專利名稱：促鈣吸收作用的林蛙卵組合物及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種由林蛙卵和食品添加劑組成的保健食品，用來作為哺乳動物的鈣增補(bǔ)劑。
林蛙也稱哈士蟆是我國特有的補(bǔ)品和滋補(bǔ)性中藥材(中藥大辭典1977；1650)，包括中國林蛙和黑龍江林蛙，主要分布在我國的吉林、遼寧、黑龍江和甘肅的部分地區(qū)(中藥通報1955；2:205；中草藥1996；27:82)，多野生于長白山密林溪水中。傳統(tǒng)的食用方法是將活林蛙全體燉煮后服用，補(bǔ)而不燥；或?qū)⒋屏滞芊叛幩溃栏?，剖取輸卵?哈士蟆油)食用或與其它中藥配方，蛙體的其余部分棄去。近年來，人們開始注意林蛙的精加工和綜合利用，中國專利CN 1076857A,CN 1130087A公開了一種林蛙油口服液的制作方法；CN 1107674A公開了將林蛙油制成飲料及羹的方法；CN1110559A公開了除去哈士蟆油和內(nèi)臟后將剩余部分加工成膠囊的方法。對林蛙卵的研究揭示，其中合有豐富的氨基酸，三十多種微量元素，多種不飽和脂肪酸，維生素D、E，雌激素和孕激素等多種生物活性物質(zhì)(中藥及天然藥物1994；29:712)。中國專利CN 1066590A公開了活取哈士蟆油及卵的方法；CN 1117352A公開了中華雪蛤精(活取的哈士蟆油及卵)及其組合物制成保健食品的方法。這些方法開辟了林蛙綜合利用的途徑，但沒有充分發(fā)掘林蛙卵應(yīng)有的生物調(diào)節(jié)作用。
我們的前期工作表明林蛙卵其有顯著的促鈣吸收作用，鈣對機(jī)體生命活動十分重要，正常人每日需要補(bǔ)充1000mg的鈣，鈣在胃中以離子形式存在，但胃不能吸收鈣離子，小腸是鈣吸收的主要部位，但腸內(nèi)的堿性環(huán)境使鈣產(chǎn)生Ca(OH)2沉淀，而不能被吸收。所以，鈣只能在小腸上段很小的區(qū)域，在胃酸沒有被腸內(nèi)的堿性環(huán)境完全中和的情況下被吸收。因此，無論機(jī)體攝入多少鈣，其吸收均受到很大的限制。維生素D可以促進(jìn)鈣的吸收，是目前促鈣吸收的最佳物質(zhì)，但仍然達(dá)不到機(jī)體對鈣的需求。美國專利US 95 06239及中國專利CN 1152258A公開了一種促鈣吸收的方法，在鈣源周圍形成一種親水性聚合物基質(zhì)，增加鈣在胃部的停留時間而增加鈣的吸收。但此方法對于大多數(shù)需要補(bǔ)鈣的骨質(zhì)疏松患者來說，未必最佳方案，因?yàn)椋琴|(zhì)疏松患者多為老年人，老人胃腸運(yùn)動本來很饅，再延長鈣在胃內(nèi)的停留時間不一定益處很大。老人鈣吸收的不足與其維生素D合成及攝入減少和胃酸分泌減少密切相關(guān)。因此，增加鈣源周圍的酸性環(huán)境，尋找促鈣吸收的物質(zhì)，將是解決鈣吸收問題的重要途徑。
因此，本發(fā)明的目的是充分發(fā)掘和利用天然資源，將被廢棄或一般性食用的林蛙卵與食品添加劑組合起來形成一種保健食品，成為哺乳動物的鈣増補(bǔ)劑，有助于預(yù)防骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明的內(nèi)容涉及的是一種促進(jìn)哺乳動物腸道鈣吸收的組合物及其制劑，該組合物由林蛙卵、鈣源、維生素D、檸檬酸和基質(zhì)組成。其中，各組分的重量配比如下林蛙卵5-80；鈣源0-90；維生素D0-5；檸檬酸0-20；基質(zhì)0-5。
本發(fā)明使用的林蛙卵是指中國林蛙、黑龍江林蛙干燥的卵。發(fā)明中使用的鈣源是任何一種食用或藥用鈣源和鈣螯合物，在增補(bǔ)劑中常用的經(jīng)典鈣源如下碳酸鈣(CaCO3)、磷酸鈣(Ca3(PO4)2)、檸檬酸鈣(C12H10Ca3O14·4H2O)、葡萄糖酸鈣(C12H22O14Ca·H2O)、草酸鈣(C2CaO4·H2O)、甘氨酸鈣(C4H3N2O4Ca)、動物骨鈣、牡蠣鈣，活性鈣。其他形式的鈣如果能被人體吸收的話也能被使用。發(fā)明中使用的維生素D是食用或藥用的維生素D或其衍生物，首選維生素D3(C27H44O)(式Ⅰ化合物)。發(fā)明中使用的檸檬酸是食用或藥用的檸檬酸(C6H3O7)(式Ⅱ化合物)。使用的基質(zhì)是一些食品和制藥業(yè)常用的輔料。如微晶纖維素、淀粉、糊精、羥甲基纖維素鈉、羥基丙基甲基纖維素。使用基質(zhì)的目的一是有助于制劑，二是有助于増加胃內(nèi)容物的粘度，以便延長鈣源在小腸上部停留的時間并延長酸性環(huán)境維持的時間。式Ⅰ化合物 式Ⅱ化合物
此組合物成形的制劑是一些口服固體或半固體制劑，片劑，膠囊是優(yōu)選的劑型。其制備方法是按傳統(tǒng)的制劑方法制備，尚可根據(jù)劑型的需要選擇其他制劑輔料。
按此組合物組成的配方，給動物服用后，可顯著促進(jìn)鈣的吸收。
和以往的發(fā)明相比，本發(fā)明有以下改進(jìn)1．充分合理地利用自然資源，將剝?nèi)×滞苡秃髲U棄的林蛙卵制成保健食品。2．建立林蛙卵組合物并將組合物制成多種制劑。3．提供一種補(bǔ)鈣方法，為當(dāng)前亟待解決的補(bǔ)鈣問題開辟新途徑。本發(fā)明的創(chuàng)造性還可通過如下內(nèi)容體現(xiàn)藥理毒理研究一．目的林蛙是我國特產(chǎn)的補(bǔ)品和滋補(bǔ)性中藥材，林蛙的輸卵管即林蛙油作為高檔補(bǔ)品，暢銷全球，林蛙卵在剝?nèi)×滞苡秃笠话惚粡U棄，本實(shí)驗(yàn)將探索被廢棄的林蛙卵與食品添加劑組成組合物對鈣吸收的影響。二．材料和方法1．受試物林蛙卵由遼寧省桓仁縣拐蘑子鎮(zhèn)林蛙管理場提供，為林蛙的干燥卵，呈黑色顆粒狀，魚腥味固體。臨用時研細(xì)配成水混懸液供試。碳酸鈣由上海碳酸鈣廠提供維生素D3由東北制藥總廠提供；檸檬酸由上海寶山縣盛橋檸檬酸廠提供；維丁鈣片由江西上饒制藥廠提供；鈣爾奇D片由立達(dá)制藥有限公司提供。2．動物昆明種小鼠，5-6周齡，體重20±1g；SD大鼠，6-7周齡，體重150±19g雌雄各半，由中國醫(yī)科大學(xué)動物室提供，動物合格證號遼實(shí)動字521號。每籠十只群養(yǎng)，自由攝食飲水。3．實(shí)驗(yàn)方法3.1.血鈣測定方法依文獻(xiàn)方法測定Ca標(biāo)準(zhǔn)液及大鼠小鼠血清鈣含量。取CaCl2標(biāo)準(zhǔn)液或小鼠血清20μl加入2ml偶氮胂Ⅲ溶液混均，室溫放置3分鐘，在650nm下測定吸光度值(中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志1995；18(3):270-2)。此方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線考察是取CaCl2標(biāo)準(zhǔn)液0.0821mg/ml 10,20,30,40,50μl進(jìn)行測定，在650nm下讀取吸光度值；日內(nèi)變異系數(shù)的測定是取1.9608μmol/L濃度的CaCl2標(biāo)準(zhǔn)液7份，每份20μl，測定吸光度，求出均值和方差計算變異系數(shù)；回收率測定是取5份小鼠血清，每份20μl再分別加入CaCl2標(biāo)準(zhǔn)液3.704μmol，爾后測定吸光度，減去空白血清的吸光度值，用此差值代入回歸方程求出加入的鈣量，再除以加入鈣的實(shí)際量即求出回收率。鈣吸收曲線是取CaCO3644mg/kg給小鼠灌胃給藥后0,30,60,90,120,150分鐘取血測定血鈣濃度(CaCO3給藥劑量的確定是取用小鼠與人的等效劑量的5倍)。3.2.不同物質(zhì)對鈣吸收的影響3.2.1維生素D對鈣吸收的影響取30只禁食小鼠，隨機(jī)分為3組，第1組口服蒸溜水10ml/kg，第2組口服碳酸鈣懸液644mg/kg，第3組口服碳酸鈣懸液644mg/kg+維生素D3200iu/kg，給藥后半小時取血測定血清鈣含量。3.2.2檸檬酸對鈣吸收的影響取30只禁食小鼠，隨機(jī)分為3組，第1組口服蒸溜水10ml/kg，第2組口服碳酸鈣懸液644mg/kg，第3組口服碳酸鈣懸液644mg/kg+檸檬酸溶液450mg/kg，給藥后半小時取血測定血清鈣含量。3.2.3林蛙卵對鈣吸收的影響。
取40只禁食小鼠，隨機(jī)分為4組，第1組口服蒸溜水10ml/kg，第2組口服碳酸鈣懸液644mg/kg，第3組口服碳酸鈣懸液644mg/kg+林蛙卵1g/kg，第4組口服碳酸鈣懸液644mg/kg+維生素D3200iu/kg+林蛙卵1g/kg，給藥后半小時取血測定血清鈣含量。3.3最佳處方的選擇將碳酸鈣，檸檬酸，維生素D和林蛙卵四個因素各選2個水平進(jìn)行組合，因素碳酸鈣(A)檸檬酸(B)維生素D(C)林蛙卵(D)水平1300mg 25mg 25μg 300mg水平2600mg 50mg 50μg 600mg取90只禁食小鼠，隨機(jī)分為9組，第1組口服蒸溜水10ml/kg，第2組口服A1B1C1D1第3組口服A1B1C1D2；第4組口服A1B2C2D1；第5組口服A1B2C2D2；第6組口服A2B1C2D1；第7組口服A2B1C2D2；第8組口服A2B2C1D1；第9組口服A2B2C1D2，給藥后30分鐘測定血鈣含量。3.4.林蛙卵組合物對大鼠血鈣的影響取60只禁食大鼠，隨機(jī)分為6組，第1組為正常組，第2-6組每周二，五肌肉注射氫化可的松(沈陽第一制藥廠)4.5mg/kg連給12周，其中，第1組口服蒸溜水10ml/kg，第2組口服蒸溜水10ml/kg，第3組口服鈣爾奇D懸液600mg/kg；第4組口服維丁鈣片懸液600mg/1g；第5組口服林蛙卵組合物懸液1300mg/kg(含碳酸鈣600mg)；第6組口服林蛙卵組合物懸液650mg/kg(含碳酸鈣300mg)；每日給藥一次，連給12周，于末次給藥30分鐘后，大鼠眶靜脈取血，測定血清鈣含量。3.5毒性實(shí)驗(yàn)取小鼠40只，隨機(jī)分兩組，每組20只，雌雄各半，禁食給水12小時后，第1組小鼠灌胃給予林蛙卵組合物0.5％CMC懸液1300mg/kg，第2組口服林蛙卵組合物0.5％CMC懸液3250mg/ml,20ml/kg,5小時后，第2組再給藥一次，爾后，連續(xù)觀察14天動物的狀態(tài)和死亡情況。4．統(tǒng)計各組數(shù)據(jù)的組間比較用t檢驗(yàn)統(tǒng)計。正交設(shè)計試驗(yàn)用方差分析F檢驗(yàn)統(tǒng)計。三．結(jié)果1．血清鈣測定方法血清鈣含量測定方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線為C=7.318A+0.0664 r=0.9997；日內(nèi)變異系數(shù)CV％=1.58％；回收率為96.79％(90.71-100.43％)。2．鈣吸收曲線CaCO3灌胃給藥后0,30,60,90,120,150分鐘的血鈣濃度分別為2.35,2.97,2.772.67,2.79,2.49mmol/L。鈣的吸收在30分鐘達(dá)到高峰，故實(shí)驗(yàn)取材時間定在給藥后30分鐘。
3．不同物質(zhì)對鈣吸收的影響3.1維生素D對鈣吸收的影響對照組，碳酸鈣組，碳酸鈣+維生素D3組的血鈣水平分別為2.51±0.42；2.76±0.49；3.27±0.41mmol/L，驗(yàn)證維生素D3對鈣的吸收有促進(jìn)作用(與碳酸鈣組比p＜0.01)。3.2檸檬酸對鈣吸收的影響對照組，碳酸鈣組，碳酸鈣+檸檬酸組的血鈣水平分別為2.21±0.14；2.60±0.29；3.14±0.36mmol/L，提示檸檬酸對鈣的吸收也有促進(jìn)作用(與碳酸鈣組比p＜0.01)。3.3林蛙卵對鈣吸收的影響對照組，碳酸鈣組，碳酸鈣+林蛙卵組和碳酸鈣+維生素D3+林蛙卵組的血鈣水平分別為2.23±0.36；2.62±0.29；3.29±0.29；3.65±0.21mmol/L，提示林蛙卵及其與維生素D3組合對鈣的吸收有促進(jìn)作用(林蛙卵+碳酸鈣組與碳酸鈣組比p＜0.01；碳酸鈣+維生素D3+林蛙卵組與碳酸鈣組比p＜0.01)。4．最佳處方的選擇各組結(jié)果如表1所示表1．林蛙卵組合物不同組合對小鼠血鈣含量的影響
表2方差分析表序號ABA×B C D Yi2 11111113.19±0.363 11111223.22±0.294 12221212.88±0.545 12222123.36±0.546 21222113.28±0.317 21221223.33±0.318 22112212.99±0.469 11111113.75±0.33Ⅰi12.65 13.02 13.15 13.15 13.15 13.58 12.34Ⅱi13.35 12.98 12.85 12.85 12.85 12.42 12.66Ⅰj3.16 3.26 3.29 3.29 3.28 3.40 3.09Ⅱj3.34 3.25 3.21 3.21 3.21 3.11 3.42R -0.18 0.01 0.08 0.08 0.08 0.29 -0.33Ⅰj2160.0 169.5 172.9 172.9 172.9 184.4 152.3Ⅱj2178.2 168.5 165.1 165.1 165.1 154.3 186.6Ri338.2 338.0 338.0 338.0 338.0 338.7 338.9Si0.05 0 0 0 0 0.175 0.225F比0.50 0 0 2.5Ri=Ⅰj2+Ⅱj2； G=∑Yi=26 G2=676CT=G2/8=84.5 Si=Ri/4-CT查F表p＞0.05結(jié)果經(jīng)方差分析F檢驗(yàn)，表明四個影響因素中以林蛙卵的影響最大，四因素中兩水平對鈣吸收的影響不顯著(p＞0.05)，根據(jù)臨床補(bǔ)鈣的經(jīng)驗(yàn)并結(jié)合實(shí)驗(yàn)具體數(shù)據(jù)，A2B2C1D2組合的促鈣吸收效果最好，故選此比例作為處方組成。5．林蛙卵組合物對大鼠血鈣的影響各組數(shù)據(jù)如表3所示表3．林蛙卵組合物對大鼠血鈣的影響(X±SD)
n=10，與模型對照組相比*p＜0.05,**p＜0.01與對照組，鈣爾奇D和維丁鈣片組相比#p＜0.05結(jié)果表明林蛙卵組合物有很強(qiáng)的促鈣吸收作用，不僅對正常動物，對皮質(zhì)激素所致的骨質(zhì)疏松動物都同樣有效，其效果強(qiáng)于市場暢銷的鈣爾奇D和維丁鈣片。6．毒性實(shí)驗(yàn)林蛙卵組合物以最高的濃度，最大的給藥容量，給小鼠口服后，連續(xù)14天的觀察，未見動物出現(xiàn)任何不適和異常反應(yīng)發(fā)生，此高劑量相當(dāng)于推薦人正常用量的600倍，相當(dāng)于小鼠與人等效劑量的78倍，說明林蛙卵組合物正常劑量口服是安全的。四．小結(jié)林蛙卵組合物給小鼠大鼠口服，使動物的血鈣水平明顯升高，其作用強(qiáng)于相同鈣含量的鈣爾奇D和維丁鈣片。以高于人用劑量600倍的劑量口服未見毒性反應(yīng)發(fā)生。
實(shí)施例下述實(shí)施例是為了更好的闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。實(shí)施例1林蛙卵膠囊處方林蛙卵 300.0g碳酸鈣(CaCO3) 300.0g維生素D312.5mg檸檬酸 25.0g可溶性淀粉 25.0g制成 1000粒制法取去掉林蛙油后的林蛙，將干燥的卵小心剝出，收集在一起，揀凈雜質(zhì)，將卵粉碎，過6號篩備用，另取處方量的維生素D3、與等量淀粉放入乳體內(nèi)研磨混合，研均后，再取25mg淀粉放入此乳缽中研蘑混合，然后，再順次增加淀粉量與維生素D3混合均勻至淀粉用完。另取處方量的檸檬酸放入另一乳缽中研細(xì)，再依次按25,50,100及125g的順序往此乳缽中加入CaCO3，每次都研均后再加下一份CaCO3至二者混合均勻。再將檸檬酸與CaCO3的混合粉按25,50,100,150g的順序加入淀粉與維生素D3的混合粉中，至其充分混均，再向此混合物中加入林蛙卵并充分混合均勻。將混均后的灰色的細(xì)粉過6號篩，爾后將其裝入0號膠囊中即得。實(shí)施例2林蛙卵油片處方林蛙卵 500.0g碳酸鈣 300.0g維生素D3 12.5mg檸檬酸 25.0g可溶性淀粉 100.0g滑石粉 適量制成 1000片制法1．制備林蛙卵油取林蛙卵，自然干燥，揀除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粉碎后用1∶2(W/V)乙醚冷浸24小時，爾后傾出上清液，再加同樣量的乙醚同法浸三次，收集并過慮浸液，用水流唧筒連通減壓裝置，在水浴上減壓回收乙醚，待無乙醚蒸出后，將蒸溜瓶內(nèi)的黃色油狀液體倒入燒杯中于室溫放置一周，將乙醚揮散凈后即得淺黃棕色卵油(白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報1991；17增刊13)，得率為20％。2．壓片按處方比例，稱取碳酸鈣、維生素D3和檸檬酸混均過6號篩；取林蛙卵油與此混合物混均。另取淀粉加水制成希糊，加入混合粉末中制成米粒大顆粒，60℃干燥2小時后加入適量滑石粉調(diào)整流動性，用壓片機(jī)10mm沖模(平面直角)壓片。片重550mg。
權(quán)利要求
1．一種促鈣吸收作用的林蛙卵組合物及其制劑，其特征是該組合物由林蛙卵、鈣源、維生素D、檸檬酸和基質(zhì)組成。其中，各組分的重量配比如下林蛙卵5-80；鈣源0-90；維生素D0-5；檸檬酸0-20；基質(zhì)0-5。其中的林蛙卵是指中國林蛙、黑龍江林蛙干燥的卵；鈣源是任何一種食用或藥用鈣源或鈣螯合物，在增補(bǔ)劑中常用的經(jīng)典鈣源有碳酸鈣、磷酸鈣、檸檬酸鈣、葡萄糖酸鈣、草酸鈣、甘氨酸鈣、動物骨鈣、牡蠣鈣，活性鈣。其他形式的鈣如果能被人體吸收的話也能被使用?；|(zhì)是一些食品和制藥業(yè)常用的輔料，如微晶纖維素、淀粉、糊精、羥甲基纖維素鈉、羥基丙基甲基纖維素等；其制劑為固體半固體口服制劑。
2．按權(quán)力要求1所述的促鈣吸收作用的林蛙卵組合物及其制劑，其特征是林蛙卵膠囊處方林蛙卵300.0g碳酸鈣(CaCO3)300.0g維生索D312.5mg檸檬酸25.0g可溶性淀粉25.0g制成 1000粒制法取去掉林蛙油后的林蛙，將干燥的卵小心剝出，收集在一起，揀凈雜質(zhì)，將卵粉碎，過6號篩備用，另取處方量的維生素D3、與等量淀粉放入乳缽內(nèi)研磨混合，研均后，再取25mg淀粉放入此乳缽中研蘑混合，然后，再順次増加淀粉量與維生素D3混合均勻至淀粉用完。另取處方量的檸檬酸放入另一乳缽中研細(xì)，再依次按25,50,100及125g的順序往此乳缽中加入CaCO3，每次都研均后再加下一份CaCO3至二者混合均勻。再將檸檬酸與CaCO3的混合粉按25,50,100,150g的順序加入淀粉與維生素D3的混合粉中，至其充分混均，再向此混合物中加入林蛙卵并克分混合均勻。將混均后的灰色的細(xì)粉過6號篩，爾后將其裝入0號膠囊中即得。林蛙卵油片處方林蛙卵 500.0g碳酸鈣 300.0g維生索D312.5mg檸檬酸 25.0g可溶性淀粉 100.0g滑石粉 適量制成1000片制法取林蛙卵依說明書方法制成卵油，按處方比例，稱取碳酸鈣、維生素D3和檸檬酸混均過6號篩；取林蛙卵油與此混合物混均。另取淀粉加水制成稀糊，加入混合粉末中制成米粒大顆粒，60℃干燥2小時后加入適量滑石粉調(diào)整流動性，用壓片機(jī)10mm沖模(平面直角)壓片。片重550mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是具有促鈣吸收作用的林蛙卵組合物及其制劑,該組合物由林蛙卵、鈣源、維生素D、檸檬酸和基質(zhì)組成。其中,各組分的重量配比如下:林蛙卵5—80;鈣源0—90;維生素D0—5;檸檬酸0—20;基質(zhì)0—5。其制劑為固體半固體口服制劑。作為保健食品,具有促鈣吸收作用,可用來作為哺乳動物的鈣增補(bǔ)劑。
文檔編號A23L1/30GK1212140SQ97116918
公開日1999年3月31日 申請日期1997年9月22日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月22日
發(fā)明者徐利 申請人:徐利