專利名稱：低聚果糖的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于利用發(fā)酵法合成低聚果糖領(lǐng)域，具體涉及法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵合成的低聚果糖的分離純化方法。
背景技術(shù)：
低聚果糖是在蔗糖分子的果糖殘基上通過β-(1, -糖苷鍵與一個(gè)或多個(gè)果糖基相連形成的。低聚果糖易溶于水，甜度是蔗糖的30%-60%，其保濕性高于蔗糖，與山梨醇相當(dāng)，粘度比相同濃度的蔗糖高，在PH 4. 0-7. 0之間具有很強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。隨著人們的健康意識(shí)越來越強(qiáng)，功能性食品的市場需求越來越大，2005年，美國的功能性食品的市場價(jià)值在735億美元左右，預(yù)計(jì)在2013年期需求量將達(dá)到905億美元。低聚果糖作為一種功能性食品已獲得FDA的認(rèn)可，目前低聚果糖在美國的市場價(jià)值在$200/ kg左右。低聚果糖在食品、飼料、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)的大規(guī)模開發(fā)應(yīng)用，推動(dòng)了低聚果糖的工業(yè)化生產(chǎn)。上世紀(jì)80年代日本對(duì)低聚果糖的代謝、組成、應(yīng)用和工業(yè)化生產(chǎn)做了多方面的研究。1984年，日本明治制果株式會(huì)社用固定化增殖細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了低聚果糖的工業(yè)化生產(chǎn)。目前，工業(yè)化生產(chǎn)低聚果糖的主要問題是產(chǎn)率低，從而導(dǎo)致低聚果糖的生產(chǎn)成本過高。因此有很多研究人員在合成低聚果糖菌種選育上做了大量的研究。工業(yè)上用果糖基轉(zhuǎn)移酶生成低聚果糖的主要問題是蔗糖酶解過程中果糖基轉(zhuǎn)移酶的成本過高。酶固定化技術(shù)能夠使果糖基轉(zhuǎn)移酶重復(fù)利用，從而降低果糖基轉(zhuǎn)移酶的使用成本。固定化酶所用的載體對(duì)酶活乃至低聚果糖的產(chǎn)量至關(guān)重要，主要載體有多孔硅石、苯乙烯衍生的多孔離子交換劑、甲基丙烯酰胺、海藻酸鈣等。隨著固定化技術(shù)的發(fā)展，人們開始用研究固定化細(xì)胞和菌體合成低聚果糖，這樣省去了酶固定化過程中酶的分離提純成本。由于蔗糖轉(zhuǎn)化生成低聚果糖的副產(chǎn)物葡萄糖會(huì)抑制蔗糖的進(jìn)一步轉(zhuǎn)化，而葡萄糖異構(gòu)酶能夠?qū)⑵咸烟寝D(zhuǎn)化成果糖?？赏ㄟ^細(xì)胞重組，發(fā)酵條件優(yōu)化等方式來提高低聚果糖產(chǎn)量。低聚果糖的合成一般是以蔗糖等為原料，利用果糖基轉(zhuǎn)移酶催化合成的，微生物在合成低聚果糖過程中由于細(xì)胞代謝以及酶的非專一性等原因，低聚果糖合成過程中常常含有其它副產(chǎn)物如葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖等單糖或二糖，此外，還含有較大量的灰分等。因此，在制備低聚果糖時(shí)，需要將低聚果糖與這些成分分離。

發(fā)明內(nèi)容
低聚果糖酶法合成過程中常常含有其它副產(chǎn)物如葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖等單糖或二糖，此外，還含有較大量的灰分等，因此，在制備低聚果糖時(shí)，需要將低聚果糖與這些成分分離。有鑒于此，本發(fā)明提供了一種低聚果糖的分離純化方法，能夠?qū)崿F(xiàn)在同一批次的發(fā)酵過程中同時(shí)分離純化蝦青素和低聚果糖，獲得的低聚果糖含量高。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
3低聚果糖的分離純化方法，其分離純化步驟包括蔗糖經(jīng)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵制得含有低聚果糖和蝦青素的發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)過離心機(jī)離心分離，提取出下層蝦青素，將上層清液經(jīng)沸水浴加熱滅酶活后再經(jīng)微濾膜提純，得到的濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱吸附，再用乙醇溶液洗脫吸附介質(zhì)，將洗脫液蒸發(fā)濃縮后得到低聚果糖。上述微濾膜提純是將上層清液在真空抽濾條件下依次通過0. 8 μ m、0. 45 μ m和 0.22 μ m的微濾膜過濾。上述吸附介質(zhì)為離子交換樹脂、活性炭、硅藻土、或活性炭與硅藻土的混合物。吸附介質(zhì)優(yōu)選為活性炭。上述層析柱的柱溫是35°C，所述濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱的流速為0.5 ml/min-1. 5 ml/min。濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱的流速優(yōu)選為0. 5 ml/min。本發(fā)明中，法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵合成的低聚果糖與其他物質(zhì)共存于發(fā)酵液中，需要對(duì)其進(jìn)行分離提純后(尤其是去除重金屬及其他鹽類)才能利用。本發(fā)明將加熱滅酶活后的法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵液經(jīng)微濾膜提純。微濾膜過濾分離是根據(jù)濾膜孔徑的大小，大于膜孔徑的分子被截留，而小于膜孔徑的分子透過的原理進(jìn)行分離的，具有高效、低能耗、設(shè)備簡單、操作方便等優(yōu)點(diǎn)。但膜分離不能將分子量相似的不同物質(zhì)分離開來，所以還需要后續(xù)進(jìn)一步提純。低聚果糖進(jìn)一步分離純化的方法很多，但常用的主要是利用離子交換樹脂、活性炭、硅藻土等為吸附劑通過柱層析對(duì)其進(jìn)行分離純化。低聚果糖濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱吸附。根據(jù)待分離樣品中不同組分與層析柱填料間的結(jié)合能力的差異，使混合物中難結(jié)合組分與易結(jié)合組分分離開來。應(yīng)用最有效的是活性炭吸附法和離子交換樹脂法，用層析柱分離低聚果糖的主要優(yōu)點(diǎn)是可以數(shù)百次連續(xù)循環(huán)操作、多次重復(fù)使用吸附劑?；钚蕴糠蛛x低聚果糖是根據(jù)不同聚合度的低聚果糖之間極性的差異進(jìn)行分離的。 用活性炭分離低聚果糖的特點(diǎn)是吸附容量大，適用范圍廣，可用于不同聚合度的糖之間的分離；待分離樣品中的無機(jī)鹽對(duì)分離沒有影響，此外活性炭吸附劑價(jià)格便宜，分離設(shè)備投入成本低，適合工業(yè)化應(yīng)用。離子交換吸附是利用待分離組分中各種糖分在樹脂上的吸附能力的不同進(jìn)行分離的，離子交換樹脂已成功的應(yīng)用于糖類的分離純化。本發(fā)明提供了一種低聚果糖的分離純化方法，能夠?qū)崿F(xiàn)在同一批次的發(fā)酵過程中同時(shí)分離純化蝦青素和低聚果糖。獲得的低聚果糖產(chǎn)品含量高，經(jīng)檢測(cè)純化產(chǎn)品中各種重金屬含量都未超過國家規(guī)定的食品標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)上限，此外，純化產(chǎn)品中總糖含量達(dá)到97. 65%， 灰分含量只有0. 78%。該結(jié)果說明，法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵蔗糖的發(fā)酵液可通過本發(fā)明中廉價(jià)、簡單的分離操作而純化得到符合食品衛(wèi)生要求的低聚果糖。


下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但附圖和具體實(shí)施方式
不應(yīng)理解為是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的限定。圖1是本發(fā)明實(shí)施例4中吸附介質(zhì)中活性炭的含量對(duì)低聚果糖吸附量的影響效果圖。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例5中不同溫度下低聚果糖靜態(tài)吸附效果圖。圖3是本發(fā)明實(shí)施例6中柱層析流速對(duì)低聚果糖吸附的影響圖。
具體實(shí)施例方式法夫酵母JMU-MVP14聯(lián)產(chǎn)發(fā)酵蝦青素和低聚果糖
將活化的法夫酵母JMU-MVP14取1 ml接種到搖瓶培養(yǎng)基中，22°C，190 r/min培養(yǎng)72 h制得種子液；按6%的接種量將種子液轉(zhuǎn)接到裝有5 L發(fā)酵培養(yǎng)基的7 L發(fā)酵罐中，控制溫度22°C、通氣量3 L/min,通過調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速控制溶氧在30-40% ；用25%氨水自動(dòng)流加控制PH 6.0;每隔8 h取一次樣測(cè)其蝦青素含量，待蝦青素合成達(dá)到穩(wěn)定后，加入蔗糖溶液， 維持PH不變繼續(xù)發(fā)酵2 h取樣。在7 L罐中法夫酵母JMU-MVP14合成含有蝦青素和低聚果糖的發(fā)酵液。發(fā)酵液的預(yù)處理
法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵液在3500 r/min下離心10 min得到上層清液和下層沉淀， 下層沉淀即為提取的蝦青素。再將上層清液經(jīng)沸水浴加熱15 min滅酶活，在真空抽濾條件下依次通過0.8 μπι、0.45 μ m和0.22 μ m的微濾膜，得到含有低聚果糖的過濾液。吸附介質(zhì)的前處理
(1)SP-sepharose> Q-sepharose 預(yù)處
兩種樹脂都依次用0.5 mol/L的NaOH、超純水、0.5 mol/L的NaCl及超純水循環(huán)洗滌3 遍；此后，SP-kpharose用稀0. 1 mol/L的HCl洗滌，再用超純水洗滌至中性，Q_s印harose 用0. 1 mol/L的NaOH洗滌，再用超純水洗滌至中性；
(2)活性炭及硅藻土預(yù)處理
用20%鹽酸煮沸30 min，待其冷卻后，真空抽濾去除鹽酸，然后用蒸餾水真空抽濾洗滌至PH中性。硅藻土直接用蒸餾水真空抽濾洗滌。吸附介質(zhì)的選擇
(1)SP-Sepharose柱層析與Q-kpharose柱層析分離低聚果糖試驗(yàn)
將預(yù)處理過的SP-S印harose樹脂裝入層析柱，裝柱體積40 ml，待樹脂沉降后，保持柱溫25°C，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將預(yù)處理過的發(fā)酵液以1 ml/min流速上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)， 收集含有低聚果糖的收集液，上樣于用超純水平衡5個(gè)柱體積的Q-kpharose柱層析中，用超純水流洗，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖含量，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量；
(2)硅藻土與活性炭柱層析分離低聚果糖試驗(yàn)
稱取等量的預(yù)處理過的硅藻土和活性炭混合后，裝入層析柱，裝柱體積為40 ml，待其沉降后，保持柱溫25°C，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將預(yù)處理過的發(fā)酵液以1 ml/min流速上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，待電導(dǎo)及A280吸收值均達(dá)到穩(wěn)定后，分別用50 ml的5%、10%、15%和20%乙醇分步洗脫，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖含量，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量。活性炭與硅藻土比例的選擇(1)活性炭與硅藻土比例的靜態(tài)吸附試驗(yàn)
將預(yù)處理過的活性炭與硅藻土分別按照0%、25%、50%、75%、100%比例混合成五組總質(zhì)量為5 g的吸附劑，分別將它們置于250 ml的錐形瓶中，每組加入50 ml發(fā)酵液，25°C，振蕩吸附2 h ；用大約6 L超純水真空抽濾洗滌，去掉無機(jī)鹽、單糖、二糖；然后用300 ml的20% 乙醇洗脫低聚果糖，使其釋放出來，并用超純水洗滌；收集含有低聚果糖的洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60°C抽真空濃縮至50 ml, HPLC測(cè)定低聚果糖的含量；
(2)柱層析驗(yàn)證試驗(yàn)
稱取10 g活性炭預(yù)處理后裝柱，待其沉降后，保持柱溫25°C，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將預(yù)處理過的發(fā)酵液以1 ml/min流速上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，待電導(dǎo)及A280吸收值均達(dá)到穩(wěn)定后，分別用250 ml的5%、10%、15%和20%乙醇分步洗脫，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖變化情況，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量，比較100%活性炭柱層析與50%活性炭柱層析吸附效果。吸附溫度的選擇試驗(yàn)
(1)不同溫度下的靜態(tài)吸附與分離試驗(yàn)
稱取5 g預(yù)處理的活性炭置于250 ml的錐形瓶中，共五組，每組加入50 ml發(fā)酵液，分別置于251、351、451、551和651下振蕩吸附2 h ；用大約6 L純水真空抽濾洗滌，去掉無機(jī)鹽以及單糖，二糖；然后用300 ml的20%乙醇洗脫低聚果糖，收集含有低聚果糖的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60°C抽真空濃縮至50 ml, HPLC測(cè)定低聚果糖的含量；
(2)柱層析分離驗(yàn)證試驗(yàn)
稱取10 g活性炭預(yù)處理后裝柱，待其沉降后，保持柱溫35°C，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將預(yù)處理過的發(fā)酵液以1 ml/min流速上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，待電導(dǎo)及A280吸收值均達(dá)到穩(wěn)定后，分別用250 ml的5%、10%和15%乙醇分步洗脫，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖變化情況，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量，比較柱溫35°C與柱溫25°C的柱層析吸附效果。吸附流速選擇試驗(yàn)
稱取10 g活性炭預(yù)處理后裝柱，待其沉降后，保持柱溫35°c，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將預(yù)處理過的發(fā)酵液上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，待電導(dǎo)吸收值均達(dá)到穩(wěn)定后，分別用250 ml的5%、10%和15%乙醇分步洗脫，分別以0. 5ml/min、 l.Oml/min和1.5 ml/min流速進(jìn)行柱層析，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖變化情況，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量， 比較流速分別為0.5 ml/minU.O ml/minU. 5 ml/min時(shí)柱層析吸附效果。分析測(cè)定方法 (1)蛋白質(zhì)含量測(cè)定
取5支干凈的試管，加樣混勻后，放置2 min，用可見分光光度計(jì)在595 nm波長處測(cè)其吸光度，根據(jù)吸光值和蛋白質(zhì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取待測(cè)樣品0.5 ml，加入0.5 ml的蒸餾水和5 ml的考馬斯亮藍(lán)G-250溶液，放置2 min后在595 nm波長處測(cè)其吸光度，根據(jù)吸光值及已繪制的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品蛋白質(zhì)含量；(2)重金屬含量檢測(cè)
將消解罐用硝酸浸泡M h,并用純水洗滌2次，超純水洗滌5次，取2 ml分離純化回收產(chǎn)品，加入到消解罐中，用移液管吸取5 ml硝酸到消解罐中，與回收產(chǎn)品混合，在通風(fēng)柜中110°C電熱板消解30 min，待其冷卻后用超純水定容到20 ml，電感耦合離子質(zhì)譜測(cè)其重金屬含量；
(3)總糖檢測(cè)
取0.01 g待測(cè)樣品用超純水定容到25 ml后，取9支干凈的試管，加樣混勻后，將試管移至沸水中加熱10 min，冷水冷卻后，用分光光度法在620 nm波長處測(cè)其吸光值，根據(jù)吸光值和蛋白質(zhì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取待測(cè)樣品0.1 ml，加入1.9 ml蒸餾水和8 ml蒽酮-硫酸混合后置于沸水中加熱10 min，冷水冷卻后，620 nm波長處測(cè)其吸光度，根據(jù)總糖標(biāo)準(zhǔn)曲線及吸光值計(jì)算待測(cè)樣品的糖濃度；
(4)灰分檢測(cè)
取洗凈的坩堝烘干至恒重，稱其重量(Wl )，向坩堝中加入1 g左右的純化樣品烘干至恒重并稱重(W2)，將坩堝置于電爐上加熱碳化至無煙霧產(chǎn)生，將碳化后的樣品置于馬弗爐內(nèi)，550 °C加熱5 h，待其冷卻后稱其重量(W3)，根據(jù)公式
fW3 - W^fQN2 - W1)計(jì)算其灰分含量。 實(shí)施例1 低聚果糖發(fā)酵液的制備
選育得到高產(chǎn)蝦青素的法夫酵母JMU-MVP14菌株，該菌株發(fā)酵蝦青素的體積產(chǎn)率達(dá)到 150 mg/L，蝦青素的細(xì)胞產(chǎn)率達(dá)到6 mg/g。蔗糖經(jīng)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵制得的低聚果糖發(fā)酵液，具體制備方法如下
將活化的法夫酵母JMU-MVP14取1 ml接種到搖瓶培養(yǎng)基中，22°C，190 r/min培養(yǎng)72 h制得種子液；按6%的接種量將種子液轉(zhuǎn)接到裝有5 L發(fā)酵培養(yǎng)基的7 L發(fā)酵罐中，控制溫度22°C、通氣量3 L/min,通過調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速控制溶氧在30-40% ；用25%氨水自動(dòng)流加控制PH 6.0;每隔8 h取一次樣測(cè)其蝦青素含量，待蝦青素合成達(dá)到穩(wěn)定后，加入蔗糖溶液， 維持PH不變繼續(xù)發(fā)酵2 h取樣。在7 L罐中法夫酵母JMU-MVP14合成含有蝦青素和低聚果糖的發(fā)酵液。法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵液在3500 r/min下離心10 min得到上層清液和下層沉淀，下層沉淀即為提取的蝦青素。再將上層清液經(jīng)沸水浴加熱15 min滅酶活，在真空抽濾條件下依次通過0.8 μπι、0.45 μ m和0.22 μ m的微濾膜，得到含有低聚果糖的過濾液。本實(shí)施例中，利用法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵蔗糖，實(shí)現(xiàn)在同一批次的發(fā)酵過程中同時(shí)獲得低聚果糖和蝦青素，從而進(jìn)一步提高了該法夫酵母的產(chǎn)業(yè)化價(jià)值。實(shí)施例2
按照實(shí)施例1中的方法制得含有低聚果糖的過濾液。離子交換樹脂作為吸附介質(zhì)分離低聚果糖。將預(yù)處理過的離子交換樹脂(SP-kpharose樹脂)裝入層析柱，裝柱體積為40 ml, 待樹脂沉降后，保持柱溫25°C，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將按照實(shí)施例1中的方法制得含有低聚果糖的過濾液以1 ml/min流速上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，用HPLC檢測(cè)，收集含有低聚果糖的收集液，上樣于用超純水平衡5個(gè)柱體積的Q-kpharose柱層析中，用超純水流洗，流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖含量，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量。測(cè)定結(jié)果如表1所示。
實(shí)施例3
按照實(shí)施例1中的方法制得含有低聚果糖的過濾液。
稱取等質(zhì)量的預(yù)處理過的硅藻土和活性炭混合后，裝入層析柱，裝柱體積為40 ml，待其沉降后，保持柱溫25°C，用超純水平衡5個(gè)柱體積后，將按照實(shí)施例1中的方法制得含有低聚果糖的過濾液以1 ml/min流速上樣于層析柱上，上樣體積為40 ml，然后用超純水流洗，待電導(dǎo)值達(dá)到穩(wěn)定后，分別用50 ml的體積分?jǐn)?shù)為5%、10%、15%和20%乙醇分步洗脫， 流速為1 ml/min，每5 ml收集一管，HPLC檢測(cè)每管低聚果糖含量，收集含有低聚果糖的收集液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至上樣前的體積，測(cè)其低聚糖的含量、電導(dǎo)和蛋白質(zhì)含量。測(cè)定結(jié)果如表1所示。
權(quán)利要求
1.低聚果糖的分離純化方法，其特征在于分離純化步驟包括蔗糖經(jīng)法夫酵母 JMU-MVP14發(fā)酵制得含有低聚果糖和蝦青素的發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)過離心機(jī)離心分離，提取出下層蝦青素，將上層清液經(jīng)沸水浴加熱滅酶活后再經(jīng)微濾膜提純，得到的濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱吸附，再用乙醇溶液洗脫吸附介質(zhì)，將洗脫液蒸發(fā)濃縮后得到低聚果糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低聚果糖的分離純化方法，其特征在于所述微濾膜提純是將上層清液在真空抽濾條件下依次通過0. 8 ym.O. 45 μ m和0.22 μ m的微濾膜過濾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低聚果糖的分離純化方法，其特征在于所述吸附介質(zhì)為離子交換樹脂、活性炭、硅藻土、或活性炭與硅藻土的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的低聚果糖的分離純化方法，其特征在于所述吸附介質(zhì)為活性炭。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低聚果糖的分離純化方法，其特征在于所述層析柱吸附的柱溫是35°C，所述濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱的流速為0. 5 ml/min-1. 5 ml/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚果糖的分離純化方法，其特征在于所述濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱的流速為0. 5 ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種低聚果糖的分離純化方法，其分離純化步驟包括蔗糖經(jīng)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵制得含有低聚果糖和蝦青素的發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)過離心機(jī)離心分離，提取出下層蝦青素，將上層清液經(jīng)沸水浴加熱滅酶活后再經(jīng)微濾膜提純，得到的濾液流經(jīng)填充吸附介質(zhì)的層析柱吸附，再用乙醇溶液洗脫吸附介質(zhì)，將洗脫液蒸發(fā)濃縮后得到低聚果糖。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)在同一批次的發(fā)酵過程中同時(shí)分離純化蝦青素和低聚果糖，分離操作廉價(jià)、簡單，獲得的低聚果糖產(chǎn)品具有含量高，符合食品衛(wèi)生要求的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12P23/00GK102433370SQ20111029733
公開日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月28日
發(fā)明者倪輝, 李利君, 杜希萍, 楊遠(yuǎn)帆, 肖安風(fēng), 蔡慧農(nóng), 黃高凌 申請(qǐng)人:集美大學(xué)