專利名稱：抗焦慮作用的林蛙卵油及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切的說它是一種具有抗焦慮作用的林蛙卵油及其制備方法。
背景技術(shù)：
林蛙(Rana Temporaria Chensinensis David)也稱哈士蟆，為脊索動(dòng)物門，兩犧綱，無尾目，蛙科，蛙亞科，林蛙屬，中國林蛙種等十幾個(gè)種。林蛙是我國傳統(tǒng)名貴補(bǔ)品和滋補(bǔ)性中藥材，史料記載林蛙及其輸卵管(蛤蟆油)補(bǔ)而不燥，潤肺生津，入腎，清肺潤喉。歷代醫(yī)書均作為補(bǔ)品將其著錄，其產(chǎn)品為哈士蟆油(林蛙輸卵管)及哈士蟆即林蛙的干燥全體。
近年，我國學(xué)者李成義對(duì)林蛙卵進(jìn)行溶劑提取并分析證明林蛙卵中含有豐富的氨基酸，三十多種微量元素，多種不飽和脂肪酸，維生素D、E，雌激素和孕激素等多種生物活性物質(zhì)(中藥及天然藥物1994；29712)。本課題組的研究證明林蛙卵中含有脂肪酸、脂肪酰胺等多類別組分(中國藥物化學(xué)雜志，2001，11(4)224 225)。
中國林蛙的開發(fā)和綜合利用近年越來越受到人們的重視，因此，中國林蛙專利逐年增多。以林蛙、哈士蟆、哈什螞、蛤士蟆、雪蛤?yàn)殛P(guān)鍵詞，檢索國內(nèi)、外專利，結(jié)果未查到其他國家專利，中國專利74篇，其中涉及林蛙卵的發(fā)明專利15篇。在這15篇專利中有一項(xiàng)專利授權(quán)(ZL 97116918.7)，十四項(xiàng)專利申請(qǐng)。中國專利99119379.2“林蛙卵及其應(yīng)用”保護(hù)的是林蛙卵在免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老、壯陽、明目、調(diào)節(jié)血脂和預(yù)防婦女更年期綜合癥方面的作用。中國專利01106213.4“利用CO2超臨界萃取林蛙卵油的方法”，01106211.8“降血脂營養(yǎng)保健軟膠囊及其制法”，01106212.6“一種具有降血脂作用的林蛙卵油營養(yǎng)保健膠囊及其制法”，01106209.6“抗衰老、降血脂營養(yǎng)保健軟膠囊及其制法”，01106210.X“益智、降血脂營養(yǎng)保健軟膠囊及其制法”是同一天，同一個(gè)代理機(jī)構(gòu)申請(qǐng)的5項(xiàng)專利，均涉及中國林蛙卵的超臨界提取工藝。01112272.2雪蛤舒脂軟膠囊公開了林蛙卵油的降血脂作用。中國專利01113910.2“林蛙卵油的超臨界提取工藝”，01106240.1“林蛙卵油軟膠囊及其生產(chǎn)工藝”，01114070.4“林蛙卵油注射液及其制備工藝”是本課題組自己申請(qǐng)的三項(xiàng)專利，對(duì)該產(chǎn)品的提取工藝和制劑工藝進(jìn)行了保護(hù)，使該產(chǎn)品生產(chǎn)的關(guān)鍵工藝具有獨(dú)占的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。這些方法揭示林蛙卵含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)機(jī)體具有多方面的調(diào)節(jié)作用。
本課題組采用壓榨、CO2超臨界萃取和溶劑提取等方法制備林蛙卵油，并將得到的產(chǎn)品制成不同途徑應(yīng)用的制劑用于機(jī)體，這些途徑使林蛙卵油進(jìn)入體內(nèi)后，發(fā)現(xiàn)其具有抗焦慮作用。因此，本發(fā)明將不同方式提取出的林蛙卵油制成多種制劑，以不同途徑將林蛙卵油導(dǎo)入機(jī)體，發(fā)揮其抗焦慮作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種抗焦慮作用的林蛙卵油及其制備方法，使林蛙卵油它可用于制備抗焦慮作用的藥物制劑。制劑可制成口服和注射途徑的制劑，口服制劑可制成軟膠囊、片劑、膠囊、納米干乳、口服液等劑型，注射劑可制成注射油劑，脂質(zhì)體注射液等。該林蛙卵油的獲得方法可以通過壓榨的方法制備，將挑選干凈的林蛙卵用油浸泡過夜后，用壓榨機(jī)擠壓，得到林蛙卵油溶液。所述的浸泡用油為豆油、色拉油、花生油、麻油、月見草油、蘇子油、橄欖油等植物油，魚油、角鯊烯等動(dòng)物油。獲得方法還可以通過CO2超臨界萃取的方法制備，將挑選干凈的林蛙卵粉碎成粗粉，用CO2超臨界萃取裝置，在壓力為5-50MPa、溫度17-75℃，以0-50％乙醇為夾帶劑條件下萃取30-360分鐘，CO2流量13.7-68升/小時(shí)，然后在分離罐中分離并分離卵油，將卵油靜置后過濾并減壓回收乙醇，即得成品。獲得方法也可以通過溶劑提取的方法制備，將挑選干凈的林蛙卵用乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙醇等溶劑提取后，減壓回收溶劑，得到林蛙卵油。
本發(fā)明和以往的發(fā)明相比，具有以下改進(jìn)一.采用壓榨、CO2超臨界萃取、乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙醇等溶劑提取，多種方法制備林蛙卵油。
二.將林蛙卵提取物制成軟膠囊、片劑、膠囊、納米干乳、口服液等口服劑型，及注射油劑，脂質(zhì)體注射液等注射液。
三.林蛙卵油原料和制劑具有顯著抗焦慮作用。可制備抗焦慮作用的藥物，為林蛙卵油提供了新的應(yīng)用途徑。
本發(fā)明的創(chuàng)造性可通過如下內(nèi)容體現(xiàn)1.林蛙卵的提取1.1 儀器設(shè)備 HA121-50-05型超臨界萃取裝置由南通華安超臨界萃取有限公司提供。TTC525×2直冷式CO2超臨界萃取裝置由鐵嶺天元生物股份有限公司提供。壓榨機(jī)、立式離心機(jī) 由遼陽制藥機(jī)械廠提供。
1.2 試劑無水乙醇 由沈陽試劑一廠提供，批號(hào)991203。無水乙醚 由沈陽試劑一廠提供，批號(hào)991219。色拉油，來源于營口渤海油脂有限公司。安定注射液，天津市氨基酸公司人民制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)010424。佳靜安定注射液，河南天方藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)010101260。
1.3 提取方法1.3.1 中國林蛙卵的乙醚提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙卵自然干燥，揀除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粉碎成40目粗粉后，用1∶2(W/V)乙醚冷浸24小時(shí)，爾后傾出上清液，再加同樣量的乙醚同法浸三次，收集并過濾浸液，用減壓裝置，在水浴上減壓回收乙醚，待無乙醚蒸出后，將蒸餾瓶內(nèi)的黃色油狀液體倒入燒杯中于室溫放置一周，將乙醚揮散凈后即得淺黃棕色卵油，得率為20％。
1.3.2 中國林蛙卵的乙醇提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙卵自然干燥，揀除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粉碎成粗粉后用1∶2(W/V)乙醇冷浸24小時(shí)，爾后傾出上清液，再加同樣量的乙醇同法浸三次，收集并過濾浸液，連通減壓裝置，在水浴上減壓回收乙醇，待無乙醇蒸出后，將蒸餾瓶內(nèi)的黃色油狀液體倒入燒杯中于室溫放置一周，將乙醇揮散凈后即得淺黃棕色卵油，收率為18％。
1.3.3 中國林蛙卵的丙酮提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙卵自然干燥，揀除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粉碎成粗粉后用1∶2(W/V)丙酮冷浸24小時(shí)，爾后傾出上清液，再加同樣量的丙酮同法浸三次，收集并過濾浸液，連通減壓裝置，在水浴上減壓回收丙酮，待無丙酮蒸出后，將蒸餾瓶內(nèi)的黃色油狀液體倒入燒杯中于室溫放置一周，將丙酮揮散凈后即得淺黃棕色卵油，收率為17％。
1.3.4 中國林蛙卵的氯仿提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙卵自然干燥，揀除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粉碎成粗粉后用1∶2(W/V)氯仿冷浸24小時(shí)，爾后傾出上清液，再加同樣量的氯仿同法浸三次，收集并過濾浸液，連通減壓裝置，在水浴上減壓回收氯仿，待無氯仿蒸出后，將蒸餾瓶內(nèi)的黃色油狀液體倒入燒杯中于室溫放置一周，將氯仿?lián)]散凈后即得淺黃棕色卵油，收率為20％。
1.3.5 中國林蛙卵的石油醚提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙卵自然干燥，揀除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粉碎成粗粉后用1∶2(W/V)石油醚冷浸24小時(shí)，爾后傾出上清液，再加同樣量的石油醚同法浸三次，收集并過濾浸液，連通減壓裝置，在水浴上減壓回收石油醚，待無石油醚蒸出后，將蒸餾瓶內(nèi)的黃色油狀液體倒入燒杯中于室溫放置一周，將石油醚揮散凈后即得淺黃棕色卵油，收率為18％。
1.3.6 中國林蛙卵的CO2超臨界提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙，令其充分陰干，將干燥的卵小心剝出，收集在一起，揀凈雜質(zhì)，將卵粉碎成粗粉，用CO2超臨界萃取裝置進(jìn)行萃取。中國林蛙卵粉碎成粗粉，在溫度31-33℃，壓力35Mpa以上，時(shí)間180分鐘，以5％乙醇為夾帶劑進(jìn)行提取為最適條件。收率為12％1.3.5 中國林蛙卵的壓榨提取取去掉中國林蛙輸卵管后的中國林蛙卵自然干燥，揀除雜質(zhì)，將挑選干凈的林蛙卵用油(分別用豆油、色拉油、花生油、麻油、月見草油、蘇子油、橄欖油等植物油，魚油、角鯊烯等動(dòng)物油)浸泡過夜后，用壓榨機(jī)擠壓，得到林蛙卵油溶液。收率為15％。
2 林蛙卵油的制劑方法2.1 林蛙卵油軟膠囊的制備取林蛙卵油25kg。將原料靜置，過濾，濾液與抗氧劑維生素E混合，充氮?dú)夂笥酶蔁釡缇缇?，取原料及明膠溶液經(jīng)壓制法制成軟膠囊，每粒軟膠囊容量約0.4ml，囊心重約400mg。
2.2 林蛙卵油注射液的制備林蛙卵油注射液采用林蛙卵油及其他成分和制劑輔料，如稀釋劑、乳化劑、助溶劑、抗氧劑等，其他有助于制劑成型和穩(wěn)定的注射劑輔料也可應(yīng)用。林蛙卵油注射液配方中各成分的配比為林蛙卵油5-70％，豆油0-80％，磷脂0-90％，司盤80 0-1％，吐溫80 0-1％，甘油0-30％，維生素E 0-5％，注射用水40-70％。
2.3 林蛙卵油膠囊的制備取林蛙卵油20kg。過濾，濾液用100kg食用碳酸鈣吸收，混合均勻，制成1號(hào)膠囊，每粒膠囊重300mg。
2.4 林蛙卵油片劑的制備稱取碳酸鈣300g，林蛙卵油50g混合均勻。另取淀粉加水制成希糊，加入混合粉末中制成米粒大顆粒，60℃干燥2小時(shí)后加入適量滑石粉調(diào)整流動(dòng)性，用壓片機(jī)10mm沖模(平面直角)壓片。片重550mg。
2.5 林蛙卵油納米干乳的制備、取林蛙卵油20kg，色拉油20kg，混合均勻，另取磷脂4kg用適量乙醇溶解，吐溫80 1kg，波洛沙姆2kg和蒸餾水400kg混合，將油相緩換緩加入水相中制備乳劑。爾后噴霧干燥法制備干乳。用蔗糖10kg、甘露醇10kg、羧甲基纖維素鈉10kg的混合物作輔料與林蛙卵油噴霧干粉混合形成干乳。
2.6 林蛙卵油口服液的制備取磷脂10kg用乙醇溶解制成飽和溶液，加入林蛙卵油10kg，混合均勻，另取吐溫80 1kg，蔗糖2kg，溶于蒸餾水40kg中，將林蛙卵油、磷脂乙醇溶液緩慢倒入水相中即得。
3 林蛙卵油的藥理研究3.1 實(shí)驗(yàn)材料3.1.1 動(dòng)物昆明種小鼠，鼠齡5-6周，體重18-22g；Wistar大鼠，鼠齡6-7周，體重120～130g，雌雄兼用。均由沈陽藥科大學(xué)動(dòng)物室提供，動(dòng)物合格證為遼實(shí)動(dòng)質(zhì)字 042號(hào)。動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證為遼實(shí)動(dòng)環(huán)字 062號(hào)。發(fā)證機(jī)關(guān)是遼寧省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)。動(dòng)物飼養(yǎng)于溫度24±2℃，50-60％相對(duì)濕度，12h光照(08:00--20:00h)，12h黑暗，隔音的動(dòng)物室內(nèi)，動(dòng)物自由攝食，飲水。適應(yīng)上述環(huán)境一周后用于實(shí)驗(yàn)。
3.1.2 儀器小動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)記錄儀由北京藥物所提供。小鼠爬梯，大鼠抬高十字迷宮裝置參照《現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法》描述的模型要求自制。大鼠高架十字迷路十字迷宮為木質(zhì)結(jié)構(gòu)，并漆成黑色。它包括兩個(gè)50cm×10cm2的相對(duì)開臂(openarms)和兩個(gè)50×10×40cm3的相對(duì)閉臂(close arms)，閉臂上部是敞開的。迷宮中央有一10cm×10cm2的開闊部。迷宮離地面50cm。小鼠樓梯一個(gè)封閉的玻璃箱，內(nèi)有5級(jí)2.5cm高的相同樓梯。樓梯側(cè)壁高度保持恒定，以使動(dòng)物在樓梯的所有水平都有相同的站立分布。
3.2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果3.2.1 林蛙卵油對(duì)小鼠爬梯的影響小鼠100只，雌雄各半，按體重、性別均衡隨機(jī)分為5組，灌胃給藥?？瞻讓?duì)照組(等容量色拉油)、陽性對(duì)照組(氯硝安定2mg·kg-1)、林蛙卵油組(1.4、2.8、5.6g·kg-1)，給藥30min后將小鼠置于箱的底部，背朝樓梯，用數(shù)碼攝像機(jī)拍攝小鼠行為，實(shí)驗(yàn)者離開以減少干擾。記錄3min內(nèi)小鼠爬梯數(shù)(以四肢都爬上樓梯為準(zhǔn))和站立數(shù)。每天18:00～21:00點(diǎn)紅燈下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每只動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后迅速清潔實(shí)驗(yàn)箱，以排除嗅覺暗示對(duì)下一只動(dòng)物的干擾。
當(dāng)小鼠被引入一個(gè)新環(huán)境時(shí)會(huì)出現(xiàn)焦慮反應(yīng)，如警覺性行為增加。爬梯行為評(píng)價(jià)探究行為或活動(dòng)性的指標(biāo)，直立則作為焦慮狀態(tài)的參數(shù)，抗焦慮劑在不減少爬梯數(shù)的劑量下使站立數(shù)減少。從表1可見服用林蛙卵油組的小鼠與空白對(duì)照組比較，爬梯數(shù)雖然減少但無顯著差異，而站立數(shù)卻均顯著減少。提示林蛙卵油具有抗焦慮作用，且呈一定劑量依賴性關(guān)系。
表1 林蛙卵油對(duì)小鼠爬梯的影響(x±s)n＝20組別 劑量(g/kg) 爬梯數(shù)站立數(shù)對(duì)照組 - 11.6±3.3 9.9±2.7氯硝安定 0.002 10.9±2.7 5.5±1.5**林蛙卵油 1.4 11.1±3.0 8.6±2.9林蛙卵油 2.8 10.1±3.0 7.0±2.9*林蛙卵油 5.6 10.4±2.4 5.9±1.9**與對(duì)照組比較，**p＜0.01，*p＜0.053.2.2 林蛙卵油不同溶劑提取物抗焦慮活性比較取小鼠112只，按體重隨機(jī)分8組，分別為空白對(duì)照組ip色拉油10ml/kg，陽性對(duì)照組ip.氯硝安定2mg/kg，6組給藥組(乙醇提取物、乙醚提取物、丙酮提取物、氯仿提取物、石油醚提取物、CO2超臨界萃取物，i.p.400mg/kg)，依照爬梯實(shí)驗(yàn)方法確定不同溶劑提取中國林蛙卵所得提取物的抗焦慮活性，結(jié)果表明，各組小鼠爬梯數(shù)、梯上站立數(shù)均明顯減少，提示每種提取物均具有抑制小鼠爬梯活動(dòng)作用，說明各提取物均具有抗焦慮活性。各組數(shù)據(jù)比較，動(dòng)物的爬梯數(shù)、梯上站立數(shù)沒有明顯差異，各組提取物對(duì)小鼠梯上站立行為的抑制作用普遍強(qiáng)于對(duì)爬梯行為的抑制作用。這正是抗焦慮劑的作用特點(diǎn)。在抗焦慮作用的基點(diǎn)上，不同提取物間作用無明顯差異。
表2 林蛙卵油不同溶劑提取物抗焦慮活性比較組別劑量(mg/kg) 爬梯數(shù) 站立數(shù)對(duì)照組 -15.9±5.3 11.6±4.0氯硝安定28.7±6.3** 3.1±3.1**CO2超臨界 400 10.4±5.4* 5.0±3.7**乙醇提取物 400 10.8±3.3** 5.6±3.1**乙醚提取物 400 11.5±5.1* 5.7±4.2**丙酮提取物 400 11.1±5.0* 5.1±3.8**氯仿提取物 400 11.3±4.1* 6.3±3.9**石油醚提取物400 12.1±3.9* 6.8±2.6**與對(duì)照組比較，**p＜0.01，*p＜0.05
3.2.3 林蛙卵油軟膠囊對(duì)小鼠爬梯的影響取小鼠100只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組，分別灌胃(ig)給藥。空白對(duì)照組(ig色拉油10ml/kg)、陽性對(duì)照組(ig氯硝安定2mg/kg)、林蛙卵油組(ig林蛙卵油5.6，2.8，1.4g/kg)，給藥30min后記錄3min內(nèi)小鼠爬梯數(shù)和站立數(shù)。
結(jié)果表明服用林蛙卵油軟膠囊組的小鼠與空白組小鼠相比較，爬梯數(shù)無顯著差異，而站立數(shù)卻均明顯減少。提示林蛙卵油軟膠囊不減少爬梯數(shù)的劑量能使小鼠站立數(shù)減少，提示其具有抗焦慮作用(表3)。
表3 林蛙卵油軟膠囊對(duì)小鼠爬梯的影響組別劑量(g/kg) 爬梯數(shù) 站立數(shù)對(duì)照組 - 11.60±3.35 10.30±3.87氯硝安定0.002 11.20±1.45 5.45±2.19**林蛙卵油軟膠囊 5.6 10.15±7.46 5.95±4.45**林蛙卵油軟膠囊 2.8 10.90±6.36 7.25±5.35*林蛙卵油軟膠囊 1.4 14.20±4.68 7.50±4.08*與對(duì)照組比較，**p＜0.01，*p＜0.053.2.4 林蛙卵油抗焦慮時(shí)效實(shí)驗(yàn)小鼠70只，雌雄各半，按體重、性別均衡隨機(jī)分為7組，腹腔給藥。給林蛙卵油組小鼠劑量均為1.2g·kg-1。分別在給藥0min(等容量色拉油)、15、30、60、120、180、240min后將小鼠置于箱的底部，記錄3min內(nèi)小鼠爬梯數(shù)和站立數(shù)。
結(jié)果如表4所示，不同時(shí)間給藥的受試小鼠的爬梯數(shù)無顯著差異。腹腔給藥15min，小鼠站立數(shù)無明顯差異，給藥30min和60min，小鼠站立數(shù)均顯著降低，且30min作用較強(qiáng)；120min以后直到240min小鼠站立數(shù)隨給藥時(shí)間的延長逐漸增加，提示抗焦慮作用逐漸減弱。
表4 林蛙卵油抗焦慮時(shí)效實(shí)驗(yàn)(x±s)n＝10組別 劑量(g/kg)測(cè)定時(shí)間(分) 爬梯數(shù) 站立數(shù)對(duì)照組 - 0 20.4±1.315.9±2.8林蛙卵油 1.2 15 20.0±2.214.3±3.5林蛙卵油 1.2 30 20.0±0.511.9±3.1**林蛙卵油 1.2 60 20.0±1.912.6±2.0**林蛙卵油 1.2 12020.4±2.213.8±3.9林蛙卵油 1.2 18021.3±3.014.3±4.7林蛙卵油 1.2 24020.6±3.114.4±4.4與對(duì)照組比較，**p＜0.01，*p＜0.053.2.5 林蛙卵油對(duì)高架十字迷宮焦慮模型大鼠的影響大鼠60只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成5組空白對(duì)照組(灌胃(ig)等容量色拉油)、陽性對(duì)照組(ig安定2mg/kg)、林蛙卵油組(ig林蛙卵油4.8，2.4，1.2g/kg)，所有實(shí)驗(yàn)在18:00-21:00進(jìn)行。ig給藥30min后，將大鼠置于高架十字迷路中央，頭朝閉臂，觀察者距離迷宮中心1.2米。記錄實(shí)驗(yàn)期(5min)內(nèi)，大鼠分別進(jìn)入開臂及閉臂的次數(shù)和滯留時(shí)間(以四肢全部入臂或出臂為準(zhǔn))。觀測(cè)指標(biāo)中央出發(fā)室潛伏時(shí)和停留時(shí)，開放通路和封閉通路連續(xù)停留時(shí)，開放通路和封閉通路進(jìn)入次數(shù)大鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)是利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開臂的恐懼形成動(dòng)物的矛盾沖突狀態(tài)。用于評(píng)價(jià)動(dòng)物的焦慮行為，十字迷路離地面50cm相當(dāng)于人站在峭壁上，大鼠會(huì)產(chǎn)生恐懼和不安心理。對(duì)照組大鼠進(jìn)入迷宮后主要停留在閉臂，進(jìn)入開臂的次數(shù)和在開臂的停留時(shí)間均短。高、中劑量林蛙卵油能顯著延長大鼠在開放通路連續(xù)停留時(shí)間，各組大鼠在迷宮中央室停留的出發(fā)潛伏期無顯著性差異；安定組和林蛙卵油組大鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)和在開臂的停留時(shí)間顯著增加；安定組和林蛙卵油組大鼠在閉臂停留的時(shí)間與空白對(duì)照組比較顯著縮短；林蛙卵油組大鼠在中央室停留的時(shí)間較空白組顯著增加。受試動(dòng)物在開臂停留時(shí)間延長，提示林蛙卵油具有一定的抗焦慮作用，安定也能增加大鼠進(jìn)入開放通路次數(shù)和停留時(shí)間(表5)。
表5 高架十字迷宮模型上EORTCD抗焦慮作用進(jìn)入開臂次劑量 動(dòng)物數(shù) 出發(fā)潛伏期開臂停留時(shí) 閉臂停留 中央室停留進(jìn)入閉臂次數(shù)組別數(shù)(次(g/kg)(只)(min) (min)((min) (min) (次/5min)/5min)對(duì)照組 - 12 1.42±1.612.17±4.20 288.75±19.113.75±4.880.25±0.45 2.67±2.90安定0.002 12 1.92±1.9813.58±12.83 254.08±33.89*32.33±28.47**2.00±1.55**4.42±1.30*林蛙卵油4.8 12 1.92±1.9825.25±27.89**238.67±44.03*36.33±28.83**1.91±1.00**4.00±1.95*林蛙卵油2.4 12 1.92±1.8319.83±33.02 251.00±51.83*29.50±28.93**1.58±2.54 5.00±2.52*林蛙卵油1.2 12 1.33±0.4916.17±21.44 267.00±34.5116.83±12.04**1.00±1.13*3.33±1.44與對(duì)照組相比*P＜0.05，**P＜0.0具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例是為了更好的闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1林蛙卵油軟膠囊配方林蛙卵油25kg維生素E 5kg按一定工藝配成林蛙卵油軟膠囊75000粒制備方法取林蛙卵油25kg。將原料靜置，過濾，濾液與抗氧劑維生素E混合，充氮?dú)夂笥酶蔁釡缇缇?，取原料及明膠溶液經(jīng)壓制法制成軟膠囊，每粒軟膠囊容量約0.4ml，囊心重約400mg。
實(shí)施例2林蛙卵油注射液配方林蛙卵油 50kg注射用豆油100kg磷脂 20kg司盤8010kg吐溫805kg維生素E 20kg甘油 50kg注射用水 500kg按一定工藝配成林蛙卵油注射液60萬支制法按配方量取林蛙卵油、注射用豆油混合后得到油相備用；另將磷脂與甘油分散在注射用水中，制得水相。將油相、司盤80、吐溫80和維生素E加入水相中，進(jìn)行乳化，并用均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)化，過濾，用1ml安瓶罐裝，滅菌，檢查，印字，包裝。
實(shí)施例3林蛙卵油膠囊配方林蛙卵油 20kg碳酸鈣 100kg按一定工藝配成林蛙卵油膠囊400000粒制法取林蛙卵油20kg。過濾，濾液用100kg食用碳酸鈣吸收，混合均勻，制成1號(hào)膠囊，每粒膠囊重300mg。
實(shí)施例4林蛙卵油片配方林蛙卵油 50kg碳酸鈣 300kg淀粉 20kg滑石粉 3kg蒸餾水 50kg按一定工藝配成林蛙卵油片600000片制法稱取碳酸鈣300g，林蛙卵油50g混合均勻。另取淀粉加水制成希糊，加入混合粉末中制成米粒大顆粒，60℃干燥2小時(shí)后加入適量滑石粉調(diào)整流動(dòng)性，用壓片機(jī)10mm沖模(平面直角)壓片。片重550mg。
實(shí)施例5林蛙卵油納米干乳配方林蛙卵油 20kg色拉油 20kg磷脂 4kg吐溫80 1kg波洛沙姆 2kg蒸餾水 400kg蔗糖 10kg甘露醇 10kg羧甲基纖維素鈉 10kg按一定工藝配成林蛙卵油片600000片制法取林蛙卵油20kg，色拉油20kg，混合均勻，另取磷脂4kg用適量乙醇溶解，吐溫80 1kg，波洛沙姆2kg和蒸餾水400kg混合，將油相緩換緩加入水相中制備乳劑。爾后噴霧干燥法制備干乳。用蔗糖10kg、甘露醇10kg、羧甲基纖維素鈉10kg的混合物作輔料與林蛙卵油噴霧干粉混合形成干乳80kg。
實(shí)施例5林蛙卵油口服液配方林蛙卵油 10kg磷脂 10kg吐溫801kg，乙醇 40kg蒸餾水40kg蔗糖 2kg按一定工藝配成林蛙卵油片600000片制法取磷脂10kg用乙醇溶解制成飽和溶液，加入林蛙卵油10kg，混合均勻，另取吐溫80 1kg，蔗糖2kg，溶于蒸餾水40kg中，將林蛙卵油、磷脂乙醇溶液緩慢倒入水相中即得。
權(quán)利要求
1.抗焦慮作用的林蛙卵油，其特征在于林蛙卵油可作為制備抗焦慮狀態(tài)的藥物制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗焦慮作用的林蛙卵油，其特征在于制劑可制成口服和注射途徑的制劑，口服制劑可制成軟膠囊、片劑、膠囊、納米干乳、口服液等劑型，注射劑可制成注射油劑，脂質(zhì)體注射液等。
3.一種如權(quán)利要求1所述的抗焦慮作用的林蛙卵油的制備方法，其特征在于獲得方法可以通過壓榨的方法制備，將挑選干凈的林蛙卵用油浸泡過夜后，用壓榨機(jī)擠壓，得到林蛙卵油溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗焦慮作用的林蛙卵油的制備方法，其特征在于所述的浸泡用油為豆油、色拉油、花生油、麻油、月見草油、蘇子油、橄欖油等植物油，魚油、角鯊烯等動(dòng)物油。
5.一種如權(quán)利要求1所述的抗焦慮作用的林蛙卵油的制備方法，其特征在于獲得方法可以通過CO2超臨界萃取的方法制備，將挑選干凈的林蛙卵粉碎成粗粉，用CO2超臨界萃取裝置，在壓力為5-50MPa、溫度17-75℃，以0-50％乙醇為夾帶劑條件下萃取30-360分鐘，CO2流量13.7-68升/小時(shí)，然后在分離罐中分離并分離卵油，將卵油靜置后過濾并減壓回收乙醇，即得成品。
6.一種如權(quán)利要求1所述的抗焦慮作用的林蛙卵油的制備方法，其特征在于獲得方法可以通過溶劑提取的方法制備，將挑選干凈的林蛙卵用乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙醇等溶劑提取后，減壓回收溶劑，得到林蛙卵油。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗焦慮作用的林蛙卵油及其制備方法。它可以用于制備抗焦慮作用的藥物制劑。該林蛙卵油可以通過壓榨、CO
文檔編號(hào)A61K47/44GK1563308SQ20041002044
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月22日
發(fā)明者徐峰 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)