參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子EjMYB1及應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一個參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子EjMYB1。以擬南芥中特異調控木質素合成的AtMYB58氨基酸序列為參考序列，利用薔薇科數(shù)據(jù)庫，通過同源克隆獲得。EjMYB1的表達量在枇杷不同組織、不同處理中與木質素的積累呈正相關；EjMYB1可正向調控木質素合成基因EjPAL1、Ej4CL1和Ej4CL5的啟動子活性；EjMYB1在煙草中瞬時過量表達時，可極顯著提高其葉片木質素含量。
【專利說明】參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子及應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物分子生物技術和基因工程領域，涉及一個參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子心￥7沒7。
【背景技術】
[0002]MYB是一類存在于真核生物中的功能多樣的轉錄因子。MYB含有高度保守的DNA結構域，稱為MYB結構域，是由52個氨基酸組成的4個不完全重復氨基酸序列，根據(jù)MYB結構域數(shù)量的不同可以分為幾類，其中R2R3-MYB為在植物中研究十分廣泛的一類，在擬南芥中有126個R2R3-MYB成員，并細分為22個亞家族。R2R3-MYB參與植物特異的生長過程，初生和次生代謝、細胞建成、發(fā)育過程和響應生物與非生物脅迫等。
[0003]木質素是芳香族類的雜聚物，是次生細胞壁的主要組成之一。木質素可參與植株機械支持、維管系統(tǒng)中的水分和溶質運輸、防御病蟲害等生命活動。然而，在有些植物中，木質素卻是影響其品質的主要因素之一，例如，作為生物能源的柳枝稷，次生細胞壁的另兩個組成成分纖維素、木聚糖是作為發(fā)酵的主要碳源，而木質素則會影響其生物轉化過程；作為果蔬類的枇杷、山竹、竹筍、芹菜等，木質化則嚴重影響了其食用品質與貯藏品質。
[0004]枇杷(iZr1AoirjaLindl.)屬于薔薇科,為非躍變型果實,可分為紅肉和白肉兩大類型。與其他果實采后出現(xiàn)軟化的現(xiàn)象不同，紅肉枇杷果實在采后會出現(xiàn)木質化現(xiàn)象，使果實硬度上升，粗糙少汁，風味變淡，商品價值下降。因此，分析木質化產(chǎn)生的調控機制，在枇杷果實木質 化研究中具有重大意義。在轉錄調控水平上，多個MYB成員是在木質素合成途徑中起轉錄激活的作用。擬南芥中先后發(fā)現(xiàn)參與次生細胞壁的形成，AtMYB58、AtMYB63為特異參與木質素的合成調控。另外，木本植物中，火炬松的PtMYBl、PtMYB4、PtMYB8,桉樹的汾#7似、楊樹的PtrMYB3、PtrMYB20都參與木質素單體的合成。果樹研究上，并未涉及類似MYB的研究，枇杷作為木質化現(xiàn)象典型的果實開展此類研究的是十分必要和重要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一個參與枇杷果實木質素合成調控的MYB轉錄因子其核苷酸序列編號為:SEQ ID NO:1。其與擬南芥中特異調控木質素合成的相似度高，基因表達模式與枇杷木質素的合成呈正相關，可正向誘導木質素合成基因EJ4CL1取Ej4CL5的啟動子活性。轉錄因子具體通過以下步驟獲得:
以擬南芥中特異調控木質素合成的氨基酸序列為參考序列，在薔薇科數(shù)據(jù)庫中(http://www.rosaceae.0rg)進行比對,選擇匹配度最高的三條序列，MDP0000133542 (chr5:11008894..11011881), MDP0000435315(chr3:7586759..7588715)和 MDP0000230141(chr3:7611165..7613121)，根據(jù)這三條序列在蘋果基因組上的位置，獲得相應核苷酸序列；根據(jù)這三條序列設計引物，以枇杷cDNA為模板，獲得以MDP0000230141 (chr3:7611165..7613121)為序列的枇杷序列SEQ:N0.\，命名為EjMYBl。[0006]為了進一步確定序列SEQ:N0.1的編碼區(qū)，對其進行RACE擴增。根據(jù)SEQ:N0.1序列設計RACE引物SEQ:N0.2-5,以枇杷RACE cDNA作為模板，參照SMART RACE cDNAAmplificat1n (Clontech)說明，進一步確定枇杷上此序列的編碼區(qū),獲得包含非翻譯區(qū)的SEQ:N0.6。
[0007]1.EjMYBl表達量與枇杷木質素合成呈正相關:
根據(jù)已獲得的包含非翻譯區(qū)的SEQ:N0.6設計實時定量熒光PCR引物(SEQ:N0.7-8),產(chǎn)物長度為89bp，其特異性經(jīng)熔點曲線以及測序結果驗證。分析枇杷不同組織(莖、葉、果實)以及不同處理果實(0°C，熱激，程序降溫)的木質素含量，并提取樣品總RNA經(jīng)TURBODNase 處理后合成 cDNA (RevertAid ? First Strand cDNA, Fermates)。以批杷 cDNA 為模板，參照 LightCycler FastStart DNA Masterpius SYBR Green I (Roche),利用 LightCycler1.5定量PCR儀(Roche)進行實時定量PCR分析。結合各樣品中木質素含量分析，結果顯示在木質素含量高的枇杷組織中，^7及招7的表達量同樣較高；經(jīng)01:處理的枇杷果實木質素積累增加，同時的表達被迅速強烈誘導；而熱激和程序降溫處理后果實中木質化進程延緩，且EjMYBl的表達被緩慢誘導。
[0008]所述的實時定量PCR 參數(shù)為:5 X LightCycler FastStart DNA Master?5 SYBRGreen I Master Mix 2 μ I,上下游引物(10 “]\0各0.5 yl，cDNA 模板 I yl，PCR 級別的水6 μL，共10 μ I體系。反應條件為95°C預變性5min;95°C變性5 sec，60°C退火5 sec，45個熱循環(huán)；熔解曲線分析65°C到95°C，每5sec升高1°C，結束。
[0009]2.EjMYBl可正向調控木質素合成基因啟動子活性:
(X)EjMYBl的表達載體構建:
根據(jù)確定的心*^7的全長序列(SEQ:N0.1)設計全長引物(SEQ:N0.9_10)，以枇杷 cDNA 為模板，參照 FastStart High Fidelity PCR System (Roche)進行 PCR 擴增，產(chǎn)物回收連接到PGEM-T easy載體轉化到大腸桿菌DH5 α，進行測序確定。確定后將質粒經(jīng)Not\、Spel雙酶切,連接到表達載體pGreen SK。重組質粒經(jīng)測序驗證,進而電轉到農(nóng)桿菌GV3101::pSoup中，以甘油菌形式保存于_80°C。
[0010](2)EjMYBl轉錄調控啟動子活性分析:
設計引物(SEQ:N0.11-28),以 GenomeWalker ? Universal Kit 試劑盒(Clontech,USA)制備的枇杷DNA為模板，擴增枇杷木質素合成基因^/Π、和的啟動子序列(SEQ:N0.29-37)，分別重組到pGreen LUC表達載體上，重組質粒經(jīng)測序驗證。將含有 pGreen SK、pGreen UjMYBl、pGreen UiC-EjPALU pGreen UiC-Ej4CLs 和 pGreenLUCiyC^s啟動子的重組質粒的甘油農(nóng)桿菌分別劃線于含25 μg/ml慶大霉素和50 μ g/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h后，刮取部分農(nóng)桿菌涂布到相同的培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)。收集農(nóng)桿菌到滲透液中(10 mM MES，1mMMgCl2,150 mM乙酰丁香酮，pH 5.6)，并調整OD6tltl到
0.75。將 pGreen SK 和 pGreen UjMYBl 分別與 pGreen UiC-EjPALl^reen UiC-Ej4CLs,pGreen UiC-EjCADs以10:1的比例混合注射到約4周大小的本氏煙葉片上。3 d后，進行雙熒光素酶檢測，即檢測葉片中REN和LUC的熒光值，計算LUC/REN的比值判斷是否具有調控木質素合成基因和啟動子活性的效應。結果顯示-.EjMYBl可正向誘導EjPALl、Ej4CLl和啟動子的活性，進而增強枇杷木質素的積累。
[0011]所述的雙突光素酶檢測方法為:應用Dual_Luciferase?Reporter Assay System(Promega)和熒光檢測儀分析LUC和REN的表達。用半徑2 mm的打孔器在注射口附近取樣，放在100 μ I PBS緩沖液中磨碎，吸取上清液50 μ I,加入50 μ I Luciferase Assay Buffer避光反應1min后檢測LUC熒光發(fā)光信號值，再加入50 μ I Stop & Glo Buffer避光反應1min后檢測REN熒光發(fā)光信號值。
[0012]本發(fā)明的另一個目的是提供所述MYB轉錄因子在調控采后枇杷果實木質化中的應用。以煙草為例，瞬時過量表達時顯著提高煙草葉片木質素含量，可增強煙草葉片木質素合成，證實其參與木質素合成的調控，同時為枇杷果實木質化這一產(chǎn)業(yè)問題提供理論基礎。具體通過以下步驟實現(xiàn):
將含pGreen SK或pGreen HjMYBl重組質粒的甘油農(nóng)桿菌分別劃線于含25 μ g/ml慶大霉素和50 μ g/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h，刮取部分農(nóng)桿菌到新的培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)。收集農(nóng)桿菌到滲透液中(10 mM MES, 10 mM MgCl2,150 mM乙酰丁香酮，pH 5.6)，并調整OD6tltl到0.75。將含pGreen SK或pGreen UjMYBl的農(nóng)桿菌分別注射到約4周大小的普通煙草相同葉片的兩邊。5 d后，取注射的葉片凍于液氮中用于后續(xù)的木質素含量的測定。結果顯示:瞬時過量表達的煙草葉片中木質素含量極顯著高于對照葉片，證實EjMYBl在煙草體內(nèi)具有生物活性，參與了木質素的合成過程。
[0013]現(xiàn)有延緩枇杷果實木質素合成的技術，多集中在不同儲藏條件的嘗試上，工作量大，經(jīng)濟效益低。而本發(fā)明提供一個正向參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子及其調控機制，結 果顯示，抑制表達的儲藏條件即可顯著抑制或延緩枇杷果實木質素的合成。本發(fā)明結果可有效指導枇杷果實的采后儲藏，為解決枇杷果實木質化這一產(chǎn)業(yè)問題提供有力的理論支撐。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1是枇杷不同組織中木質素含量與表達量的變化。
[0015]圖2是不同處理中枇杷果實木質素含量的變化。
[0016]圖3是不同處理中枇杷果實EjMYBl表達量的變化。
[0017]圖4是EjMYBI調控木質素合成基因啟動子活性分析。
[0018]圖5是EjMYBl調控木質素合成的功能驗證。
【具體實施方式】
[0019]下面結合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步闡述，但實施例不限制本發(fā)明的保護范圍。
[0020]實施例1 'EjMYBl全長序列的獲得 (一)實驗方法
1.序列查找:在薔薇科(http://www.rosaceae.0rg)的 Apple Genome V1.0 predictedpeptides數(shù)據(jù)庫中，應用blastp算法，以的氨基酸序列進行查找；選擇匹配度最高的前三條序列:MDP0000133542 (chr5:11008894..11011881),MDP0000435315 (chr3:7586759..7588715) ,MDP0000230141 (chr3:7611165..76131 21)，根據(jù)這三條序列在蘋果基因組上的位置，獲得相應核苷酸序列，設計引物，以枇杷cDNA為模板，獲得了以MDP0000230141(chr3:7611165..7 613121)為參考序列的枇杷序列 SEQ:N0.12.EjMYBl序列擴增:根據(jù)查找到的核苷酸序列擴增獲得一條序列SEQ:N0.1，命名為EjMYBl。以枇杷cDNA為模板，應用SEQ:N0.9_10為引物擴增，參照FastStart HighFidelity PCR System (Roche)進行 PCR 擴增。PCR 反應條件為 94°C預變性 5 min ;94°C變性30 s，58°C退火30 s，72°C延伸90 S，35個循環(huán)；最后72°C延伸lOmin。PCR產(chǎn)物回收連接到pGEM-T easy載體轉化到大腸桿菌DH5 α，進行測序確定。
[0021]3.EjMYBl 非編碼區(qū)序列擴增:參照 SMART RACE cDNA Amplificat1n(Clontech)說明，設計RACE引物SEQ:N0.2_5。以枇杷RACE cDNA作為模板，以ExTaq聚合酶(Takara)進行PCR擴增，進行2次PCR。第一次PCR反應條件為:反應條件為94°C預變性5 min ；94°C變性 30 S，72。。，150 S，5 個循環(huán);94°C變性 30 s，68°C退火 30 s，72°C延伸 150 S，5 個循環(huán)；94°C變性30 s，65°C退火30 s，72°C延伸150 S，25個循環(huán)；最后72°C延伸10 min。第二次反應以第一次反應的產(chǎn)物為模板進行，參數(shù)為:10 XExBuffer 2 μ L，2.5mmol/L dNTPs 1.6μ I,內(nèi)測引物NUP 2 yL,10 μ mol/L特異內(nèi)測引物0.5 μ 1，ExTaq聚合酶0.1 yL，加滅菌的雙蒸水至20 μ L。94°C預變性5 min ； ;94°C變性30 s，58°C退火30 s，72°C延伸90 s，35個循環(huán)；最后72°C延伸10 min。PCR產(chǎn)物回收連接到pGEM_T easy載體轉化到大腸桿菌DH5 α ,進行測序確定。
[0022](二)實驗結果
獲得了 EjMYBl的序列SEQ:Ν0.1，進一步通過RACE擴增，得到了該序列的5’、3’末端的非翻譯區(qū)，即SEQ:N0.6，其中SEQ:N0.1 % EjMYBl的編碼區(qū)。
[0023]實施例2 'EjMYBl在枇杷不同組織以及不同處理的果實中的表達模式分析 (一)實驗方法
1.樣品處理
成熟度一致，大小均勻，無病蟲害的枇杷果實進行以下處理:0°c，即直接將果實貯藏在(TC環(huán)境；熱激處理，即40°C處理4 h后，再貯藏到0°C環(huán)境；程序降溫處理，即5°C下放置6d以后，再貯藏在0°C環(huán)境。果肉切成塊狀后迅速放在液氮中，之后放在_80°C保存。葉片、莖組織用液氮凍后，放在_80°C保存。
[0024]2.總 RNA 提取
分別稱取存放在_80°C的枇杷葉片、莖各0.2 g，果實I g，按以下步驟提取總RNA:樣品在液氮中充分研磨，加入到65°C預熱的裝有4 ml CTAB/80 μ I β -巰基乙醇提取緩沖液的10 ml離心管中，渦旋混合放到65°C加熱2 min ;再向離心管中加入4 ml氯仿:異戊醇(24:I)抽提液，渦旋混合；15°C 1000rpm離心10 min，吸取上清到新的1ml離心管中，再次加Λ 4 ml氯仿:異戊醇(24:1)抽提液，渦旋，10000 rpm離心10 min,吸取上清到新的10 ml離心管中；加入1/4體積的10 mol/1的LiCl2，放置在4°C冰箱過夜。次日，4°C 10000 rpm離心30 min，倒上清，用槍頭輕輕吸去殘余的液體，加入400 μ I 65°C預熱的SSTE溶液，溶解沉淀；再加入500 μ I氯仿:異戊醇(24:1)抽提液，渦旋混合，將液體全部轉移到1.5 ml離心管中，10000 rpm離心10 min,吸取上清至新的1.5 ml的離心管中，加入2倍體積-201^?冷的無水乙醇，上下顛倒混勻，-80°C放置30 min以上；4°C 10000 rpm離心25 min,倒掉上清液，用槍頭輕輕吸去殘余的液體，加入20 μ I DEPC水溶解沉淀。即為總RNA。
[0025]3.基因表達模式分析
將提取的總RNA用TURBO DNase去除其中的DNA后，參照Fermates公司提供的RevertAid ? First Strand cDNA 合成試劑盒合成 cDNA。使用 LightCycler FastStart DNAMaster?5 SYBR Green I染料試劑盒說明書，應用LightCycler 1.5定量PCR儀用內(nèi)參基因ACT將各個模板濃度調整到相對一致水平Ct=22~23左右。調整后的cDNA作為模板，用EjMYBl實時定量引物SEQ:N0.7_8和內(nèi)參基因ACT進行熒光定量PCR，得到相應的Ct值。不同組織的表達量采用絕對定量的方法計算，即2_ΛΜ，其中Λ Ct為Ct {EJMYB1、與Ct (ACT)之差。三個處理的表達量用相對定量的計算方法，即，即Λ Ct為Ct {EJMYB1、與Ct(ACT)之差，ΔΔ Ct為Λ Ct (某天處理值)與Λ Ct (第O天值)之差。
[0026](二)實驗結果
在不同組織中，木質素含量高的組織中，表達量也較高(附圖1)。0°C處理過程中隨著木質素含量上升，迅速響應，表達量上升，而熱激和程序降溫處理可以減緩果實木質素含量的升高(附圖2)，并抑制表達的上升趨勢(附圖3)。EjMYBl的表達量與木質素含量的變化呈正向相關，由此推測參與枇杷木質素的合成。
[0027]實施例3..EjMYBl轉錄調控木質素合成基因啟動子活性分析 (一)實驗方法
1.枇杷木質素合成基因啟動子載體構建
設計引物(SEQ:N0.11-28), VX Genomeffalker? Universal Kit 試劑盒(Clontech,USA)制備的枇杷DNA為模板，使用Platinum? Taq DNA Polymerase體系進行2輪PCR,擴增枇杷木質素合成基因萬H,EJ4CLs和的啟動子序列(SEQ:N0.29-37)。第一輪進行PCR反應程序為 94°C變性 25s，72。。，3 min，7 個循環(huán)；94°C變性 25s，67。。，3 min, 32 個循環(huán)；67°C延伸7min。以第一輪PCR產(chǎn)物為模板，進行第二輪PCR擴增，反應程序為94°C變性25 s,72°C，3min，7個循環(huán)； 94°C變性25 s，67°C，3 min，32個循環(huán)；671:延伸7 1^11?；厥蘸筮B接到pGEM-T easy載體并轉化到大腸桿菌DH5 α，進行測序確定。
[0028]用Sal/Nco\雙酶切已連到pGEM-T easy載體上的啟動子，連接到pGreen LUC載體上。轉化到大腸桿菌DH5ci，進行測序確定。將啟動子的重組質粒電轉到農(nóng)桿菌GV3101中，挑取陽性克隆，并保存在75%甘油中。
[0029]2.注射煙草
將含有 pGreen SK、pGreen UjMYBl、pGreen UiC-EjPAL1、pGreen UiC-Ej4CLs 和pGreen UiC-EjCADs啟動子的重組質粒的甘油農(nóng)桿菌分別劃線于含25 μ g/ml慶大霉素和50 μ g/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h后，刮取部分農(nóng)桿菌涂布到相同的培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)。收集農(nóng)桿菌到滲透液中(10 mM MES，10 mM MgCl2,150 mM乙酰丁香酮，pH5.6)，并調整 OD6tltl 到 0.75。將 pGreen SK、pGreen UjMYBl 分別與 pGreen UiC-EjPAL1、pGreenLUC-^/mi,pGreen LUC-^/^α^以10:1的比例混合注射到約4周大小的本氏煙葉片上，每株注射三片葉子。生長3 d后進行熒光值檢測。
[0030]3.雙熒光素酶檢測分析
用半徑2 _的打孔器在注射口附近取樣，每片葉子取2個圓片，一共6個圓片。圓片放在100 μ I PBS緩沖液中磨碎，吸取上清液50 μ I,加入50 μ I Luciferase Assay Buffer避光反應1min后檢測LUC熒光發(fā)光信號值，再加入50 μ I Stop & Glo Buffer避光反應1min后檢測REN熒光發(fā)光信號值。通過比較pGreen HjMYBI和陰性對照pGreen SK的LUC/REN比值，判斷是否具有調控啟動子活性的效應。[0031](二)實驗結果
EjPAL, EJ4CL, EjCAD是枇杷木質素合成的關鍵結構基因，在基因家族中^/況17和EJ4CL5兩個成員參與木質素的合成。本發(fā)明結果證實EjMYBl可增強EjPALl ,EJ4CL1和啟動子的活性分別達到3倍，14倍和4倍(附圖4)，進而參與枇杷木質素的合成調控。
[0032]實施例4 'EjMYBl調控木質素合成的功能驗證 (一)實驗方法
1.煙草注射
將含pGreen SK或pGreen UjMYBl重組質粒的甘油農(nóng)桿菌分別劃線于含25 μ g/ml慶大霉素和50 μ g/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h后，刮取部分農(nóng)桿菌到涂布到相同的培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)。收集農(nóng)桿菌到滲透液中(10 mM MES, 10 mM MgCl2,150 mM乙酰丁香酮，PH 5.6)，并調整0D_到0.75。使用無針頭注射器將菌液注射到約4周大小的普通煙的葉片上，每株植株注一片葉子，在同一片葉子的兩側分別注射含pGreen SK或pGreen UjMYBl重組質粒的農(nóng)桿菌菌液。生長5 d后，取注射過的葉片進行木質素含量的測定。
[0033]2.木質素含量測定
樣品的洗滌:煙草葉片凍樣置于液氮中磨成粉末，裝入到5 mL洗液(100 mM的K2HPO4/KH2PO4,0.5% Triton X-100,0.5% PVP，pH 7.8)中，在室溫下振蕩洗滌 30 min, 10000 g，20 min 離心，用洗液重懸浮沉淀，重復洗兩次，再用100%甲醇洗4次，每次洗的時間均為0.5 h，同樣10000 g，20 min離心。沉淀在80°C烘箱中烘干過夜。木質素含量的測定:精確稱取10 mg的經(jīng)洗滌烘干后的粉末于10 mL的帶蓋的管子，加入I mL的2 M HCl和0.1 mL的巰基乙酸，沸水浴8 h后置冰上冷卻，15000 g，4°C離心20 min ;沉淀用蒸餾水清洗、過夜烘干后重懸浮于2 mL的I M的NaOH中，室溫下輕微振蕩反應18 h，再用15000 g,離心20 min ;取0.5 mL的上清液于新的試管中，加入100 μ L的濃鹽酸，置4°C下4 h以沉淀巰基乙酸結合的木質素，用15000 gdO離心20 min,沉淀溶于I mL的I M的NaOH。經(jīng)過適當稀釋后,用紫外-可見分光光度計測定280 nm處的吸光值。以NaOH溶液為空白對照。單位為X 13 A280/kg FW，重復3次。
[0034](二)實驗結果
注射含PGreen SK表達載體的農(nóng)桿菌煙草葉片中木質素含量為3.01 X 13 A280/kg Fff,而注射含pGreen UjMYBl重組質粒的農(nóng)桿菌煙草葉片的木質素含量達到了 3.74X103A280/kg Fff,極顯著地高于陰性對照(附圖5)。本發(fā)明結果證實了，反具有調控木質素合成的功能。
[0035]對于本領域普通技術人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應屬于本發(fā)明所附權利要求的保護范圍。
【權利要求】
1.參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子，其特征在于，該轉錄因子的核苷酸序列為:SEQ IDNO =10
2.根據(jù)權利要求1所述的參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子其特征在于，所述轉錄因子通過以下步驟獲得:以擬南芥中特異調控木質素合成的氨基酸序列為參考序列，查找薔薇科植物中的同源序列，首先在薔薇科數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站進行比對，選取匹配度最高的前三個序列，設計引物，獲得序列SEQ:N0.1的轉錄因子^/￥7價。
3.根據(jù)權利要求1所述的參與枇杷果實木質素合成調控的轉錄因子在調控采后枇杷果實木質化中 的應用。
【文檔編號】C12N15/84GK104031922SQ201410230291
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月28日 優(yōu)先權日:2014年5月28日
【發(fā)明者】殷學仁, 徐倩, 李鮮, 陳昆松 申請人:浙江大學