一種高效抗腫瘤靈芝提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效抗腫瘤靈芝提取物，是以靈芝子實(shí)體、靈芝子實(shí)體與可食用油脂的混合物、靈芝子實(shí)體與富含油脂的可食材料的混合物中的一種為原料進(jìn)行超臨界CO2萃?。惠腿∵^(guò)程中，在超臨界狀態(tài)下，原料中的天然油脂被CO2萃取帶出，天然油脂作為天然夾帶劑和載體，將靈芝子實(shí)體中的活性物質(zhì)，特別是三萜類物質(zhì)夾帶提取出來(lái)，再經(jīng)分離釜收集得到。本發(fā)明所獲得的提取物富集了靈芝子實(shí)體中的高效抗腫瘤物質(zhì)靈芝三萜，且制作工藝簡(jiǎn)單；本發(fā)明通過(guò)萃取方法及有效物質(zhì)載體巧妙的專一性設(shè)置，使有效物質(zhì)的萃取富集過(guò)程即為產(chǎn)品的制備過(guò)程，一步到位，三萜種類豐富并且總含量高，性狀穩(wěn)定，加工過(guò)程無(wú)引入二次污染物，食用安全。
【專利說(shuō)明】一種高效抗腫瘤靈芝提取物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種抗腫瘤提取物，具體是一種高效抗腫瘤靈芝提取物，屬于醫(yī)藥及 保健品制備【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 靈芝又稱瑞草、仙草，性平味甘，為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)所提及靈芝，是 指赤靈芝的子實(shí)體部分，故靈芝子實(shí)體才是最正宗的靈芝真菌藥效部位。靈芝子實(shí)體在日 常保健、食療、醫(yī)藥方面的應(yīng)用在我國(guó)歷史悠久，使用范例舉不勝舉，如東漢《神農(nóng)本草經(jīng)》 列靈芝為"上藥"，認(rèn)為它有"益心氣、安驚魄、補(bǔ)肝益氣、堅(jiān)筋骨、好顏色"等功效，"久食，輕 身不老，延年神仙"。明朝李時(shí)珍所著《本草綱目》記載，靈芝"甘平、無(wú)毒益心氣、活血、入心 充血、助心充脈、補(bǔ)肝氣、補(bǔ)中、增智慧、好顏色、利關(guān)節(jié)、堅(jiān)筋骨，祛痰、健胃"。古代研究對(duì)靈 芝從來(lái)不乏贊美之詞，認(rèn)為靈芝是"百利而無(wú)一害"。
[0003] 現(xiàn)代研究進(jìn)一步驗(yàn)證了靈芝的卓越功效，認(rèn)為靈芝能提高機(jī)體免疫力，保肝護(hù)肝， 鎮(zhèn)定安神，促進(jìn)損傷細(xì)胞修復(fù)，抑制腫瘤生長(zhǎng)，提高機(jī)體抗氧化酶類的含量等，配合其他藥 物應(yīng)用時(shí)更是具有增效減毒的作用，對(duì)機(jī)體無(wú)毒副不良反應(yīng)。
[0004] 鑒于靈芝的強(qiáng)大功效作用，醫(yī)學(xué)臨床上多濃縮靈芝有效成分制備靈芝提取物，并 將其應(yīng)用于腫瘤、癌癥的輔助放化療，能減輕放化療毒副作用，提高患者對(duì)放化療的耐受 性，增強(qiáng)放化療對(duì)腫瘤、癌癥細(xì)胞的殺傷作用，并降低患者手術(shù)或放化療后的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)率。 其中令人振奮欣喜的是，研究表明靈芝中的重要活性成分一靈芝三萜類物質(zhì)能通過(guò)多種 有效途徑直接抑制或殺傷腫瘤、癌癥細(xì)胞。
[0005] 可見考察靈芝提取物的質(zhì)量，其中一個(gè)重要的參考因素即為其靈芝三萜類物質(zhì)的 含量。大量研究已經(jīng)證明，靈芝子實(shí)體所含三萜遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于靈芝孢子，以靈芝子實(shí)體為提取原 材料更有利于富集靈芝三萜類物質(zhì)。另外目前所有研究均表明靈芝三萜制品的濃度或使用 量與抗腫瘤效果存在劑量效應(yīng)，兩者為正相關(guān)關(guān)系，故可認(rèn)為高效富集靈芝三萜的產(chǎn)品，相 對(duì)應(yīng)就有高效抗腫瘤的效果。
[0006] 然而采用一般的溶劑提取方法所得的靈芝浸膏，三萜含量并不高，主要是因?yàn)槠?中所含雜質(zhì)性成分多，且靈芝三萜為熱敏性物質(zhì)，傳統(tǒng)的加熱提取、濃縮方法容易導(dǎo)致其失 活變性。因三萜類物質(zhì)為脂溶性成分，且靈芝子實(shí)體中脂溶性成分很少，除去占干重絕大部 分的幾丁質(zhì)、纖維素等不溶性物質(zhì)外，剩余大部分是糖類、蛋白質(zhì)等水溶性物質(zhì)，故利用適 合脂溶性物質(zhì)提取的低溫超臨界CO 2萃取技術(shù)理論上能達(dá)到高效、專一的富集提取靈芝子 實(shí)體中三萜類物質(zhì)的效果。然而，實(shí)際應(yīng)用中往往是收率過(guò)低，或根本收集不到產(chǎn)物，原因 是靈芝子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)實(shí)在是太少了，從萃取釜中提取出來(lái)后全部粘附到設(shè)備系統(tǒng) 管道當(dāng)中，難以收集得到最終產(chǎn)物。一般是采用加水、酒精、乙酸乙酯等人工夾帶劑的方法 對(duì)靈芝子實(shí)體進(jìn)行夾帶提取，以克服上述的不足，但提取所得的物質(zhì)含不可食用甚至有毒 的夾帶劑，又要另外設(shè)置濃縮或干燥工序以減少無(wú)用溶劑、去除有毒溶劑，此反復(fù)加工的方 法容易造成靈芝三萜類物質(zhì)的受熱損耗和延長(zhǎng)工藝路線所造成的過(guò)程損耗，且一般引入的 夾帶劑極性較高，改變了超臨界CO2萃取原本的特性，損耗了其萃取的專一性。尤其是在進(jìn) 行靈芝的萃取時(shí)，引入水、酒精、甘油等夾帶劑使大量極性較強(qiáng)的雜質(zhì)進(jìn)入到產(chǎn)物中，影響 了目標(biāo)功效物質(zhì)靈芝三萜的富集效果，并且如此破壞萃取的專一性后無(wú)法得到性狀均一的 產(chǎn)物，長(zhǎng)期存放中會(huì)出現(xiàn)分層、凝絮、乳化、沉淀析出等產(chǎn)品不穩(wěn)定的情況，需要進(jìn)一步對(duì)超 臨界提取產(chǎn)物進(jìn)行復(fù)雜的后續(xù)分離純化處理。另外引入極性?shī)A帶劑往往容易導(dǎo)致原料中的 重金屬被富集轉(zhuǎn)移到產(chǎn)物中，使超臨界萃取原本在杜絕產(chǎn)物重金屬污染方面的技術(shù)優(yōu)勢(shì)無(wú) 法得到體現(xiàn)，產(chǎn)物的重金屬超標(biāo)將嚴(yán)重影響到人的食用安全性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種高效抗腫瘤靈芝提取物及其制備方法，該提取物是以 靈芝子實(shí)體、靈芝子實(shí)體與可食用油脂的混合物、靈芝子實(shí)體與富含油脂的可食材料的混 合物中的一種為原料進(jìn)行超臨界CO 2萃取，萃取過(guò)程中，在超臨界狀態(tài)下，原料中的天然油 脂被CO2萃取帶出，天然油脂作為靈芝子實(shí)體的天然夾帶劑和載體，將靈芝子實(shí)體中的天然 活性物質(zhì)，特別是三萜類物質(zhì)夾帶提取出來(lái)，經(jīng)分離釜收集得到；所獲得的提取物富集了靈 芝子實(shí)體中的高效抗腫瘤物質(zhì)靈芝三萜，備方法簡(jiǎn)單，本發(fā)明的制備方法通過(guò)萃取方法及 有效物質(zhì)載體巧妙的專一性設(shè)置，使有效物質(zhì)的萃取富集過(guò)程即為產(chǎn)品的制備過(guò)程，一步 到位，產(chǎn)品中三萜種類豐富并且總含量高，性狀穩(wěn)定，加工過(guò)程無(wú)二次污染物引入，食用安 全。
[0008] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述一種高效抗腫瘤靈芝提取物的制備方法。
[0009] 本發(fā)明技術(shù)方案如下：一種高效抗腫瘤靈芝提取物，是以靈芝子實(shí)體、靈芝子實(shí)體 與可食用油脂的混合物、靈芝子實(shí)體與富含油脂的可食材料的混合物中的一種為原料進(jìn)行 超臨界CO 2萃取，萃取過(guò)程中，在超臨界狀態(tài)下，原料中的天然油脂被CO2萃取帶出，天然油 脂作為天然夾帶劑和載體，將靈芝子實(shí)體中的靈芝三萜類物質(zhì)轉(zhuǎn)移富集到天然油脂中，再 通過(guò)分離釜收集獲得；其制備方法包括如下步驟： (1) 將靈芝子實(shí)體投入萃取釜、可食用油脂作為夾帶劑泵入，或?qū)㈧`芝子實(shí)體混合可食 用油脂直接投入萃取釜，或?qū)㈧`芝子實(shí)體混合富含油脂的可食材料直接投入萃取釜，進(jìn)行 超臨界CO 2萃?。?(2) 原料放入萃取釜后，通入二氧化碳，在壓力l(T35MPa，溫度35飛5°C下萃取1?12小 時(shí)； (3) 控制一級(jí)分離釜壓力ClOMPa，溫度3(T50°C，進(jìn)行分離，萃取完畢后從分離釜出口 放出富含靈芝三萜類物質(zhì)的復(fù)方功能油脂，即得所述高效抗腫瘤靈芝提取物； (4) 控制二級(jí)分離壓力4?6MPa，溫度3(T50°C，進(jìn)行分離，萃取完畢后放出少量水。 [0010] 所述高效抗腫瘤靈芝提取物中的靈芝三萜類物質(zhì)含量為3(Γ80%。
[0011] 所述富含油脂的可食材料優(yōu)選油脂含量為1(Γ50%的可食材料。
[0012] 所述靈芝子實(shí)體與可食用油脂的混合比例、靈芝子實(shí)體與富含油脂的可食材料的 質(zhì)量混合比例可以是任意的比例，優(yōu)選的混合比例為209Γ80%: 809Γ20%。
[0013] 優(yōu)選的，制備時(shí)，所述靈芝子實(shí)體粉碎至2(Γ200目的靈芝子實(shí)體粉末或切成 0. 1~0. 5_厚的靈芝子實(shí)體片；所述可食材料粉碎至2(Γ200目的可食材料粉末。
[0014] 優(yōu)選的，所述可食用油脂為動(dòng)物油、植物油、藥材油、海藻油、真菌油及其他可食用 的油脂中的一種或幾種。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述可食用油脂為番茄油、南瓜籽油、薏苡仁油或具有抗腫瘤功效 的可食用油脂。
[0016] 優(yōu)選的，所述富含油脂的可食材料是蛋黃粉、黃豆、花生、紫蘇籽、油菜籽、亞麻籽、 南瓜籽、薏苡仁、女貞子、五味子、當(dāng)歸、丹參、沙棘籽、葡萄籽、石榴籽、蜂膠、食用真菌孢子 粉及其他富含油脂的可食材料的一種或幾種。
[0017] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述富含油脂的可食材料為具有抗腫瘤功效的富含油脂的可食材 料，如藥材五味子、當(dāng)歸、靈芝孢子等，可進(jìn)一步協(xié)同提高產(chǎn)品的抗腫瘤功效。
[0018] 采用本發(fā)明方法制備得到的高效抗腫瘤靈芝提取物可進(jìn)一步應(yīng)用于制備治療或 輔助治療腫瘤、癌癥的顆粒劑、片劑、口服液及其他醫(yī)學(xué)上認(rèn)可的、不同劑型的藥物或保健 品。
[0019] 為進(jìn)一步驗(yàn)證本發(fā)明產(chǎn)品中的總靈芝三萜含量與抗腫瘤效果的關(guān)系，進(jìn)行了不同 總靈芝三萜濃度的復(fù)方功能油脂的抗腫瘤作用研究。
[0020] 采用本發(fā)明方法，以靈芝子實(shí)體與可食用油脂橄欖油按照1:1混合，放入萃取釜 中，通入CO2進(jìn)行超臨界萃取，控制萃取壓力lOMPa，溫度45°C，萃取3. 5h，從一級(jí)分離釜放 出所獲得的高效抗腫瘤靈芝提取物。測(cè)定提取物的靈芝總?cè)茲舛龋O(shè)由低至高五個(gè)不同 濃度組（0. 4,0. 8,1. 6, 3. 2,6. 以不同靈芝總?cè)茲舛鹊奶崛∥镞M(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0021] 實(shí)驗(yàn)方法：采用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT)考察上述不同靈芝總?cè)茲舛鹊奶?取物對(duì)人肝癌細(xì)胞株QGY7703,大鼠肝癌細(xì)胞株CBRH7919,人胃癌細(xì)胞株BGC823的增殖抑 制作用。
[0022] 細(xì)胞培養(yǎng)：用含有體積分?jǐn)?shù)為10%的胎牛血清的RPMI -1640培養(yǎng)液，細(xì)胞在37°C 和5% C02實(shí)驗(yàn)條件下常規(guī)培養(yǎng)。細(xì)胞于指數(shù)生長(zhǎng)期用不同濃度的藥物處理相應(yīng)時(shí)間后進(jìn) 行檢測(cè)。
[0023] MTT法檢測(cè)不同靈芝總?cè)茲舛鹊奶崛∥飳?duì)各腫瘤細(xì)胞增殖的影響：取指數(shù) 生長(zhǎng)期的細(xì)胞加入96孔板中，每孔6 000個(gè)細(xì)胞，100 μ L。GLG設(shè)由低至高不同濃度組 (0. 4,0. 8,1. 6,3. 2,6. ^ig·!^1)，陽(yáng)性藥物5-Fu (氟尿嘧陡）采用一般常用劑量：終濃度 10 μ gmL'每孔設(shè)6個(gè)平行孔，置37 °C條件下培養(yǎng)48 h，MTT法檢測(cè)490 nm波長(zhǎng)下每孔 的OD值，按下列公式求出生長(zhǎng)抑制率：生長(zhǎng)抑制率/%= (1 -用藥組平均OD值/對(duì)照組 平均OD值）X 100%。
[0024] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：提取物的靈芝總?cè)茲舛仍?. 4飛.4 mg/ml的藥物濃度范圍內(nèi)，對(duì)3種 腫瘤細(xì)胞株（QGY7703, CBRH7919, BGC823)均具有明顯的增殖抑制效果，且呈現(xiàn)較好的量效 依賴關(guān)系(見表1)。而陽(yáng)性藥物5-Fu對(duì)3種細(xì)胞株的抑制率分別為60. 7 %，62. 4 %，66. 5 % O
[0025] 表1不同靈芝總?cè)茲舛鹊奶崛∥飳?duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（％)

【權(quán)利要求】
1. 一種高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：是以靈芝子實(shí)體、靈芝子實(shí)體與可食用 油脂的混合物、靈芝子實(shí)體與富含油脂的可食材料的混合物中的一種為原料進(jìn)行超臨界 co2萃取，在超臨界狀態(tài)下，原料中的天然油脂被co2萃取帶出，天然油脂作為天然夾帶劑 和載體，將靈芝子實(shí)體中的靈芝三萜類物質(zhì)轉(zhuǎn)移富集到天然油脂中，再通過(guò)分離釜收集獲 得；其制備方法包括如下步驟： (1) 將靈芝子實(shí)體投入萃取釜、可食用油脂作為夾帶劑泵入，或?qū)㈧`芝子實(shí)體混合可食 用油脂直接投入萃取釜，或?qū)㈧`芝子實(shí)體混合富含油脂的可食材料直接投入萃取釜，進(jìn)行 超臨界C0 2萃?。? (2) 原料放入萃取釜后，通入二氧化碳，在壓力l(T35MPa，溫度35飛5°C下萃取1?12小 時(shí)； (3) 控制一級(jí)分離釜壓力flOMPa，溫度3(T50°C，進(jìn)行分離，萃取完畢后從分離釜出口 放出富含靈芝三萜類物質(zhì)的復(fù)方功能油脂，即為所述高效抗腫瘤靈芝提取物； (4) 控制二級(jí)分離壓力4?6MPa，溫度3(T50°C，進(jìn)行分離，萃取完畢后放出少量水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述高效抗腫瘤靈芝 提取物中的靈芝三萜類物質(zhì)含量為3(Γ80%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述富含油脂的可食 材料中，可食材料的油脂含量為1(Γ50%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述靈芝子實(shí)體與可 食用油脂的混合比例、靈芝子實(shí)體與富含油脂的可食材料的混合比例為20%~80%:80%~20%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述靈芝子實(shí)體為粉 碎至2(Γ200目的靈芝子實(shí)體粉末或切成0. 1~0. 5_厚的靈芝子實(shí)體片；所述可食材料為粉 碎至2(Γ200目的可食材料粉末。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述可食用油脂為動(dòng) 物油、植物油、藥材油、海藻油、真菌油及其他可食用的油脂中的一種或幾種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述可食用油脂 為番茄油、南瓜籽油、薏苡仁油或具有抗腫瘤功效的可食用油脂。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述富含油脂的可食 材料是蛋黃粉、黃豆、花生、紫蘇籽、油菜籽、亞麻籽、南瓜籽、薏苡仁、女貞子、五味子、當(dāng)歸、 丹參、沙棘籽、葡萄籽、石榴籽、蜂膠、食用真菌孢子粉及其他富含油脂的可食材料的一種或 幾種。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或3或8所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述富含油 脂的可食材料為具有抗腫瘤功效的富含油脂的可食材料。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效抗腫瘤靈芝提取物，其特征在于：所述高效抗腫瘤靈芝 提取物用于制備治療或輔助治療腫瘤、癌癥的顆粒劑、片劑、口服液及其他醫(yī)學(xué)上認(rèn)可的、 不同劑型的藥物或保健品。
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK104274498SQ201410476890
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月18日
【發(fā)明者】許克勇, 梁晉誼, 譚惠嫻, 周杰棠, 周健平, 周敬豪 申請(qǐng)人:開平健之源保健食品有限公司