用于輸注短暫植入的同種異體淋巴細(xì)胞的選定群體來治療癌癥的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供用于施用同種異體淋巴細(xì)胞作為內(nèi)源性腫瘤反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞的CD4+T細(xì)胞輔助的外部來源的方法和組合物。由供體淋巴細(xì)胞輸注引起的CD8+T細(xì)胞的耗竭減少持續(xù)植入和移植物抗宿主疾病的風(fēng)險。從輸注群體中去除調(diào)控性T細(xì)胞可增進非調(diào)控性T細(xì)胞為抗腫瘤免疫力的內(nèi)源性效應(yīng)物提供輔助的能力。同種異體T細(xì)胞療法通常在同種異體干細(xì)胞移植的情況下給予，其中患者接收高度免疫抑制調(diào)節(jié)，隨后輸注含有未經(jīng)選擇的成熟T細(xì)胞的群體的干細(xì)胞移植物。在本文描述的治療中，移植物經(jīng)過工程改造以將持續(xù)供體細(xì)胞植入的可能性減少到最低限度，并且抗腫瘤效應(yīng)T細(xì)胞從宿主獲得。
【專利說明】用于輸注短暫植入的同種異體淋巴細(xì)胞的選定群體來治療 癌癥的方法和組合物
[0001] 發(fā)明背景 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明大體上涉及免疫學(xué)，并且更具體地說，涉及用于治療癌癥的方法和含有同 種異體淋巴細(xì)胞的組合物。
[0003] 背景信息
[0004] 宿主的免疫系統(tǒng)提供迅速并特異性地發(fā)動針對致病微生物的保護性反應(yīng)并且還 促成惡性腫瘤的排斥的手段。免疫反應(yīng)大體上描述為包括體液反應(yīng)，其中對于抗原具有特 異性的抗體由分化的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，和細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中各種類型T淋巴細(xì)胞通過 各種機制來消除抗原。舉例來說，能夠識別特異性抗原的CD4(也稱為CD4+)輔助T細(xì)胞 可通過釋放可溶性介體如細(xì)胞因子來募集免疫系統(tǒng)的其他細(xì)胞參與免疫反應(yīng)而作出反應(yīng)。 CD8 (也稱為CD8+)細(xì)胞毒性T細(xì)胞也能夠識別特異性抗原并且可結(jié)合并破壞或摧毀攜帶抗 原的細(xì)胞或顆粒。具體地說，包括細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL)反應(yīng)在內(nèi)的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反 應(yīng)對于消除腫瘤細(xì)胞和由微生物如病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染的細(xì)胞可為至關(guān)重要的。
[0005] 癌癥包括廣泛范圍的疾病并且在世界范圍內(nèi)影響大約四分之一的個體。CTL反應(yīng) 是有效癌癥疫苗的關(guān)鍵特征；有效CD4T細(xì)胞輔助也可能在生成性CD8T細(xì)胞活化中發(fā)揮關(guān) 鍵作用，因而提供臨床益處。
[0006] 關(guān)于微生物感染，瘧疾、結(jié)核病、HIV-AIDS和其它病毒感染如單純性皰疹病毒 (HSV)感染（在世界范圍內(nèi)，生殖器潰瘍的主要病因）持續(xù)造成全球性健康問題。HSV-2發(fā) 病率在世界各地以驚人的速度增加。在美國，總HSV-2血清發(fā)病率超過20%，并且在發(fā)展中 國家中，HSV-2發(fā)病率估計在30 %與50 %之間。除了 HSV-2感染在成人中的深重負(fù)擔(dān)以外， 新生兒HSV-2感染的發(fā)病率也在不斷增加。甚至在治療時，由HSV-2感染引起的新生兒腦 炎具有>15%的死亡率，并且HSV-2感染嬰幼兒之中的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)病率也占存活病例中的 30%至50%。與HSV-2流行病同時出現(xiàn)的十分明顯的現(xiàn)實是，HSV-2感染大大增加HIV-1 獲得和傳播的風(fēng)險。來自非洲的數(shù)據(jù)表明HSV-2感染可增加HIV傳播的風(fēng)險多達7倍并且 多達一半的新獲得HIV病例直接歸因于HSV-2感染?？傮w上，在HSV-2感染個體中，HIV獲 得的相對風(fēng)險增加超過2倍。
[0007] 新出現(xiàn)的證據(jù)暗示在對于由癌癥獨特表達的抗原具有特異性的淋巴細(xì)胞中，癌癥 誘導(dǎo)無反應(yīng)狀態(tài)。然而，此無反應(yīng)狀態(tài)應(yīng)能夠逆轉(zhuǎn)。一些人腫瘤由CD8+T細(xì)胞浸潤，并且 CD8+T細(xì)胞浸潤程度經(jīng)常與不存在轉(zhuǎn)移和存活提高相關(guān)。然而，這些CD8+T細(xì)胞可能因腫瘤 特異性CD4+T細(xì)胞的功能遲滯而不能消除癌癥。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明基于以下重大發(fā)現(xiàn)：輸注含有CD4+T細(xì)胞的同種異體淋巴細(xì)胞可破壞宿主 抗腫瘤CD8+T細(xì)胞的耐受性，即使供體細(xì)胞不長期植入接受者中也是如此。在同種異體細(xì) 胞輸注之前施用化學(xué)療法可通過促進轉(zhuǎn)移淋巴細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)擴增，且/或通過耗竭宿主調(diào)控 性T細(xì)胞和髓源性抑制細(xì)胞來增進短暫植入淋巴細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。針對癌癥的免疫反應(yīng) 受到患者CD4+T細(xì)胞的功能缺陷所阻礙。輸注同種異體淋巴細(xì)胞可提供用于內(nèi)源性的腫瘤 反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞的CD4+T細(xì)胞輔助的外部來源。由供體淋巴細(xì)胞輸注引起的CD8+T細(xì)胞 的耗竭減少持續(xù)植入和移植物抗宿主疾病的風(fēng)險。從輸注群體中去除調(diào)控性T細(xì)胞可增進 非調(diào)控性T細(xì)胞為抗腫瘤免疫力的內(nèi)源性效應(yīng)物提供輔助的能力。
[0010] 同種異體T細(xì)胞療法通常在同種異體干細(xì)胞移植的情況下給予，其中患者接收高 度免疫抑制調(diào)節(jié)，隨后輸注含有未經(jīng)選擇的成熟T細(xì)胞群體的干細(xì)胞移植物。alloSCT的目 標(biāo)是獲得供體細(xì)胞的持續(xù)植入并且伴有移植物抗宿主疾病引起的死亡風(fēng)險。在本文描述的 治療中，移植物經(jīng)過工程改造以將持續(xù)供體細(xì)胞植入的可能性減少到最低限度，并且抗腫 瘤效應(yīng)T細(xì)胞從宿主獲得。因此，此療法需要在短暫供體細(xì)胞植入期間宿主和供體淋巴細(xì) 胞的獨特配合。
[0011] 這是可應(yīng)用于任何人類或動物癌癥的治療。本發(fā)明的變化包括：1)在輸注同種異 體淋巴細(xì)胞之前給予的化療方案的變化（可包括環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、達沙替 尼、其組合；2)供體淋巴細(xì)胞來源的變化（可來自相關(guān)或不相關(guān)的供體，可包括I類或II類 HLA基因座處的限定錯配；3)對于輸注所選擇的細(xì)胞類型的變化，如耗竭CD4+CD25+調(diào)控性 T細(xì)胞、耗竭CD8+T細(xì)胞。供體可在淋巴細(xì)胞輸注之前針對限定抗原進行免疫或可離體用細(xì) 胞因子極化以富集I型（產(chǎn)生IFN-y)或17型（產(chǎn)生IL-17)T細(xì)胞。
[0012] 在第一個實施方案中，本發(fā)明提供制造同種異體淋巴細(xì)胞組合物的方法，其包括： 提供來自相對于接受者來說為同種異體的人供體的外周血細(xì)胞組合物，所述外周血細(xì)胞組 合物包括CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在供體抗接受者的方向中，供體 包括相對于接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因錯配，并且HLA II類等位 基因錯配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且（ii) 接受者不具有對供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體；并且通過使外周血細(xì)胞組合 物中的CD8+T細(xì)胞的數(shù)目減少至少一個數(shù)量級來從外周血細(xì)胞組合物制造同種異體淋巴 細(xì)胞組合物，其中（a)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合 物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，并且（b)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然 殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，其限制條件是同 種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0013] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供由本發(fā)明方法制成的組合物。在另一個實施方 案中，本發(fā)明提供同種異體人淋巴細(xì)胞組合物，其包括：來自供體的外周血細(xì)胞組合物的 CD4+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在供體抗接受者的方向中，供體包括相對于接受者的 至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因錯配，并且HLA II類等位基因錯配是在選自由 以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)接受者不具有對供體的人 白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù) 目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50 %，（iv)基于以公斤（kg) 為單位的接受者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X10 9 個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（v)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等 于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有 比外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組 合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0014] 本發(fā)明還提供治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括：向受試者施用淋巴細(xì) 胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法以誘導(dǎo)受試者的短暫淋巴細(xì)胞減少；并且隨后向受試者 施用從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述第 一同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞 和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在供體抗受試者的方向中，供體包括相對于受試者 的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因錯配，并且HLA II類等位基因錯配是在選自 由以下組成的組的基因處：HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)受試者不具有對供體的 人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì) 胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（iv)基于以公斤 (kg)為單位的受試者理想體重的供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X10 5個CD4+T細(xì)胞/kg與約 1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（v)第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目 小于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)第一同種異體淋巴細(xì) 胞組合物具有比外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞,其限制條件是第一同 種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0015] 在一個方面，在向受試者施用第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物之后，所述方法還包 括向受試者施用連續(xù)淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭療法以誘導(dǎo)受試者的短暫淋巴細(xì) 胞減少；并且隨后向受試者施用從另外人同種異體供體的另外外周血細(xì)胞組合物獲得的連 續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自另外供體的另外 外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在另外 供體抗受試者的方向中，所述另外供體包括相對于受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因錯配，并且HLA II類等位基因錯配是在選自由以下組成的組的基因處： HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)受試者不具有對另外供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng) 性的可檢測抗體，（iii)連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與另外外周 血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（iv)基于以公斤（kg)為單位的 受試者理想體重的另外供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X10 5個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個 CD4+T細(xì)胞/kg之間，（v)連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等 于另外外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組 合物具有比另外外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的⑶8+T細(xì)胞。
[0016] 本發(fā)明還提供制造施用至人接受者的同種異體淋巴細(xì)胞組合物的方法，其包括： 提供來自相對于接受者為同種異體的人供體的外周血細(xì)胞組合物，所述外周血細(xì)胞組合物 包括一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞、一定數(shù)目的CD8+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i) 供體具有相對于存在于接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于接受 者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是在選 自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且（iii)接受者不具有對 供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體；并且通過使外周血細(xì)胞組合物中的CD8+T細(xì) 胞的數(shù)目減少至少一個數(shù)量級來從外周血細(xì)胞組合物制造同種異體淋巴細(xì)胞組合物，其中 (a)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞 的數(shù)目的差異小于約50%，并且（b)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小 于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組 合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0017] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于施用至人接受者的從人同種異體供體的外 周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括：來 自供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中 (i)供體具有相對于存在于接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于 接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是 在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)接受者不具有對 供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì) 胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤 (kg)為單位的接受者理想體重的供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個CD4+T細(xì)胞/kg與約 1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小 于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合 物具有比外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴 細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0018] 本發(fā)明還提供用于施用至人接受者的從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲 得的同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括：來自供體的外周血細(xì) 胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)供體具有相對于 不存在于接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于接受者的至少一個 人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成 的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)接受者不具有對供體的人白細(xì)胞抗 原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血 細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的接 受者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T 細(xì)胞/kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周 血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比外周 血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的 ⑶4+T細(xì)胞未離體活化。
[0019] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供用于治療受試者的疾病或病狀的試劑盒，所述試 劑盒包括：淋巴細(xì)胞組合物，其中受試者是人接受者；以及納米顆粒組合物，其包括包含不 存在于人接受者體內(nèi)的抗原的納米顆粒。
[0020] 此外，存在治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括向受試者施用從人同種異 體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合 物包括來自供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì) 胞，其中（i)供體具有相對于存在于受試者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包 括相對于受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類等位基 因匹配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)受試者 不具有對供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的 ⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基 于以公斤（kg)為單位的受試者理想體重的供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個CD4+T細(xì) 胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì) 胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋 巴細(xì)胞組合物具有比外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同 種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0021] 在一個方面，本發(fā)明提供治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括向腫瘤中注 入納米顆粒組合物，其中所述納米顆粒組合物包括包含不存在于受試者體內(nèi)的抗原的納 米顆粒，由此將抗原引入受試者體內(nèi)；向受試者施用從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合 物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自供體的外周 血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)供體具有 相對于抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原 (HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的組的基因處： HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)受試者不具有對供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的 可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中 的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的受試者理想體重的 供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間， (vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合物中 的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比外周血細(xì)胞組合物少 至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離 體活化。
[0022] 附圖簡述
[0023] 圖1展示BMT之后的相同五個患者的紅細(xì)胞壓積，其中鋸齒狀部分反映輸注效應(yīng) (曲線圖）。
[0024] 圖2展示非植入DLI誘導(dǎo)抗腫瘤免疫力（曲線圖）。
[0025] 圖3a展示植入作為疫苗的供體細(xì)胞加上alio⑶4延長存活（曲線圖）。圖3b展 示具有供體CD4+T細(xì)胞嵌合體和移植后天數(shù)的曲線圖。
[0026] 圖4展示使用白細(xì)胞分離產(chǎn)物和放血樣本的CD8耗竭的驗證操作（流式細(xì)胞術(shù)結(jié) 果）。
[0027] 發(fā)明詳述
[0028] 本公開至少部分地產(chǎn)生于以下重大發(fā)現(xiàn)：對于癌癥的免疫反應(yīng)受到患者⑶4+T細(xì) 胞的功能缺陷所阻礙。輸注同種異體淋巴細(xì)胞可提供用于內(nèi)源性腫瘤反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞的 CD4+T細(xì)胞輔助的外部來源。由供體淋巴細(xì)胞輸注引起的CD8+T細(xì)胞的耗竭減少持續(xù)植入 和移植物抗宿主疾病的風(fēng)險。從輸注群體中去除調(diào)控性T細(xì)胞可增進非調(diào)控性T細(xì)胞為抗 腫瘤免疫力的內(nèi)源性效應(yīng)物提供輔助的能力。同種異體T細(xì)胞療法通常在同種異體干細(xì)胞 移植的情況下給予，其中患者接收高度免疫抑制調(diào)節(jié)，隨后輸注含有未經(jīng)選擇的成熟T細(xì) 胞的群體的干細(xì)胞移植物。在本文描述的治療中，移植物經(jīng)過工程改造以將持續(xù)供體細(xì)胞 植入的可能性減少到最低限度，并且抗腫瘤效應(yīng)T細(xì)胞從宿主獲得。因此，此療法需要在短 暫供體細(xì)胞植入期間宿主和供體淋巴細(xì)胞的獨特配合。
[0029] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供制造用于施用至人接受者的同種異體淋巴細(xì)胞組 合物的方法，優(yōu)選地，供體和接受者不是同一人。所述方法包括提供來自相對于接受者為 同種異體的人供體的外周血細(xì)胞組合物，所述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目的CD4+T細(xì) 胞、一定數(shù)目的CD8+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，一些自然殺傷細(xì)胞具有CD8+抗原 并且可通過"減少"步驟來去除；然而，本發(fā)明的優(yōu)選淋巴細(xì)胞組合物包括來自供體的至少 一些自然殺傷細(xì)胞。在一方面，（i)在供體抗接受者方向上，供體包括相對于接受者的至少 一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因錯配（HLA II類等位基因錯配在供體抗接受者方向 上，即，"移植物抗宿主方向上），并且HLA II類等位基因錯配是在如HLA-DRBUHLA-DQB1或 HLA-DPB1等基因處。接受者不具有對于供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體（在這 種情況下，"可檢測抗體"使用進行此確定的標(biāo)準(zhǔn)方法來定義（例如，接受者不具有可通過補 體依賴性細(xì)胞毒性來檢測的針對供體HLA分子的抗體，在流式細(xì)胞交叉匹配測定中，陽性 結(jié)果是不合需要的，或在固相免疫測定中，3000或更大的平均熒光強度（MFI)是不可接受 的）。
[0030] 同種異體淋巴細(xì)胞組合物通過使外周血細(xì)胞組合物中的⑶8+T細(xì)胞的數(shù)目減 少至少一個數(shù)量級來從外周血細(xì)胞組合物制得，其中（a)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的 ⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%。在一個 優(yōu)選實施例中，淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+數(shù)目/CD8+T細(xì)胞數(shù)目的比率優(yōu)選地大于或等于 約30。一些實施方案的實例包括但不限于以下每公斤接受者理想體重的劑量：包括105個 ⑶4+細(xì)胞的淋巴細(xì)胞組合物通常具有不大于3. 2X 103個⑶8+細(xì)胞、106個⑶4+細(xì)胞通常 具有不大于3. 2X 104個CD8+細(xì)胞，107個CD4+細(xì)胞通常具有不大于3. 2X 105個CD8+細(xì) 胞，108個⑶4+細(xì)胞通常具有不大于3. 2X 106個⑶8+細(xì)胞，并且5X 108個⑶4+細(xì)胞通常 具有不大于1.6X 107個⑶8+細(xì)胞。
[0031] 同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合 物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體 活化。減少一個數(shù)量級，優(yōu)選地約兩個數(shù)量級，更優(yōu)選地約五個數(shù)量級。在一個實施方案中， CD8+細(xì)胞的數(shù)目減少約2. 5個數(shù)量級（例如，使用磁性珠粒細(xì)胞分選方法）。
[0032] 在一方面，其中如果供體和接受者是AB0血型不相容的并且外周血細(xì)胞組合物包 括一定數(shù)目的紅細(xì)胞，那么制造同種異體淋巴細(xì)胞組合物還包括減少紅細(xì)胞數(shù)目。如本文 使用，"AB0血型不相容"是指當(dāng)接受者具有相對于供體的主要AB0紅細(xì)胞不相容性時，例 如，接受者是血型〇并且供體是血型A、B或AB，接受者是A型并且供體是B型或AB型，或 接受者是B型并且供體是A型或AB型。
[0033] 在一方面，紅細(xì)胞的數(shù)目包括小于或等于約50ml壓積。例如，小于或等于約50ml 壓積，優(yōu)選地小于或等于約30ml壓積，此外"壓積"應(yīng)加以定義，例如，淋巴細(xì)胞組合物的離 心產(chǎn)生50ml或更小壓積的紅細(xì)胞；也可篩選淋巴細(xì)胞組合物的測量體積樣品以提供壓縮 血細(xì)胞的按比例代表性體積。
[0034] 在一方面，同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物 中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約20%。在一些實施方案中，⑶4+T細(xì)胞小于約50%， 小于約40%，優(yōu)選地小于約20%，更優(yōu)選地小于約10%。在一些實施方案中，可執(zhí)行⑶4+T 細(xì)胞的離體擴增，在這些實施方案中CD4+T細(xì)胞的數(shù)目可極大地超過原始數(shù)目。這類擴增 是替代實施方案。
[0035] 在一些實施方案中，從供體獲得的CD4+T細(xì)胞未有意地擴增或有意地離體分化。 有意地擴增或有意地分化不同于僅僅是方法的副作用（并非有意的、不注意的）的CD4+T 細(xì)胞的擴增或分化，例如，CD4+T細(xì)胞可有時通過接觸到塑料、這類不注意的事件的其它實 例而經(jīng)歷分化。在另一個實施方案中，進一步限制條件是干細(xì)胞在對于接受者為同種異體 的外周血細(xì)胞組合物供體體內(nèi)沒有經(jīng)歷動員。
[0036] 在一些方面，減少外周血細(xì)胞組合物中的CD8+T細(xì)胞包括使用與磁性顆粒相關(guān)聯(lián) 的抗CD8+抗體或抗CD8+抗體加上補體。外周血細(xì)胞組合物可為例如全血產(chǎn)物或單采產(chǎn)物。 此外，供體抗接受者方向上的HLA II類等位基因錯配可為HLA-DRB1處的錯配。供體抗接 受者方向上的對于HLA II類等位基因錯配的此限制是例如"移植物抗宿主方向"，其中同種 異體供體抗接受者方向上的至少一個HLA II類等位基因錯配還包括同種異體供體與接受 者的一個或多個第一近親之間的相同HLA II類等位基因錯配，這對于保持從第一近親至接 受者的骨髓移植的機會；理想地，供體與接受者之間的所有錯配不存在于潛在家族骨髓供 體與接受者之間。
[0037] 在一些方面，進行一個或多個選擇特征的篩選并且對于選自由接受者、供體和一 個或多個潛在同種異體供體組成的組的受試者來執(zhí)行篩選。舉例來說，針對感染物抗原的 血清反應(yīng)性來篩選選擇特征。感染物抗原選自由以下組成的組：人免疫缺陷病毒（HIV)抗 原、肝炎病毒抗原和巨細(xì)胞病毒抗原。欲篩選的重要試劑包括例如HIV-1抗原、HIV-2抗原、 甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、CMV抗原、感染性疾病等。如果 病毒或感染物或其抗原是治療標(biāo)靶，那么不排除具有針對此試劑的所需CD4+介導(dǎo)免疫反 應(yīng)的供體。
[0038] 在一方面，感染物抗原是巨細(xì)胞病毒抗原，對接受者和供體加以篩選，并且在接受 者或供體中沒有巨細(xì)胞病毒抗原的血清反應(yīng)性。在一方面，病毒抗原是流感抗原并且流感 抗原是血凝素抗原或神經(jīng)氨酸酶抗原。
[0039] 在另一方面，針對一種以上HLA II類等位基因來篩選選擇特征。在某些情況下， 基于在一種以上HLA II類等位基因處、在潛在同種異體供體抗接受者方向上、潛在同種異 體供體與接受者之間的最大化錯配來選擇潛在同種異體供體，并且將潛在同種異體供體選 為供體。在某些情況下，針對一個或多個HLA I類等位基因來篩選選擇特征。
[0040] 可基于最小化一種以上HLA I類等位基因處、潛在同種異體供體與接受者之間的 錯配來選擇潛在同種異體供體，并且將潛在同種異體供體選為供體。
[0041] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供通過如本文描述的本發(fā)明方法獲得的用于施用至 人接受者的同種異體淋巴細(xì)胞組合物。
[0042] 如果接受者對于CMV抗原是血清陽性的，那么供體狀態(tài)不重要。在某些實施方 案中，其中供體未針對存在于接受者體內(nèi)或?qū)⒁f送至接受者的抗原進行免疫接種，遞送 CD4+T細(xì)胞輔助取決于接受者細(xì)胞上的同種異體HLA II類分子的供體CD4+T細(xì)胞識別。出 于例證本發(fā)明的這些實施方案的目的的"理想供體"的實例則在HLA II類等位基因（尤其， HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1)處完全錯配并且對于I類等位基因來說完全匹配（以最 大化接受者中的供體細(xì)胞的存活并且最小化針對I類分子的同種抗體形成）。此外，理想供 體與同種異體干細(xì)胞移植的潛在供體的接受者的第一近親的不共享HLA完全錯配。
[0043] 在一個實施方案中，存在從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體 淋巴細(xì)胞組合物用于施用至人接受者，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自供體的外周 血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在供體抗接 受者的方向中，供體包括相對于接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因錯 配，并且HLA II類等位基因錯配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1 和HLA-DPB1，（ii)接受者不具有對供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)同 種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目 的差異小于約50% (包括但不限于小于約50%、小于約40%、優(yōu)選小于約20%、更優(yōu)選小 于約10% )。此外，"外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%"意指外 周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目加或減小于50%。舉例來說,如果外周血細(xì)胞組合 物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目是1X10 5個⑶4+細(xì)胞，那么"外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞 的數(shù)目的差異小于約50%"意指^4+1'細(xì)胞的數(shù)目在1.5乂10 5與0.5乂105之間。在組合物 中，基于以公斤（kg)為單位的接受者的理想體重（理想體重（IBW)是基于身高。對于男性， IBW = 50+2. 3kg/英寸，在5英尺內(nèi)。對于女性，IBW = 45. 5+2. 3kg/英寸，在5英尺內(nèi)）的 供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X10 9個⑶4+T細(xì)胞/kg之間（在 一個優(yōu)選實施方案中，在約1X106個⑶4+T細(xì)胞/kg與約5X10 8個⑶4+T細(xì)胞/kg之間）； (v)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合物中的 自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比外周血細(xì)胞組合物少至 少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體 活化。
[0044] 還提供治療人受試者的疾病或病狀的方法，包括將淋巴細(xì)胞減少性（在本發(fā)明的 這一方面的一些實施方案中，需要提供淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法來促進所 施用淋巴細(xì)胞組合物的穩(wěn)態(tài)擴增和分化；在其它實施方案中，需要治療也為骨髓細(xì)胞減少 性的（即，抑制或耗竭抑制性骨髓群體包括髓源性抑制細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和或N2嗜 中性粒細(xì)胞）非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法施用至受試者以誘導(dǎo)受試者的短暫淋巴細(xì)胞減少； 隨后向受試者施用從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的第一同種異體淋巴細(xì)胞 組合物，所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目 的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在供體抗受試者的方向中，供體包括相 對于受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因錯配，并且HLA II類等位基因錯 配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)受試者不具 有對供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物中 的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（iv) 基于以公斤（kg)為單位的受試者理想體重的供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X10 5個CD4+T細(xì) 胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（v)第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷 細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)第一同種 異體淋巴細(xì)胞組合物具有比外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞，其限制條 件是第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0045] 雖然不希望受具體理論約束，但是輸注的CD4+細(xì)胞為其它細(xì)胞類型提供信號，主 要是受試者的CD8+、巨噬細(xì)胞和/或增進這些細(xì)胞在受試者中的細(xì)胞毒性功能的抗原呈遞 細(xì)胞（受試者的耐受CD4+/受試者的排出CD8+);通過此方法的治療疾病或病狀的實例應(yīng) 例示為至少治療骨髓增生異常綜合征。
[0046] 在一方面，淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法包括用選自由以下組成的組 的一種或多種細(xì)胞減少性試劑來治療受試者：烷化劑、烷基磺酸鹽、亞硝基脲、三氮烯、抗代 謝物、嘧啶類似物、嘌呤類似物、長春花生物堿、表鬼白毒素、抗生素、二溴甘露醇、脫氧精胍 菌素、二甲基馬利蘭和塞替派。在一方面，淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法包括用 烷化劑治療受試者并且烷化劑是環(huán)磷酰胺。在一方面，在將第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物 施用至受試者之后，所述方法還包括將抗腫瘤單克隆抗體或抗腫瘤單克隆抗體/藥物綴合 物施用至受試者。
[0047] 在一方面，提供用于治療受試者的疾病或病狀的試劑盒，試劑盒包括：如本文描述 的淋巴細(xì)胞組合物，其中受試者是人接受者；和納米顆粒組合物，其包括包含不存在于人接 受者體內(nèi)的抗原的納米顆粒。在一方面，納米顆粒還包括細(xì)胞因子，例如，白介素或干擾素。 細(xì)胞因子可為白介素并且選自由以下組成的組：IL_2、IL-7、IL-12和IL-15。細(xì)胞因子可 為干擾素例如干擾素Y、干擾素0、干擾素a、干擾素、t、干擾素Q和復(fù)合干擾素。
[0048] 納米顆粒可還包括選自由以下組成的組的化合物：趨化因子、成像劑、光天線分 子、熱天線分子和Toll樣受體配體、促進⑶4+T細(xì)胞分化成I型（例如產(chǎn)生IFN- Y )⑶4+記 憶T細(xì)胞的配體、誘導(dǎo)抗原呈遞細(xì)胞（例如，抗CD40抗體或適體）活化的受體的配體。此 夕卜，納米顆粒可包括將納米顆粒靶向輸送至腫瘤細(xì)胞或抗原呈遞細(xì)胞的試劑。
[0049] 在一方面，方法還包括施用抗腫瘤單克隆抗體并且抗腫瘤單克隆抗體選自由以 下組成的組：利妥昔單抗、西妥昔單抗、曲妥珠單抗和培妥珠單抗。在一方面，本發(fā)明包括 施用抗腫瘤單克隆抗體/藥物綴合物并且抗腫瘤單克隆抗體/藥物綴合物選自由以下組 成的組：布妥昔單抗維多?。╞rentuximab vedotin)、吉妥珠單抗奧佐米星（gemtuzumab ozogamicin)、曲妥珠單抗艾美坦辛（trastuzumab emtansine)、伊妥珠單抗奧佐米星 (inotuzumab ozogamicin)、格雷帕珠單抗維多?。╣lembatumumab vedotin)、羅佛珠單抗 莫登素（lorvotuzumab mertansine)、坎妥珠單抗莫登素（cantuzumab mertansine)和米拉 珠單抗-多柔比星（milatuzumab-doxorubicin)。在一些方面，首先施用同種異體淋巴細(xì)胞 組合物，然后將化學(xué)治療劑施用至受試者。舉例來說，化學(xué)治療劑選自由以下組成的組：達 沙替尼、尼羅替尼、帕納替尼、伊馬替尼、拉帕替尼和維莫德吉。
[0050] 在一方面，在將第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至受試者之后，所述方法還包 括將單克隆抗體/CD4+T細(xì)胞表位綴合物施用至受試者。在一個方面，在向受試者施用第一 同種異體淋巴細(xì)胞組合物之后，所述方法還包括向受試者施用連續(xù)淋巴細(xì)胞減少性非致淋 巴細(xì)胞衰竭的療法以誘導(dǎo)受試者的短暫淋巴細(xì)胞減少；隨后向受試者施用從另外人同種異 體供體的另外外周血細(xì)胞組合物獲得的連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述連續(xù)同種異體 淋巴細(xì)胞組合物包括來自另外供體的另外外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和 一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在另外供體抗受試者的方向中，所述另外供體包括相 對于受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因錯配，并且HLA II類等位基因錯 配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)受試者不具 有對另外供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合 物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與另外外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約 50%，（iv)基于以公斤（kg)為單位的受試者理想體重的另外供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約 1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（V)連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組 合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于另外外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù) 目，并且（vi)連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比另外外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù) 量級的CD8+T細(xì)胞。此方法的限制條件是連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離 體活化。在將第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至受試者之后，所述方法還包括施用阻斷T 細(xì)胞中的負(fù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的試劑。阻斷T細(xì)胞中的負(fù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的試劑選自由以下組成的組：抗 ro-i抗體、伊匹木單抗、抗ro-L2抗體和ro-i融合蛋白質(zhì)。疾病或病狀選自由以下組成的 組：癌癥、自身免疫病癥、器官移植、同種異體移植物排斥和病毒感染。舉例來說，疾病或病 狀是癌癥并且癌癥是骨髓增生異常綜合征。
[0051] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供制造用于施用至人接受者的同種異體淋巴細(xì)胞組 合物的方法，其包括提供來自相對于接受者為同種異體的人供體的外周血細(xì)胞組合物，所 述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目的⑶4+T細(xì)胞、一定數(shù)目的⑶8+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自 然殺傷細(xì)胞，其中（i)供體具有相對于存在于接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii) 供體包括相對于接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類 等位基因匹配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且 (iii)接受者不具有對供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體；并且通過減少外周血 細(xì)胞組合物中的CD8+T細(xì)胞的數(shù)目至少一個數(shù)量級來從外周血細(xì)胞組合物制造同種異體 淋巴細(xì)胞組合物，其中（a)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞 組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，并且（b)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的 自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，其限制條件 是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0052] 在一方面，存在于接受者中的抗原選自由以下組成的組：贅生性抗原（贅生性抗 原是與贅生物相關(guān)聯(lián)的抗原，其中贅生物定義為任何新的和異常細(xì)胞生長，尤其是細(xì)胞復(fù) 制不受控制并且漸進性的生長。贅生物可為良性、惡性前或惡性，并且癌癥是惡性贅生物。 因此，所有癌癥抗原是贅生性抗原但是并非所有贅生性抗原是癌癥抗原。贅生性獨特型 (Id)是腫瘤特異性目標(biāo)，例如，在其細(xì)胞表面上表達此分子的那些B細(xì)胞惡性腫瘤中，例 如，淋巴瘤或多發(fā)性骨髓瘤，并且包括病毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原、寄生蟲抗原和非人類 動物抗原。
[0053] 在一方面，潛在同種異體供體基于最小化一種以上HLA II類等位基因處潛在同種 異體供體與接受者之間的錯配來選自一個或多個潛在同種異體供體，并且將潛在同種異體 供體選為供體。潛在同種異體供體基于最小化一種或多種HLA I類等位基因處潛在同種異 體供體與接受者之間的錯配來選自一個或多個潛在同種異體供體，并且將潛在同種異體供 體選為供體。
[0054] 在一方面，供體對其具有免疫力的存在于接受者中的抗原是病毒抗原并且病毒抗 原選自由以下組成的組：人乳頭狀瘤病毒抗原、愛潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰 疫病毒（KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。舉例來 說，病毒抗原是人乳頭狀瘤病毒抗原并且人乳頭狀瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。在一 方面，同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì) 胞的數(shù)目的差異小于約20%。
[0055] 在一個實施方案中，提供從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體 淋巴細(xì)胞組合物用于施用至人接受者，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自供體的外周 血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)供體具有相 對于存在于接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于接受者的至少一 個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組 成的組的基因處：HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)接受者不具有對供體的人白細(xì)胞 抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周 血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的接 受者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X10 5個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T 細(xì)胞/kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周 血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比外周 血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的 ⑶4+T細(xì)胞未離體活化。
[0056] 本發(fā)明提供從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞組 合物用于施用至人接受者，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括：來自供體的外周血細(xì)胞組 合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)供體具有相對于不存 在于接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于接受者的至少一個人白 細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的組 的基因處：HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)接受者不具有對供體的人白細(xì)胞抗原有 反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞 組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的接受者 理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞 /kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于外周血細(xì)胞 組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比外周血細(xì)胞 組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T 細(xì)胞未離體活化。
[0057] 本發(fā)明提供治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括向受試者施用從人同種異 體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合 物包括來自供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì) 胞，其中（i)供體具有相對于抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于受試者的至 少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是在選自由以 下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)受試者不具有對供體的人 白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目 與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單 位的受試者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X10 5個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個 CD4+T細(xì)胞/kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于 外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比 外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合 物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
[0058] 本發(fā)明的組合物和方法可針對廣泛范圍的癌癥和腫瘤類型來使用，包括但不限于 膀胱癌、腦癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌、胃腸癌、生殖泌尿癌、頭和頸癌、肺癌、卵巢癌、前 列腺癌、腎臟癌、皮膚癌和睪丸癌。更具體地講，可通過本文所述的組合物和方法治療的癌 癥包括但不限于以下：心臟癌癥，包括，例如肉瘤，例如，血管肉瘤，纖維肉瘤，橫紋肌肉瘤和 脂肪肉瘤；粘液瘤；橫紋肌瘤；纖維瘤；脂肪瘤和畸胎瘤；肺癌，包括，例如，支氣管癌，例如 鱗狀細(xì)胞、未分化小細(xì)胞、未分化大細(xì)胞和腺癌；肺泡和細(xì)支氣管癌；支氣管腺瘤；肉瘤；淋 巴瘤；軟骨瘤型錯構(gòu)瘤；和間皮瘤；胃腸癌，包括，例如，食道癌，如鱗狀細(xì)胞癌，腺癌，平滑 肌肉瘤和淋巴瘤；胃癌，例如，癌，淋巴瘤和平滑肌肉瘤；胰腺癌，例如導(dǎo)管腺癌，胰島瘤，胰 高血糖素瘤，胃泌素瘤，類癌瘤，以及舒血管腸肽瘤；小腸癌，例如，腺癌，淋巴瘤，類癌瘤， 卡波濟氏肉瘤，平滑肌肉瘤，血管瘤，脂肪瘤，神經(jīng)纖維瘤和纖維瘤；大腸癌，如腺癌，管狀 腺瘤，絨毛狀腺瘤，錯構(gòu)瘤和平滑肌肉瘤；泌尿生殖道的癌癥，包括，例如，腎癌，如腺癌，威 廉氏腫瘤（腎母細(xì)胞瘤），淋巴瘤和白血病；膀胱和尿道癌，如鱗狀細(xì)胞癌，移行細(xì)胞癌和 腺癌；前列腺癌，例如，腺癌和肉瘤；睪丸癌，如精原細(xì)胞瘤，畸胎瘤，胚胎癌，畸胎癌，絨毛 膜癌，肉瘤，間質(zhì)細(xì)胞癌，纖維瘤，纖維腺瘤，腺瘤樣瘤和淋巴瘤；肝癌，包括，例如，肝細(xì)胞 瘤，例如，肝細(xì)胞癌；膽管癌；肝母細(xì)胞瘤；血管肉瘤；肝細(xì)胞腺瘤；和血管瘤；骨癌，包括， 例如，骨原性肉瘤（骨肉瘤），纖維肉瘤,惡性纖維組織細(xì)胞瘤，軟骨肉瘤，尤因氏肉瘤，惡性 淋巴瘤（網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤），多發(fā)性骨髓瘤,惡性巨細(xì)胞瘤脊索瘤，骨軟骨瘤（骨軟骨外生骨 疣），良性軟骨瘤，軟骨母細(xì)胞瘤，軟骨肌瘤樣纖維瘤，骨樣骨瘤和骨巨細(xì)胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)的 癌癥，包括，例如，顱骨癌癥，如骨瘤，血管瘤，肉芽腫，黃色瘤，和畸形性骨炎；腦膜癌，如腦 膜瘤，腦膜肉瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤；腦癌，如星形細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，室管膜瘤，生 殖細(xì)胞瘤（松果體瘤），多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤，神經(jīng)鞘瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞 瘤和先天性腫瘤；和脊髓癌，例如，神經(jīng)纖維瘤，腦膜瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤和肉瘤；婦科癌癥，包 括，如子宮癌，例如子宮內(nèi)膜癌；子宮頸的癌癥，例如，宮頸癌，和預(yù)腫瘤宮頸發(fā)育不良；卵 巢的癌癥，如卵巢癌，包括漿液性囊腺癌，粘液性囊腺癌，未分類癌，顆粒腱鞘細(xì)胞瘤，睪丸 支持間質(zhì)細(xì)胞瘤，無性細(xì)胞瘤和惡性畸胎瘤；外陰的癌癥，如鱗狀細(xì)胞癌，上皮內(nèi)癌，腺癌， 纖維肉瘤和黑色素瘤；陰道癌癥，如透明細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，葡萄狀肉瘤和胚胎性橫紋肌 肉瘤；和輸卵管癌，例如癌；血液系統(tǒng)癌癥，包括，例如，血癌，如急性髓細(xì)胞性白血病，慢性 髓細(xì)胞性白血病，急性淋巴細(xì)胞性白血病，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，骨髓增生性疾病，多發(fā) 性骨髓瘤和骨髓增生異常綜合征，何杰金氏淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤（惡性淋巴瘤）和華 氏巨球蛋白血癥；皮膚癌，包括，例如，惡性黑色素瘤，基底細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，卡波濟氏肉 瘤，痣發(fā)育異常痣，脂肪瘤，血管瘤，皮膚纖維瘤，瘢痕瘤，銀屑病；和腎上腺的癌癥，包括，例 如，神經(jīng)母細(xì)胞瘤。在某些實施方案中，當(dāng)疾病是癌癥時，它可包括例如肺癌腫瘤、乳腺癌腫 瘤、前列腺癌腫瘤、腦癌腫瘤或皮膚癌腫瘤。
[0059] 本發(fā)明的組合物也可與現(xiàn)有治療癌癥方法，例如化療、照射或手術(shù)組合施用。因 此，進一步提供治療癌癥的方法，包括將有效量的本發(fā)明組合物施用至需要這類治療的個 體，其中將有效量的至少另一種癌癥化學(xué)治療劑施用至個體。合適的化學(xué)治療劑的實例 包括以下任何一種：阿巴瑞克，阿地白介素，阿侖單抗，阿利維A酸，別嘌呤醇，六甲蜜胺， 阿那曲唑，三氧化二砷，門冬酰胺酶，阿扎胞苷，貝伐單抗，貝沙羅汀，博來霉素，硼替佐米 (bortezombi)，硼替佐米（bortezomib)，靜脈內(nèi)白消安，口服白消安，卡普睪酮，卡培他濱， 卡鉬，卡莫司汀，西妥昔單抗，苯丁酸氮芥，順鉬，克拉屈濱，氯法拉濱，環(huán)磷酰胺，阿糖胞苷， 達卡巴嗪，更生霉素，達肝素鈉，達沙替尼，柔紅霉素，地西他濱，地尼白介素，地尼白介素融 合毒素（denileukin diftitox)，右雷佐生，多西紫杉醇，阿霉素，屈他雄酮丙酸酯，依庫珠 單抗，表柔比星，埃羅替尼，雌莫司汀，磷酸依托泊苷，依托泊苷，依西美坦，檸檬酸芬太尼， 非格司亭，氟尿苷，氟達拉濱，氟尿嘧啶，氟維司群，吉非替尼，吉西他濱，吉妥珠單抗奧唑米 星，醋酸戈舍瑞林，組氨瑞林乙酸酯，替伊莫單抗，伊達比星，異環(huán)磷酰胺，伊馬替尼甲磺酸 酸，重組人干擾素a 2a，伊立替康，拉帕替尼二甲苯磺酸酸，來那度胺，來曲唑，亞葉酸鈣，醋 酸亮丙瑞林，左旋咪唑，洛莫司汀，氮芥，醋酸甲地孕酮，美法侖，巰嘌呤，甲氨蝶呤，甲氧沙 林，絲裂霉素C，米托坦，米托蒽醌，諾龍苯丙酸酯，奈拉濱，諾非單抗，奧沙利鉬，紫杉醇，帕 米膦酸，帕尼單抗，培門冬酶，培非司亭，培美曲塞二鈉，噴司他丁，哌泊溴烷，普卡霉素，丙 卡巴肼，喹吖因，拉布立酶，利妥昔單抗，索拉非尼，鏈佐星，舒尼替尼，馬來酸舒尼替尼，他 莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊苷，睪內(nèi)酯，沙利度胺，硫鳥嘌呤，塞替派，托泊替康，托瑞米芬，托 西莫單抗，曲妥珠單抗，維A酸，尿嘧啶氮芥，戊柔比星，長春堿，長春新堿，長春瑞濱，伏立 諾他和唑來膦酸鹽。
[0060] 在本文描述的本發(fā)明方法中，任選地在向受試者施用同種異體淋巴細(xì)胞組合物之 前，所述方法還包括施用耗竭或抑制髓源性抑制細(xì)胞的療法。耗竭或抑制髓源性抑制細(xì)胞 的療法可包括施用選自由以下組成的組的藥物：例如達沙替尼、5-氟尿嘧啶、泰索帝、氯膦 酸鹽和吉西他濱。任選地，在向受試者施用同種異體淋巴細(xì)胞組合物之前，所述方法還包括 施用耗竭或抑制腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的療法。任選地，在向受試者施用同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭調(diào)控性T細(xì)胞的療法。耗竭調(diào)控性T細(xì)胞的療法可包 括施用選自由以下組成的組的藥物：環(huán)磷酰胺、地尼白介素融合毒素和達利珠單抗。
[0061] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括向 腫瘤中注入納米顆粒組合物（納米顆粒可注入或輸注至受試者體內(nèi)，其中納米顆粒還包 括靶向輸送劑，并且靶向輸送劑結(jié)合至靶細(xì)胞例如分散/非定域腫瘤（例如淋巴瘤或白血 ?。?，其中直接注射至所有可能位點是不實際或不可行的），其中所述納米顆粒組合物包括 包含不存在于受試者體內(nèi)的抗原的納米顆粒，由此將抗原引入受試者體內(nèi)；向受試者施用 從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋 巴細(xì)胞組合物包括來自供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的 自然殺傷細(xì)胞，其中（i)供體具有相對于抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)供體包括相對于 受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因匹配并且HLA II類等位基因匹配是 在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)受試者不具有對 供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì) 胞的數(shù)目與外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤 (kg)為單位的受試者理想體重的供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X10 5個CD4+T細(xì)胞/kg與約 1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（vi)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小 于或等于外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)同種異體淋巴細(xì)胞組合 物具有比外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞；其限制條件是同種異體淋巴 細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。在一方面，抗原是非人類動物抗原并且非人類動物 抗原是匙孔血藍蛋白抗原。在另一方面，抗原是病毒抗原并且病毒抗原選自由以下組成的 組：人乳頭狀瘤病毒抗原、愛潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰疹病毒（KSHV)抗原、 甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。
[0062]本發(fā)明的組合物可通過各種途徑來施用至個體，例如，口服、局部、腸胃外、陰道 內(nèi)、全身、肌肉內(nèi)、直腸或靜脈內(nèi)。在某些實施方案中，組合物與藥用載劑一起配制。優(yōu)選地， 組合物是靜脈內(nèi)施用。
[0063]在一些實施方案中，組合物與其它抗病毒或抗癌療法組合，如施用抗病毒或抗癌 齊U、輻射療法、光線療法或免疫療法?？共《净蚩拱﹦┛稍谕恢苿┗騿为氈苿┲信c本發(fā)明 組合物一起施用，以增強治療。在這些實施方案中，組合物和其它療法可在同一時間（同 時）或在單獨時間（依序）施用，只要其以具有所需效應(yīng)的方式并且在時間上充分接近來 施用即可。
[0064] 以下實施例旨在說明而不是限制本發(fā)明。 實施例
[0065]骨髓增生異常綜合征（MDS)是以血細(xì)胞的增生異常和無效骨髓產(chǎn)生以及轉(zhuǎn)化成 急性白血病的可變風(fēng)險為特征的一組不同惡性干細(xì)胞病癥。這些病癥可重新患上或在暴露 于潛在致突變的化療之后數(shù)年出現(xiàn)。
[0066]在美國今年診斷大約12, 000-20, 000個新的MDS病例，中值發(fā)病年齡在60與72 歲之間。骨髓增生異常綜合征的當(dāng)前治療結(jié)果是使人失望的。如通過國際預(yù)后評分系統(tǒng) (IPSS)確定的年齡、體能狀態(tài)和疾病風(fēng)險類別通常確定治療方式的選擇。具有良好或極好 體能狀態(tài)并且處于IPSS中間-2或高風(fēng)險類別中的〈60歲的患者主要考慮進行高強度療 法，因為這些IPSS類別分別賦予1. 2和0. 4年的中值存活。高強度療法定義為要求住院治 療，包括化療和造血細(xì)胞移植的密集組合。
[0067]處于低或中間-1類別中的患者總體上考慮進行低強度療法。這些療法包括可在 門診病人診所中施用的療法，如造血生長因子、分化誘導(dǎo)劑、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑和低強度化 療。具有不佳體能狀態(tài)的患者考慮進行支持性護理或低強度療法。
[0068]實施例1-IDE設(shè)各
[0069] 用于此試驗中的研究劑是具有CliniMACSv⑶8試劑的CliniMACS系統(tǒng)，用于富 集或耗竭來自人血液產(chǎn)物的⑶8+T細(xì)胞的醫(yī)療設(shè)備。用于選擇⑶8+細(xì)胞的CliniMACS.i 系統(tǒng)包括四個主要組成部分：l)CliniMACSK⑶8試劑-連接至針對人⑶8的鼠科抗體 的膠狀超順磁性葡聚糖鐵珠粒；2)CliniMACSplus儀器-處理血液樣品（細(xì)胞產(chǎn)物）的軟 件控制儀器；3)CliniMACSx導(dǎo)管集，（標(biāo)準(zhǔn)或LS)-具有兩個專有細(xì)胞選擇柱的一次性 使用、無菌、拋棄式導(dǎo)管集；和4)CliniMACStPBS/EDTA緩沖液-無菌、等滲磷酸緩沖 ImM EDTA鹽水溶液，用作用于體外制備血細(xì)胞的外部洗滌和傳輸液。所述系統(tǒng)利用磁性細(xì) 胞分選(MACS、)，一種分離許多細(xì)胞類型的強大工具，以選擇性富集或耗竭所感興趣的細(xì) 胞群體。在這種情況下，⑶8+T細(xì)胞用連接至超順磁性顆粒的單克隆抗體標(biāo)記，然后通過傳 經(jīng)CliniMACS系統(tǒng)來從血液產(chǎn)物中耗竭，所述CliniMACS系統(tǒng)并入有強永磁鐵和去除標(biāo)記 細(xì)胞的具有鐵磁基體的分離柱。值得注意的是，此試驗中的治療劑，耗竭了 CD8+T細(xì)胞的血 細(xì)胞來自設(shè)備并且不欲含有設(shè)備的任何組分。
[0070] 實施例2-短暫棺入供體淋巴細(xì)朐誘導(dǎo)臨床腫瘤反應(yīng)
[0071] 迄今為止，只有兩種療法能夠延長患有MDS的患者的存活。第一種療法，即同種異 體BMT實現(xiàn)一些長期治愈，以及疾病進展的延遲。由于年齡、供體可用性和合并癥，此療法 只可適用于小部分受影響患者。第二種療法是甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，5-阿扎胞苷。與支持性 護理單獨相比，此療法已被證明可延長中值存活7個月10。一些患有MDS的患者對于免疫 抑制方案有反應(yīng)，如環(huán)孢素、抗胸腺細(xì)胞球蛋白（ATG)或類固醇，并且血液計數(shù)持續(xù)增加。 此結(jié)果類似于再生障礙性貧血，其中免疫抑制治療自身免疫組分導(dǎo)致血細(xì)胞減少。以特異 性靶向免疫系統(tǒng)的試劑獲得的有利結(jié)果表明MDS是對于免疫調(diào)節(jié)敏感的疾病。ATG、環(huán)孢素 和類固醇的益處的一個潛在解釋是這些藥物通過選擇性抑制或殺滅抑制抗腫瘤免疫力的 淋巴細(xì)胞來將內(nèi)源性抗腫瘤免疫反應(yīng)的活性去屏蔽。存在針對MDS的隱秘、內(nèi)源性免疫反 應(yīng)的另外潛在證據(jù)發(fā)現(xiàn)于我們的非清髓性、部分HLA錯配（半相合）同種異體骨髓移植術(shù) 試驗中，其中盡管移植排斥，但五個患者經(jīng)歷疾病反應(yīng)。所有五個患者具有骨髓胚細(xì)胞百分 比的至少短暫減少，并且各自在移植之前依賴于紅細(xì)胞+/_小板輸注的五個患者中的三個 變得不依賴于輸注。表1展示，盡管在BMT之后30天不存在供體細(xì)胞植入，五個患者中的 至少三個具有在BMT之后持續(xù)至少六個月的髓胚細(xì)胞減少。
[0072]表 1
【權(quán)利要求】
1. 一種制造同種異體淋巴細(xì)胞組合物的方法，其包括： 提供來自相對于接受者為同種異體的人供體的外周血細(xì)胞組合物，所述外周血細(xì)胞 組合物包括⑶4+T細(xì)胞、⑶8+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在所述供體抗所述接受者 的方向中，所述供體包括相對于所述接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基 因錯配，并且所述HLA II類等位基因錯配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、 HLA-DQB1和HLA-DPB1，并且（ii)所述接受者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性 的可檢測抗體；并且 通過使所述外周血細(xì)胞組合物中的CD8+T細(xì)胞的數(shù)目減少至少一個數(shù)量級來從所述 外周血細(xì)胞組合物制造所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物，其中（a)所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約 50%，并且（b)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于所述外 周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，其限制條件是所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物的 所述CD4+T細(xì)胞未離體活化。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中如果所述供體和接受者是ABO血型不相容的并且所 述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目的紅細(xì)胞，那么制造所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物還包 括減少所述紅細(xì)胞數(shù)目。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中紅細(xì)胞的數(shù)目包括小于或等于約50ml壓積。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù) 目與所述外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約20%。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其進一步限制條件為從所述供體獲得的CD4+T細(xì)胞未有 意地擴增或有意地離體分化。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中減少所述外周血細(xì)胞組合物中的所述CD8+T細(xì)胞包 括使用與磁性顆粒相關(guān)聯(lián)的抗CD8+抗體或抗CD8+抗體加上補體。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述外周血細(xì)胞組合物是全血產(chǎn)物或單采產(chǎn)物。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中在所述供體抗所述接受者方向上的所述HLA II類等 位基因錯配是在HLA-DRB1處的錯配。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述提供還包括針對一個或多個選擇特征進行篩選 并且對于選自由所述接受者、所述供體和一種或多種潛在同種異體供體組成的組的受試者 來執(zhí)行所述篩選。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其中針對感染物抗原的血清反應(yīng)性來篩選選擇特征。
11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述感染物抗原選自由以下組成的組：人免疫缺 陷病毒（HIV)抗原、肝炎病毒抗原和巨細(xì)胞病毒抗原。
12. 如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述感染物抗原是巨細(xì)胞病毒抗原，對所述接受 者和所述供體加以篩選，并且在所述接受者或所述供體中沒有所述巨細(xì)胞病毒抗原的血清 反應(yīng)性。
13. 如權(quán)利要求9所述的方法，其中針對一種以上HLA II類等位基因來篩選選擇特征。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中基于最大化在所述一種以上HLA II類等位基因 處、在所述潛在同種異體供體抗所述接受者方向上、所述潛在同種異體供體與所述接受者 之間的錯配來選擇潛在同種異體供體，并且將所述潛在同種異體供體選為所述供體。
15. 如權(quán)利要求9所述的方法，其中針對一個或多個HLA I類等位基因來篩選選擇特 征。
16. 如權(quán)利要求15所述的方法，其中基于最小化所述一種以上HLA I類等位基因處、所 述潛在同種異體供體與所述接受者之間的錯配來選擇潛在同種異體供體，并且將所述潛在 同種異體供體選為所述供體。
17. -種通過如權(quán)利要求1所述的方法獲得的用于施用至人接受者的同種異體淋巴細(xì) 胞組合物。
18. -種同種異體人淋巴細(xì)胞組合物，其包括： 來自供體的外周血細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在所述供體 抗所述接受者的方向中，所述供體包括相對于所述接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因錯配，并且所述HLA II類等位基因錯配是在選自由以下組成的組的基因處： HLA-DRBUHLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)所述接受者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有反 應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外 周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（iv)基于以公斤（kg)為單位 的所述接受者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（v)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于 或等于所述外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)所述同種異體淋巴細(xì) 胞組合物具有比所述外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞； 其限制條件是所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
19. 如權(quán)利要求18所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目 的紅細(xì)胞并且紅細(xì)胞的數(shù)目包括小于或等于約50ml壓積。
20. 如權(quán)利要求18所述的淋巴細(xì)胞組合物，其進一步限制條件為從所述供體獲得的 CD4+T細(xì)胞未有意地擴增或有意地離體分化。
21. 如權(quán)利要求18所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述外周血細(xì)胞組合物是全血產(chǎn)物或 單采產(chǎn)物。
22. 如權(quán)利要求18所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述HLA II類等位基因錯配是選 自由以下組成的組的兩個或更多個HLA II類等位基因的錯配：HLA-DRB1、HLA-DPB1和 HLA-DQB1。
23. 如權(quán)利要求18所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中在所述供體抗所述接受者方向上的所 述HLA II類等位基因錯配是在HLA-DRB1處的錯配。
24. -種治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括： 向所述受試者施用淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法以誘導(dǎo)所述受試者的短 暫淋巴細(xì)胞減少；并且 隨后向所述受試者施用從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的第一同種異體 淋巴細(xì)胞組合物，所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自所述供體的外周血細(xì)胞組合 物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在所述供體抗所述受試 者的方向中，所述供體包括相對于所述受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基 因錯配，并且所述HLA II類等位基因錯配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、 HLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)所述受試者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可 檢測抗體，（iii)所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血 細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（iv)基于以公斤（kg)為單位的 所述受試者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個 CD4+T細(xì)胞/kg之間，（v)所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于 或等于所述外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)所述第一同種異體淋 巴細(xì)胞組合物具有比所述外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞，其限制條件 是所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
25. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法 包括用選自由以下組成的組的一種或多種細(xì)胞減少性試劑來治療所述受試者：烷化劑、烷 基磺酸鹽、亞硝基脲、三氮烯、抗代謝物、嘧啶類似物、嘌呤類似物、長春花生物堿、表鬼臼毒 素、抗生素、二溴甘露醇、脫氧精胍菌素、二甲基馬利蘭和塞替派。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法包 括用烷化劑治療所述受試者并且所述烷化劑是環(huán)磷酰胺。
27. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中在將所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至所 述受試者之后，所述方法還包括將抗腫瘤單克隆抗體或抗腫瘤單克隆抗體/藥物綴合物施 用至所述受試者。
28. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述方法還包括施用所述抗腫瘤單克隆抗體并且 所述抗腫瘤單克隆抗體選自由以下組成的組：利妥昔單抗、西妥昔單抗、曲妥珠單抗和培妥 珠單抗。
29. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述方法還包括施用所述抗腫瘤單克隆抗體/藥 物綴合物并且所述抗腫瘤單克隆抗體/藥物綴合物選自由以下組成的組：布妥昔單抗維多 汀、吉妥珠單抗奧佐米星、曲妥珠單抗艾美坦辛、伊妥珠單抗奧佐米星、格雷帕珠單抗維多 汀、羅佛珠單抗莫登素、坎妥珠單抗莫登素和米拉珠單抗-多柔比星。
30. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中在將所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至所 述受試者之后，所述方法還包括將化學(xué)治療劑施用至所述受試者。
31. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑選自由以下組成的組：達沙替尼、 尼羅替尼、帕納替尼、伊馬替尼、拉帕替尼和維莫德吉。
32. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中在將所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至所 述受試者之后，所述方法還包括將單克隆抗體/CD4+T細(xì)胞表位綴合物施用至所述受試者。
33. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中在將所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至所 述受試者之后，所述方法還包括 向所述受試者施用連續(xù)淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法以誘導(dǎo)所述受試者 的短暫淋巴細(xì)胞減少；并且 隨后向所述受試者施用從另外人同種異體供體的另外外周血細(xì)胞組合物獲得的連續(xù) 同種異體淋巴細(xì)胞組合物，所述連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自所述另外供體的另 外外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)在所 述另外供體抗所述受試者的方向中，所述另外供體包括相對于所述受試者的至少一個人白 細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因錯配，并且所述HLA II類等位基因錯配是在選自由以下組 成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（ii)所述受試者不具有對所述另外 供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iii)所述連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物中 的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述另外外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約 50%，（iv)基于以公斤（kg)為單位的所述受試者理想體重的另外供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目 在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（v)所述連續(xù)同種異體淋 巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于所述另外外周血細(xì)胞組合物中的自然 殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vi)所述連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比所述另外外周血細(xì) 胞組合物少至少一個數(shù)量級的⑶8+T細(xì)胞。
34. 如權(quán)利要求33所述的方法，其限制條件是所述連續(xù)同種異體淋巴細(xì)胞組合物的 ⑶4+T細(xì)胞未離體活化。
35. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中在將所述第一同種異體淋巴細(xì)胞組合物施用至所 述受試者之后，所述方法還包括施用阻斷T細(xì)胞中的負(fù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的試劑。
36. 如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述阻斷T細(xì)胞中的負(fù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的試劑選自由以 下組成的組：抗ro-i抗體、伊匹木單抗、抗ro-L2抗體和ro-i融合蛋白質(zhì)。
37. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述疾病或病狀選自由以下組成的組：癌癥、自身 免疫病癥、器官移植、同種異體移植物排斥和病毒感染。
38. 如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述疾病或病狀是癌癥并且所述癌癥是骨髓增生 異常綜合征。
39. -種制造用于施用至人接受者的同種異體淋巴細(xì)胞組合物的方法，其包括： 提供來自相對于所述接受者為同種異體的人供體的外周血細(xì)胞組合物，所述外周血細(xì) 胞組合物包括一定數(shù)目的⑶4+T細(xì)胞、一定數(shù)目的⑶8+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞， 其中（i)所述供體具有相對于存在于所述接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii) 所述供體包括相對于所述接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且 所述HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和 HLA-DPB1，并且（iii)所述接受者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗 體；并且 通過使所述外周血細(xì)胞組合物中的CD8+T細(xì)胞的數(shù)目減少至少一個數(shù)量級來從所述 外周血細(xì)胞組合物制造所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物，其中（a)所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約 50%，并且（b)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于所述外 周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，其限制條件是所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物的 ⑶4+T細(xì)胞未離體活化。
40. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述HLA II類等位基因匹配包括HLA-DRB1處的 匹配。
41. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述HLA II類等位基因匹配包括HLA-DRB1、 HLA-DQB1 和 HLA-DPB1 處的匹配。
42. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中如果所述供體和接受者是ABO血型不相容的并且 所述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目的紅細(xì)胞，那么制造所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物還 包括減少所述紅細(xì)胞數(shù)目。
43. 如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述紅細(xì)胞的數(shù)目包括小于或等于約50ml壓積。
44. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中存在于所述接受者中的抗原選自由以下組成的 組：贅生性抗原、贅生性獨特型、病毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原、寄生蟲抗原和非人類動物 抗原。
45. 如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述抗原是贅生性抗原并且所述贅生性抗原是腫 瘤抗原。
46. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述提供還包括針對一個或多個選擇特征進行篩 選并且對于選自由所述接受者、所述供體和一種或多種潛在同種異體供體組成的組的受試 者來執(zhí)行所述篩選。
47. 如權(quán)利要求46所述的方法，其中針對感染物的血清反應(yīng)性來篩選選擇特征。
48. 如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述感染物抗原選自由以下組成的組：人免疫缺 陷病毒（HIV)抗原、肝炎病毒抗原和巨細(xì)胞病毒抗原。
49. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述感染物抗原是巨細(xì)胞病毒抗原，對所述接受 者和所述供體加以篩選，并且在所述接受者或所述供體中沒有所述巨細(xì)胞病毒抗原的血清 反應(yīng)性。
50. 如權(quán)利要求46所述的方法，其中選擇特征是針對一種以上HLA II類等位基因來篩 選一種或多種潛在同種異體供體。
51. 如權(quán)利要求50所述的方法，其中潛在同種異體供體基于最小化所述一種以上HLA II類等位基因處、所述潛在同種異體供體與所述接受者之間的錯配來選自所述一種或多種 潛在同種異體供體，并且將所述潛在同種異體供體選為所述供體。
52. 如權(quán)利要求46所述的方法，其中選擇特征是針對一種或多種HLA I類等位基因來 篩選一種或多種潛在同種異體供體。
53. 如權(quán)利要求52所述的方法，其中潛在同種異體供體基于最小化所述一種或多種 HLA I類等位基因處、所述潛在同種異體供體與所述接受者之間的錯配來選自所述一個或 多個潛在同種異體供體，并且將所述潛在同種異體供體選為所述供體。
54. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述供體針對存在于所述接受者中的所述抗原進 行了免疫接種。
55. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述供體具有針對存在于所述接受者中的所述抗 原的預(yù)先存在的CD4+T細(xì)胞免疫力。
56. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述供體對其具有免疫力的存在于所述接受者中 的所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原選自由以下組成的組：人乳頭狀瘤病毒抗原、愛 潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰疹病毒（KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝 炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。
57. 如權(quán)利要求56所述的方法，其中所述病毒抗原是人乳頭狀瘤病毒抗原并且所述人 乳頭狀瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。
58. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的 數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約20%。
59. 如權(quán)利要求39所述的方法，其進一步限制條件為從所述供體獲得的CD4+T細(xì)胞未 有意地擴增或有意地離體分化。
60. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中減少所述外周血細(xì)胞組合物中的所述CD8+T細(xì)胞 包括使用與磁性顆粒相關(guān)聯(lián)的抗CD8+抗體或抗CD8+抗體加上補體。
61. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述外周血細(xì)胞組合物是全血產(chǎn)物或單采產(chǎn)物。
62. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中存在于所述接受者中的所述抗原由于將包含所述 抗原的納米顆粒引入所述接受者中而存在于所述接受者體內(nèi)，其中在引入所述納米顆粒之 前，所述抗原不存在于所述接受者體內(nèi)。
63. -種通過如權(quán)利要求39所述的方法獲得的用于施用至人接受者的同種異體淋巴 細(xì)胞組合物。
64. -種用于施用至人接受者的從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異 體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括： 來自所述供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷 細(xì)胞，其中（i)所述供體具有相對于存在于所述接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力， (ii)所述供體包括相對于所述接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配 并且所述HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1 和HLA-DPB1，（iii)所述接受者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗 體，（iv)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中 的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的所述接受者理想體 重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之 間，（vi)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于所述外周血細(xì) 胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比所述 外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的⑶8+T細(xì)胞； 其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
65. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中存在于所述接受者中的抗原選自由以 下組成的組：贅生性抗原、贅生性獨特型、病毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原和寄生蟲抗原。
66. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述抗原是贅生性抗原并且所述贅生 性抗原是腫瘤抗原。
67. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述供體對其具有免疫力的存在于所 述接受者中的所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原選自由以下組成的組：人乳頭狀瘤病 毒抗原、愛潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰疹病毒（KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗 原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。
68. 如權(quán)利要求67所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述病毒抗原是人乳頭狀瘤病毒抗原 并且所述人乳頭狀瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。
69. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中如果所述供體和接受者是ABO血型不 相容的并且所述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目的紅細(xì)胞，那么制造所述同種異體淋巴細(xì) 胞組合物還包括減少所述紅細(xì)胞數(shù)目。
70. 如權(quán)利要求69所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述紅細(xì)胞的數(shù)目包括小于或等于約 50ml壓積。
71. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述HLA II類等位基因匹配包括 HLA-DRB1處的匹配。
72. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述HLA II類等位基因匹配包括 HLA-DRB1、HLA-DQB1 和 HLA-DPB1 處的匹配。
73. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物沒有對 于巨細(xì)胞病毒抗原的免疫反應(yīng)性。
74. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的 ⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約20%。
75. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其進一步限制條件為從所述供體獲得的 CD4+T細(xì)胞未有意地擴增或有意地離體分化。
76. 如權(quán)利要求64所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述外周血細(xì)胞組合物是全血產(chǎn)物或 單采產(chǎn)物。
77. -種用于施用至人接受者的從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異 體淋巴細(xì)胞組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括： 來自所述供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷 細(xì)胞，其中（i)所述供體具有相對于存在于所述接受者體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力， (ii)所述供體包括相對于所述接受者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA)II類等位基因匹配 并且所述HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的組的基因處：HLA-DRBUHLA-DQB1 和HLA-DPB1，（iii)所述接受者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗 體，（iv)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中 的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的所述接受者理想體 重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之 間，（vi)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或等于所述外周血細(xì) 胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物具有比所述 外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的⑶8+T細(xì)胞； 其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
78. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述抗原選自由以下組成的組：贅生 性抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原、寄生蟲抗原和非人類動物抗原。
79. 如權(quán)利要求78所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述抗原是非人類動物抗原并且所述 非人類動物抗原是匙孔血藍蛋白抗原。
80. 如權(quán)利要求78所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗 原選自由以下組成的組：人乳頭狀瘤病毒抗原、愛潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰 疹病毒（KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原和流感抗 原。
81. 如權(quán)利要求80所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述病毒抗原是人乳頭狀瘤病毒抗原 并且所述人乳頭狀瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。
82. 如權(quán)利要求80所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述病毒抗原是流感抗原并且所述流 感抗原是血凝素抗原或神經(jīng)氨酸酶抗原。
83. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中如果所述供體和接受者是ABO血型不 相容的并且所述外周血細(xì)胞組合物包括一定數(shù)目的紅細(xì)胞，那么制造所述同種異體淋巴細(xì) 胞組合物還包括減少所述紅細(xì)胞數(shù)目。
84. 如權(quán)利要求83所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述紅細(xì)胞的數(shù)目包括小于或等于約 50ml壓積。
85. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述HLA II類等位基因匹配包括 HLA-DRB1處的匹配。
86. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述HLA II類等位基因匹配包括 HLA-DRB1、HLA-DQB1 和 HLA-DPB1 處的匹配。
87. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物沒有對 于巨細(xì)胞病毒抗原的免疫反應(yīng)性。
88. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的 ⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中的⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約20%。
89. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其進一步限制條件為從所述供體獲得的 CD4+T細(xì)胞未有意地擴增或有意地離體分化。
90. 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物,其中所述外周血細(xì)胞組合物是全血產(chǎn)物或 單采產(chǎn)物。
91. 一種用于治療受試者的疾病或病狀的試劑盒，所述試劑盒包括： 如權(quán)利要求77所述的淋巴細(xì)胞組合物，其中受試者是人接受者；并且 納米顆粒組合物，其包括包含不存在于所述人接受者體內(nèi)的抗原的納米顆粒。
92. 如權(quán)利要求91所述的試劑盒，其中所述納米顆粒還包括細(xì)胞因子。
93. 如權(quán)利要求92所述的試劑盒，其中所述細(xì)胞因子是白介素或干擾素。
94. 如權(quán)利要求93所述的試劑盒，其中所述細(xì)胞因子是白介素并且選自由以下組成的 組：IL-2、IL-7、IL-12 和 IL-15。
95. 如權(quán)利要求93所述的試劑盒，其中所述細(xì)胞因子是干擾素并且選自由以下組成的 組：干擾素 Y、干擾素0、干擾素 a、干擾素、t、干擾素 Q和復(fù)合干擾素。
96. 如權(quán)利要求91所述的試劑盒，其中所述納米顆粒還包括選自由以下組成的組的化 合物：趨化因子、成像劑、光天線分子、熱天線分子和Toll樣受體配體。
97. 如權(quán)利要求91所述的試劑盒，其中所述納米顆粒還包括將所述納米顆粒靶向輸送 至腫瘤細(xì)胞或抗原呈遞細(xì)胞的試劑。
98. -種治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括： 向所述受試者施用從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞 組合物， 所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自所述供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù)目的 CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)所述供體具有相對于存在于所述受試者 體內(nèi)的抗原的CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)所述供體包括相對于所述受試者的至少一個人白細(xì) 胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且所述HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的 組的基因處：HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)所述受試者不具有對所述供體的人 白細(xì)胞抗原有反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的 數(shù)目與所述外周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤 (kg)為單位的所述受試者理想體重的供體CD4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個CD4+T細(xì)胞/kg 與約1X109個⑶4+T細(xì)胞/kg之間，（vi)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞 的數(shù)目小于或等于所述外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)所述同種 異體淋巴細(xì)胞組合物具有比所述外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的⑶8+T細(xì)胞； 其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
99. 如權(quán)利要求98所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組合 物之前，所述方法還包括向所述受試者施用淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法以誘 導(dǎo)所述受試者的短暫淋巴細(xì)胞減少
100. 如權(quán)利要求98所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭或抑制髓源性抑制細(xì)胞的療法。
101. 如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述耗竭或抑制髓源性抑制細(xì)胞的療法包括施 用選自由以下組成的組的藥物：達沙替尼、5-氟尿嘧啶、泰索帝、氯膦酸鹽和吉西他濱。
102. 如權(quán)利要求98所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭或抑制腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的療法。
103. 如權(quán)利要求98所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭調(diào)控性T細(xì)胞的療法。
104. 如權(quán)利要求103所述的方法，其中耗竭調(diào)控性T細(xì)胞的療法可包括施用選自由以 下組成的組的藥物：環(huán)磷酰胺、地尼白介素融合毒素和達利珠單抗。
105. 如權(quán)利要求98所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之后，所述方法還包括施用藥物以誘導(dǎo)同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞的選擇性耗竭。
106. 如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述抗原選自由以下組成的組：贅生性抗原、病 毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原和寄生蟲抗原。
107. 如權(quán)利要求106所述的方法，其中所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原選自 由以下組成的組：人乳頭狀瘤病毒抗原、愛潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰疹病毒 (KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。
108. 如權(quán)利要求107所述的方法，其中所述病毒抗原是人乳頭狀瘤病毒抗原并且所述 人乳頭狀瘤病毒抗原是E6或E7抗原性肽。
109. 如權(quán)利要求107所述的方法，其中所述病毒抗原是人乳頭狀瘤病毒抗原并且所述 疾病或病狀是癌癥并且所述癌癥選自由以下組成的組：宮頸癌、外陰癌、陰道癌、陰莖癌、肛 門癌和口咽癌。
110. -種治療人受試者的疾病或病狀的方法，其包括： 向腫瘤中注入納米顆粒組合物，其中所述納米顆粒組合物包括包含不存在于所述受試 者體內(nèi)的抗原的納米顆粒，由此將所述抗原引入所述受試者體內(nèi)； 向所述受試者施用從人同種異體供體的外周血細(xì)胞組合物獲得的同種異體淋巴細(xì)胞 組合物，所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物包括來自所述供體的外周血細(xì)胞組合物的一定數(shù) 目的CD4+T細(xì)胞和一定數(shù)目的自然殺傷細(xì)胞，其中（i)所述供體具有相對于所述抗原的 CD4+T細(xì)胞免疫力，（ii)所述供體包括相對于所述受試者的至少一個人白細(xì)胞抗原（HLA) II類等位基因匹配并且所述HLA II類等位基因匹配是在選自由以下組成的組的基因處： HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DPB1，（iii)所述受試者不具有對所述供體的人白細(xì)胞抗原有 反應(yīng)性的可檢測抗體，（iv)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目與所述外 周血細(xì)胞組合物中的CD4+T細(xì)胞的數(shù)目的差異小于約50%，（v)基于以公斤（kg)為單位的 所述受試者理想體重的供體⑶4+T細(xì)胞的數(shù)目在約1X105個⑶4+T細(xì)胞/kg與約1X109個 CD4+T細(xì)胞/kg之間，（vi)所述同種異體淋巴細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目小于或 等于所述外周血細(xì)胞組合物中的自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目，并且（vii)所述同種異體淋巴細(xì)胞 組合物具有比所述外周血細(xì)胞組合物少至少一個數(shù)量級的CD8+T細(xì)胞； 其限制條件是同種異體淋巴細(xì)胞組合物的CD4+T細(xì)胞未離體活化。
111. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括向所述受試者施用淋巴細(xì)胞減少性非致淋巴細(xì)胞衰竭的療法以 誘導(dǎo)所述受試者的短暫淋巴細(xì)胞減少。
112. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭或抑制髓源性抑制細(xì)胞的療法。
113. 如權(quán)利要求112所述的方法，其中所述耗竭或抑制髓源性抑制細(xì)胞的療法包括施 用選自由以下組成的組的藥物：達沙替尼、5-氟尿嘧啶、泰索帝、氯膦酸鹽和吉西他濱。
114. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭或抑制腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的療法。
115. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之前，所述方法還包括施用耗竭調(diào)控性T細(xì)胞的療法。
116. 如權(quán)利要求115所述的方法，其中耗竭調(diào)控性T細(xì)胞的療法可包括施用選自由以 下組成的組的藥物：環(huán)磷酰胺、地尼白介素融合毒素和達利珠單抗。
117. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中在向所述受試者施用所述同種異體淋巴細(xì)胞組 合物之后，所述方法還包括施用藥物以誘導(dǎo)同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞的選擇性耗竭。
118. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中所述抗原選自由以下組成的組：贅生性抗原、病 毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原、寄生蟲抗原和非人類動物抗原。
119. 如權(quán)利要求118所述的方法，其中所述抗原是非人類動物抗原并且所述非人類動 物抗原是匙孔血藍蛋白抗原。
120. 如權(quán)利要求118所述的方法，其中所述抗原是病毒抗原并且所述病毒抗原選自 由以下組成的組：人乳頭狀瘤病毒抗原、愛潑斯坦巴爾病毒抗原、卡波濟肉瘤相關(guān)皰疹病毒 (KSHV)抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和丙型肝炎病毒抗原。
121. 如權(quán)利要求120所述的方法，其中所述病毒抗原是流感抗原并且所述流感抗原是 血凝素抗原或神經(jīng)氨酸酶抗原。
122. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中所述納米顆粒還包括細(xì)胞因子。
123. 如權(quán)利要求122所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是白介素或干擾素。
124. 如權(quán)利要求123所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是白介素并且選自由以下組成的 組：IL-2、IL-7、IL-12 和 IL-15。
125. 如權(quán)利要求123所述的方法，其中所述細(xì)胞因子是干擾素并且選自由以下組成的 組：干擾素 Y、干擾素0、干擾素 a、干擾素、t、干擾素 Q和復(fù)合干擾素。
126. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中所述納米顆粒還包括選自由以下組成的組的化 合物：趨化因子、成像劑、光天線分子、熱天線分子和Toll樣受體配體。
127. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中所述納米顆粒還包括將所述納米顆粒靶向輸送 至腫瘤細(xì)胞或抗原呈遞細(xì)胞的試劑。
128. 如權(quán)利要求110所述的方法，其中在從所述供體獲得所述外周血細(xì)胞組合物之 前，所述供體針對所述抗原進行了免疫接種。
129.如權(quán)利要求110所述的方法，其中所述疾病或病狀選自由以下組成的組：肺癌腫 瘤、乳腺癌腫瘤、前列腺癌腫瘤、腦癌腫瘤和皮膚癌腫瘤。
【文檔編號】C12N5/078GK104394877SQ201380030373
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月8日
【發(fā)明者】E·J·福克斯, H·J·西蒙斯, L·思文 申請人:約翰·霍普金斯大學(xué)