一種沙門菌的分離選取及檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種沙門菌的分離選取和檢測方法，包括增菌、分離培養(yǎng)、挑取疑似菌落、生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定，所述挑取疑似菌落包括步驟：撥動(dòng)疑似菌落和挑取破碎菌落。該檢測方法在大規(guī)模沙門菌篩選工作中，快速識(shí)別沙門菌，大幅度減少工作量，提高工作效率。
【專利說明】—種沙門菌的分離選取及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種沙門菌的分離選取和檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]沙門菌是重要的腸道病原菌，是食物中毒和腹瀉的重要病原菌之一。
[0003]目前，檢測沙門菌主要采用傳統(tǒng)常規(guī)檢測方法、分子生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法等多種方法。傳統(tǒng)常規(guī)檢測方法:采集糞便和食品樣品進(jìn)行選擇性增菌后使用選擇性分離平板(WS、SS、BS、DHL、HE等)進(jìn)行分離，在分離平板上一般需要挑選多個(gè)疑似菌落，再對其進(jìn)行生化和血清學(xué)的鑒定。采用全自動(dòng)細(xì)菌分析儀檢測:將細(xì)菌微量生化鑒定系統(tǒng)與計(jì)算機(jī)相連接，細(xì)菌的鑒定結(jié)果由計(jì)算機(jī)來處理，并自動(dòng)報(bào)告結(jié)果，就是微生物分析儀。待檢樣品增菌后培養(yǎng)物經(jīng)過特定的處理，取一定量的處理液注入儀器檢測，檢測出的數(shù)據(jù)經(jīng)過微機(jī)處理計(jì)算，對比微機(jī)數(shù)據(jù)庫儲(chǔ)存的數(shù)據(jù)，然后判斷結(jié)果。免疫學(xué)方法有酶聯(lián)免疫法(ELISA):該方法利用抗原——抗體反應(yīng)的特異性，采用預(yù)先包被了沙門氏菌(A-E群)單克隆抗體的微量板，加入經(jīng)增菌處理的樣品，反應(yīng)后再加入顯色劑，作用完畢后用酶標(biāo)儀測定OD值來判定結(jié)果。ELISA法檢出沙門氏菌的極限范圍在IO5-1O6Cfu / ml，因此，要得出可靠的結(jié)果，檢測樣品首先必須進(jìn)行預(yù)增菌、選擇性增菌。如酶聯(lián)免疫法(ELISA)、基因芯片法、聚合酶鏈法(PCR)、Transia沙門菌卡片檢測法等，這些方法較好的解決了沙門菌檢測的特異性和敏感性問題，但是都需要昂貴的儀器設(shè)備，并且檢測成本較高，并不適合大樣本的篩查。
[0004]傳統(tǒng)的常規(guī)培養(yǎng)分離技術(shù)雖然費(fèi)時(shí)耗力，但是迄今為止不論是疾病診斷還是衛(wèi)生學(xué)評價(jià)仍然是不可缺少的重要方法，是分子生物學(xué)技術(shù)等檢驗(yàn)不能替代的。但是該方法中，在分離平板挑選疑似菌落時(shí)，大量疑似菌落的參雜需要后續(xù)的生化及血清學(xué)鑒定，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此如何減少所挑選菌落中與目標(biāo)檢測的沙門菌相似菌落的數(shù)量是目前需要解決問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對上述現(xiàn)有技術(shù)的難題，本發(fā)明的目的是提供一種沙門菌的檢測方法，減少所挑選菌落中與目標(biāo)檢測的沙門菌相似菌落的數(shù)量。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的:
[0007]一種沙門菌的分離選取方法，其特征在于，撥動(dòng)疑似菌落和挑取破碎菌落。
[0008]一種沙門菌的檢測方法，包括增菌、分離培養(yǎng)、挑取疑似菌落、生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定，其特征在于，所述挑取疑似菌落包括步驟:撥動(dòng)疑似菌落和挑取破碎菌落。
[0009]所述撥動(dòng)疑似菌落為撥動(dòng)半透明中心為黑色的菌落。
[0010]所述增菌為將標(biāo)本接種于亞硒酸鹽增菌液，35°C~37°C培養(yǎng)18~24h。
[0011]所述分離培養(yǎng)為在WS瓊脂平板上35°C~37°C培養(yǎng)18~24h。
[0012]本發(fā)明所提供的技術(shù)方案，提高了常規(guī)分離培養(yǎng)基WS平板上沙門菌疑似菌落的識(shí)別率，以減少假陽性菌落數(shù)量以減少后續(xù)不必要的繁瑣的鑒定工作。在沙門菌檢測工作中，掘棄大量假陽性，有利于準(zhǔn)確檢測真正的沙門菌。本方法在傳統(tǒng)培養(yǎng)基WS平板上，使用特殊識(shí)別方法挑選疑似沙門菌特征明顯、方法簡單、容易辨認(rèn)、特異性高。在大規(guī)模沙門菌篩選工作中，快速識(shí)別沙門菌，大幅度減少工作量，提高工作效率，快速檢出沙門菌。腸道帶菌沙門菌檢測從傳統(tǒng)的4-7天,減少到2-3天。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不作為對本發(fā)明的限定。
[0014]取糞便標(biāo)本0.5~Ig接種于IOml亞硒酸鹽增菌液(SF增菌液)35°C~37°C培養(yǎng)18~24h，用接種環(huán)挑取增菌液接種于選擇性培養(yǎng)基(WS瓊脂平板)上，35°C~37°C培養(yǎng)18~24h，從WS瓊脂平板上，用接種針撥動(dòng)中心黑色的可疑菌落，并挑取撥動(dòng)后破碎的菌落進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定。生化試驗(yàn):挑取可以菌落移種于克氏雙糖，并作氧化酶、硝酸鹽、KCN、賴氨酸試驗(yàn)；或移種于沙門菌生化鑒定板；或使用微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。符合沙門菌生化反應(yīng)的再做血清學(xué)試驗(yàn)；血清學(xué)鑒定依據(jù)沙門菌0血清決定群，再用H因子血清第I相和第2相試驗(yàn)結(jié)果綜合判定其所屬血清型。本發(fā)明的發(fā)明點(diǎn)在于在WS瓊脂平板分離培養(yǎng)后，挑取菌落時(shí)先撥動(dòng)符合沙門菌菌落特征的可疑菌落，然后挑取這些可疑菌落中被接種針撥動(dòng)破碎的菌落，來得到較小假陽性菌落的沙門菌可疑菌落，減少后續(xù)生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的工作量。
[0015]13278件腸檢標(biāo)本，采用本發(fā)明方法檢出102株，常規(guī)法檢出101株，敏感性對比無顯著性差異(x2=0.116，p>0.05);特異性對比本發(fā)明方法99.98%，常規(guī)法90.33%，有非常顯著性差異(P〈0.005)?？岂R嘉CAS顯色培養(yǎng)基由于含有特殊顯色物質(zhì)，無需通過任何儀器，僅通過觀察菌落顏色即能在24-48小時(shí)用肉眼進(jìn)行判斷。國外學(xué)者對508份臨床標(biāo)本檢測分離出20株沙門菌，靈敏度為100%，特異性為88.9%。本發(fā)明方法和進(jìn)口顯色平板(CAS)對比試驗(yàn):通過對936份 體檢樣品檢測，結(jié)果檢出6株，顯色平板(CAS)敏感性為100%，特異性為96.1% ;本發(fā)明方法敏感性為100%，特異性為100%。
【權(quán)利要求】
1.一種沙門菌的分離選取方法，其特征在于，撥動(dòng)疑似菌落和挑取破碎菌落。
2.一種沙門菌的檢測方法，包括增菌、分離培養(yǎng)、挑取疑似菌落、生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定，其特征在于，所述挑取疑似菌落包括步驟:撥動(dòng)疑似菌落和挑取破碎菌落。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的沙門菌的檢測方法，其特征在于:所述撥動(dòng)疑似菌落為撥動(dòng)半透明中心為黑色的菌落。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的沙門菌的檢測方法，其特征在于:所述增菌為將標(biāo)本接種于亞硒酸鹽增菌液，35°C~37°C培養(yǎng)18~24h。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的沙門菌的檢測方法，其特征在于:所述分離培養(yǎng)為在WS瓊脂平板上35°C~37° C培 養(yǎng)18~24h。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK103525735SQ201310493238
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】張繆偉, 周正元 申請人:常熟市疾病預(yù)防控制中心