專利名稱：能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于ー種微生物溶液的制備方法，具體為能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法。用該微生物溶液水解結(jié)合型膽汁酸變?yōu)楗I(yè)上需要的游離型膽汁酸。
背景技術(shù)：
各種動物膽汁中都存在著與甘氨酸和牛磺酸結(jié)合的膽汁酸鹽，一直以來，人們分離エ業(yè)和醫(yī)藥膽汁酸單體都是首先用高濃度的NaoH，在長時間高溫或高壓條件下，水解結(jié)合型膽汁酸變?yōu)橛坞x型膽汁酸，如曹榮安、李良玉、劉妍妍、范淼、張麗萍發(fā)表的“豬膽汁中 膽酸皂化工藝研究”(見《食品科技》2009年第11期)。尋找ー種溫和、安全的水解方法，是水解結(jié)合型膽汁酸變?yōu)橛坞x型膽汁酸的發(fā)展方向。已有文獻(xiàn)還表明，膽汁酸是膽汁的重要成分，在脂肪代謝中起著重要作用。膽汁酸主要存在于腸肝循環(huán)系統(tǒng)并通過再循環(huán)起一定的保護(hù)作用。只有ー少部分膽汁酸進(jìn)入外圍循環(huán)。促進(jìn)膽汁酸腸肝循環(huán)的動力是肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)一吸收膽汁酸并將其分泌入膽汁、縮膽囊素誘導(dǎo)的膽囊收縮、小腸的推進(jìn)蠕動，回腸黏膜的主動運(yùn)輸及血液向門靜脈的流入。膽汁酸在腸中通過兩種機(jī)理被機(jī)體重新吸收。進(jìn)餐后，膽囊在胰酶分泌素作用下發(fā)生收縮。在收縮過程中，膽囊的作用像馬達(dá)，驅(qū)動腸肝循環(huán)。通常情況下，在進(jìn)餐消化后30分鐘內(nèi)，十二指腸中的膽汁酸濃度急劇升高。在腸道中，各種形式的膽汁酸充分發(fā)揮各自的生理功能，并再次決定了自身的命運(yùn)。腸道上段膽汁酸與脂類的消化吸收有夫。腸道下段(即回腸及近側(cè)結(jié)腸)膽汁酸自身發(fā)生變化在腸內(nèi)微生物作用下發(fā)生轉(zhuǎn)化，并在腸黏膜中大部分以原來的或轉(zhuǎn)化的形式按主動運(yùn)輸或被動運(yùn)輸機(jī)理被重新吸收。只有一小部分隨食物殘?jiān)懦鲶w外。膽汁酸鹽極性越差，越容易與未吸收的纖維素或微生物結(jié)合，也越容易通過被動擴(kuò)散被吸收。腸內(nèi)微生物主要集中在回腸內(nèi)容物及大腸內(nèi)容物中。所述內(nèi)容物主要指腸內(nèi)待排泄物。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明拋開了常規(guī)的用NaoH皂化結(jié)合型膽汁酸的エ藝，依據(jù)膽汁酸在動物體內(nèi)屬于腸肝循環(huán)的原理，采用ー種有效方法，從腸內(nèi)內(nèi)容物中提取出能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的基本思路是依據(jù)膽汁酸在動物體內(nèi)屬于腸肝循環(huán)的原理，取動物回腸內(nèi)容物及大腸內(nèi)容物來培養(yǎng)提取其中的微生物，進(jìn)而來水解結(jié)合型膽汁酸變成游離型膽汁酸。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法，其特征是取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積O. 5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入O. 1-0. 5倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在35_42°C，培養(yǎng)24_72小吋，
得培養(yǎng)液；用離心機(jī)分離培養(yǎng)液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。本發(fā)明中，所述內(nèi)容物主要指腸內(nèi)待排泄物。MRS為(肉湯)培養(yǎng)基。
本發(fā)明的有益效果是，這種微生物溶液能水解結(jié)合型膽汁酸變?yōu)楗I(yè)上需要的游離型膽汁酸。進(jìn)而還可以從鴨膽汁中用大孔樹脂等方法分離其中的鵝去氧膽酸(CDCA)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)ー步說明。但本發(fā)明的應(yīng)用范圍不限于下列實(shí)施例。實(shí)施例I :取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積O. 5倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入O. I倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在42°C，培養(yǎng)72小時，得培養(yǎng)液；用離心機(jī)以5000r/min離心15min,沉淀培養(yǎng)液,得到沉淀物； 加沉淀物重量80倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實(shí)施例2 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積3倍的水稀釋混勻，用過濾機(jī)過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入O. 2倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在40°C，培養(yǎng)70小時，得培養(yǎng)液；用離心機(jī)以3000r/min離心18min,沉淀培養(yǎng)液,得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實(shí)施例3:取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積6倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入O. 2倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在38°C，培養(yǎng)60小時，得培養(yǎng)液；用離心機(jī)以4000r/min離心16min,沉淀培養(yǎng)液,得到沉淀物；加沉淀物重量90倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實(shí)施例4 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積6倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入O. 4倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在36°C，培養(yǎng)72小時，得培養(yǎng)液；用離心機(jī)以6000r/min離心IOmin,沉淀培養(yǎng)液,得到沉淀物；
加沉淀物重量20倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實(shí)施例5 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積3倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入O. 26倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在38°C，培養(yǎng)42小時，得培養(yǎng)液；用離心機(jī)以4000r/min離心15min,沉淀培養(yǎng)液,得到沉淀物；加沉淀物重量5倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。
權(quán)利要求
1.一種能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法，其特征是 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物； 在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積O. 5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液； 按濾液體積加入O. 1-0. 5倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在35-42°C，培養(yǎng)24-72小時，得培養(yǎng)液； 用離心機(jī)分離培養(yǎng)液，得到沉淀物； 加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液； 常溫保存微生物溶液，備用。
全文摘要
一種能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法，其特征是取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內(nèi)容物；在刮出的內(nèi)容物中，添加內(nèi)容物體積0.5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質(zhì)，得到濾液；按濾液體積加入0.1-0.5倍的MRS培養(yǎng)基，保持溫度在35-42℃，培養(yǎng)24-72小時，得培養(yǎng)液；用離心機(jī)沉淀培養(yǎng)液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結(jié)合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。這種微生物溶液能水解結(jié)合型膽汁酸變?yōu)楣I(yè)上需要的游離型膽汁酸。進(jìn)而還可以從鴨膽汁中用大孔樹脂等方法分離其中的鵝去氧膽酸(CDCA)。
文檔編號C12N1/00GK102703320SQ201210175319
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者吳憲君, 吳昱隆, 寧玉蓉, 干文冬 申請人:綿陽勁柏生物科技有限責(zé)任公司