利用rna吸附柱快速提取植物rna的試劑盒及方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。利用該試劑盒能夠快速獲得純度高、完整性好的RNA。所述試劑盒的組成包括：裂解液、BufferA、BufferB、去蛋白液、漂洗液、RNA吸附柱。利用該試劑盒通過(guò)植物組織細(xì)胞的破碎、RNA的吸附，快速提取植物DNA。本發(fā)明通過(guò)采用RNA吸附柱吸附RNA，同時(shí)使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等雜質(zhì)，可以在較短時(shí)間內(nèi)獲得較高純度的植物RNA。本發(fā)明能快速獲得質(zhì)量較高的植物RNA。
【專(zhuān)利說(shuō)明】利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明提供一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]核酸是生物遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，決定生物體的遺傳、變異、生長(zhǎng)和發(fā)育。在基因工程中，核酸分子是主要的研究對(duì)象，因此核酸的分離、提取是分子生物學(xué)研究中很重要的技術(shù)。從植物組織中提取RNA是進(jìn)行植物分子生物學(xué)方面研究的必要前提，要克隆基因，或是簡(jiǎn)歷cDNA文庫(kù)，RT-PCR以及Northern雜交等都需要有高質(zhì)量的RNA。因此，從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA是上述研究的關(guān)鍵所在。
[0003]RNA是一類(lèi)極易降解的分子，要得到完整的RNA必須最大限度地抑制提取過(guò)程中內(nèi)源性及外源性核糖核酸酶對(duì)RNA的降解。高濃度強(qiáng)變性劑硫氰酸胍，可以溶解蛋白質(zhì)、破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使核蛋白與核酸分離，失活RNAaseJfW RNA從細(xì)胞中釋放出來(lái)時(shí)不會(huì)被降解。細(xì)胞裂解后，除了 RNA，還有DNA、蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片，通過(guò)苯酚、氯仿等有機(jī)溶劑處理得到純化、均一的總RNA。
[0004]在提取植物RNA的過(guò)程中，常由于提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，RNA酶污染等原因造成RNA降解，使得后續(xù)試驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。因此，采用一種快速植物RNA的方法對(duì)于進(jìn)行RNA的相關(guān)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，利用該試劑盒能夠快速獲得純度高、完整性好的RNA。
[0006]本發(fā)明首先提供了一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒，所述試劑盒的組成包括:
1)裂解液=Trizol提取液；
2)Buffer A:氯仿；
3)BufferB:70%重量比乙醇；
4)去蛋白液:5M鹽酸胍，20mMTris-HCI pH6.6，38%重量比乙醇；
5)漂洗液:20mMNaCL, 2mM Tris-HCI pH7.5，80% 重量比乙醇；
6)RNA吸附柱。
[0007]所述Trizol 提取液配制如下:174ml solut1nD、17.4 ml 0.2M Nacl(ph4.2_4.5)、174 ml 水飽和酌.、34.8 ml 氯仿、1.2 ml 2-Mercaptoethaol (b_ 硫基乙醇)，其中solut1nD的配方如下:283.5g異硫氰酸胍、2.5g月桂酸、50ml 250mM檸檬酸鈉(ph7.0)，加 DEPC 處理水至 500ml ο
[0008]本發(fā)明還提供了一種利用所述試劑盒快速提取植物DNA的方法，依次包括以下步驟:(O植物組織細(xì)胞的破碎:稱(chēng)取0.5g植物樣品加入液氮研磨成粉狀，將其迅速轉(zhuǎn)入1.5ml離心管，加入1ml裂解液，振蕩器震蕩30秒后，加入200ul的Buffer A，振蕩器震蕩30秒；
(2)RNA的吸附:將細(xì)胞破碎后的樣品12000rpm/min離心10min，離心后將上清吸到1.5ml離心管,加入等體積的Buffer B,混勻后將樣品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體,加入500ul去蛋白液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin，倒掉液體，再加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，吹干后加入50ul DEPC水，12000 rpm/min離心2min,收集液體。
[0009]其中所述RNA吸附柱為硅膠膜RNA吸附柱，購(gòu)自北京天恩澤公司。
[0010]常規(guī)的植物RNA提取方法步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)長(zhǎng)，容易造成RNA降解。本發(fā)明通過(guò)采用RNA吸附柱吸附RNA，同時(shí)使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等雜質(zhì)，可以在較短時(shí)間內(nèi)獲得較高純度的植物RNA。本發(fā)明能快速獲得質(zhì)量較高的植物RNA。
[0011]采用本發(fā)明所提供的方法具有突出的特點(diǎn):
1.降低了植物組織RNA的提取時(shí)間。
[0012]2.提高了植物組織RNA的提取純度和完整性。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1為植物組織RNA的提取檢測(cè)結(jié)果圖。泳道1，2，3，4，5分別代表利用本方法提取的水稻、 玉米、甘蔗、花生、小麥組織RNA電泳結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0014]本發(fā)明的一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒及方法，具體步驟如下
(I)原料:稱(chēng)取0.5g水稻、玉米、甘蔗、花生、小麥樣品。
[0015](2)植物組織細(xì)胞的破碎:分別將樣品加入液氮研磨成粉狀，將其迅速轉(zhuǎn)入1.5ml離心管，加入1ml Trizol提取液。振蕩器震蕩30秒后，加入200ul的Buffer A，振蕩器震湯30秒。
[0016](3)RNA的吸附:將樣品12000rpm/min離心1min,離心后將上清吸到1.5ml離心管。加入等體積的Buffer B,混勻后將樣品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，加入500ul去蛋白液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體,加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin,倒掉液體，吹干后加入50ul DEPC水，12000 rpm/min離心2min,收集液體。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳電測(cè)RNA。
[0017](4)利用紫外分光光度計(jì)對(duì)提取到的植物根部RNA進(jìn)行溶度以及純度的檢測(cè)。
[0018]Buffer A 溶液:氯仿。
[0019]Buffer B 溶液:70% 乙醇。
[0020]去蛋白液溶液:5M鹽酸胍，20mM Tris_HCI，pH6.6，38%乙醇。
[0021]漂洗液溶液:20mMNaCL, 2mM Tris-HCI, ρΗ7.5，80% 乙醇。
[0022]植物組織RNA的提取檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1，泳道1，2，3，4，5分別代表利用本方法提取的水稻、玉米、甘蔗、花生、小麥組織RNA電泳結(jié)果圖。圖中的28sr RNA亮度約為18sr RNA亮度的2倍，說(shuō)明本方法能夠快速提取到具有較高完整性的RNA。植物根部RNA濃度以及純度的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，RNA樣品的OD (260:280)比值均在1.9-2.0之間，說(shuō)明本方法提取的RNA具有較高的純度，RNA樣品的濃度范圍在0.49 μ g/μ 1-0.62 μ g/μ I。說(shuō)明本方法能快速提取到濃度高、純度好的植物RNA。
[0023]表1:不同植物RNA的溶度以及OD (260:280)

【權(quán)利要求】
1.一種利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的組成包括: 裂解液=Trizol提取液； Buffer A:氯仿； Buffer B:70%重量比乙醇； 去蛋白液:5M鹽酸胍，20mM Tris-HCI pH6.6，38%重量比乙醇； 漂洗液:20mM NaCL, 2mM Tris-HCI ρΗ7.5，80%重量比乙醇； RNA吸附柱。
2.一種利用權(quán)利要求1所述試劑盒快速提取植物DNA的方法，其特征在于:依次包括以下步驟: (O植物組織細(xì)胞的破碎:稱(chēng)取0.5g植物樣品加入液氮研磨成粉狀，將其迅速轉(zhuǎn)入.1.5ml離心管，加入1ml裂解液，振蕩器震蕩30秒后，加入200ul的Buffer A，振蕩器震蕩.30秒； (2)RNA的吸附:將細(xì)胞破碎后的樣品12000rpm/min離心10min，離心后將上清吸到.1.5ml離心管,加入等體 積的Buffer B,混勻后將樣品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min離心Imin,倒掉液體,加入500ul去蛋白液，12000rpm/min離心Imin,倒掉液體,加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心lmin，倒掉液體，再加入500ul漂洗液，12000rpm/min離心Imin,倒掉液體，吹干后加入50ul DEPC水，12000 rpm/min離心2min,收集液體。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK104164423SQ201410449503
【公開(kāi)日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】王清水, 余彥 申請(qǐng)人:福建師范大學(xué)