專利名稱：具有高蛋白質(zhì)水解活性的瑞士乳桿菌細(xì)菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的屬于瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)的乳酸菌。本發(fā)明另外涉及通過用所述乳酸菌使乳發(fā)酵而獲得的發(fā)酵乳和含有所述乳酸菌的組合物或飲食品。本發(fā)明另外涉及使用所述乳酸菌生產(chǎn)氨基酸和/或肽的方法。
背景技術(shù)：
已知乳蛋白質(zhì)和食物蛋白質(zhì)潛在地包含功能性肽。已嘗試使用通過酶解或發(fā)酵加工的乳蛋白質(zhì)或食物蛋白質(zhì)。例如，作為此類功能性肽，已報道三肽VPP和IPP具有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制活性并因此顯示降血壓作用(專利文獻(xiàn)1-4和 非專利文獻(xiàn)I)。已報道除VPP和IPP之外的作為乳來源的功能性肽的二肽YP具有降血壓和抗焦慮作用(專利文獻(xiàn)5)。還報道了二肽IP、AP、EP、RP、QP、TP、MP和GP為具有ACE抑制活性的難分解性的肽組(例如，專利文獻(xiàn)6)。同時，瑞士乳桿菌(L.helveticus)已常規(guī)用于生產(chǎn)乳制品，并已知其具有高蛋白質(zhì)水解活性。為了提供更容易攝取和加工的發(fā)酵乳，已報道一些具有高蛋白質(zhì)水解活性和良好的肽生產(chǎn)率的瑞士乳桿菌菌株(專利文獻(xiàn)1-4和7、非專利文獻(xiàn)I)。蛋白質(zhì)是由氨基酸構(gòu)成，并因此可通過促進(jìn)蛋白質(zhì)水解而成為供給氨基酸的來源。已知氨基酸除營養(yǎng)和風(fēng)味以外還具有多種功能。例如，因?yàn)橹ф湴被?BCAA)包含于構(gòu)成肌肉的蛋白質(zhì)中，其中BCAA在運(yùn)動等時被消耗并用作能量，所以已知補(bǔ)給BCAA是重要的。丙氨酸(Ala)是生糖氨基酸，已知作為肝臟的能量源。因?yàn)锳la消耗在醇分解時產(chǎn)生的NADH，因此表明肝臟中的分解反應(yīng)在Ala的存在下進(jìn)行。另外已知Ala誘導(dǎo)鮮味(umami)的味覺(即，良好的味道和風(fēng)味)并具有世耐爾(shionare)與蘇耐爾(sunare)效果(即，降低咸和酸的味覺的效果)和掩蔽辛辣味的效果。據(jù)說賴氨酸(Lys)是必需氨基酸之中最容易缺乏的氨基酸。必須攝取Lys作為抗體、激素或酶等的原材料。已報道Lys還參與鈣吸收、膠原形成和骨組織生產(chǎn)。絲氨酸(Ser)作為體內(nèi)各種重要物質(zhì)例如磷脂酰絲氨酸及其他氨基酸的前體是重要的。還已知Ser通過腦內(nèi)神經(jīng)元的活化來抑制血膽固醇水平的減少或腦細(xì)胞死亡，由此防止腦老化并用作皮膚保濕成分。為生產(chǎn)此類氨基酸，微生物已被積極地使用。然而，可以以微生物發(fā)酵產(chǎn)物的形式直接攝取的氨基酸的實(shí)例并不多。關(guān)于乳酸菌，已篩選到具有良好的分解氨基酸活性的乳酸菌以便改進(jìn)日本腌潰品的風(fēng)味。然而，已知沒有研究為了攝取功能性氨基酸和功能性肽而直接使用發(fā)酵乳的實(shí)例。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1:歐洲專利1016709B專利文獻(xiàn)2:國際公開專利W001/32836專利文獻(xiàn)3:國際公開專利W02007/096510
專利文獻(xiàn)4:歐洲專利1820850專利文獻(xiàn)5:歐洲專利0821968專利文獻(xiàn)6:歐洲專利1661909專利文獻(xiàn)7 JP公開專利(特開平)07-274949A (1995)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I =Nakamura, Y.等人，J.Dairy Sc1.Vol.78，1253-1257 頁，199
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題因此，本 發(fā)明的目的是提供具有高蛋白質(zhì)水解活性和良好的肽生產(chǎn)能力和/或氨基酸生產(chǎn)能力的乳酸菌。本發(fā)明另外的目的是提供含有高濃度的氨基酸和/或肽并具有良好風(fēng)味的發(fā)酵乳。用于解決問題的方案作為以達(dá)到上述目的深入研究的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)從屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌菌株中成功獲得對乳蛋白質(zhì)具有良好的氨基酸生產(chǎn)能力與良好的功能性肽生產(chǎn)能力和具有高于常規(guī)乳酸菌的蛋白質(zhì)水解活性的菌株。此外，本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)借助于該菌株來獲得氨基酸和/或肽含量高的發(fā)酵乳和組合物，從而允許生產(chǎn)氨基酸和/或肽。結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人完成本發(fā)明。具體地，本發(fā)明包含以下[I]至[32]。[I] 一種屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌，其具有以下(a)至⑷特性的至少一種:(a)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25 μ mol/ml以上的游離氨基酸；(b)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)8.5mg/ml以上的肽；(c)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總量為260 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和(d)在通過使動物乳在30_34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位(acidity)下，生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。[2]根據(jù)[I]所述的乳酸菌，其中15%以上的所述游離氨基酸為支鏈氨基酸。[3]根據(jù)[I]或[2]所述的乳酸菌，其中所述游離氨基酸包括選自丙胺酸、賴氨酸和絲氨酸的至少一種氨基酸。[4]根據(jù)[I]至[3]任一項(xiàng)所述的乳酸菌，其以60 μ g/ml以上的量生產(chǎn)YP肽。[5]根據(jù)[I]至[4]任一項(xiàng)所述的乳酸菌，其為瑞士乳桿菌CM4菌株(登錄號FERMBP-6060)的突變株。[6]根據(jù)[I]至[5]任一項(xiàng)所述的乳酸菌，其為瑞士乳桿菌CP3232菌株(登錄號FERM BP-11271)或其突變株。[7] 一種瑞士乳桿菌 CP3232 菌株(登錄號 FERM BP-11271)。[8] 一種用于由動物乳生產(chǎn)氨基酸和/或肽的組合物，其包括屬于瑞士乳桿菌的至少一種乳酸菌。[9]根據(jù)[8]所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25 μ mol/ml以上的游離氨基酸。[10]根據(jù)[9]所述的組合物，其中所述游離氨基酸的15%以上為支鏈氨基酸。
[11]根據(jù)[9]或[10]所述的組合物，其中所述游離氨基酸包括選自丙胺酸、賴氨酸和絲氨酸的至少一種氨基酸。[12]根據(jù)[8]至[11]任一項(xiàng)所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵以8.5mg/ml以上的量生產(chǎn)肽。[13]根據(jù)[8]至[12]任一項(xiàng)所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總量為260 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽。[14]根據(jù)[8]至[13]任一項(xiàng)所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵以60 μ g/ml以上的量生產(chǎn)YP肽。[15]根據(jù) [8]至[14]任一項(xiàng)所述的組合物，在通過使動物乳在30_34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，其生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。[16]根據(jù)[8]至[15]任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述乳酸菌為[I]至[7]任一項(xiàng)所述的乳酸菌。[17] 一種發(fā)酵乳，其通過用屬于瑞士乳桿菌的至少一種乳酸菌使動物乳發(fā)酵而獲得并包含以下(a)至⑷成分的至少一種:(a) 25 μ mol/ml以上的游離氨基酸；(b)8.5mg/ml 以上的肽；(c)總計為260 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和(d)在酸度單位下，當(dāng)以VPP的換算量計時為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。[18]根據(jù)[17]所述的發(fā)酵乳，其包括屬于瑞士乳桿菌的至少一種乳酸菌。[19]根據(jù)[17]或[18]所述的發(fā)酵乳，其包括[I]至[7]任一項(xiàng)所述的至少一種
乳酸菌。[20]根據(jù)權(quán)利要求[17]至[19]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其中所述游離氨基酸的15%以上為支鏈氨基酸。[21]根據(jù)權(quán)利要求[17]至[20]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其中所述游離氨基酸包括選自丙胺酸、賴氨酸和絲氨酸的至少一種氨基酸。[22]根據(jù)權(quán)利要求[17]至[21]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其包括60 μ g/ml以上的YP肽。[23]根據(jù)權(quán)利要求[17]至[22]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其中在30_34°C的溫度下進(jìn)行所述發(fā)酵。[24]根據(jù)權(quán)利要求[17]至[23]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其用于降血壓藥、腦功能改善齊[J、自主神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、副交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、能量補(bǔ)充劑、肌肉分解與肌肉損傷抑制劑、肌肉增強(qiáng)劑、疲勞減輕劑、耐久性改善劑、風(fēng)味改善劑或醇代謝劑。[25] 一種飲食品，其包括[I]至[7]任一項(xiàng)所述的至少一種乳酸菌和/或其處理物、和/或[17]至[24]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳和/或其處理物。[26] 一種氨基酸和/或肽的生產(chǎn)方法，其包括使用[I]至[7]任一項(xiàng)所述的至少一種乳酸菌或[8]至[16]任一項(xiàng)所述的組合物使動物乳或乳蛋白質(zhì)發(fā)酵，然后從所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物中收集氨基酸和/或肽。[27]根據(jù)[26]所述的方法，其中所述氨基酸為支鏈氨基酸。
[28]根據(jù)[26]或[27]所述的方法，其中所述氨基酸包括選自丙胺酸、賴氨酸和絲氨酸的至少一種氨基酸。[29]根據(jù)[26]至[28]任一項(xiàng)所述的方法，其中所述肽為選自由XP肽和/或XPP肽組成的組的至少一種肽。[30]根據(jù)[26]至[29]任一項(xiàng)所述的方法，其中在30_34°C的溫度下進(jìn)行所述發(fā)酵。[31] 一種具有蛋白質(zhì)水解活性并屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌的獲得方法，其包括以下步驟:(a)制備瑞士乳桿菌CM·4菌株(登錄號FERM BP-6060)或瑞士乳桿菌CP3232菌株(登錄號FERM BP-11271)的突變株；和(b)從該突變株中篩選具有至少一種以下(a)至(d)特性的菌株:(a)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25 μ mol/ml以上的游離氨基酸；(b)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)8.5mg/ml以上的肽；(c)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總計為260 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和(d)在通過使動物乳在30_34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。[32] 一種功能性飲食品的生產(chǎn)方法，其包括制備[I]至[7]任一項(xiàng)所述的至少一種乳酸菌和/或其處理物、和/或[17]至[24]任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳和/或其處理物，以及將所述乳酸菌和/或其處理物、和/或所述發(fā)酵乳和/或其處理物混合至飲食品中的步驟。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，提供具有高蛋白質(zhì)水解活性與良好的肽生產(chǎn)能力和氨基酸生產(chǎn)能力的屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌。由所述乳酸菌生產(chǎn)的氨基酸和/或肽具有多種功能。例如，肽如IPP、VPP和YP具有降血壓作用。此外，通過使用所述乳酸菌發(fā)酵，可獲得含有高濃度的具有各種功能的各種各樣的氨基酸和/或肽的發(fā)酵乳。在由此獲得的發(fā)酵乳的酸度單位(unit of acidity)下所述IPP和VPP肽的量高，因此沒有由于進(jìn)行常規(guī)發(fā)酵生產(chǎn)乳酸而導(dǎo)致的高酸度所引起的問題。具體地，可生產(chǎn)含有氨基酸和/或肽的水平高于乳酸生產(chǎn)水平的發(fā)酵乳。因此，借助于少量的發(fā)酵乳，可便利地生產(chǎn)具有良好風(fēng)味且易于飲用或食用的同時保持其功能性的形式的產(chǎn)品。此外，可將所述產(chǎn)品提供給消費(fèi)者。


圖1示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C (A)或37°C (B)下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中各氨基酸的量(nmol/ml)的圖。圖2示出顯示包含在通過用各乳酸菌菌株在32°C或37°C下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中游離氨基酸的·總量(μ mol/ml) (A)和支鏈氨基酸的量(μ mol/ml)
(B)的圖。圖3為示出通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C或37°C下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中肽的量(mg/ml)的圖。圖4示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C (A)或37°C (B)下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中功能性肽的量(μ g/ml)的圖。
圖5示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C (A)或37°C (B)下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中XP肽和XPP肽的量(μ g/ml)的圖。圖6示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C (A)或37°C (B)下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中各氨基酸的量(nmol/ml)的圖。圖7示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C或37°C下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中游離氨基酸的總量(ymol/ml) (A)和支鏈氨基酸的量(μ mol/ml) (B)的圖。圖8為示出 在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C或37°C下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中肽的量(mg/ml)的圖。圖9示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32°C (A)或37°C (B)下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中功能性肽的量(μ g/ml)的圖。圖10示出顯示包含在通過用各指定的乳酸菌菌株在32 °C (A)或37 °C (B)下使乳發(fā)酵24小時而獲得的發(fā)酵乳的上清液中XP肽和XPP肽的量(μ g/ml)的圖。圖11示出通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法擴(kuò)增各指定的乳酸菌菌株的基因組DNA而獲得的片段的電泳圖譜。圖12示出通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法擴(kuò)增各指定的乳酸菌菌株的基因組DNA而獲得的片段的電泳圖譜。
具體實(shí)施例方式以下將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。本申請要求2010年11月9日提交的日本專利申請2010-250754的優(yōu)先權(quán)，并且本申請包括該申請的說明書和/或附圖所描述的內(nèi)容。根據(jù)本發(fā)明的屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌為通過發(fā)酵由糖產(chǎn)生乳酸的乳酸菌，并且本文中也被稱為“本發(fā)明的乳酸菌”。本發(fā)明的乳酸菌的特征在于具有高蛋白質(zhì)水解活性與良好的氨基酸生產(chǎn)能力和/或良好的功能性肽生產(chǎn)能力。具體地，本發(fā)明的乳酸菌具有以下(a)至(d)特性的至少一種:(a)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25 μ mol/ml以上、優(yōu)選30 μ mol/ml以上的游離氨基酸；(b)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)8.5mg/ml以上、優(yōu)選10mg/ml以上的肽；(c)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總量為260 μ g/ml以上、優(yōu)選280 μ g/ml以上、進(jìn)一步優(yōu)選300 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和(d)在通過使動物乳在30_34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的例如稍后在實(shí)施例中描述的方法測定上述(a)至(d)的特性。簡單地，可通過用屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌在30-35°C下、優(yōu)選在30-34°C下使作為底物的乳蛋白質(zhì)(例如，動物乳)發(fā)酵10-30小時，然后測定包含在從所述乳蛋白質(zhì)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物中的游離氨基酸或肽的量以及酸度等來判定(a)至(d)特性。關(guān)于(a)，可使用已知的氨基酸分析器例如高效液相色譜儀測定氨基酸的量。本發(fā)明的乳酸菌可通過使動物乳發(fā)酵來生產(chǎn)25 μ mol/ml以上、優(yōu)選30 μ mol/ml以上的游離氨基酸。另外，支鏈氨基酸以5 μ mol/ml以上并更優(yōu)選6或7 μ mol/ml以上的量生產(chǎn)，并且支鏈氨基酸(纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)優(yōu)選為所生產(chǎn)游離氨基酸的15%以上、更優(yōu)選19%或20%以上。游離氨基酸優(yōu)選包含2000 μ g/ml以上的至少一種選自丙胺酸、賴氨酸和絲氨酸的氨基酸，并更優(yōu)選包含1500 μ g/ml的各至少兩種氨基酸。關(guān)于(b),可通過本領(lǐng)域已知的方法例如OPA法(Church等人，J.DairySc1.1983.66:1219-1227)測定肽的量。本發(fā)明的乳酸菌可通過使動物乳發(fā)酵來生產(chǎn)
8.5mg/ml以上、優(yōu)選10mg/ml以上的肽。關(guān)于(C)，術(shù)語 “XP肽”是指Xaa-PiO(其中Xaa表示任意的氨基酸)構(gòu)成的肽。XP 肽的實(shí)例包括 YP (Tyr-Pro)、VP (Val-Pro)、IP (Ile-Pro)、AP (Ala-Pro)、EP (Glu-Pro)、RP (Arg-Pro)、QP (Gln-Pro)、TP (Thr-Pro)、MP (Met-Pro)和 GP (Gly-Pro)。此外，術(shù)語“ XPP肽”是指Xaa-Ρ -Ρ (其中Xaa表示任意的氨基)構(gòu)成的肽。XPP肽的實(shí)例包括VPP(Val-Pro-Pro)、IPP(Ile-Pro-Pro)和 LPP (Leu-Pro-Pro)。另外，作為在本文中使用的XP肽和XPP肽各自被稱為“二肽”和“三肽”，或一起被稱為“功能性肽”?？墒褂靡阎腖C/MS儀測定所述XP肽和/或所述XPP肽的量。本發(fā)明的乳酸菌可通過使動物乳發(fā)酵而生產(chǎn)總量為260 μ g/ml以上、優(yōu)選280 μ g/ml以上并更優(yōu)選300 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽。特別地，優(yōu)選生產(chǎn)60 μ g/ml以上、更優(yōu)選65 μ g/ml以上并進(jìn)一步優(yōu)選70 μ g/ml以上的YP肽。關(guān)于(d)，可通過使用已知的自動滴定器等已知的中和滴定法測定酸度(即，發(fā)酵乳中酸的濃度)。此外，可通過關(guān)于(C)所記載的方法來測定IPP肽和VPP肽。本發(fā)明的乳酸菌在通過使動物乳在30-34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，生產(chǎn)的IPP和VPP肽的量以VPP的換算量計為5.5mg/ml以上、優(yōu)選6.0mg/ml以上。另外，使用1.02作為發(fā)酵乳的比重來計算上述量。此外，根據(jù)基于ACE抑制活性的VPP換算量通過下式來計算IPP和VP肽(如本文所述)的量:(VPP 換算量(μ g/ml)) =IPP 的量(μ g/ml) X 1.7+VPP 的量(μ g/ml)本發(fā)明的乳酸菌具有至少一種上述(a)至(d)特性并優(yōu)選顯示上述2種、3種或全部的特性。例如，本發(fā)明的乳酸菌具有(a)、(b)、(c)或(d)的特性，或具有(a)和(b)、(a)和(c)、(a)和(d)、(b)和(c)、(b)和(d)、或(C)和(d)的特性，(a)、(b)和(c) ； (a)、(b)和(d) ;(a)、(C)和(d) ;(b)、(C)和(d)的特性，或(a)至(d)的特性。本發(fā)明中，本發(fā)明的乳酸菌包括任一種屬于顯示至少一種上述特性的瑞士乳桿菌的乳酸菌。具有此類特性的瑞士乳桿菌的優(yōu)選實(shí)例為由本發(fā)明人自己從使用瑞士乳桿菌CM4菌株(登錄號FERM BP-6060，專利文獻(xiàn)I)作為親株(parent strain)而獲得的突變株中篩選的瑞士乳桿菌CP3232菌株。另外，由本申請人分別按照FERM BP-6060和FERMBP-11271于1997年8月15日和2010年8月4日將瑞士乳桿菌CM4菌株和CP3232菌株保藏于國際專利生物保藏中心(International Patent Organism Depositary)獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所(National Institute of Advanced Industrial Science andTechnology) (AIST)(日本國茨城縣筑波市東I 丁目I番地I中央第6 (郵政編碼305-8566)Tsukuba Central6, l-l-lHigashi, Tsukuba, Ibaraki, Japan, 305-8566),所述 AIST 是按照布達(dá)佩斯條約(Budapest Treaty)為保藏專利微生物而建立的國際保藏單位(IDA)。如實(shí)施例中所描述，已證實(shí)所述瑞士乳桿菌CP3232菌株具有上述(a)至(d)的全部特性。此外，所述瑞士乳桿菌CP3232菌株為源自上述作為親株的瑞士乳桿菌CM4菌株的突變株。因此，瑞士乳桿菌CM4菌株和瑞士乳桿菌CP3232菌株的突變株可能具有任一種上述(a)至(d)的特性。本發(fā)明中也包括這些來自瑞士乳桿菌CP3232菌株或瑞士乳桿菌CM4菌株的突變株，只要其具有上述特性即可。本發(fā)明中，術(shù)語“突變株”是指從親株獲得的任意菌株。具體地，是指通過增加自然突變頻率或增加經(jīng)用物理或化學(xué)誘變劑的誘變的人工突變頻率的方法、或具體的突變技術(shù)(例如,遺傳重組)從親株獲得的菌株。反復(fù)地篩選和分離通過這些方法生產(chǎn)的微生物以培育有用的微生物，因此可獲得具有目的特性的突變株。本文中使用的此類突變株的實(shí)例包括從作為親株的CM4菌株、CP3232菌株或其突變株而獲得的菌株。具體地，CM4菌株的突變株的實(shí)例另外包括CM4菌株經(jīng)若干反復(fù)的突變后篩選的突變株。例如，基于通 過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法擴(kuò)增的片段(乳酸菌的基因組DNA的片段)的分子量分布，可以容易地使來自瑞士乳桿菌CM4菌株、瑞士乳桿菌CP3232菌株及其突變株的突變株區(qū)別于其他乳酸菌菌株。簡言之，制備目的乳酸菌菌株的DNA樣品，通過PCR法使用具有例如SEQ ID NOS:1和2所示序列的引物進(jìn)行基因擴(kuò)增，分析由此獲得的片段的電泳圖譜，并可判定所得到的菌株是否為起源于瑞士乳桿菌CP3232菌株或瑞士乳桿菌CM4菌株的突變株。然而,證實(shí)此類對象菌株(subject strain)是否為突變株的方法并不限于此方法。即使當(dāng)沒有檢出上述PCR片段時，所得菌株可能是來自瑞士乳桿菌CM4菌株的突變株或來自瑞士乳桿菌CP3232菌株的突變株?？赏ㄟ^檢測其他基因片段、微生物學(xué)特性或本領(lǐng)域已知的技術(shù)來證實(shí)此類對象菌株是否為突變株。通過判斷此類突變株是否具有上述(a)至(d)的特性，可獲得可用作本發(fā)明的乳酸菌的菌株。本發(fā)明的乳酸菌可通過使用通常用于培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)來制備。天然培養(yǎng)基或合成培養(yǎng)基可用作培養(yǎng)基，只要它包含碳源、氮源、無機(jī)鹽及其他成分并且能夠有效地培養(yǎng)乳酸菌即可。本領(lǐng)域技術(shù)人員可適當(dāng)?shù)剡x擇已知的適用于待用菌株的培養(yǎng)基?？墒褂玫奶荚吹膶?shí)例包括乳糖、葡萄糖、半乳糖和赤糖糊(blackstrapmolasses)?？墒褂玫牡吹膶?shí)例包括有機(jī)含氮物質(zhì)，例如酪蛋白水解物、乳清蛋白質(zhì)水解物和大豆蛋白質(zhì)水解物?？墒褂玫臒o機(jī)鹽的實(shí)例包括磷酸鹽、鈉、鉀和鎂。培養(yǎng)乳酸菌的適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基的實(shí)例包括MRS液體培養(yǎng)基、GAM培養(yǎng)基、BL培養(yǎng)基、Briggs肝肉湯(BriggsLiver Broth)、動物乳、脫脂乳和乳清衍生的乳。優(yōu)選使用含有已滅菌的脫脂奶粉的乳培養(yǎng)基。另外，可在20V至50°C、優(yōu)選25°C至42°C、并更優(yōu)選28°C至37°C借助厭氧條件進(jìn)行本發(fā)明的乳酸菌的培養(yǎng)?？墒褂煤銣夭?、覆套式加熱器(mantle heater)或夾套等來調(diào)整溫度條件。另外，在文中使用的術(shù)語“厭氧條件”是指乳酸菌可以增殖的低氧環(huán)境。例如，可通過使用厭氧培養(yǎng)室、厭氧箱或者含有除氧劑的密封容器或袋子等，或通過簡單地密封培養(yǎng)容器來提供厭氧條件。培養(yǎng)的形式包括靜置培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)和槽式培養(yǎng)(tank culture)。培養(yǎng)時間可以為3-96小時。在培養(yǎng)開始時優(yōu)選保持培養(yǎng)基的pH在4.0-8.0。以下簡單地描述制備本發(fā)明的乳酸菌的具體實(shí)例。例如，當(dāng)使用瑞士乳桿菌CP3232菌株時，將乳酸菌接種至已滅菌的乳培養(yǎng)基(例如，含有9.00%(w/w)復(fù)原脫脂奶粉(reconstituted powdered skim milk)的乳培養(yǎng)基)、接著在28_37°C下過夜培養(yǎng)(約18-28小時)。優(yōu)選反復(fù)地進(jìn)行該培養(yǎng)步驟。培養(yǎng)后，所獲得的乳酸菌的培養(yǎng)物可直接使用，或可進(jìn)一步任選地通過離心等進(jìn)行粗純化和/或通過過濾等進(jìn)行固液分離和滅菌。此外，可使用通過處理本發(fā)明的乳酸菌而獲得的乳酸菌的處理物，只要它具有目的特性即可?？蛇x地，乳酸菌的處理物可進(jìn)行進(jìn)一步的處理。以下描述此類處理的實(shí)例。使用乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物使生乳、脫脂乳或豆乳發(fā)酵，因此可制備發(fā)酵產(chǎn)物。例如，將乳酸菌或進(jìn)行另外處理的乳酸菌接種至生乳、脫脂乳或豆乳，接著通過本領(lǐng)域已知的條件下(基本上相當(dāng)于上述培養(yǎng)乳酸菌的條件)發(fā)酵。所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物可以直接使用，或進(jìn)行另外的處理例如過濾、滅菌、稀釋或濃縮。可通過在適當(dāng)溶劑中懸浮或稀釋而將乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物制備為懸浮液或稀釋液的形式?？墒褂玫娜軇┑膶?shí)例包括水、生理鹽水和磷酸鹽緩沖液(PBS)。可使乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物滅菌，因此可制備滅菌產(chǎn)物。為了使乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物滅菌，例如，可進(jìn)行已知的滅菌處理例如過濾滅菌、放射性滅菌、過熱滅菌(superheat sterilization)或力口壓滅菌?？墒谷樗峋?xì)·胞和/或其處理物進(jìn)行熱處理，因此可制備熱處理物。為了制備此類熱處理物，對乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物進(jìn)行高溫處理(例如，在80-150°C下)約10-60分鐘(例如，約10-20分鐘)?？墒谷樗峋?xì)胞和/或其處理物破碎、研磨或粉碎，因此可制備破碎產(chǎn)物或無細(xì)胞提取物。例如，可通過物理破碎(例如，攪拌或過濾器過濾)、酶解處理、化學(xué)處理或自我分解處理等進(jìn)行此類處理。使用適當(dāng)?shù)乃匀軇┗蛴袡C(jī)溶劑提取乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物，因此可獲得提取物。提取方法并不特別限定，只要它是使用水性溶劑或有機(jī)溶劑作為提取溶劑的提取方法即可。然而，此類方法的實(shí)例為已知方法例如包括使乳酸菌或其處理物(通過乳酸菌的另外處理而制備)浸入水性溶劑或有機(jī)溶劑(例如，水、甲醇或乙醇)中并將其在溶劑中攪拌或回流的方法。另外，可經(jīng)干燥將乳酸菌細(xì)胞和/或其處理物加工成粉狀產(chǎn)物(粉末)或粒狀產(chǎn)物的形式。干燥方法的具體實(shí)例包括，但不特別限于噴霧干燥、轉(zhuǎn)鼓干燥、真空干燥和凍干，其可單獨(dú)或組合使用。在干燥時，可根據(jù)需要添加通常使用的賦形劑。本發(fā)明的乳酸菌也可以是濕的細(xì)菌細(xì)胞或干的細(xì)菌細(xì)胞。可在適當(dāng)情況下單獨(dú)或組合使用上述處理的實(shí)例。本發(fā)明中，此類處理物可以與乳酸菌相似的方式使用。上述獲得的乳酸菌和/或處理物可單獨(dú)或連同其他成分作為組合物用于從動物乳生產(chǎn)氨基酸和/或肽。具體地，本發(fā)明提供用于生產(chǎn)氨基酸和/或肽的組合物，其含有至少一種屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌。本發(fā)明的組合物通過使動物乳發(fā)酵能夠生產(chǎn)25 μ mol/ml以上、優(yōu)選30 μ mol/ml以上的游離氨基酸。優(yōu)選15%以上的所生產(chǎn)的游離氨基酸為支鏈氨基酸?？蛇x地或另外地，本發(fā)明的組合物通過使動物乳發(fā)酵能夠生產(chǎn)8.5mg/ml以上、優(yōu)選10mg/ml以上的肽?？蛇x地或另外地，本發(fā)明的組合物通過使動物乳發(fā)酵能夠生產(chǎn)總量為260μ g/ml以上、優(yōu)選280 μ g/ml并更優(yōu)選300 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽?？蛇x地或另外地，在通過使動物乳在30-34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，本發(fā)明的組合物生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。本發(fā)明的組合物包括上述乳酸菌和/或其處理物作為活性成分。具體地，所述組合物可包含I種類型的乳酸菌和/或其處理物、多種不同的乳酸菌和/或處理物、或多種經(jīng)不同處理的乳酸菌的處理物的組合。另外，本發(fā)明的組合物優(yōu)選包括至少IXlO7個乳酸菌細(xì)胞/ml。此外，本發(fā)明的組合物可單獨(dú)或組合地補(bǔ)充有除作為活性成分的乳酸菌之外的本領(lǐng)域已知的添加劑和賦形劑，只要它們不抑制目的作用即可。本發(fā)明的組合物還可包括促進(jìn)乳酸菌發(fā)酵的添加劑(例如，谷氨酸和糖如葡萄糖)。本發(fā)明的組合物的形式并不特別限定，并且可將其制劑成懸浮液、顆粒、粉末或膠囊等。本發(fā)明的組合物中活性成分(乳酸菌)的含量根據(jù)其形式不同，作為乳酸菌的量，通常在0.0001質(zhì)量％至99質(zhì)量％、優(yōu)選0.001質(zhì)量％至80質(zhì)量％、更優(yōu)選0.001質(zhì)量％至75質(zhì)量％的范圍內(nèi)。本發(fā)明的組合物中含有約IO7個細(xì)胞/g至約IO12個細(xì)胞/g 的乳酸菌。通過使用本發(fā)明的乳酸菌或組合物使動物乳發(fā)酵來獲得含有高濃度氨基酸和/或肽的發(fā)酵乳組合物。因此，本發(fā)明提供通過使用至少一種屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌使動物乳發(fā)酵所獲得并包含至少一種以下(a)至(d)的成分的發(fā)酵乳:(a) 25 μ mol/ml以上、優(yōu)選30 μ mol/ml的游離氨基酸(優(yōu)選游離氨基酸的15%以上為支鏈氨基酸)；(b)8.5mg/ml 以上、優(yōu)選 10mg/ml 以上的肽；(c)總量為260 μ g/ml以上、優(yōu)選280 μ g/ml以上、更優(yōu)選300 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和(d)在發(fā)酵乳的酸度單位下，在以VPP的換算量計時為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽?？墒褂帽景l(fā)明的乳酸菌或組合物根據(jù)本領(lǐng)域已知方法通過發(fā)酵來制備本發(fā)明的發(fā)酵乳?？赏ㄟ^將至少一種乳酸菌添加至動物乳然后在適當(dāng)?shù)臈l件將其培養(yǎng)來進(jìn)行發(fā)酵。作為動物乳，可使用哺乳動物來源的乳例如牛乳、山羊乳和馬乳，或加工乳例如脫脂乳、復(fù)原乳(reconstituted milk)或煉乳。具體地，可使用I種類型的乳或可使用多種類型的乳與加工乳的組合。乳的固形物濃度并不特別限定。例如，當(dāng)使用脫脂乳時無脂乳的固形物濃度在大約3質(zhì)量％至15質(zhì)量％、優(yōu)選6質(zhì)量％至15質(zhì)量％的范圍內(nèi)?？墒箘游锶樵诎l(fā)酵前滅菌?？蓪⒋龠M(jìn)乳酸菌發(fā)酵的添加劑(例如，谷氨酸或糖如葡萄糖)添加至動物乳。可選地，從動物乳中分離乳蛋白質(zhì)成分，然后可使用此類乳蛋白質(zhì)成分作為底物進(jìn)行發(fā)酵。作為添加至動物乳的乳酸菌，預(yù)培養(yǎng)的乳酸菌優(yōu)選用作起子(starter)。同樣，添加的乳酸菌的量并不限定，換算為干乳酸菌細(xì)胞通常在0.005質(zhì)量％至10質(zhì)量％、優(yōu)選0.05質(zhì)量％至5質(zhì)量％的范圍內(nèi)。本文中使用的乳酸菌可以是完整的乳酸菌培養(yǎng)物、經(jīng)過濾或離心從培養(yǎng)基分離到的乳酸菌，或從培養(yǎng)基分離之后保存的冷凍的或凍干的乳酸菌。發(fā)酵條件幾乎與如上所述的培養(yǎng)乳酸菌的相同。在20°C至50°C、優(yōu)選25°C至42°C并更優(yōu)選28°C至37°C并在厭氧條件下進(jìn)行發(fā)酵。另外，稍后描述的實(shí)施例中，本發(fā)明的乳酸菌在30°C至34°C (約32°C)下生產(chǎn)特別高量的支鏈氨基酸和功能性肽。因此，特別優(yōu)選在30°C至34°C下進(jìn)行發(fā)酵?？墒褂煤銣夭?、覆套式加熱器或夾套等來調(diào)整溫度條件。發(fā)酵可以靜置培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)或槽式培養(yǎng)的形式進(jìn)行。此外，發(fā)酵時間可在3小時至96小時并優(yōu)選12至36小時的范圍內(nèi)。優(yōu)選在發(fā)酵罐內(nèi)測定pH與酸度并保持pH在4.0至8.0時進(jìn)行發(fā)酵?？商幚砣缟纤霁@得的發(fā)酵乳或可進(jìn)一步處理發(fā)酵乳的處理物，只要它包含所期望的成分即可。以下描述此類處理的實(shí)例。將發(fā)酵乳和/或其處理物懸浮或稀釋于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，因此可制備懸浮液或稀溶液?？墒褂玫娜軇┑膶?shí)例包括水、生理鹽水和磷酸鹽緩沖液(PBS)。將發(fā)酵乳和/或其處理物滅菌，因此可制備滅菌產(chǎn)物。可通過已知的滅菌方法例如過濾滅菌、放射性滅菌、過熱滅菌和加壓滅菌使發(fā)酵乳和/或其處理物滅菌。使發(fā)酵乳和/或其處理物進(jìn)行熱處理，因此可制備熱處理物。進(jìn)行高溫處理(例如，80°C至150。。) 一定時間例如約10-60分鐘(例如，約10-20分鐘)以制備此類熱處理物。此外，將發(fā)酵乳和/或其處理物過濾或離心，因此可制備其上清液(乳清)。此外，使發(fā)酵乳和/或其處理物干燥以便獲得粉狀產(chǎn)物(粉末)或粒狀產(chǎn)物。具體的干燥方法的實(shí)例包括，但不特別限于噴霧干燥、轉(zhuǎn)鼓干燥、真空干燥和冷凍干燥?？蓡为?dú)使用此類干燥方法，或可組合·使用這些方法。此時，還可根據(jù)需要添加通常使用的賦形劑。可在適當(dāng)情況下單獨(dú)或組合使用上述處理的實(shí)例。本發(fā)明還包括此類發(fā)酵乳的處理物。本發(fā)明的發(fā)酵乳或其處理物包含高濃度的各種氨基酸和/或肽，因此它可用于使用氨基酸和/或肽的特性的應(yīng)用。例如，氨基酸涉及風(fēng)味、能源、安定作用和生長促進(jìn)作用等，因此本發(fā)明的發(fā)酵乳可用作風(fēng)味改善劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑或能量補(bǔ)充劑。此外，包括纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸基的支鏈氨基酸(BCAA)是必需氨基酸并可用于增加肌力或防止身體疲勞。此外，認(rèn)為在肝臟中進(jìn)行分解反應(yīng)是由于丙胺酸(Ala)的存在。此外。已知Ala誘導(dǎo)鮮味的味覺(即，良好的味道和風(fēng)味)并具有世耐爾與蘇耐爾效果(降低咸和酸的味覺的效果)和掩蔽辛辣味的效果。據(jù)說賴氨酸(Lys)是必需氨基酸之中最容易缺乏的氨基酸。Lys應(yīng)作為例如抗體、激素或酶等的原材料被攝取。還報道了 Lys還參與鈣吸收、膠原形成和骨組織生產(chǎn)。絲氨酸(Ser)作為體內(nèi)各種重要物質(zhì)例如磷脂酰絲氨酸及其他氨基酸的前體是重要的。還已知Ser通過腦內(nèi)神經(jīng)元的活化等來抑制血膽固醇水平和腦細(xì)胞死亡的減少，由此防止腦老化并用作皮膚保濕成分。因此，本發(fā)明的發(fā)酵乳或其處理物可用作風(fēng)味改善劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、能量補(bǔ)充劑、腦功能改善劑、自主神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、副交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、肌肉分解和肌肉損傷抑制劑、肌肉增強(qiáng)劑、疲勞減輕劑、耐久性改善劑或醇代謝劑等。此外，所述VPP肽和IPP肽具有ACE抑制活性和放松的效果。具體地，LPP肽具有ACE抑制活性，YP肽具有降血壓作用和抗焦慮作用，以及VP、IP、AP、EP、RP、QP、TP、MP和GP肽是生物不可降解的且具有ACE抑制活性。因此，本發(fā)明的發(fā)酵乳或其處理物可用作降血壓藥或壓力緩解劑。使用已知的分離和/或純化方法從由此獲得的發(fā)酵乳或其處理物純化各種氨基酸和/或肽成分，或者含有這些成分的級分。本發(fā)明的發(fā)酵乳或其處理物包含至少一種上述(a)至(d)成分中的成分(例如，氨基酸和肽)，或可包含多種成分的組合。同樣，發(fā)酵乳或其處理物可包含用于發(fā)酵的乳酸菌。同樣，本發(fā)明的組合物可單獨(dú)或組合地補(bǔ)充添加劑、另外已知的降血壓藥、壓力緩解劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、能量補(bǔ)充劑、肌肉增強(qiáng)劑或風(fēng)味改善劑等，只要所述目的作用不受抑制即可。本發(fā)明的發(fā)酵乳的劑型包括，但并不特別限于懸浮劑(發(fā)酵后獲得的完整的發(fā)酵乳)和通過本領(lǐng)域已知技術(shù)處理并獲得的片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、粉劑、糖漿劑與干糖漿劑。所述發(fā)酵乳優(yōu)選便于經(jīng)口施用或攝取的劑型。另外，液體制劑例如懸浮劑在施用或攝取之前可立即懸浮于水或另外的適當(dāng)媒介中。當(dāng)所述發(fā)酵乳形成片劑或顆粒劑時，可通過已知方法在表面上包衣?？筛鶕?jù)常規(guī)方法通過摻入通常使用的添加劑例如賦形劑、崩解劑、粘結(jié)劑、濕潤劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑、甜味劑、風(fēng)味劑(flavoring agent)、芳香齊U、酸化劑和著色劑來 生產(chǎn)上述劑型的發(fā)酵乳。例如，在所述發(fā)酵乳用于藥品或促進(jìn)健康的情況下，可將藥物學(xué)可接受載體或添加劑摻入到通過發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳中。此類藥物學(xué)可接受載體和添加劑的實(shí)例包括水、藥物學(xué)可接受有機(jī)溶劑、膠原、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯燒酮、聚羧乙烯(carboxyvinyl polymer)、海藻酸鈉、水溶性右旋糖酐、水溶性糊精、羧甲基淀粉鈉、果膠、黃原膠、阿拉伯膠、酪蛋白、明膠、瓊脂、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蠟、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白、甘露醇、山梨醇、乳糖和可接受的作為藥物學(xué)添加劑的表面活性劑。另外，本發(fā)明的發(fā)酵乳可進(jìn)一步包含多種用于生產(chǎn)藥品、飲食品或飼料的添加劑以及其他各種物質(zhì)。此類物質(zhì)和添加劑的實(shí)例包括多種油脂(例如,植物油例如豆油、玉米油、紅花油和橄欖油，和動物油脂例如牛脂或沙丁魚油)、草藥(例如，蜂王漿和人參(ginseng))、氨基酸(例如，谷氨酰胺、半胱氨酸、亮氨酸和精氨酸)、多元醇(例如，乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、甘油和糖醇例如山梨糖醇、赤蘚醇、木糖醇、麥芽糖醇和甘露醇)、天然聚合物(例如，阿拉伯膠、瓊脂、水溶性玉米纖維、明膠、黃原膠、酪蛋白、谷蛋白或谷蛋白水解物、卵磷脂、淀粉和糊精)、維生素(例如，維生素C和維生素B族)、礦物質(zhì)(例如，鈣、鎂、鋅和鐵)、膳食纖維(例如，甘露聚糖、果膠和半纖維素)、表面活性劑(例如，脂肪酸的甘油酯和脂肪酸的山梨聚糖酯)、純水、賦形劑(例如，葡萄糖、玉米淀粉、乳糖和糊精)、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑、甜味劑、風(fēng)味劑、酸化劑、著色劑和芳香劑。另外，除上述活性成分之外，可將功能性成分或添加劑摻入到本發(fā)明的發(fā)酵乳中。其實(shí)例包括牛磺酸、谷胱甘肽、肉毒堿、肌酸、輔酶Q、葡糖醛酸、葡糖醛酸內(nèi)酯、辣椒提取物、姜提取物、可可提取物、瓜拉那提取物、藤黃屬植物提取物、茶氨酸、Y -氨基丁酸、辣椒素、辣椒素酯(capsiate)、各種有機(jī)酸、類黃酮、多酚、兒茶素、黃嘌呤衍生物、難消化的寡糖如低聚果糖(fructooligosaccharide)和聚乙烯卩比咯燒酮。此類添加劑的摻入量可依據(jù)添加劑的類型和所期望的攝取量而適當(dāng)?shù)卮_定。施用或攝取本發(fā)明的發(fā)酵乳的受試者可為脊椎動物。其具體實(shí)例包括哺乳動物例如人、靈長類(例如，猴子和黑猩猩)、家畜動物(例如，牛、馬、豬、羊和鳥)、寵物動物(例如，狗和貓)和實(shí)驗(yàn)動物(例如，小鼠和大鼠)。另外，此類受試者可為爬蟲動物和鳥類。特別優(yōu)選那些期望攝取氨基酸和/或肽的受試者，例如高血壓患者、具有壓力誘發(fā)癥狀(stress-1nduced symptoms)的人和運(yùn)動前后的人。
本發(fā)明的發(fā)酵乳的施用或攝取劑量根據(jù)受試者的年齡和體重、施用/攝取途徑、施用/攝取劑量的次數(shù)和施用目的等而不同，并可由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員自由裁量而廣泛變化以達(dá)到所期望的效果。發(fā)酵乳中活性成分的含量并不特別限定，并可根據(jù)例如易于生產(chǎn)的程度和優(yōu)選的每日劑量而適當(dāng)?shù)卣{(diào)整。本發(fā)明的發(fā)酵乳是十分安全的，且因此還可增加攝取劑量。每日劑量可以一次劑量攝取，或可將其分為多次劑量來攝取。另外，施用或攝取的頻率并不特別限定，并可根據(jù)各種條件例如施用/攝取途徑、受試者的年齡和體重以及所期望的效果而適當(dāng)?shù)剡x擇。本發(fā)明的發(fā)酵乳的施用/攝取途徑并不特別限定，并優(yōu)選經(jīng)口施用或經(jīng)口攝取。例如，將發(fā)酵乳摻入到飲食品或飼料中或制成片劑或顆粒劑等，并因此可經(jīng)口施用或攝取。本發(fā)明的發(fā)酵乳可與其他的藥品、治療方法或預(yù)防方法等組合使用?？蓪⒋祟惼渌乃幤泛捅景l(fā)明的發(fā)酵乳制成單一制劑?？蛇x地，可將它們制成單獨(dú)的制劑以便同時或間隔施用。如上所述，本發(fā)明的發(fā)酵乳可用作降血壓藥、腦功能改善劑、自主神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、副交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、能量補(bǔ)充劑、肌肉分解和肌肉損傷抑制劑、肌肉增強(qiáng)劑、疲勞減輕劑、耐久性改善·劑、風(fēng)味改善劑或醇代謝劑等。本發(fā)明的乳酸菌和發(fā)酵乳是十分安全的，并因此容易用于長期持續(xù)的攝取。因此，本發(fā)明的乳酸菌和發(fā)酵乳還可用于飲食品和飼料。本發(fā)明的乳酸菌生產(chǎn)大量的具有各種功能的氨基酸和/或肽。另外，本發(fā)明的發(fā)酵乳包含高濃度的此類氨基酸和/或肽。此外，本發(fā)明的乳酸菌顯示出功能性肽相對于酸度的產(chǎn)量高，可抑制酸味，并且即使當(dāng)添加至各種飲食品時也并不抑制飲食品自身的風(fēng)味。因此，本發(fā)明的乳酸菌和發(fā)酵乳被添加至各種飲食品，可持續(xù)攝取，并因此期望顯示各種效果。因此，本發(fā)明的飲食品包含至少一種本發(fā)明的乳酸菌和/或其處理物、和/或本發(fā)明的發(fā)酵乳和/或其處理物。本發(fā)明中，本發(fā)明的飲食品的實(shí)例還包括飲料(beverages)。除促進(jìn)健康的保健飲食品、功能性飲食品和借助于氨基酸和/或肽的特殊保健用途的飲食品之外，本發(fā)明的飲食品的實(shí)例包括可將本發(fā)明的乳酸菌和發(fā)酵乳摻入其中的所有飲食品。功能性飲食品特別優(yōu)選作為本發(fā)明的飲食品。本發(fā)明的術(shù)語“功能性飲食品”是指對生物體具有預(yù)定功能的飲食品，并包括，例如所謂的一般保健飲食品(例如，包括特殊保健用途的飲食品(包括合格的F0SHU[g卩，特殊保健用途食品])的具有健康聲明的飲食品和具有營養(yǎng)功能聲明的飲食品)、特殊膳食用途的飲食品、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、健康補(bǔ)充劑、補(bǔ)充劑(例如，具有多種劑型如片劑、包衣片劑、糖衣片劑、膠囊劑和液劑的那些)和美容飲食品(例如，減肥飲食品)。飲食品的具體實(shí)例包括劑型為例如流質(zhì)飲食(例如，管腸內(nèi)營養(yǎng)補(bǔ)充劑)、片劑糖果、片劑、咀嚼片、片劑、粉劑、散劑、膠囊劑、顆粒劑和滋補(bǔ)飲料等的健康飲食品和營養(yǎng)補(bǔ)充劑；茶飲料例如綠茶、烏龍茶和紅茶；飲品(drinks)或飲料例如軟飲料、果凍飲料、等滲飲料、乳飲料、碳酸飲料、蔬菜飲料、果汁飲料、發(fā)酵蔬菜飲料、發(fā)酵果汁飲料、發(fā)酵乳飲料、發(fā)酵乳(例如，飲用酸奶和固體酸奶)、發(fā)酵乳飲料(已滅菌的)、乳酸菌飲料、濃縮飲料、濃縮固形物、乳飲料(例如，咖啡乳)、含有飲料粉末的飲料、可可飲料、乳和純水；涂抹調(diào)味品(spreads)例如黃油、果醬、干調(diào)味品和人造奶油；蛋黃醬；起酥油(shortening);乳蛋糕乳脂；敷料劑(dressings);面包；米飯；面條；意大利面；味增湯；豆腐；酸奶；湯或醬油；和甜食(例如，餅干和曲奇、巧克力、糖果、蛋糕、冰淇淋、口香糖和糖片)?？赏ㄟ^摻入除本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳以外的用于生產(chǎn)上述飲食品的其他食物原料、各種營養(yǎng)物、各種維生素、礦物質(zhì)、膳食纖維和各種添加劑(例如，呈味成分(taste components)、甜味劑、酸化劑例如有機(jī)酸、穩(wěn)定劑和香料)，根據(jù)常規(guī)方法生產(chǎn)本發(fā)明的飲食品。對于本發(fā)明的飲食品，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可鑒于飲食品的形式和所需的味道或口感適當(dāng)?shù)卮_定乳酸菌、發(fā)酵乳或其處理物的摻入量。通過以允許管理本發(fā)明的飲食品的期望攝取量的形式消耗本發(fā)明的飲食品，例如，可提供使用所述飲食品以降低血壓、消除壓力、營養(yǎng)支持、能量補(bǔ)充、增強(qiáng)肌肉、改善腦功能、調(diào)節(jié)自主神經(jīng)、調(diào)節(jié)副交感神經(jīng)、調(diào)節(jié)交感神經(jīng)、抑制肌肉分解和損 傷、增強(qiáng)肌肉、減輕疲勞、改善耐久性或醇代謝的方法?？捎杀绢I(lǐng)域熟練技術(shù)人員通過任意可得的適當(dāng)方法生產(chǎn)本發(fā)明的飲食品。例如，本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)可以以液狀、凝膠狀、固體狀、粉末狀或粒狀制備，然后將其摻入飲食品中?？蛇x地，本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)可直接混合或溶解到飲食品的原材料中。本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)可涂布至、包衣至、浸入或噴涂至飲食品中。本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)可均勻分散或不均勻分布在飲食品中?？芍苽浜斜景l(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)的膠囊劑?？蓪⒖墒秤媚せ蚴称吠繉觿┑劝诒景l(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)的周圍?？蛇x地，可在添加適當(dāng)?shù)馁x形劑等后將本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳(處理物)制備成例如片劑等形式?？蛇M(jìn)一步加工本發(fā)明的飲食品。此類加工產(chǎn)物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的飲食品的生產(chǎn)中，可采用多種常規(guī)用于飲食品的添加劑。添加劑的實(shí)例包括，但不限于，發(fā)色劑(例如，亞硝酸鈉)、著色劑(例如，桅子色素和Redl02)、香料(例如，橙味香料)、甜味劑(例如，甜葉菊和阿斯巴甜)、防腐劑(例如，乙酸鈉和山梨酸)、乳化劑(例如，軟骨素硫酸鈉和脂肪酸丙二醇酯)、抗氧化劑(例如，EDTA 二鈉和維生素C)、pH調(diào)節(jié)劑(例如，檸檬酸)、化學(xué)調(diào)味品(例如，肌苷酸鈉)、增稠劑(例如，黃原膠)、膨脹劑(例如，碳酸鈣)、消泡劑(例如，磷酸鈣)、粘結(jié)劑(例如，聚磷酸鈉)、營養(yǎng)強(qiáng)化劑(nutrition-enriching agent)(例如，韓強(qiáng)化劑和維生素A)和賦形劑(例如，水溶性糊精)?？蛇M(jìn)一步添加功能性原料例如人參(Panax ginseng)提取物、刺五加(Acanthopanaxsenticosus)提取物、桉樹提取物或杜仲茶提取物。如上所述，本發(fā)明的飲食品具有由氨基酸和/或肽引起的各種功能并且十分安全，但無需考慮副作用。另外，本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳可抑制酸度，具有良好的風(fēng)味，并且當(dāng)添加至各種飲食品時不抑制飲食品的風(fēng)味。所獲得的飲食品可容易地用于長期持續(xù)的攝取以期望長期發(fā)揮各種功能。另外，本發(fā)明的乳酸菌和/或發(fā)酵乳不僅可以摻入到人類用飲食品中，而且還可以摻入到動物例如家畜(例如，牛和豬)、賽馬和寵物(例如，狗和貓)用飼料中。飼料除了給予非人類受試者以外基本上相當(dāng)于飲食品。因此，飲食品的以上描述可做必要的修正而適用于飼料。實(shí)施例以下，參考下列實(shí)施例更詳細(xì)描述本發(fā)明，但是本發(fā)明不限于所述實(shí)施例。
[實(shí)施例1]瑞士乳桿菌CP3232菌株的鑒定培育瑞士乳桿菌CM4菌株(登錄號FERM BP-6060)。從源自所述CM4菌株的突變株獲得顯示如實(shí)施例2至5所述特性的新的瑞士乳桿菌CP3232菌株。將所述瑞士乳桿菌CP3232菌株在37°C下在MRS瓊脂培養(yǎng)基中厭氧培養(yǎng)24小時，然后檢查所得菌落的形態(tài)學(xué)上觀察到的特性和其生理特性等。此外，測定16S rRNA序列并證實(shí)與另外的瑞士乳桿菌菌株(模式株)具有99.9%的同源性。因此，揭示由此獲得的菌株明確地屬于瑞士乳桿菌并且為新菌株。[實(shí)施例2]發(fā)酵乳的制備通過將溫度增加至95°C，將9.00%(w/w)的復(fù)原脫脂奶粉滅菌，然后冷卻至15°C。所得物用作乳培養(yǎng)基。將含有乳酸菌(5%)的發(fā)酵乳添加至該乳培養(yǎng)基中(用于接種)，接著在37°C培養(yǎng)24小時。重復(fù)此步驟，然后將由此獲得的發(fā)酵乳用作起子。將該起子(3%)添加至乳培養(yǎng)基，然后在32°C或37°C下培養(yǎng)24小時。測定該發(fā)酵乳的pH和酸度。使用平沼(Hiranuma)自動滴定器 C0MTITE-450 (Hiranuma Sangyo C0.，Ltd.)測定酸度。使用作為乳酸菌的瑞士乳桿菌CP3232菌株和對比用瑞士乳桿菌CP3264菌株(分離自市售可得的抗高血壓藥品)、瑞士乳桿菌CM4菌株(登錄號FERM BP-6060)、瑞士乳桿菌CP1092菌株、瑞士乳桿菌CPllOO菌株、瑞士乳桿菌CP1081菌株及瑞士乳桿菌CPN4菌株(JP公開專利(特開平)H7-123977A (1995))。結(jié)果示于表I。因?yàn)閱挝恢亓縄PP的ACE抑制活性是VPP的1.7倍，所以通過下式根據(jù)VPP的換算量來計算IPP和VPP的量:VPP 換算量(U g/ml) =IPP 的量(u g/ml) X 1.7+VPP 的量(U g/ml)另外，術(shù)語“酸度”是指發(fā)酵乳中含有的酸(乳酸)的濃度。如表I所示，在通過用瑞士乳桿菌CP3232菌株使乳發(fā)酵而獲得發(fā)酵乳的情況下，相對于所產(chǎn)乳酸的量(即，所述酸度)的IPP和VPP肽的量在以VPP的換算量計時為6.2mg/g，表明相對于酸度的肽量高。用1.02作為發(fā)酵乳的比重進(jìn)行計算。[表 I]酸度單位下的LTP (IPP和VPP)的量(VPP換算量)
權(quán)利要求
1.一種屬于瑞士乳桿菌的乳酸菌，其具有以下(a)至(d)特性的至少一種: (a)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25ym0l/ml以上的游離氨基酸； (b)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)8.5mg/ml以上的肽； (c)通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總量為260μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和 (d)在通過使動物乳在30-34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸菌，其中15%以上的所述游離氨基酸為支鏈氨基酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳酸菌，其以60μ g/ml以上的量生產(chǎn)YP肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的乳酸菌，其為瑞士乳桿菌CM4菌株(登錄號FERMBP-6060)的突變株。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的乳酸菌，其為瑞士乳桿菌CP3232菌株(登錄號FERM BP-11271)或其突變株。
6.一種瑞士乳桿菌CP3232菌株(登錄號FERM BP-11271)。
7.一種用于由動物乳生產(chǎn)氨基酸和/或肽的組合物，其包括屬于瑞士乳桿菌的至少一種乳酸菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25μ mol/ml以上的游離氨 基酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述游離氨基酸的15%以上為支鏈氨基酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9任一項(xiàng)所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵以8.5mg/ml以上的量生產(chǎn)肽。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10任一項(xiàng)所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總量為260 μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽。
12.根據(jù)權(quán)利要求7至11任一項(xiàng)所述的組合物，其通過使動物乳發(fā)酵以60yg/ml以上的量生產(chǎn)YP肽。
13.根據(jù)權(quán)利要求7至12任一項(xiàng)所述的組合物，在通過使動物乳在30-34°C下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，其生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。
14.根據(jù)權(quán)利要求7至13任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述乳酸菌為權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的乳酸菌。
15.一種發(fā)酵乳，其通過用屬于瑞士乳桿菌的至少一種乳酸菌使動物乳發(fā)酵而獲得并包含以下(a)至⑷成分的至少一種: (a)25 μ mol/ml以上的游離氨基酸； (b)8.5mg/ml以上的肽； (c)總計為260μ g/ml以上的XP肽和/或XPP肽；和 (d)在酸度單位下，當(dāng)以VPP的換算量計時為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的發(fā)酵乳，其包括屬于瑞士乳桿菌的至少一種乳酸菌。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的發(fā)酵乳，其包括權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的至少一種乳酸菌。
18.根據(jù)權(quán)利要求15至17任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其中所述游離氨基酸的15%以上為支鏈氨基酸。
19.根據(jù)權(quán)利要求15至18任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其包括60μ g/ml以上的YP肽。
20.根據(jù)權(quán)利要求15至19任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其中在30-34°C的溫度下進(jìn)行所述發(fā)酵。
21.根據(jù)權(quán)利要求15至20任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳，其用于降血壓藥、腦功能改善劑、自主神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、副交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、交感神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、能量補(bǔ)充劑、肌肉分解與肌肉損傷抑制劑、肌肉增強(qiáng)劑、疲勞減輕劑、耐久性改善劑、風(fēng)味改善劑或醇代謝劑。
22.—種飲食品，其包括權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的至少一種乳酸菌和/或其處理物、和/或權(quán)利要求15至21任一項(xiàng)所述的發(fā)酵乳和/或其處理物。
23.一種氨基酸和/或肽的生產(chǎn)方法，其包括使用權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的至少一種乳酸菌或權(quán)利要求7至14任一項(xiàng)所述的組合物使動物乳或乳蛋白質(zhì)發(fā)酵，然后從所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物中收集氨基酸和/或肽。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述氨基酸為支鏈氨基酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中所述肽為選自由XP肽和/或XPP肽組成的組的至少一 種肽。
26.根據(jù)權(quán)利要求23至25任一項(xiàng)所述的方法，其中在30-34°C的溫度下進(jìn)行所述發(fā)酵。
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有高蛋白質(zhì)水解活性并因此具有極好的肽生產(chǎn)能力和/或氨基酸生產(chǎn)能力的乳酸菌。本發(fā)明還提供含有高濃度氨基酸和/或肽并具有良好風(fēng)味的發(fā)酵乳。具體地，本發(fā)明提供一種屬于瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)屬的乳酸菌，其特征在于具有以下(a)-(d)特性的至少一種。(a)所述乳酸菌通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)25μmol/ml以上的游離氨基酸。(b)所述乳酸菌通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)8.5mg/ml以上的肽。(c)所述乳酸菌通過使動物乳發(fā)酵生產(chǎn)總量為260μg/ml以上的XP肽和/或XPP肽。(d)在通過使動物乳在30-34℃下發(fā)酵所獲得的發(fā)酵乳的酸度單位下，生產(chǎn)以VPP的換算量計為6.0mg/g以上的IPP和VPP肽。
文檔編號C12N15/00GK103221531SQ201180054138
公開日2013年7月24日 申請日期2011年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月9日
發(fā)明者若井丈人, 畑中美咲, 中村康則, 山本直之 申請人:可爾必思株式會社