本發(fā)明屬于中藥保健品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，涉及一種由鐵皮石斛、三七、紅景天為主要原料制備而成的口服液，以及該口服液的制備方法。
背景技術(shù)：
：世界衛(wèi)生組織調(diào)查顯示，全世界亞健康人群比例高達75％。亞健康狀態(tài)已經(jīng)成為嚴重影響人們工作、生活和健康的重大隱患。專家分析認為，85％以上的疾病和亞健康狀態(tài)都與人體免疫力下降有關(guān)，同時認為有目的地適當服用具有調(diào)節(jié)免疫機能功效的保健品，對消除或避免亞健康狀態(tài)十分有益。鐵皮石斛(學名：Dendrobiumofficinale)主要含有石斛多糖、石斛堿等活性成分，性味甘淡微咸，寒，歸胃、腎、肺經(jīng)。益胃生津，滋陰清熱。用于陰傷津虧，口干煩渴，食少干嘔，病后虛熱，目暗不明。鐵皮石斛名列“九大仙草”之首，與其它品種如霍山石斛、金釵石斛等都屬于傳統(tǒng)名貴中草藥，在中國及東南亞等地區(qū)備受青睞。富硒鐵皮石斛中含有豐富的有機硒，硒是人體必需的微量元素，參與合成人體內(nèi)多種含硒酶和含硒蛋白；能提高人體免疫力，促進淋巴細胞的增殖及抗體和免疫球蛋白的合成；硒對多種癌癥具有明顯的抑制和防護作用；并且硒與維生素E、大蒜素、亞油酸、鍺、鋅等營養(yǎng)素具有協(xié)同抗氧化的功效，增加抗氧化活性。三七(學名：Panaxpseudo-ginseng)性溫，味甘微苦，入肝、胃、大腸經(jīng)，具有止血、散瘀、定痛的功效，同時還具有治療糖尿病和心血管疾病的作用。紅景天(學名：RhodiolaroseaL.)，能夠補氣清肺，益智養(yǎng)心，是一味作用廣泛的中藥，亦有很強的美容效果，可作護膚品，也可食用。市場上含有鐵皮石斛的功能性食品種類繁多，例如，中國專利CN104435749公開了一種鐵皮石斛復方制劑及其制備方法和應用，其采用鐵皮石斛與枸杞子、西洋參、靈芝等搭配，用于增強免疫力、緩解體力疲勞。然而，將鐵皮石斛與三七、紅景天配伍的復方制劑尚未見報道。另一方面，現(xiàn)有鐵皮石斛復方制劑在制備過程中，常常直接采用市售鐵皮石斛作為原料，但因種源質(zhì)量、栽培方式、栽培基質(zhì)、采收時間的不同，造成鐵皮石斛品質(zhì)不一，其石斛多糖、石斛堿等活性成分含量存在差異，進而使得鐵皮石斛復方制劑的質(zhì)量難以控制；其次，在復方制劑制備過程中多采用干燥粉碎、熱水煎煮(例如上述文獻中提到的復方制劑)以及醇提取等手段對鐵皮石斛進行處理，造成石斛多糖、石斛堿等有效成分的流失，保健效果無法保證；此外，現(xiàn)有鐵皮石斛復方制劑添加的原料較多，導致生產(chǎn)成本居高不下。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種原料精簡、工藝簡單、活性成分穩(wěn)定可控、功效提升的功能性保健食品及其制備方法。因此，本發(fā)明提供了一種由鐵皮石斛、三七、紅景天作為主要原料制備而成的口服液，其采用鐵皮石斛原球莖、尤其是鐵皮石斛原球莖鮮萃液，復配三七、紅景天，三者功效協(xié)同互補，強化了口服液功效，能夠有效用于增強人體免疫力。另一方面，本發(fā)明還提供了所述口服液的制備方法，使得石斛多糖、石斛堿等活性物質(zhì)的質(zhì)量可控，口服液品質(zhì)穩(wěn)定、成本低。具體而言，本發(fā)明的技術(shù)方案通過如下段落進行描述：[1]一種由鐵皮石斛、三七和紅景天作為主要原料制備而成的口服液。[2]如段落[1]所述的口服液，其特征在于，以重量份計，制備所述口服液的原料包含：鐵皮石斛1～10份、三七1～10份、紅景天1～10份、輔料1.5～3.5份。[3]如段落[1]或[2]所述的口服液，其特征在于，所述鐵皮石斛為富硒鐵皮石斛。[4]如段落[2]所述的口服液，其特征在于，所述輔料包含赤蘚糖醇和檸檬酸，優(yōu)選地，以重量份計，制備所述口服液的輔料包含赤蘚糖醇1～2份、檸檬酸0.5～1.5份。[5]如段落[1]-[4]中任一項所述的口服液的制備方法，所述方法包括：鮮萃：將鐵皮石斛原球莖經(jīng)洗凈、除雜后，進行打漿，過濾，分別得到鐵皮石斛原球莖鮮萃液和濾渣；提取濃縮：將三七與紅景天混合、粉碎，再加入鐵皮石斛原球莖濾渣，混合，進行水提，提取液經(jīng)過濾、濃縮，得到提取濃縮液；復配：將所述鐵皮石斛原球莖鮮萃液與所述提取濃縮液混合，再加入輔料，經(jīng)攪拌混合、滅菌、離心、灌裝、再滅菌，得所述口服液。[6]如段落[5]所述的方法，其特征在于，所述鮮萃步驟如下：洗凈除雜：采用10倍重量的水對鐵皮石斛原球莖漂洗30～60min，重復3次，瀝干表面水分；萃?。簩⑾磧舫s后的鐵皮石斛原球莖與2倍重量的水一起打漿，經(jīng)200目過濾，分別得到鐵皮石斛原球莖鮮萃液和濾渣。[7]如段落[5]所述的方法，其特征在于，所述提取濃縮步驟如下：將三七與紅景天混合，粉碎至80目，再加入鮮萃步驟中得到的濾渣進行混合，獲得混合物；向所述混合物中加入10倍重量的水，煮沸提取1～3h，經(jīng)200目過濾，得濾液，重復提取3次；合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度1～1.5，得到提取濃縮液。[8]如段落[5]所述的方法，其特征在于，所述復配步驟如下：將鮮萃步驟中得到的鐵皮石斛原球莖鮮萃液、提取濃縮步驟中得到的提取濃縮液、赤蘚糖醇和檸檬酸混合，攪拌溶解，得到口服液原液；口服液原液滅菌后，靜置5～10h，然后以5000r/min離心30min，收集上清液，灌裝、再滅菌，得所述口服液。[9]如段落[5]-[8]中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括鐵皮石斛原球莖的培育步驟：播種：無菌條件下，將鐵皮石斛種子播撒在萌發(fā)培養(yǎng)基表面，于25±1℃、1000～2000Lux光照10～16h/d條件下，培養(yǎng)50～80d，使種胚萌發(fā)，其中，所述萌發(fā)培養(yǎng)基如下：1/4～1MS培養(yǎng)基、蔗糖10～40g/L、瓊脂3～10g/L，pH7.0，121℃滅菌20min；誘導增殖：無菌條件下，將鐵皮石斛種胚轉(zhuǎn)接于原球莖誘導增殖培養(yǎng)基，于25±1℃、1000～2000Lux光照10～16h/d條件下，培養(yǎng)60～90d，進行原球莖的誘導增殖，其中，所述誘導增殖培養(yǎng)基如下：1/2～2MSMS培養(yǎng)基、NAA1～5mg/L、6-BA1～5mg/L、蔗糖20～50g/L、瓊脂3～15g/L，pH7.0，121℃滅菌20min。[10]如段落[9]所述的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛原球莖的培育步驟為富硒鐵皮石斛原球莖的培育步驟，包括：播種：無菌條件下，將鐵皮石斛種子播撒在萌發(fā)培養(yǎng)基表面，于25±1℃，1000～2000Lux光照10～16h/d條件下，培養(yǎng)50～80d，使種胚萌發(fā)，其中，所述萌發(fā)培養(yǎng)基如下：1/4～1MS培養(yǎng)基、蔗糖10～40g/L、亞硒酸鈉3～10g/L、瓊脂3～10g/L，pH7.0，121℃滅菌20min；誘導增殖：無菌條件下，將鐵皮石斛種胚轉(zhuǎn)接于原球莖誘導增殖培養(yǎng)基，于25±1℃，1000～2000Lux光照10～16h/d條件下，培養(yǎng)60～90d，進行富硒原球莖的誘導增殖，其中，所述誘導增殖培養(yǎng)基如下：1/2～2MSMS培養(yǎng)基、NAA1～5mg/L、6-BA1～5mg/L、蔗糖20～50g/L、亞硒酸鈉3～10g/L、瓊脂3～15g/L，pH7.0，121℃滅菌20min。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明以鐵皮石斛、三七、紅景天為主要原料，鐵皮石斛可滋陰生津、補五臟虛勞，為君；三七、紅景天益氣活血，通脈平喘，為臣，輔助鐵皮石斛滋陰潤五臟，補氣活血、緩解疲勞，提升機體運動能力，并強化對心血管的保護作用。此外，在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明采用了通過富硒培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的富硒鐵皮石斛原球莖作為鐵皮石斛原料，其含有豐富的活性硒元素，參與合成人體內(nèi)多種含硒酶和含硒蛋白，能提高人體免疫。本發(fā)明利用各個組分的功效特點，達到增強免疫、緩解疲勞、抗缺氧、延緩衰老以及及改善心血管功能等多重功效，非常適合運動休閑人群和亞健康人群的養(yǎng)生與保健。在選材方面，本發(fā)明采用人工組培條件下培養(yǎng)的鐵皮石斛原球莖，通過無菌、可控的培養(yǎng)條件，能有效控制石斛多糖、石斛堿等活性物質(zhì)指標，具有安全可靠、品質(zhì)可控的優(yōu)點，有效避免了當前人工大棚、露天培育的鐵皮石斛品質(zhì)不一、衛(wèi)生條件不達標、易出現(xiàn)發(fā)霉、染菌等微生物污染等問題。在工藝方面，本發(fā)明應用的“鮮萃”技術(shù)最大程度保留了多糖、石斛堿等有效成分，大大提升了其利用價值；其次，省去了鐵皮石斛的干燥步驟，避免因干燥而導致多糖、石斛堿等有效成分營養(yǎng)成分的流失(為避免焦化，往往采用中低溫、長時間干燥，這樣多糖及石斛堿會通過細胞的代謝作用而消耗)；再次，萃取液色澤翠綠、氣味清香、口感微甜，鮮萃工藝可使產(chǎn)品色澤、氣味和口感更佳，極好地保留了鐵皮石斛鮮品的特色。再結(jié)合提取、復配、灌裝等工藝，制成方便服用的口服液，非常適合現(xiàn)代人快節(jié)奏的生活。本發(fā)明的口服液從組方配伍、原料的選擇、加工工藝、產(chǎn)品劑型等方面較之市場同類產(chǎn)品均有明顯優(yōu)勢，有著良好的市場前景。附圖說明圖1是鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)流程圖。圖2是鐵皮石斛原球莖的照片。圖3是鐵皮石斛原球莖的鮮萃流程圖。圖4是提取濃縮流程圖。圖5是作為具體實施方式之一的鐵皮石斛、三七、紅景天口服液工藝流程圖。圖6示出了鐵皮石斛原球莖多糖含量測定標準曲線。圖7示出了鐵皮石斛原球莖生物堿含量測定標準曲線。具體實施方式在本發(fā)明中，采用以下測定方法對鐵皮石斛中的有效成分含量進行測定。1.石斛多糖測定方法：(1)試劑D-無水葡萄糖購自中國藥品生物制品檢定所；蒽酮(AR)購自國藥集團；其它試劑均為分析純；鐵皮石斛原球莖采用本文所述的培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。(2)儀器TU-1800spc型紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。(3)分析步驟①最大波長的測量：精密吸取葡萄糖對照品溶液0.2mL于10mL量瓶中，加蒸餾水補足至1.0mL，加入0.2％的蒽酮-硫酸試劑4.0mL，混勻，置于沸水浴中，加熱20min，取出迅速浸入冰水浴中10min。另取蒸餾水1.0mL，加入4.0mL0.2％蒽酮-硫酸試劑同上操作，作為參比。在400～700nm波長處掃描，測定吸光度。確定吸光度的最大測定波長為572nm。②標準曲線繪制：分別精密吸取葡萄糖對照品溶液0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL量瓶中，在572nm波長處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標，葡萄糖濃度C為橫坐標，作對照曲線，得回歸方程：A＝0.0367C+0.0412r＝0.9998，線性范圍4.36～21.8μg/mL。③樣品處理：將鐵皮石斛樣品置于索氏提取器中，加入石油醚回流5h，脫去葉綠素等脂類，得到鐵皮石斛試樣。稱取干燥的鐵皮石斛試樣，采用水提醇沉法，用10倍重量的水提取，水浴溫度90℃，提取4次，每次2.5h。提取液濃縮后，加入無水乙醇使其濃度達到80％，低溫靜置過夜，離心得沉淀。沉淀用Sevag法反復去除蛋白5次，再依次用無水乙醇、丙酮反復洗滌，減壓干燥得黑色石斛多糖粉末。④測定：精密稱取105℃下干燥至恒重的D-無水葡萄糖對照品0.0109g，置于50mL量瓶中，加蒸餾水溶解，搖勻，定容，作為對照品溶液。精密稱取0.2000g蒽酮，加濃硫酸溶解，搖勻，冷卻至室溫，于100mL棕色容量瓶定容，得0.2％蒽酮-硫酸試劑。精密稱取經(jīng)提取純化的石斛多糖粉末0.0508g，用蒸餾水定容于50mL量瓶，作為供試品溶液，在572nm波長處測定吸光度。⑤結(jié)果計算：試樣中多糖的含量按下面公式計算：式中：X：試樣中多糖的含量(g/100g)；m1：試樣的質(zhì)量(g)；m2：通過線性回歸方程算得的待測液中多糖的質(zhì)量(mg)；v1：待測液定容后的體積(mL)；v2：測定用的溶液體積(mL)；x：試樣的含水量(g/100g)。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。⑥精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10％。2.石斛堿測定方法：(1)試劑pH4.5緩沖溶液：0.2M鄰苯二甲酸氫鉀(pH4.0)，用0.2M氫氧化納調(diào)至pH4.5；0.04％溴甲酚綠溶液：稱取溴甲酚綠40.0mg，加100mLpH4.5緩沖溶液溶解，濾過即得；0.01N氫氧化鈉、無水乙醇溶液、氯仿、無水乙醇(以上均為國產(chǎn)分析純試劑)。(2)儀器721型分光光度計，上海第三分析儀器廠。(3)分析步驟①標準曲線繪制：精密稱取石斛堿1.00mg，置100ml容量瓶中，加氯仿至刻度。精密量取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分別置于分液漏斗中，用氯仿準確稀釋至10.0mL加入pH4.5緩沖液5.0ml和0.04％溴甲酚綠溶液1.0mL，劇烈振搖3min，靜置30min，經(jīng)氯仿浸泡處理并干燥后的藥棉濾過，取濾液6.0mL加0.01N氫氧化鈉無水乙醇液1.0mL搖勻。以氯仿10.0mL同樣操作，做空白對照。于波長620nm處分別測得吸光度。以吸光度A為縱坐標，石斛堿濃度C為橫坐標，作對照曲線，得回歸方程：A＝0.0438C+0.0391r＝0.9998，線性范圍3.26～20.16μg/mL。②測定：精密稱取石斛樣品(60目)0.500g，用適量氨水浸濕密封塞放置30min，精密加入氯仿1000mL稱重，置水溶回流加熱2h，冷后稱重；補充氯仿達到原重量，過濾，精密吸取續(xù)濾液1.0mL，置10mL容量瓶中，加氯仿至刻度搖勻，從中吸取2.0mL置25mL容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，為樣品試液。精密吸取樣品試液10.0ml，同法加入緩沖溶液及溴甲酚綠試液，顯色后，測定OD620mm，并以石斛堿標準溶液(25mg/ml)2.0mL置25mL容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，再準確吸取10mL同法顯色，測吸光度。③計算：按標準品對照法計算總生物堿含量(以石斛堿計算)計算公式如下：式中：X：試樣中生物堿的含量(g/100g)；m1：試樣的質(zhì)量(g)；m2：通過線性回歸方程算得的待測液中生物堿的質(zhì)量(mg)；v1：待測液定容后的體積(mL)；v2：測定用的溶液體積(mL)；x：試樣的含水量(g/100g)。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。⑥精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10％。樣品準備：樣品1：100g鐵皮石斛原球莖；樣品2：將100g鐵皮石斛原球莖采用本法明的鮮萃方法獲得的鮮萃液；樣品3：將100g鐵皮石斛原球莖在60±5℃下干燥、粉碎至60目，加入5倍量的水煎煮2小時，獲得提取液。結(jié)果：測量結(jié)果如下表所示：石斛多糖石斛堿樣品125.46％0.035％樣品225.09％0.032％樣品322.57％0.027％由上表可以看出，本發(fā)明的鮮萃工藝很好地保留了石斛多糖、石斛堿等活性成分。實施例下面通過實施例對本發(fā)明作進一步闡述，這些實施例將幫助更好地理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實施例。實施例11.富硒鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)：(1)無菌條件下，將鐵皮石斛種子均勻播種在萌發(fā)培養(yǎng)基(1/2MS培養(yǎng)基、蔗糖30g/L、亞硒酸鈉5g/L、瓊脂5g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)表面，于25±1℃，1600Lux光照12h/d條件下，培養(yǎng)60d，使種胚萌發(fā)；(2)無菌條件下，將鐵皮石斛種胚轉(zhuǎn)接于原球莖誘導增殖培養(yǎng)基(1/2MS培養(yǎng)基、NAA3mg/L、6-BA2mg/L、蔗糖40g/L、亞硒酸鈉6g/L、瓊脂6g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)，于25±1℃，1800Lux光照14h/d條件下，培養(yǎng)80d，獲得富硒鐵皮石斛原球莖。2.富硒鐵皮石斛原球莖的鮮萃：(1)洗凈除雜：采用10倍重量的水對富硒鐵皮石斛原球莖漂洗50min，重復3次，瀝干表面水分；(2)萃?。簩⑾磧舫s后的富硒鐵皮石斛原球莖3份與純化水6份用打漿機進行打漿，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，分別獲得富硒鐵皮石斛原球莖鮮萃液和濾渣。3.提取濃縮：(1)以重量份計，將三七5份與紅景天5份混合，粉碎至80目，再加入上述濾渣進行混合，得到混合物；(2)向上述混合物中加入10倍重量的純化水混合，煮沸提取2h，經(jīng)200目尼龍紗布過濾得濾液，重復提取3次；(3)合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度1.2，得到提取濃縮液。4.復配：(1)將鮮萃步驟中得到的鐵皮石斛原球莖鮮萃液、提取濃縮步驟中得到的提取濃縮液與赤蘚糖醇1份、檸檬酸0.2份混合、攪拌溶解，得到口服液原液；(2)口服液原液經(jīng)滅菌后，靜置8h，然后在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心30min，收集上清液，灌裝、再滅菌，即得本發(fā)明的口服液。實施例21.富硒鐵皮鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)：(1)篩選優(yōu)質(zhì)鐵皮石斛作為種源；無菌條件下，將鐵皮石斛種子均勻灑落在萌發(fā)培養(yǎng)基(1/4MS培養(yǎng)基、蔗糖10g/L、亞硒酸鈉3g/L、瓊脂3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)表面，于25±1℃，1000Lux光照10h/d條件下，培養(yǎng)50d，使種胚萌發(fā)；(2)無菌條件下，將鐵皮石斛種胚轉(zhuǎn)接于原球莖誘導增殖培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基、NAA1mg/L、6-BA1mg/L、蔗糖20g/L、亞硒酸鈉4g/L、瓊脂3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)，于25±1℃，1000Lux光照10h/d條件下，培養(yǎng)50d，獲得富硒鐵皮石斛原球莖。2.富硒鐵皮鐵皮石斛原球莖的鮮萃：(1)洗凈除雜：采用10倍重量的水對富硒鐵皮石斛原球莖漂洗30min，重復3次，瀝干表面水分；(2)萃?。簩⑾磧舫s后的富硒鐵皮石斛原球莖1份與純化水2份一起用打漿機進行打漿，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，分別得到鐵皮石斛原球莖鮮萃液和濾渣。3.提取濃縮：(1)以重量份計，將三七1份與紅景天1份混合，粉碎至80目，再加入上述鮮萃步驟中得到的濾渣進行混合，獲得混合物；(2)向所述混合物中加入10倍重量的水，煮沸提取1h，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，得濾液，重復提取3次；(3)合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度為1，得到提取濃縮液。4.復配：(1)將鮮萃步驟中得到的鐵皮石斛原球莖鮮萃液、提取濃縮步驟中得到的提取濃縮液與赤蘚糖醇0.5份、檸檬酸0.1份混合、攪拌溶解，得到口服液原液；(2)口服液原液經(jīng)滅菌后，靜置5h，然后以5000r/min離心30min，收集上清液，灌裝、再滅菌，即得本發(fā)明的口服液。實施例31.富硒鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)：(1)無菌條件下，將鐵皮石斛種子均勻灑落在萌發(fā)培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基、蔗糖40g/L、亞硒酸鈉9g/L、瓊脂10g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)表面，于25±1℃，2000Lux光照16h/d條件下，培養(yǎng)80d，使種胚萌發(fā)；(2)無菌條件下，將鐵皮石斛種胚轉(zhuǎn)接于原球莖誘導增殖培養(yǎng)基(2MS培養(yǎng)基、NAA5mg/L、6-BA5mg/L、蔗糖50g/L、亞硒酸鈉10g/L、瓊脂15g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)，于25±1℃，2000Lux光照16h/d條件下，培養(yǎng)90d，獲得富硒鐵皮石斛原球莖。2.富硒鐵皮石斛原球莖的鮮萃：(1)洗凈除雜：采用10倍重量的水對富硒鐵皮石斛原球莖漂洗60min，重復3次，瀝干表面水分；(2)萃?。簩⑾磧舫s后的富硒鐵皮石斛原球莖5份與純化水10份一起用打漿機進行打漿，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，分別得到鐵皮石斛原球莖鮮萃液和濾渣。3.提取濃縮：(1)以重量份計，將三七10份與紅景天10份混合，粉碎至80目，再加入鮮萃步驟中得到的濾渣進行混合，獲得混合物；(2)向所述混合物中加入10倍重量的水，煮沸提取3h，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，得濾液，重復提取3次；(3)合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度1.5，得到提取濃縮液。4.復配：(1)以重量份計，將鮮萃步驟中得到的鐵皮石斛原球莖鮮萃液、提取濃縮步驟中得到的提取濃縮液與赤蘚糖醇2份、檸檬酸0.5份混合、攪拌溶解，得到口服液原液；(2)口服液原液經(jīng)滅菌后，靜置10h，然后以5000r/min離心30min，收集上清液，灌裝、再滅菌，即得本發(fā)明的口服液。對比實施例11.富硒鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)：(1)無菌條件下，將鐵皮石斛種子均勻播種在萌發(fā)培養(yǎng)基(1/2MS培養(yǎng)基、蔗糖30g/L、亞硒酸鈉5g/L、瓊脂5g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)表面，于25±1℃，1600Lux光照12h/d條件下，培養(yǎng)60d，使種胚萌發(fā)；(2)無菌條件下，將鐵皮石斛種胚轉(zhuǎn)接于原球莖誘導增殖培養(yǎng)基(1/2MS培養(yǎng)基、NAA3mg/L、6-BA2mg/L、蔗糖40g/L、亞硒酸鈉6g/L、瓊脂6g/L，pH7.0，121℃滅菌20min)，于25±1℃，1800Lux光照14h/d條件下，培養(yǎng)80d，獲得富硒鐵皮石斛原球莖。2.富硒鐵皮石斛原球莖的鮮萃：(1)洗凈除雜：采用10倍重量的水對富硒鐵皮石斛原球莖漂洗50min，重復3次，瀝干表面水分；(2)萃取：將洗凈除雜后的鐵皮石斛原球莖3份與2倍重量的水一起用打漿機進行打漿，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，分別得到鐵皮石斛原球莖鮮萃液和濾渣。3.提取濃縮：(1)以重量份計，將上述濾渣3份與純化水20份混合，煮沸提取2h，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，得濾液，重復提取3次；(2)合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度1.2，得到提取濃縮液。4.復配：(1)以重量份計，將所述富硒鐵皮石斛原球莖鮮萃液、提取濃縮步驟中得到的提取濃縮液與赤蘚糖醇1份、檸檬酸0.2份混合、攪拌溶解，獲得口服液原液；(2)口服液原經(jīng)液滅菌后，靜置8h，然后以5000r/min離心30min，收集上清液，灌裝、再滅菌，即得鐵皮石斛口服液。對比實施例21.提取濃縮：(1)將三七粉碎至80目，以重量份計，將三七粉5份與純化水50份混合，煮沸提取3h，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，得濾液，重復提取3次；(2)合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度1.5，得到提取濃縮液。2.復配：(1)以重量份計，將所述提取濃縮液與赤蘚糖醇2份、檸檬酸0.5份混合、攪拌溶解，獲得口服液原液；(2)口服液原液經(jīng)滅菌后，靜置10h，然后以5000r/min離心30min，收集上清液，灌裝、滅菌，即得三七口服液。對比實施例31.提取濃縮：(1)將紅景天粉碎至80目，以重量份計，將紅景天粉5份與純化水50份混合，煮沸提取3h，經(jīng)200目尼龍紗布過濾，得濾液，重復提取3次；(2)合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度1.5，得到提取濃縮液。2.復配：(1)以重量份計，將所述提取濃縮液與赤蘚糖醇2份、檸檬酸0.5份混合、攪拌溶解，獲得口服液原液；(2)口服液原液經(jīng)滅菌后，靜置10h，然后以5000r/min離心30min，收集上清液，灌裝、再滅菌，即得紅景天口服液。試驗實施例1：藥效試驗經(jīng)動物實驗證實本品具有增強免疫力和緩解體力疲勞的功能。一、增強免疫力功能試驗以氫化可的松模型小鼠為試驗對象，通過口腔給予不同劑量的本發(fā)明的口服液1個月，結(jié)果顯示，本發(fā)明的口服液具有升高小鼠外周血白細胞數(shù)，增加模型小鼠胸腺、脾臟指數(shù)，增強巨噬細胞的吞噬功能，促進模型鼠細胞免疫功能的功效。因此認為，本發(fā)明的口服液具有增強免疫力的功能。1材料和方法1.1材料試驗樣品：實施例1制備的本發(fā)明的口服液，規(guī)格為25mL/瓶；對比實施例1-3制備的口服液作為對照組；實驗動物：清潔級ICR小鼠180只，雌雄各半，體重18～22g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供；主要試劑：印度墨汁，綿羊紅細胞(SRBC)。1.2方法(1)對小鼠白細胞數(shù)和胸腺、脾臟指數(shù)的影響如表1所示，取健康小鼠80只，雌雄各半，按體重隨機分為8組。正常組、模型組小鼠每天灌胃給予生理鹽水0.01mL/g，對照組和給藥組按表1劑量分別灌胃給予試驗樣品，劑量分別為0.4mL/kg體重(低劑量組)、1.2mL/kg體重(中劑量組)與4.0mL/kg體重(高劑量組)，1次/天，連續(xù)30天。除正常組外，其它各組于實驗第18天開始皮下注射氫化可的松(40mg/kg)5次，隔天注射1次。末次給藥1.5h后，小鼠眼眶采血，測定白細胞數(shù)，并用頸椎脫臼法處死動物，剖取胸腺、脾臟并稱重量，計算臟器指數(shù)，再用t檢驗進行統(tǒng)計處理。(2)對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響小鼠分組、給藥及造模同上述方法(1)。末次給藥1h后，各組小鼠尾靜脈注射印度墨汁(用生理鹽水稀釋4倍)0.01mL/g，于注射后2min、10min時分別眼眶取血20μL，溶于2mL0.1％(wt)碳酸鈉水溶液中，搖勻，測定OD600nm，計算吞噬指數(shù)a：吞噬指數(shù)a＝(logA1-logA2)÷(t1-t2)。(3)對綿羊紅細胞(SRBC)誘導小鼠足跖腫脹度的影響取健康小鼠80只，雌雄各半，按體重隨機分為8組，見表3。正常組、模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.01mL/g，對照組和給藥組分別按表3以試驗樣品0.4mL/kg體重、1.2mL/kg體重與4.0mL/kg體重的劑量灌胃給藥，1次/天，連續(xù)30天。30天后，除正常組外，腹腔注射2％(wt)SRBC，每只小鼠注射0.2mL(約1×108個SRBC)。免疫4天后，測量左后足跖部厚度或腫脹度，然后在測量部位皮下注射20％(V/V)SRBC，每只鼠20μL(約1×108個SRBC)，注射后24h測定左后足跖部厚度或腫脹度，同一部位測定三次，取平均值。2結(jié)果2.1對小鼠白細胞數(shù)及胸腺、脾臟指數(shù)的影響結(jié)果如表1所示，與模型組相比，實施例1的口服液1.3mL/kg、4.1mL/kg能有效抵制氫化可的松所引起的外周血白細胞數(shù)的急劇下降，減輕氫化可的松應用的副作用，并能有效抑制氫化可的松引起的免疫器官分泌淋巴細胞的減少；與正常組相比，實施例1的口服液1.3mL/kg、4.1mL/kg能夠較明顯地提升外周血白細胞的效應，促進免疫器官的增殖(P<0.05)，且作用優(yōu)于各對照組。為平均值±標準差。表1試驗樣品對小鼠白細胞數(shù)和胸腺、脾臟指數(shù)的影響(n＝10，)注：與正常組比較，*：P<0.05；**：P<0.01。2.2對小鼠碳廓清指數(shù)的影響結(jié)果如表2所示，與模型組相比，實施例1的口服液1.3mL/kg、4.1mL/kg能有效抑制氫化可的松加入后引起的小鼠碳粒廓清速度減慢；與正常組相比，實施例1的口服液1.3mL/kg、4.1mL/kg能明顯提高吞噬速率a，增加小鼠碳粒廓清能力，且作用優(yōu)于各對照組。表2試驗樣品對小鼠碳粒廓清速度的影響(n＝10，)注：與正常組比較，與模型組比較，*：P<0.05；**：P<0.01。2.3對綿羊紅細胞(SRBC)誘導小鼠足跖腫脹度的影響結(jié)果如表3所示，模型組的足跖腫脹度與正常組相比，有顯著的統(tǒng)計學差異(P<0.01)。實施例1的口服液1.3mL/kg、4.1mL/kg能顯著減少SRBC致敏引起的足跖腫脹程度，有效促進細胞免疫。與正常組相比，實施例1的口服液1.3mL/kg、4.1mL/kg可以有效促進小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應，促進細胞免疫功能(P<0.05，P<0.01)，且作用優(yōu)于各對照組。表3試驗樣品對綿羊紅細胞誘導小鼠足跖腫脹度的影響(n＝10，)注：與正常組比較，*：P<0.05，**：P<0.01；***：P<0.01。3結(jié)論上述試驗實施例證明本發(fā)明的富硒鐵皮石斛、三七、紅景天口服液具有升高氫化可的松模型小鼠外周血白細胞數(shù)，增加模型鼠胸腺、脾臟指數(shù)，增強巨噬細胞的吞噬功能，促進模型鼠細胞免疫功能。表明該制劑具有免疫增強作用，可增強機體的特異性和非特異性免疫功能。當前第1頁1 2 3