專利名稱：用于檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物檢測領域，涉及一種用于快速檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒。
背景技術：
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, HP)是通過口腔進入消化道的常見病原菌之一，其感染是慢性B型胃炎的主要病因，與非潰瘍型消化不良、胃和十二指腸潰瘍及胃癌關系密切。流行病學研究表明，國人無癥狀或健康人群中HP感染率為39. 9-49. 6%。對于慢性胃炎、消化性潰瘍的診斷、治療及預防而言，幽門螺桿菌的檢測已成為臨床需要。傳統(tǒng)的幽門螺桿菌檢測方法主要包括1)直接從胃粘膜檢測HP，包括細菌培養(yǎng)、組織涂片和切片染色；2)素酶試驗或14C呼吸實驗診斷HP感染；3)免疫學方法，如ELISA等，近年來又有血清學檢測及PCR等方法。目前診斷HP感染的標準涉及胃粘膜病理組織檢查和細菌培養(yǎng)，但是這些方法都耗時耗力，花費較高，不利于臨床應用，更不適用于大批量檢測，給HP的檢測帶來不便。幽門螺桿菌的生物特性之一是富含脲素酶，這也是其致病因素之一，因此快速脲素酶診斷方法具有很高的敏感性和特異性，已廣泛應用于臨床，但是需要通過取新鮮活檢胃粘膜來進行檢測。因次，如何快速、準確、經濟的測定HP感染是臨床面臨的課題之一。

發(fā)明內容
因此，本發(fā)明的目的是提供一種能夠快速檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術解決方案如下一種檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒，所述試劑盒包括盒體和盒蓋,所述盒體內設置至少四個獨立的隔室或凹槽，第一隔室或凹槽用于放置尿素，第二隔室或凹槽用于放置取樣簽，第三隔室或凹槽用于放置苯酚紅，第四隔室或凹槽用于放置檢測試管。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括比色紙，所述比色紙獨立的放置于所述第二或者第四隔室或凹槽內，或者固定于盒蓋上，或者固定于所述第四隔室或凹槽內放置的各個檢測試管上。優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內放置的檢測試管為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內的檢測試管；更優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內放置的檢測試管為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內獨立包裝的檢測試管。進一步優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內順序設置多個卡槽，卡槽內固定多個獨立包裝的檢測試管；或者所述第四隔室或凹槽內放置的獨立包裝的檢測試管順序粘結于該隔室或凹槽內。優(yōu)選地，所述尿素為多個獨立包裝的單位使用劑量的尿素。更優(yōu)選地，第一隔室或凹槽被分割成多個間隔的單位隔室或凹槽，每個單位隔室或凹槽用于放置單位使用劑量的尿素。優(yōu)選地，所述苯酚紅為多個獨立包裝的單位使用劑量的苯酚紅。更優(yōu)選地，第一隔室或凹槽被分割成多個間隔的單位隔室或凹槽，每個單位隔室或凹槽用于放置單位使用劑量的苯酹紅。優(yōu)選地，所述第二隔室或凹槽內放置的取樣簽為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內的取樣簽；更優(yōu)選地，所述第二隔室或凹槽內放置的取樣簽為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內獨立包裝的取樣簽。進一步優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內放置的獨立包裝的取樣簽順序粘結于該隔室或凹槽內。優(yōu)選地，所述第一、第二、第三、或者第四隔室或凹槽在盒體內按順序依次設置，或者，所述盒體包括兩層，第一、第二、第三隔室或凹槽位于盒體一層且按順序依次設置，第四隔室或凹槽位于盒體另一層。上述試劑盒的使用方法包括以下步驟1)在檢測試管中配制檢測試劑；2)用標本簽取新鮮活檢舌苔樣本，置于檢測試管內，孵育1-10分鐘；3)觀察檢測試劑顏色變化。其中，所述步驟I)中檢測試劑的配制方法如下取單位使用劑量的苯酚紅配制成O. 07-0.1 %苯酚紅溶液，將2. 5-3. Og尿素加入至苯酚紅溶液中，加超純水定容至50ml。優(yōu)選地，所述步驟I)中檢測試劑的配制方法如下取單位使用劑量的苯酚紅配制成O. 09%苯酚紅溶液，將2. 75g尿素加入至苯酚紅溶液中，加超純水定容至50ml。此外，本發(fā)明還提供了上述試劑盒在檢測幽門螺桿菌感染中的應用?？梢?，本發(fā)明提供的快速定性檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒包括盒體，設在盒體內的幽門螺桿菌檢測試劑、幽門螺桿菌檢測指示劑、檢測試管、比色紙、取樣簽。優(yōu)選地，試劑盒中包括一包尿素，一瓶苯酚紅，以可拆卸方式固定的獨立包裝的檢測試管及比色紙的多聯(lián)檢測試管，一包取樣簽。使用時隨時可取下一個獨立包裝的檢測試管進行檢測，方便、快速、準確的檢測。上述的試劑盒， 其中脲酶最低檢出溶度為O. 3-0. 7mg/ml,優(yōu)選為O. 5mg/ml。用1%脲素酶系列稀釋后，脲素酶最低含量為O. 3-0. 7mg/ml,尤其為O. 5mg/ml時，反應液顏色剛好由黃色轉變?yōu)榧t色，脲素酶含量越高，顏色變化越快且深。在上述的快速定性檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒中，由于檢測試劑中含有尿素，遇到能產生脲素酶的幽門螺桿菌，從而使指示劑苯酚紅顏色變?yōu)闇\紅色至紫紅色。因此，利用該試劑盒，僅根據(jù)溶液的顏色變化，就可以輕松的對HP感染進行定性檢測。將本發(fā)明的尿素酶檢測與膠體金免疫滲濾法檢測結果比較，對322例標本同時行尿素酶試驗和膠體金免疫滲濾法檢查HP，結果顯示，尿素酶試驗HP陽性率63. 4%(204/322);膠體金免疫滲濾法HP陽性率64. 9 % (209/322) ; 二者符合率為88. 5 %(285/322)。將本發(fā)明的尿素酶檢測與PCR法檢測結果進行比較，I)癌灶組織PCR法檢查的Hp陽性率為63. 0% (29/46);尿素酶試驗檢測HP的陽性率為58. 7% (27/46)，以PCR法為標準，尿素酶試驗的敏感性93. 1% (26/29)，特異性94. 1% (16/17)，二者符合率91. 3%(42/46)。2)癌旁組織PCR法檢測HP的陽性率為73. 9% (34/46)，尿素酶試驗Hp陽性率% 71. 7% (33/46)，以PCR為標準，尿素酶試驗的敏感性為94. 1% (32/34)，特異性91. 7%(11/12)，二者符合率為93. 5% (43/46)。雖然快速尿素酶和PCR法檢測幽門螺桿菌都具有高敏感性及高特異性，但是PCR假陽性的主要原因是底物的污染；假陰性可能由于HP在胃內不規(guī)則分布有關，也可能與所采用PCR體系檢測靈敏度有關。PCR敏感性為97. 5%，特異性為87. 5%。而尿素酶的敏感性為86% 98%，特異性為95% 100%。雖然兩種方法對胃HP的檢出率差異無顯著性，但由于PCR方法技術條件要求高，操作繁雜，價格昂貴，又不能快速得出結果，因而臨床應用受到一定限制；而快速尿素酶試驗具有簡單、快速、經濟等優(yōu)點，因而值得推廣應用，特別是在基層醫(yī)院?？傊?，本發(fā)明提供的試劑盒具有以下優(yōu)點和效果I)試劑盒根據(jù)內置的各種檢測工具而設置為獨立的隔室或凹槽，各檢測工具均為獨立包裝，有效地防止檢測工具之間的相互污染，試劑盒穩(wěn)定，可長時間保存，保質期為12個月。2)制備試劑盒的各種原料來源豐富，價格低廉，成本低，經濟實用；3)各種檢測工具，例如檢測試劑及檢測指示劑均為單位使用劑量的獨立包裝，取用方便，檢測步驟簡單，只需I人即可完成整個操作過程；4)檢測在人體外進行，取樣為人口腔舌苔樣本，樣本采集方便，隨時隨地都可以取樣，適合用大眾使用，避免人體與化學試劑的接觸，安全可靠；5)檢測速度快，一次檢測時間僅為1-10分鐘，減少了人力資源的浪費。6)定性準確，實驗證明，準確率為96. 4%。



圖1是采用本發(fā)明試劑盒檢測的結果，其中A為陰性檢測結果，B為陽性檢測結
果O
具體實施例方式下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1如圖1所示，試劑盒內按順序依次排列有第一隔室或凹槽(內置有50個獨立包裝，每個獨立包裝內含2. 75g尿素)，第二隔室或凹槽(內置有50個獨立包裝,每個獨立包裝內含2個取樣簽)，第三隔室或凹槽(內置有50個獨立包裝，每個獨立包裝內含5ml苯酚紅，第四隔室或凹槽(內置有50個獨立包裝，每個獨立包裝內含2個檢測試管)。另外，試劑盒還包括直接印刷于盒體蓋上的比色紙。實施例2試劑盒內分為兩層，試劑盒第一層按順序依次排列有第一隔室或凹槽(內置有100個獨立包裝,每個獨立包裝內含3. Og尿素)，第二隔室或凹槽(內置有100個獨立包裝，每個獨立包裝內含2個取樣簽)，第三隔室或凹槽(內置有100個獨立包裝，每個獨立包裝內含5ml苯酚紅。第一隔室或凹槽(內置有100個獨立包裝，每個獨立包裝內含2個檢測試管)。試劑盒第二層為第四隔室或凹槽(內置有100個獨立包裝，每個獨立包裝內含2個檢測試管)。另外，試劑盒還包括直接印刷于所述各個檢測試管上的比色紙。實施例3本實施例提供了本發(fā)明的試劑盒檢測幽門螺桿菌感染的方法，具體操作如下I)從試劑盒第一隔室或凹槽內，取一份獨立包裝的尿素(2. 75g)；2)從試劑盒第三隔室或凹槽內，取一份獨立包裝的O. 09%苯酚紅(5ml)，其中O. 09%苯酚紅溶液的配制方法如下a)按O. 9g/L的比例稱取若干苯酚紅，小心倒入研缽中；b)按2ml/L的比例，往研缽中加入Imol/LNaOH溶液，再往里加入30 50ml蒸餾水，研磨15 20min ；c)把研磨均勻的苯酹紅倒入燒杯中,加入蒸懼水定容到所需量,玻棒攪拌混勻，放置約IOmin。3)從試劑盒第四隔室或凹槽內取出檢測試管，在檢測試管內加入5ml苯酚紅溶液，再加入2. 75g尿素,最后加入超純水定容至50ml,配制成檢測試劑；4)從試劑盒第二隔室或凹槽內取出標本簽，用標本簽取新鮮活檢舌苔樣本，置于檢測試管內；5)室溫5分鐘后，觀察結果。對兩份活檢舌苔樣本進行檢測前后的檢測試劑顏色變化結果，陰性結果(無脲酶)，檢測試劑(黃色)——保持黃色；陽性結果(有脲酶)，檢測試劑(黃色)——變?yōu)闇\紅色至紫紅色。實施例4本實施例提供 了對本發(fā)明的試劑盒進行分析靈敏度評估。I)實驗要求實驗人員應熟悉檢測方法與儀器操作；采用合適的質控品并保持儀器處于正常狀態(tài)；用于實驗的試劑應為同一批號，且在有效期內。2)實驗材料和方法該試劑盒為定性檢測試劑盒，以經測試管內液體顏色由黃色轉變?yōu)榧t色判斷為陽性。因此，設計一系列濃度的脲素酶溶液，研究該試劑的最低檢出量(檢測試劑在I分鐘內正好變色的最低濃度)。用甘油和滅菌水以4 6比例配制成的脲酶稀釋液作為空白樣品，并用稀釋液作系列稀釋配成0,0. 10,0. 20,0. 30,0. 40,0. 50,0. 60,0. 70mg/ml的脲酶系列樣品，每個濃度配制3份。用在有效期內的三批次的幽門螺桿菌檢測試劑對樣品重復測定3次。觀察其顏色的變化；若I分鐘內反應液體顏色由黃色變?yōu)榧t色判斷為陽性，標記為“ + ”，若不變色，則為陰性，標記為記錄每次檢測到的顏色變化，8個“ + ”認定為合格。表I幽門螺桿菌檢測試劑對不同濃度脲素酶的檢測結果
權利要求
1.一種用于檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒，所述試劑盒包括盒體和盒蓋，其特征在于， 所述盒體內設置至少四個獨立的隔室或凹槽，第一隔室或凹槽用于放置尿素，第二隔室或凹槽用于放置取樣簽，第三隔室或凹槽用于放置苯酚紅，第四隔室或凹槽用于放置檢測試管。
2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括比色紙，所述比色紙獨立的放置于所述第二或者第四隔室或凹槽內，或者固定于盒蓋上，或者固定于所述第四隔室或凹槽內放置的各個檢測試管上。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述第四隔室或凹槽內放置的檢測試管為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內的檢測試管；優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內放置的檢測試管為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內獨立包裝的檢測試管；更優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內順序設置多個卡槽，卡槽內固定多個獨立包裝的檢測試管；或者所述第四隔室或凹槽內放置的獨立包裝的檢測試管順序粘結于該隔室或凹槽內。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述尿素為多個獨立包裝的單位使用劑量的尿素；優(yōu)選地，所述第一隔室或凹槽被分割成多個間隔的單位隔室或凹槽，每個單位隔室或凹槽用于放置單位使用劑量的尿素。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述苯酚紅為多個獨立包裝的單位使用劑量的苯酚紅；優(yōu)選地，所述第三隔室或凹槽被分割成多個間隔的單位隔室或凹槽，每個單位隔室或凹槽用于放置單位使用劑量的苯酚紅。
6.根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述第二隔室或凹槽內放置的取樣簽為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內的取樣簽；優(yōu)選地，所述第二隔室或凹槽內放置的取樣簽為多個以可拆卸方式固定于該隔室或凹槽內獨立包裝的取樣簽；更優(yōu)選地，所述第四隔室或凹槽內放置的獨立包裝的取樣簽順序粘結于該隔室或凹槽內。
7.根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述第一、第二、第三、或者第四隔室或凹槽在盒體內按順序依次設置；或者，所述盒體包括兩層，第一、第二、第三隔室或凹槽位于盒體一層且按順序依次設置，第四隔室或凹槽位于盒體另一層。
8.權利要求1至7中任一項所述的試劑盒的使用方法，包括以下步驟1)在檢測試管中配制檢測試劑；2)用標本簽取新鮮活檢舌苔樣本，置于檢測試管內，孵育1-10分鐘；3)觀察檢測試劑顏色變化。
9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中檢測試劑的配制方法如下 取單位使用劑量的苯酚紅配制成O. 07-0.1 %苯酚紅溶液，將2. 5-3. Og尿素加入至苯酚紅溶液中，加超純水定容至50ml。
10.權利要求1至7中任一項所述的試劑盒在檢測幽門螺桿菌感染中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種檢測幽門螺桿菌感染的試劑盒，所述試劑盒包括盒體，所述盒體設置為四個獨立的隔室或凹槽，第一隔室或凹槽內放置有幽門螺桿菌檢測試劑，第二隔室或凹槽內放置有取樣簽，第三隔室或凹槽內放置有幽門螺桿菌檢測指示試劑，第四隔室或凹槽內放置有檢測試管。本發(fā)明提供的試劑盒能夠快速、準確、經濟的檢測幽門螺桿菌感染，適用于臨床使用。
文檔編號C12M1/34GK103045468SQ20111031129
公開日2013年4月17日 申請日期2011年10月14日 優(yōu)先權日2011年10月14日
發(fā)明者肖性龍, 張經緯, 翟建新, 潘艷萍, 路遙 申請人:深圳太太基因工程有限公司