顆粒重懸在含有10 mM MgCl2的50 mM Tris-HClpH7. 5中。實(shí)時(shí)定量PCR定量。2. 3酶聯(lián)免疫法測(cè)定乙肝病毒抗原的表達(dá)
樹(shù)駒肝細(xì)胞培養(yǎng)8小時(shí)后，在培養(yǎng)基中加入40 mg/ml PEG，同時(shí)每孔加入I x IO6乙肝病毒，在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞每孔中分別加入終濃度為0. 05μΜ的短肽(ST15-I、ST20-I或ST-27-I)，陽(yáng)性對(duì)照組只加乙肝病毒和/或溶劑DMS0，陰性對(duì)照組不加乙肝病毒，對(duì)照肽組加入0.05μΜ的CP對(duì)照肽。37° C，5% 二氧化碳培養(yǎng)。每24小時(shí)換液一次，收集每次換液上清用于ELISA檢測(cè)乙肝病毒e抗原和表面抗原，共收集7天。乙肝病毒e抗原與表面抗原檢測(cè)使用科華乙型肝炎e抗原診斷試劑盒及乙型肝炎表面抗原診斷試劑盒。測(cè)定方法遵照廠商的說(shuō)明書進(jìn)行，操作如下酶標(biāo)版設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，每孔加入陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照各50 μ 1，并設(shè)空白對(duì)照I孔，實(shí)驗(yàn)組每孔加入待測(cè)標(biāo)本50μ1。每孔加入酶結(jié)合物50μ I (空白對(duì)照除外)，充分混勻，封板，置37° C孵育30分鐘。棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。每孔加顯色劑A液、B液各50 μ I，充分混勻，封板，置37° C孵育15分鐘。每孔加入終止液50 μ I，混勻。用酶標(biāo)儀讀數(shù)(波長(zhǎng)450nm)。結(jié)果(圖2、圖3)顯示，含有特征序列的短肽ST15-I、ST20-I或ST_27_I均能有效降低乙肝病毒e抗原和表面抗原的表達(dá)，顯示其具有較強(qiáng)的抑制乙肝病毒感染樹(shù)駒肝細(xì)胞的能力。
綜合上述，本發(fā)明的短肽可以結(jié)合乙肝病毒preSl13_59，并有效抑制乙肝病毒感染肝細(xì)胞，顯示該短肽成為治療乙肝病毒感染或乙型肝炎的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種合成或表達(dá)的短肽，其特征在于，所述短肽包含以下氨基酸序列中的任意一種 N-亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-異亮氨酸-精氨酸-C ； I)中所示氨基酸序列中有1-2個(gè)氨基酸缺失且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列； I)中所示氨基酸序列中有1-2個(gè)氨基酸被替代且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列； I)中所示氨基酸序列中有I個(gè)或多個(gè)氨基酸插入且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列； I) 一 4)中所示氨基酸序列重復(fù)拼接且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列。
2.如權(quán)利要求I所述的短肽，其特征在于，所述的短肽的氨基酸序列是I)所示氨基酸序列，或者I)所示氨基酸序列的重復(fù)拼接。
3.如權(quán)利要求I或者2所述的短肽，其特征在于，所述的重復(fù)拼接采用氨基酸GSG銜接權(quán)利要求I中I)的氨基酸序列。
4.如權(quán)利要求I所述的短肽，其特征在于，所述的短肽的氨基酸序列如SEQID NO I、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3 或者 SEQ ID NO 4 所示。
5.含有權(quán)利要求I所述的短肽的構(gòu)建物或者細(xì)胞。
6.編碼權(quán)利要求I所述的短肽的核酸序列。
7.含有權(quán)利要求6所述的核酸序列的構(gòu)建物或者細(xì)胞。
8.—種權(quán)利要求I所述的短肽的制備方法，其特征在于，該短肽是按照其氨基酸序列人工合成的。
9.權(quán)利要求I所述的短肽在制備治療人乙型肝炎病毒感染或乙型肝炎的藥物中的用途。
10.一種用于治療人乙型肝炎病毒或乙型肝炎的藥物，其特征在于，所述的藥物包含權(quán)利要求I所述的短肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種能抑制人乙型肝炎病毒感染細(xì)胞的短肽，該短肽包含以下氨基酸序列中的任意一種1)N-亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-異亮氨酸-精氨酸-C；2)1)中所示氨基酸序列中有1-2個(gè)氨基酸缺失且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列；3)1)中所示氨基酸序列中有1-2個(gè)氨基酸被替代且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列；4)1)中所示氨基酸序列中有1個(gè)或多個(gè)氨基酸插入且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列；5)1)－4)中所示氨基酸序列重復(fù)拼接且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列。本發(fā)明還提供了包括該短肽的氨基酸序列或者核酸編碼序列的構(gòu)建物和細(xì)胞及其應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12N15/63GK102775470SQ20111012251
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2011年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月12日
發(fā)明者何永剛, 劉晶, 周佳海, 汪垣, 董琦蕾, 謝幼華, 鄧強(qiáng) 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)