專利名稱：一種預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫領(lǐng)域，尤其涉及預(yù)防和治療幽門螺桿菌感染的藥物，具體來說是一種預(yù)防幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染的藥物制劑。
背景技術(shù)：
幽門螺桿菌是定居于人胃內(nèi)的一種革蘭氏陰性螺旋狀桿菌，自1982年Warren和Marshall發(fā)現(xiàn)Hp以來，大量研究表明，Hp感染是慢性活動(dòng)性胃炎和消化性潰瘍的主要病因，與胃惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，并于1996年被世界衛(wèi)生組織確認(rèn)為一級(jí)致癌原。根除Hp對(duì)上述疾病的預(yù)防及治療至關(guān)重要，目前的主要方法是藥物根除(抗生素加質(zhì)子泵抑制劑或鉍劑)，但是副作用大、復(fù)發(fā)率高特別是耐藥菌株的出現(xiàn)使得藥物療效大受影響，另外，由于人群中Hp自然感染率較高，在我國達(dá)50％以上，而Hp具有口-口、糞-口等多種傳播途徑，難以人為切斷。因此，應(yīng)用常規(guī)藥物很難在人群中大規(guī)模防治Hp。
近年來許多學(xué)者提出了免疫防治Hp的策略，并取得了積極的進(jìn)展。研究表明，口服Hp成份抗原及佐劑能夠激發(fā)有效的免疫保護(hù)反應(yīng)，具有應(yīng)用于臨床治療及預(yù)防Hp感染的前景。目前已發(fā)現(xiàn)了多種Hp成份抗原與不同佐劑的有效組合。通過基因工程技術(shù)可獲得大量有效、無毒的抗原，而通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)有效的佐劑僅有霍亂毒素(CT)、大腸桿菌不耐熱腸毒素(LT)，但是二者的毒性作用制約其進(jìn)一步應(yīng)用于人體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑，所述的藥物制劑包括尿素酶B亞單位、空泡毒素、外膜蛋白OMP27和藥用佐劑，進(jìn)一步的，所述的佐劑采用一種新型粘膜佐劑CpG-寡核苷酸，所述的CpG-寡核苷酸具有如下的序列5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’。
本發(fā)明的目的還在于提供所述的預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑在預(yù)防和治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的所述的藥物可以通過鼻腔的方式或其他免疫學(xué)可行的給藥途徑對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫。
本發(fā)明的制備方法是將三種抗原蛋白與CpG-ODN在4℃下加入無菌雙蒸水溶解、混合，即可制成本發(fā)明所述的藥物制劑。采用本發(fā)明對(duì)病人進(jìn)行治療時(shí)，將液體制劑通過鼻道滴入，進(jìn)入鼻腔，可被鼻粘膜迅速吸收，激發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)而產(chǎn)生保護(hù)作用。本發(fā)明所述的藥物也可以通過皮內(nèi)給藥的方式對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫。
本發(fā)明和已有技術(shù)相對(duì)照由于本發(fā)明由三種純化的抗原蛋白質(zhì)與CpG-ODN組成，安全、無毒，而且不會(huì)與機(jī)體發(fā)生交叉反應(yīng)。尤其是佐劑CpG-ODN的使用，既具有較強(qiáng)的免疫刺激作用，又無其它佐劑的毒性作用，而且本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單，操作方便，易在實(shí)驗(yàn)室中完成，也適宜于工廠化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明所述的藥物分別采用粘膜佐劑CpG-寡核苷酸和其它佐劑治療用于治療感染動(dòng)物后，血清中IgG2a水平的比較圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1H.pylori基因組DNA的抽提H.pylori菌株NCTC11637(由澳大利亞悉尼新南威爾士大學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)院Andren Lee教授惠贈(zèng))生長(zhǎng)于瓊脂平板上，37℃微需氧條件下培養(yǎng)48小時(shí)，收集細(xì)菌于PH8.0的TE緩沖液中，分別用溶菌酶、10％SDS及20mg/ml的蛋白酶K作用后，采用酚氯仿抽提法提取Hp全基因組DNA，-20℃下備用。
實(shí)施例2尿素酶B亞單位(UreaB)基因的制備尿素酶B亞單位(UreaB)基因從EMBL sequence No.M60398中得到該基因全序列。利用GCG基因分析軟件系統(tǒng)，對(duì)目的基因進(jìn)行的酶切位點(diǎn)、閱讀框、mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)分析，引物設(shè)計(jì)如下sense5’-AGGAAGATGCACGAAGACTGGGGCACC-3’；antisense5’-GAAGATCTGGACGAAAATGCTAAATAGTTG-3’。PCR反應(yīng)條件94℃熱變性4min，94℃ 30sec、45℃ 30sec和72℃ 1.5min 30個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。PCR產(chǎn)物用1％Agarose電泳鑒定后，進(jìn)行割膠回收。
實(shí)施例3外膜蛋白(OMP27)基因的制備以分離純化的H.pylori基因組DNA作模板。核酸序列設(shè)計(jì)引物如下sense 5’-AAAAAAGGTACCGAAGAGAGCGCGGCTTTTGTGGGA-3’；antisense5’-AAAAAAAAGCTTTCATTAAAAATCCCTCAAGTAACTGAT-3’。PCR反應(yīng)條件94℃熱變性3min，94℃ 30sec，50℃ 30sec，72℃°1min，共30個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物用1％Agarose電泳鑒定后，進(jìn)行割膠回收。
實(shí)施例4空泡毒素VacA基因的制備從Genebank獲得H.pylori NCTC11637 vacA的全基因序列，基因登錄號(hào)為AF049653。vacA基因全長(zhǎng)4544bp，編碼約140kDa的VacA前毒素蛋白，本實(shí)驗(yàn)克隆其中編碼成熟VacA毒素的DNA片段(389bp-2942bp)，表達(dá)約95kDa毒素蛋白。利用DNAStar和GeneRunner基因分析軟件對(duì)目的基因進(jìn)行閱讀框、酶切位點(diǎn)、mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)分析，針對(duì)此序列設(shè)計(jì)引物如下sense 5’-CAAAGTCCCATGGCCTTTTTCACAAC-3’，antisense 5’-TTCAAACTGCAGCTCAATAGTGCC-3’；克隆位點(diǎn)為Nco I和Pst I。PCR反應(yīng)條件為94℃熱變性4min，94℃ 30sec、55℃ 1min、72℃ 2.5min共30個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。PCR產(chǎn)物用1％Agarose電泳鑒定后，進(jìn)行割膠回收。
實(shí)施例5UreaB基因與載體的酶切與連接用限制性內(nèi)切酶Sal I酶和BamH I分別對(duì)擴(kuò)增的目的基因片段UreaB和載體質(zhì)粒pQE-30(購自QIAGEN公司)進(jìn)行雙酶切。
酶切反應(yīng)的反應(yīng)體系為50μl，其中目的基因或載體質(zhì)粒的DNA 25μl，10 X Buffer 5μl，兩種限制性內(nèi)切酶各1μl，37℃下消化3小時(shí)。酶切產(chǎn)物用1％Agarose凝膠電泳分離鑒定。切膠回收目的基因，與載體質(zhì)粒分別用T4 DNA連接酶連接，連接反應(yīng)體系為10μl，含10 X Bufer 1μl，T4連接酶1μl，目的基因和載體DNA按4∶1混勻，16℃連接16小時(shí)。
實(shí)施例6OMP27基因與載體的酶切與連接用限制性內(nèi)切酶Kpn I和Hind III分別對(duì)擴(kuò)增的目的基因片段OMP27和載體質(zhì)粒pQE-30進(jìn)行雙酶切。酶切反應(yīng)的反應(yīng)體系為50μl，其中目的基因或載體質(zhì)粒的DNA 25μl，10 X Buffer 5μl，兩種限制性內(nèi)切酶各1μl，37℃下消化3小時(shí)。酶切產(chǎn)物用1％Agarose凝膠電泳分離鑒定。切膠回收目的基因，與載體質(zhì)粒分別用T4 DNA連接酶連接，連接反應(yīng)體系為10μl，含10 X Bufer 1μl，T4連接酶1μl，目的基因和載體DNA按4∶1混勻，16℃連接16小時(shí)。
實(shí)施例7VacA P95基因與載體的酶切與連接用限制性內(nèi)切酶Nco I和Pst I分別對(duì)目的基因片段VacA P95和載體質(zhì)粒pQE-TriSystem進(jìn)行雙酶切。為防止載體質(zhì)粒自身環(huán)化，用Shrimp堿性磷酸酶處理酶切后的質(zhì)粒DNA。
酶切反應(yīng)的反應(yīng)體系為50μl，其中目的基因或載體質(zhì)粒的DNA 25μl，10 X Buffer 5μl，兩種限制性內(nèi)切酶各1μl，37℃下消化3小時(shí)。酶切產(chǎn)物用1％Agarose凝膠電泳分離鑒定。切膠回收目的基因，與載體質(zhì)粒分別用T4 DNA連接酶連接，連接反應(yīng)體系為10μl，含10 X Bufer 1μl，T4連接酶1μl，目的基因和載體DNA按4∶1混勻，16℃連接16小時(shí)。
實(shí)施例8 感受態(tài)細(xì)胞的制備及重組質(zhì)粒的鑒定用標(biāo)準(zhǔn)CaCl2法制備E.coli DH5α、XL1-Blue、M15和SG13009的感受態(tài)細(xì)胞(購自QIAGEN公司)，置于-80℃?zhèn)溆谩?br> 用熱休克法將連接產(chǎn)物分別轉(zhuǎn)化入相應(yīng)的宿主菌中UreaB+PQE30→DH5α，OMP27+PQE30→XL1-Blue，VacA P95+pQE-TriSystem→XL1-Blue。取凍存的E.coli感受態(tài)細(xì)胞置于1.5ml Eppendorf管中，分別加入相應(yīng)的連接反應(yīng)產(chǎn)物，輕輕混勻，冰浴20分鐘后42℃熱擊45sec，立即置冰上2min，再加入1ml LB，于37℃、200rpm轉(zhuǎn)速下培育50min，5000rpm離心3min，棄部分上清，留約100μl重懸沉淀后涂于含100μg/ml氨芐青霉素的LB平板上，37℃培養(yǎng)過夜。
以PCR法篩選出含重組質(zhì)粒的陽性克隆，挑選一單個(gè)克隆擴(kuò)增培養(yǎng)后，提取重組質(zhì)粒DNA，根據(jù)各自的雙酶切位點(diǎn)進(jìn)一步酶切鑒定后，用DNA測(cè)序儀進(jìn)行序列測(cè)定，使用QIAGEN公司提供的pQE載體測(cè)序引物。
實(shí)施例9重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌經(jīng)測(cè)序的重組DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)菌UreaB+PQE30→M15，OMP27+PQE30→XL1-Blue，VacA P95+pQE-TriSystem→SG13009。取上述純化的重組質(zhì)粒各1μl對(duì)宿主菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化，方法同上。最后取30μl轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物涂于含100μg/ml氨芐青霉素及25μg/ml卡那霉素的LB平板上，37℃培養(yǎng)過夜。PCR篩選陽性克隆，并以酶切法進(jìn)一步鑒定，篩選陽性重組工程菌。
實(shí)施例10誘導(dǎo)表達(dá)以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白于含100μg/ml氨芐青霉素及25μg/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)液中按20∶1比例加入陽性重組工程菌過夜培養(yǎng)液，37℃，200rpm培養(yǎng)至菌液OD600＝0.8時(shí)，取出1ml作為誘導(dǎo)表達(dá)前的對(duì)照，加入IPTG至終濃度1mM，同樣條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)3小時(shí)，菌液于5000rpm離心20分鐘，棄上清，-20℃保存菌體沉淀。
實(shí)施例11表達(dá)產(chǎn)物的鑒定(1)SDS-PAGE凝膠電泳后進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色，觀察表達(dá)的蛋白條帶，并用光密度薄層掃描儀定量檢測(cè)蛋白質(zhì)含量。(2)Western blot按上述方法對(duì)宿主菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE后，通過電轉(zhuǎn)移將蛋白轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜，3％牛血清白蛋白(BSA)4℃封閉過夜，加入H.pylori感染小鼠血清于37℃作用1h，羊抗兔IgG-HRP于37℃ 1h，TBS振洗后，用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)。氨基酸測(cè)序?qū)⑥D(zhuǎn)印好的膜經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色，甲醇-冰乙酸脫色后切下含目的條帶的凝膠，進(jìn)行氨基酸序列測(cè)定。
實(shí)施例12表達(dá)產(chǎn)物的分離純化(1)包涵體的分離以裂解液裂解細(xì)胞，經(jīng)超聲破碎后(冰浴下進(jìn)行)，高速離心，再溶于含8M尿素的初始緩沖液中備用。
(2)金屬螯合親和層析(MCAC)純化重組蛋白所用儀器為AKTAexplorer100(Amersham pharmaciabiotech)FPLC層析儀，將溶解的包涵體直接上樣，8M尿素作為變性劑，在變性條件下純化。采用介質(zhì)為亞氨二乙酸的HiTrapChelating 5ml預(yù)裝柱(Amersham pharmaciabiotech)，以5倍體積的0.05MNiSO4過柱吸附Ni2+，0.1-0.5M咪唑線性洗脫，洗脫速度為2ml/min，按每管1ml自動(dòng)收集洗脫液。
(3)純化產(chǎn)物的復(fù)性將純化的目的蛋白，4℃下分別于1000ml含4M、2M尿素的磷酸鹽緩沖液(PBS)中各透析2h，然后將透析袋移至1000ml不含尿素的PBS中，4℃透析過夜，經(jīng)聚乙二醇濃縮，分裝，-20℃凍存?zhèn)溆谩?br> (4)純化產(chǎn)物的鑒定SDS-PAGE和Western blot。具體方法見上。
實(shí)施例13佐劑的制備用DNA合成儀合成CpG-ODN，序列如下5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’，CpG-ODN可由上海生工生物技術(shù)有限公司購得，并經(jīng)硫代修飾，溶于無菌生理鹽水中。
實(shí)施例14動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CpG佐劑的效果1.菌株培養(yǎng)本研究所用的Hp菌株為悉尼株(Sydney Strain，SS1，購于澳大利亞新南威爾士大學(xué)微生物學(xué)院)。采用添加7％馬血(上海生物制品所)和Skirrow選擇性抗生素的血瓊脂(Oxoid，Ltd)培養(yǎng)基或腦心浸液(BHI)肉湯(Oxoid，Ltd)，微氧培養(yǎng)2-3天，經(jīng)尿素酶、觸酶、氧化酶試驗(yàn)及涂片革蘭氏染色鑒定細(xì)菌形態(tài)及活力。將活力良好的Hp懸于改良布氏肉湯中，利用分光光度計(jì)測(cè)定菌液濃度，當(dāng)OD660＝1時(shí)，細(xì)菌濃度為108/ml[1]。將濃度調(diào)整至109/ml，用于接種小鼠。
2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為無特殊病原菌(S.P.F)級(jí)C57BL/6小鼠，6～8周齡，18～20g，委托中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。
3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共設(shè)8組，分別經(jīng)口或鼻道給予Hp WCS(1mg)/CpG(50μg)或HpWCS(1mg)/CT(10μg)，并設(shè)m-CpG對(duì)照及只給予Hp WCS或佐劑的對(duì)照組。免疫程序接種共4次，每周1次。最后1次免疫后1周，所有小鼠均以5×108Hp攻擊，隔日1次，共3次，最后1次攻擊后2周處死小鼠，將實(shí)驗(yàn)鼠胃沿大彎縱向切開，縱向切成同樣大小的3份，1份直接行快速尿素酶試驗(yàn)，1份用于細(xì)菌培養(yǎng)，1份置于10％福爾馬林中固定，用于病理組織學(xué)(Giemsa和H&E染色)檢測(cè)。
4.標(biāo)本收集1)唾液收集腹腔內(nèi)注射100μg Pilocarpin(溶于100μlPBS)，數(shù)分鐘后將剪好的BFC180纖維素條(Whatman，USA)一端伸入小鼠口中將唾液吸出，直至飽和。將纖維素條放入尖底離心管中，-70℃凍存。測(cè)定前，在離心管中加入300μlPBS(含5％脫脂奶粉和蛋白酶抑制劑(1mM PMSF，1μg/ml抑肽酶和10μM亮肽素))，旋渦振蕩2次，每次15秒，16000g，2分鐘，4℃離心，收集上清，測(cè)定或置-70℃凍存待用。
2)胃液收集將BFC180纖維素紙(約1×2cm)貼于胃黏膜面，3分鐘后，將纖維素紙放入尖底離心管中，-70℃凍存。余步驟同前。
3)血清收集取眼球放血，收集至尖底離心管中，離心集上清，-70℃凍存待用。
5.ELISA法檢測(cè)抗體以HpWCS(0.5μg/孔)包板。依次加入待測(cè)樣品及辣根過氧化物酶標(biāo)記的goat-anti-mouse IgG(Calbiochem，USA)，goat-anti-mouse IgG1(Caltag Laboratories，USA)，goat-anti-mouse IgG2a(CaltagLaboratories，USA)和goat-anti-mouse IgA(Caltag Laboratories，USA)。反應(yīng)濃度為血清1∶100，goat-anti-mouse IgG 1∶1萬，goat-anti-mouse IgG2a 1∶4000，goat-anti-mouse IgG1 1∶5000；血清1∶50，goat-anti-mouse IgA 1∶1萬；胃液1∶5，唾液1∶25，goat-anti-mouse IgA 1∶1萬。最后加入TMB 100μl，37℃，15min后加入終止液，終止反應(yīng)，測(cè)定OD450nm。
6.結(jié)果各組保護(hù)效果見表1。
組別免疫成分及途實(shí)驗(yàn) 感染 保護(hù)率徑 鼠只數(shù)鼠只數(shù)(％)1 WCS+CT 123 75*i.o2 WCS+CpG 10100i.o3 WCS+CpG 103 70*i.n4 WCS+mCpG10100i.n5 CpG 10100i.n6 WCS 108 20i.o7 CT 109 10i.o8 N.S 10100i.o*與未免疫對(duì)照組(N.S組)相比，P＜0.05(χ2檢驗(yàn))。
如表1、圖1所示，細(xì)菌攻擊后2周及8周時(shí)，滴鼻Hp WCS/ODN組的血清IgG和IgG2a顯著高于對(duì)照組(Student’s t test，P＜0.05)，各組及組內(nèi)血清、唾液、胃液IgA無顯著差別。
結(jié)果顯示，鼻內(nèi)給予小鼠CpG-ODN可獲得70％的保護(hù)率，和CT相似，而經(jīng)口灌胃不能獲得保護(hù)，而且單獨(dú)給予CpG-ODN或變異的CpG ODN均不能產(chǎn)生保護(hù)作用。ELISA法檢測(cè)抗體結(jié)果顯示，保護(hù)組的IgG2a水平增高，IgG2a是Th1反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的抗體，提示免疫保護(hù)作用可能與Th1反應(yīng)相關(guān)。綜上，CpG-ODN是一頗具潛力的幽門螺桿菌疫苗佐劑。
實(shí)施例15預(yù)防H.pylori感染的制劑制備將50ug尿素酶B亞單位、50ug空泡毒素、50ug外膜蛋白OMP27和50ug粘膜佐劑CpG-寡核苷酸，在4℃下加入0.08ml無菌雙蒸水溶解、混合，即可制成本發(fā)明所述的藥物制劑。
實(shí)施例16動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證本混合制劑預(yù)防幽門螺桿菌感染的作用1.菌株培養(yǎng)同上。
2.動(dòng)物同上。
3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共設(shè)4組，分別經(jīng)鼻道給予混合制劑Hp WCS(1mg)/CpG(50μg)或并設(shè)HpWCS(1mg)/CT(10μg)的對(duì)照及只給予Hp的感染對(duì)照的對(duì)照組。
免疫接種經(jīng)鼻道免疫C57BL/6小鼠，每周1次，每只小鼠接受免疫的劑量為三種抗原以及佐劑各50μg，共接種4次。另設(shè)空白對(duì)照組、感染對(duì)照組以及全菌超聲粉碎抗原+CT組作為對(duì)照。最后1次免疫后1周，所有小鼠均以108CFU Hp攻擊，經(jīng)口灌入，隔日1次，共3次。最后1次灌胃后2周拉頸處死小鼠。將實(shí)驗(yàn)鼠胃沿大彎縱向切開，縱向切成同樣大小的3份，1份直接行快速尿素酶試驗(yàn)，1份放入無菌生理鹽水中，用于細(xì)菌培養(yǎng)，1份置于10％福爾馬林中固定，用于病理組織學(xué)(Giemsa和H&E染色)檢測(cè)。
各組保護(hù)效果見表2。

*與未免疫的感染對(duì)照組相比，P＜0.05(Two-tailed Fisher’s ExactProbability Test)
權(quán)利要求
1，一種預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑，其特征在于所述的藥物制劑包括尿素酶B亞單位、空泡毒素、外膜蛋白OMP27和藥用佐劑。
2，如權(quán)利要求1所述的一種預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑，其特征在于所述的藥用佐劑采用粘膜佐劑CpG-寡核苷酸，所述的CpG-寡核苷酸具有如下的序列，5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’。
3，權(quán)利要求1所述的預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑在制備預(yù)防和治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。
4，如權(quán)利要求3所述的預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑在制備預(yù)防和治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物通過鼻腔的方式對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫。
5，如權(quán)利要求3所述的預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑在制備預(yù)防和治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物通過皮內(nèi)給藥的的方式對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物制劑以及本發(fā)明作為預(yù)防幽門螺桿菌感染的藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的所述的藥物可以通過鼻腔的方式或其他免疫學(xué)可行的給藥途徑對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫，本發(fā)明的制備方法是將三種抗原蛋白與CpG－ODN在4℃下加入無菌雙蒸水溶解、混合，即可制成本發(fā)明所述的藥物制劑。采用本發(fā)明對(duì)病人進(jìn)行治療時(shí)，將液體制劑通過鼻道滴入，進(jìn)入鼻腔，可被鼻粘膜迅速吸收，激發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)而產(chǎn)生保護(hù)作用。
文檔編號(hào)A61P37/00GK1552445SQ0312886
公開日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2003年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月27日
發(fā)明者蕭樹東, 史彤, 鄭青, 龐智, 朱紅音, 劉文忠, 樓屹 申請(qǐng)人:上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院