人IgG2抗體鉸鏈區(qū)修飾體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了一種鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體，所述抗體重鏈鉸鏈區(qū)缺失Glu216Arg217Lys218位氨基酸，且在Cys219和/或Cys220含有氨基酸的替換和/或刪除。本發(fā)明另一方面還提供一種增強(qiáng)重組人IgG2抗體抗蛋白酶水解作用的方法。本發(fā)明所提供的IgG2型抗體消除了抗體鉸鏈區(qū)二硫鍵引起的異質(zhì)性，且具有增強(qiáng)的抗蛋白酶水解作用。
【專利說明】人lgG2抗體鉸鏈區(qū)修飾體

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗體領(lǐng)域，更具體地，涉及一種重組人IgG2抗體鉸鏈區(qū)修飾體，所述修飾體的鉸鏈區(qū)特定位點(diǎn)的氨基酸殘基被刪除和/或替換。

【背景技術(shù)】
[0002]在開發(fā)抗體類藥品時，其物理性質(zhì)，尤其是均一性和穩(wěn)定性極為重要。關(guān)于IgG2亞型，有人報道了由抗體鉸鏈區(qū)的二硫鍵帶來的異質(zhì)性。如Amgen公司開發(fā)的靶向RANKL(核因子κΒ受體活化因子配體)的全人源單克隆抗體Denosumab,它是一種IgG2抗體，同許多血漿分離的天然IgG2亞型抗體一樣，它存在三種形式的異構(gòu)體I gG2-A、I gG2-A/B 和 I gG2_B，而導(dǎo)致終產(chǎn)品的非均一性(Wypych J 等，J B1l Chem,2008，283:29266-29272)。而抗體分子中重鏈、輕鏈間所含半胱氨酸殘基(Cys)形成二硫鍵的配對方式、錯配或配對不完全都會影響它對抗原的識別，會導(dǎo)致抗體與抗原的結(jié)合力下降甚至活性喪失。因而，抗體藥物開發(fā)時應(yīng)盡可能減少由二硫鍵所致異質(zhì)性因素，獲得均一性產(chǎn)物。
[0003]人免疫球蛋白各亞型間的恒定區(qū)的同源性高達(dá)95%以上，但鉸鏈區(qū)序列長度及Cys殘基的個數(shù)明顯不同，IgG2鉸鏈區(qū)由12個氨基酸組成，包含4個Cys殘基，更特別的是，它有兩個連續(xù)的Cys位點(diǎn)，Cys219和Cys220。IgG2的上游鉸鏈區(qū)較IgGl少3個氨基酸，且220位的Ser被Cys替換。此外，相對于IgGl，IgG2的重鏈(HC) CHl區(qū)域中131位Ser亦被Cys替換(由EU索引殘基編碼系統(tǒng)編碼)，Cysl31通常與輕鏈(LC) Cys214配對形成二硫鍵。RP-HPLC分析IgGl和IgG2型的人源化單克隆抗體，IgGl呈單一峰，而IgG2則出現(xiàn)三個峰，可知IgG2抗體的異質(zhì)性源于其一級結(jié)構(gòu)的差異性，更具體地講，由于IgG2抗體HC的Cysl31、LC的Cys214以及上游鉸鏈區(qū)的Cys219和Cys220之間可形成三種不同的分子間或分子內(nèi)二硫鍵的配對方式，導(dǎo)致產(chǎn)生三種異構(gòu)體，其中IgG2-A型的LC的Cys214僅與HC CHl域內(nèi)Cys-131形成分子間二硫鍵(圖1_1) ；IgG2-B的LC Cys214和上游鉸鏈區(qū)的Cys219形成分子間二硫鍵，CHl域內(nèi)Cysl31與HC的Cys220形成分子內(nèi)二硫鍵(圖
1-3);而IgG2-A/B是兩種異構(gòu)體的中間體形式(圖1-2)。將以上幾個位點(diǎn)的Cys突變?yōu)镾er,如 Cysl31Ser、Cys219Ser、Cys220Ser 和 Cys219Ser/Cys220Ser 幾種突變體，毛細(xì)管凝膠電泳結(jié)果顯示，圖譜均呈現(xiàn)單一峰，且它們與Fe Y受體、FcRn受體或Clq的結(jié)合能力與野生型IgG2沒有明顯差異,抗體的結(jié)合親和力也未受影響(Sandra Lightle等，ProteinScience, 2010,19:753-762)。
[0004]另外，雖然IgG2較其他幾種亞型的抗體，如IgGl的抗蛋白酶水解作用要強(qiáng)許多，但是依然存在被某些蛋白酶降解的可能，其鉸鏈區(qū)所含三個氨基酸位點(diǎn)Glu216Arg217Lys218 (EU索引氨基酸殘基編碼系統(tǒng))，是潛在的蛋白酶酶切位點(diǎn)，如內(nèi)肽酶Glu-C切在Glu216之后，纖溶酶和胰蛋白酶酶切在Arg217或Lys218之后，Xa因子和內(nèi)肽酶Arg-C切在Arg217之后，凝血酶和內(nèi)肽酶Lys-C切在Lys218之后。這些潛在的蛋白酶水解位點(diǎn)，增加了 IgG2型抗體對蛋白酶的水解作用的敏感性，穩(wěn)定性降低。
[0005]上游鉸鏈區(qū)(Upper hinge)是抗體Fab段和Fe段之間的柔性肽接頭，允許Fab段繞其對稱軸靈活轉(zhuǎn)動，因而上游鉸鏈區(qū)的氨基酸修飾，會改變鉸鏈區(qū)的長度、區(qū)段柔性(segmental flexibility)以及抗體Fab段與Fe段間的相互作用，繼而影響抗體與Fe受體的結(jié)合以及識別抗原的能力。IgG2抗體鉸鏈區(qū)僅含12個氨基酸，且鉸鏈區(qū)缺乏甘氨酸殘基、并包含剛性的聚脯氨酸雙螺旋，并通過額外的重鏈間二硫鍵來穩(wěn)定。這些特性限定了IgG2分子的柔性，IgG2的柔性是4種IgG亞型中最低的。因而,本領(lǐng)域技術(shù)人員不會認(rèn)真考慮將IgG2抗體上游鉸鏈區(qū)截短的突變形式。我們創(chuàng)造性地將Glu216Arg217Lys218 (EU索引氨基酸殘基編碼系統(tǒng))三個潛在的蛋白酶酶切位點(diǎn)刪除、同時將上游鉸鏈區(qū)Cys219和/或Cys220兩個氨基酸進(jìn)行替換或刪除，獲得了均一、穩(wěn)定的IgG2抗體產(chǎn)物，同時抗體的抗原結(jié)合力和與受體的作用不受影響，這個技術(shù)效果是超出本領(lǐng)域技術(shù)人員預(yù)期的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的在于提供一種鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體，所述抗體鉸鏈區(qū)特定位點(diǎn)的一個或多個氨基酸被刪除和/或替換，以獲得均一、穩(wěn)定的產(chǎn)品。本發(fā)明另一方面還提供一種增強(qiáng)重組人IgG2抗體抗蛋白酶水解作用的方法。本發(fā)明中所提及的氨基酸位點(diǎn)序號均按EU索引編碼系統(tǒng)確定。
[0007]在本發(fā)明的一個方面，提供了一種鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體，由輕鏈與含鉸鏈區(qū)的重鏈組成，所述重鏈鉸鏈區(qū)缺失Glu216Arg217Lys218位氨基酸，且在Cys219和/或Cys220含有氨基酸的取代/替換和/或刪除/缺失，使得輕鏈C末端的半胱氨酸Cys214殘基僅與重鏈非鉸鏈區(qū)的Cysl31形成分子間二硫鍵。
[0008]進(jìn)一步地,所述Cys219和Cys220可被Ser或Thr取代/替換。
[0009]本發(fā)明所提供一種鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體為野生型抗RANKL的IgG2抗體Denosumab(商品名為Prolia)的突變體，所述野生型抗RANKL的IgG2抗體的突變體的重鏈鉸鏈區(qū)缺失Glu216Arg217Lys218位氨基酸，且在Cys219和/或Cys220含有氨基酸的替換和/或刪除。其中，野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。鉸鏈區(qū)未經(jīng)修飾的野生型抗RANKL的IgG2抗體Denosumab,其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0010]進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的突變體1，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218Cys219Cys220被刪除，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID N0:4所示。圖
2-1為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。其重鏈氨基酸序列如SEQID NO:5所示，見圖
3-1，輕鏈氨基酸序列如SEQID N0:6所示，見圖3-2。
[0011]本發(fā)明提供的突變體2，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218Cys219被刪除，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，圖2-2為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0012]本發(fā)明提供的突變體3，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218Cys220被刪除，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，圖2-3為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0013]本發(fā)明提供的突變體4，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218被刪除，且Cys219和Cys220被替換為Ser，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，圖2-4為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0014]本發(fā)明提供的突變體5，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218被刪除，且Cys219被替換為Ser，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，圖2-5為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0015]本發(fā)明提供的突變體6，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218被刪除，且Cys220被替換為Ser，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，圖2-6為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0016]本發(fā)明提供的突變體7，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218Cys219被刪除，且Cys220被替換為Ser，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQID NO:12所示，圖2-7為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0017]本發(fā)明提供的突變體8，即野生型抗RANKL的IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218Cys220被刪除，且Cys219被替換為Ser，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQID NO:13所示，圖2-8為其鉸鏈區(qū)二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)。
[0018]進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了編碼權(quán)利要求4所述鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體的分離核酸。
[0019]進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了含有上述核酸的表達(dá)載體。
[0020]進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了用上述表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。
[0021 ] 進(jìn)一步地，提供了一種藥物組合物，含有上述抗體和藥物學(xué)上可接受的載體。
[0022]進(jìn)一步地，提供了所述藥物組合物的用途，優(yōu)選該藥物組合物用于調(diào)節(jié)OPG (骨保護(hù)蛋白VRANKL/RANK系統(tǒng)，來治療骨代謝疾病，如老年化、激素治療和絕經(jīng)后婦女的骨質(zhì)疏松癥以及骨轉(zhuǎn)移和炎癥引起的骨侵蝕等。
[0023]根據(jù)本發(fā)明的再一個方面，本發(fā)明提供了一種提高重組人IgG2抗體抗蛋白酶水解作用的方法，所述方法在于將重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218位氨基酸刪除/缺失。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1-1、野生型IgG2異構(gòu)體IgG2_A 二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0025]圖1-2、野生型IgG2異構(gòu)體IgG2_A/B 二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0026]圖1-3、野生型IgG2異構(gòu)體IgG2_B 二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0027]圖2-1、突變體I鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0028]圖2-2、突變體2鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0029]圖2-3、突變體3鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0030]圖2-4、突變體4鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0031]圖2-5、突變體5鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0032]圖2-6、突變體6鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0033]圖2-7、突變體7鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0034]圖2-8、突變體8鉸鏈區(qū)的二硫鍵配對方式的2D結(jié)構(gòu)示意圖。
[0035]圖3-1、突變體I的重鏈氨基酸序列。
[0036]圖3-2、突變體I的輕鏈氨基酸序列。
[0037]圖4-1、直接法ELISA測定HRP標(biāo)記的Denosumab與RANKL抗原結(jié)合能力。
[0038]圖4-2、間接法ELISA測定野生型Denosumab與AB4與抗原結(jié)合親和力比較。
[0039]圖5、競爭法ELISA測定野生型Denosumab與AB4與抗原結(jié)合親和力大小。
[0040]圖6-1、野生型Denosumab抗體的RP-HPLC圖譜。
[0041]圖6-2、AB4 抗體的 RP-HPLC 圖譜。
[0042]圖7、SDS-PAGE電泳分析Denosumab與AB4抗體的抗胰蛋白酶水解能力。

【具體實(shí)施方式】
[0043]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆:實(shí)驗(yàn)室手冊(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的條件,或按照制造廠商所建議的條件。
[0044]以下實(shí)施例僅選取重鏈鉸鏈區(qū)Glu216/Arg217/Lys218/Cys219/Cys220被刪除的抗RANKL抗體突變體進(jìn)行描述，其命名為AB4，其鉸鏈區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。其它幾種突變體在下述實(shí)驗(yàn)中的方法及結(jié)果與AB4 —致，在此不再贅述。
[0045]實(shí)施例1、野生型Denosumab與AB4與抗原結(jié)合親和力測定
首先用直接ELISA法檢測HRP標(biāo)記的Denosumab抗體與抗原的結(jié)合能力。首先，以辣根過氧化物酶(HRP, Boehringer Ingelheim)標(biāo)記抗人 RANKL 的抗體 Denosumab (Amgen)作為試劑(350 μ g/mL)， 按比例進(jìn)行梯度稀釋。用與鼠IgG Fe融合的抗原RANKL-mFc (100μ I, 0.5 μ g/mL)包被酶標(biāo)板(Corning)，室溫過夜。棄去包被溶液，用溶解在PBS的脫脂奶封閉各孔0.5小時，再用含0.05% Tween-20的PBS洗孔。然后每孔加入50 μ I不同濃度的HRP標(biāo)記的抗體Denosumab，反應(yīng)I小時后，再用含0.05% Tween-20的PBS洗孔。最后用酶標(biāo)儀(Thermo Fisher)在450nm和620nm雙波長下,讀取各孔的OD值。圖4-1中表明HRP標(biāo)記的Denosumab與RANKL抗原結(jié)合。
[0046]再用間接ELISA法比較AB4與野生型Denosumab抗體與抗原的結(jié)合親和力。首先，用與鼠IgG Fe融合的抗原RANKL-mFc (100 μ I, 0.5 μ g/mL)包被酶標(biāo)板，室溫過夜。棄去包被溶液，用溶解在PBS的脫脂奶封閉各孔0.5小時，再用含0.05% Tween-20的PBS洗孔。然后每孔加入50 μ I ΑΒ4,反應(yīng)I小時后，再用含0.05% Tween-20的PBS洗孔，再加入HRP標(biāo)記的鼠抗人IgG Fe的二抗(Jackson，1:10000稀釋)，反應(yīng)0.5小時后，用含0.05%Tween-20的PBS洗孔。以野生型Denosumab抗體和緩沖液作為陽性和陰性對照，其中待測抗體和對照抗體初始濃度為10 μ g/mL,然后按1:2比例進(jìn)行梯度稀釋。最后用酶標(biāo)儀在450nm和620nm雙波長下，讀取各孔的OD值。圖4_2中表明AB4和Denosumab都與抗原RANKL-mFc結(jié)合，且結(jié)合能力相當(dāng)。
[0047]實(shí)施例2、與野生型Denosumab抗體的競爭結(jié)合測定
以HRP標(biāo)記抗人RANKL的抗體Denosumab作為試劑(初始濃度350 μ g/mL, 1:1000稀釋)。用與鼠IgG Fe融合的抗原RANKL-mFc (100 μ I, 0.5 μ g/mL)包被酶標(biāo)板，室溫過夜。棄去包被溶液，用溶解在PBS的脫脂奶封閉各孔0.5小時，再用含0.05%吐溫Tween-20的PBS洗孔。然后每孔加入50 μ I ΑΒ4^50μ1 HRP標(biāo)記的抗體Denosumab (250ng/mL)的混合液，反應(yīng)I小時后，再用含0.05%吐溫-20 (Tween-20)的PBS洗孔。以未標(biāo)記的Denosumab和含抗另一種抗原的非相關(guān)抗體作為陽性與陰性對照，其中待測抗體和對照抗體初始濃度為30 μ g/mL,然后按1:2比例進(jìn)行梯度稀釋。最后用酶標(biāo)儀在450nm和620nm雙波長下，讀取各孔的OD值。圖5中表明AB4和Denosumab與抗原RANKL-mFc的結(jié)合表位一致，可競爭結(jié)合抗原。
[0048]實(shí)施例3、RP-HPLC分析野生型Denosumab抗體與AB4抗體的異質(zhì)性
采用RP-HPLC分析AB4抗體與對照抗體即野生型Denosumab抗體的二硫鍵帶來的異質(zhì)性。采用伍豐HPLC LClOO型高效液相色譜儀，配備PlOO高壓恒流泵與UVlOO紫外檢測器和WSlOO色譜工作站。
[0049]分子篩HPLC 色譜條件:凝膠色譜柱 TSK gel G3000 SffXL (7.8mmX 300mm) (TOSOH公司，Cat N0.0008541);流動相=10mM磷酸鈉、500mM氯化鈉、5%乙醇，pH 7.0 ;流速:
0.5mL/min ;柱溫:25° C;進(jìn)樣量:20μ1。
[0050]RP-HPLC 條件:SephasiI Peptide C8 層析柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m, PharmaciaB1tech公司);流動相A:0.1%三氟乙酸水溶液；流動相B:70%異丙醇、20%乙腈、0.1%三氟乙酸。柱溫:25° C ;進(jìn)樣量:20μ I ;流速:lmL/min。
[0051]如圖6-1中所示，對照抗體野生型Denosumab抗體表現(xiàn)出異質(zhì)性，呈現(xiàn)多個峰；而圖6-2中，AB4抗體則呈均一性，只有單一峰。
[0052]實(shí)施例4、體外酶解法測定野生型Denosumab與AB4的抗胰蛋白酶水解能力
將 10ul 的 1.0mg/mL AB4 和 Denosumab 抗體分別用 2.5 mg/mL (40000 U/mL)的膜蛋白酶在37°C水浴中水解18小時，同時設(shè)置兩個對照組，無關(guān)對照抗體AB2(Rituxan)和胰蛋白酶對照組(泳道1-4);以在同樣條件下，未被胰蛋白酶水解的抗體樣品作為陰性對照(泳道6-8)。按上述條件處理各樣品18小時后，用非還原SDS-PAGE電泳檢測水解產(chǎn)物。各組在圖7中的泳道位置及上樣量表示在表1中，其中泳道5為蛋白Marker(NEB，CatN0.26630)。如圖7所示，Denosumab抗體(泳道4)較AB4抗體(泳道3)在胰蛋白酶水解18小時后，電泳條帶更雜、更為彌散，表明其降解產(chǎn)物較多，即抗胰蛋白酶水解作用不及鉸鏈區(qū)修飾的AB4抗體。
[0053]表1: SDS-PAGE電泳樣品泳道編號及上樣量

【權(quán)利要求】
1.一種鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體，由輕鏈與含鉸鏈區(qū)的重鏈組成，其特征在于，所述重鏈鉸鏈區(qū)缺失根據(jù)EU索引編號系統(tǒng)確定的Glu216Arg217Lys218位氨基酸，且在Cys219和/或Cys220含有氨基酸的替換和/或刪除。
2.一種鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體，由輕鏈與含鉸鏈區(qū)的重鏈組成，其重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO:1，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO: 2，其特征在于，所述重鏈鉸鏈區(qū)缺失Glu216Arg217Lys218位氨基酸，且在Cys219和/或Cys220位的氨基酸被刪除和/或替換，其選自下組: (i)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys219和Cys220位氨基酸被刪除； (ii)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys219被刪除； (iii)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys220被刪除； (iv)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys219和Cys220被替換為Ser； (V)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys219被替換為Ser ； (vi)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys220被替換為Ser； (vii)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys219被刪除，且Cys220被替換為Ser； (viii)所述重鏈鉸鏈區(qū)Cys219被替換為Ser，且Cys220被刪除。
3.編碼如權(quán)利要 求2所述的鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體的核酸。
4.一種載體,包含如權(quán)利要求3所述的核酸。
5.—種包含如權(quán)利要求4所述載體轉(zhuǎn)染的真核宿主細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求5所述的真核宿主細(xì)胞為CHO細(xì)胞。
7.—種藥物組合物，其特征在于，該組合物含有如權(quán)利要求2所述的鉸鏈區(qū)修飾的重組人IgG2抗體以及藥物學(xué)上可接受的載體。
8.如權(quán)利要求7所述藥物組合物的用途，包括用于治療骨代謝疾病，優(yōu)選老年化、激素治療和絕經(jīng)后婦女的骨質(zhì)疏松癥以及骨轉(zhuǎn)移和炎癥引起的骨侵蝕。
9.一種提高重組人IgG2抗體抗蛋白酶水解作用的方法，其特征在于，將所述重組人IgG2抗體的重鏈鉸鏈區(qū)Glu216Arg217Lys218位氨基酸刪除或替換。
【文檔編號】C12N5/10GK104177496SQ201410441129
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月2日
【發(fā)明者】李強(qiáng), 李媛麗, 孫見宇, 周若云, 孫乃超 申請人:安源生物科技(上海)有限公司