專利名稱：Dna甲基轉移酶抑制劑的制作方法
背景技術：
1.發(fā)明領域本發(fā)明涉及抗生素領域，尤其是抗菌化合物。特別是本發(fā)明涉及靶向DNA修飾酶的抗生素，尤其是腺嘌呤DNA甲基轉移酶，它是各種不同細菌病原體的成分，該細菌病原體包括那些為細菌細胞生長所必需者。本發(fā)明特別提供了這種腺嘌呤DNA甲基轉移酶的抑制劑，其對胞嘧啶甲基轉移酶的抑制作用很小或沒有抑制作用，并因此對真核細胞尤其是哺乳動物細胞的抗菌作用有限。本發(fā)明還提供了制備和使用本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的方法，以及它們的藥物組合物。
2.發(fā)明背景現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)展的一個標志是降低與細菌感染有關的發(fā)病率和死亡率。20世紀早期和中期各種抗生素藥物的開發(fā)第一次為醫(yī)學從業(yè)人員提供了對各種感染性疾病的有效治療。
但是，濫用常規(guī)抗生素和感染性細菌群的自然選擇已導致了大多數(shù)細菌感染性藥劑的耐藥性發(fā)展為不同程度的大多數(shù)抗生素藥劑的耐藥性。嚴重情況下，諸如MRSA(耐多種藥物的StaphA)，目前只有一種或僅一些抗生素是有效的。另外，免疫缺陷綜合癥的存在導致另外發(fā)生需要抗生素加強治療的機會性致病感染。
因此，本領域越來越需要新的更有效的抗生素化合物來治療對現(xiàn)有的療法產生耐藥性的細菌感染。
大多數(shù)細菌通過使特定的核苷酸堿基甲基化來修飾它們的基因組DNA。DNA甲基化對于基因調節(jié)和突變損傷的修復很關鍵(見Jost和Soluz，1993，DNA甲基化，分子生物學和生物學顯著性，Birhauser VerlagBasel，Switzerland；Palmer和Marinus，1994，《基因》1431-12；Dryden，1999，“細菌DNA甲基轉移酶”，在《S-腺苷蛋氨酸依賴性甲基轉移酶結構和功能》中，X.Cheng和R.M.Blumenthal(編)，World Scientific Publishing，p.283340，評論)。DNA甲基化是由一類具有不同序列特征的酶來催化的。有這樣一些DNA甲基轉移酶，例如(dam)，它們使GATC序列中的腺嘌呤殘基或者CCAGG或CCTGG序列中的胞嘧啶(dcm)殘基甲基化，這些序列不包含在關聯(lián)限制酶的識別部位。有這樣一些DNA甲基化轉移酶，它們使包含在關聯(lián)限制酶的識別部位的殘基甲基化(例如，ApaI，AvaII，BclI，ClaI，DpnII，EcoRI，HaeIII，HhaI，MboI，和MspI；見Marinus和Morris，1973，《細菌學雜志》(J.Bacteriol.)1141143-1150；May和Hatman，1975，《細菌學雜志》(J.Bacteriol.)123768-770；Heitman，1993，Genet.Eng.1557-108)。另外，本發(fā)明人已經從新月柄桿菌中發(fā)現(xiàn)了一種腺嘌呤DNA甲基轉移酶，這種酶可使GANTC序列中的腺嘌呤殘基甲基化，這公開在國際申請公開號WO98/12206中。這種甲基轉移酶是細胞周期調節(jié)性的酶并且是成功的細菌細胞生長所必需的；酶的抑制作用使得細菌不能生存。在流產布魯氏菌、幽門螺桿菌、根癌土壤桿菌和苜宿中華根瘤菌中也發(fā)現(xiàn)了相似的甲基轉移酶。與細菌細胞相比，真核細胞尤其是哺乳動物細胞中的DNA甲基化限于包括序列CpG部位的胞嘧啶甲基化(Razin和Riggs，1980，《科學》210604-610；Jost和Bruhat，1997，Prog.NucleicAcid Res.Molec.Biol.57217-248)。
因此，DNA甲基化的存在，尤其是，本發(fā)明人在某些細菌種類中發(fā)現(xiàn)有細胞-周期調節(jié)的腺嘌呤DNA甲基轉移酶，表明本領域對于抗生素活性需要提出新的研究目標。
發(fā)明概要本發(fā)明提供了能抑制細菌細胞中的腺嘌呤DNA甲基轉移酶的抗生素化合物。本發(fā)明的抗生素化合物特別抑制腺嘌呤特異性細菌DNA甲基轉移酶，而不抑制細菌的或真核細胞的，尤其是哺乳動物和大多數(shù)特定的人的胞嘧啶特異性DNA甲基轉移酶。本發(fā)明化合物還抑制植物中的腺嘌呤特異性DNA甲基轉移酶。這種抗生素化合物也能以藥物組合物的形式給動物尤其是人服用，用于治療細菌病原性疾病、或機會性感染，它是由免疫妥協(xié)或衰弱狀態(tài)的動物(尤其是人)的一種細菌感染的。
本發(fā)明還提供了制備抗生素化合物及其藥物組合物的方法，和治療上使用所述抗生素的方法。還提供了本發(fā)明抗生素化合物和藥物組合物的試劑盒和包裝形式。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方式體現(xiàn)在下列對某些優(yōu)選實施方式的更為詳細的說明和權利要求書中。


圖1和2表示細菌腺嘌呤DNA甲基轉移酶的“活性部位”的示意圖。
優(yōu)選實施方式的詳細說明本發(fā)明提供了作為細菌腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的抗生素、尤其是抗細菌的化合物。本發(fā)明化合物對任何產生腺嘌呤DNA甲基轉移酶的細菌種類具有抗細菌特性、生長抑制特性。這些酶包括屬于本領域已知的細菌限制/修飾體系成分的腺嘌呤DNA甲基轉移酶、以及細胞周期調節(jié)的腺嘌呤DNA甲基轉移酶(CcrM)，例如，公開在國際申請公開號W098/12206中的那些，引作參考。因此，本發(fā)明特別提供了腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑。
本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑包括一類新的廣譜抗生素。大多數(shù)細菌種類具有一種DNA甲基轉移酶，該轉移酶是修飾劑的部分，尤其與限制酶有關，它保持細胞DNA的完整性、同時防衛(wèi)外來的(特別是大多數(shù)病毒的)DNA。另外，某些細菌產生為細菌細胞生長所必需的腺嘌呤DNA甲基轉移酶。為本發(fā)明抑制劑的抗細菌活性提供適當目標的醫(yī)學上重要的細菌種類包括革蘭氏陽性細菌，包括球菌例如葡萄球菌類和鏈球菌類；桿菌，包括桿狀菌類、棒狀桿菌類和梭菌類；細絲狀細菌，包括防線菌類和鏈霉菌類；革蘭氏陰性細菌，包括球菌例如奈瑟氏菌屬類；桿菌，例如假單胞菌屬類、布魯氏桿菌屬類、植物肥大病菌屬類、博代氏桿菌屬類、埃希氏桿菌屬類、志賀氏菌屬類、耶爾森氏菌屬類、沙門氏菌屬類、克雷白氏桿菌屬類、水棲菌屬類、嗜血桿菌類、巴斯德氏菌屬類、和鏈桿菌屬類；螺旋體類、彎曲桿菌屬類、弧菌屬類；和細胞內的細菌包括立克次氏體屬類和衣原體屬類。
作為本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的目標物的特殊細菌種類包括金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、釀膿鏈球菌、無乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒桿菌、產氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風梭菌、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、銅綠假單胞菌、侵肺軍團菌、大腸埃希氏菌、鼠疫耶爾森氏菌、流感嗜血桿菌、幽門螺桿菌、胚胎彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、徹白密螺旋體、衣氏放線菌、普氏立克次氏體、立氏立克次氏體、砂眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、流產布魯氏菌或根癌土壤桿菌。
本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的一個重要特性在于含胞嘧啶特異性DNA甲基轉移酶的這些物質的活性水平低。這是因為胞嘧啶特異性DNA甲基轉移酶出現(xiàn)在哺乳動物的(尤其是人的)細胞中，并且本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉移酶的一個有用特性是對哺乳動物的甲基轉移酶很少有或沒有抑制活性。這一特性使得這些分子具有本發(fā)明所提供的對細菌細胞特異性的有利特性、并且對哺乳動物的(最優(yōu)選人的)細胞很少有抗生素活性。優(yōu)選的是，這些化合物對胞嘧啶特異性DNA甲基轉移酶的IC50大于500μM。
本發(fā)明所提供的抑制化合物可以式I表示 其中R1、R2和R2相同或不同、并且各自為氫、低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，其中每個環(huán)烷基基團具有3-7個環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個是或不是選自氧和氮的雜原子，且其中每個烷基、芳基或環(huán)烷基基團均可被氫、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基取代或不取代，并且其中R3可以是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物，包括硫代磷酸酯、磷酰胺糖醇和本領域已知的相似衍生物，條件是R1、R2和R3不都是氫，當R3是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物時，R1和R2不都是氫。在一個優(yōu)選的實施方式中，R1為H，R2為(2-二苯基硼酸酯)乙基或二苯基丙基，且R3為H、2-(4-嗎啉基)-乙基、3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基、2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基、或乙基-2-(丙烯酸酯)-甲基。在另外優(yōu)選的實施方式中，R1為H，R2為(S-高胱氨酸基)甲基，R3為核糖、5’-磷?；颂?、脫氧核糖或5’-磷?；撗鹾颂恰Ｔ谄渌鼉?yōu)選的實施方式中，R2為H，R1和R2均為2-(二苯基甲基)環(huán)戊基或2-(二苯基羥基甲基)環(huán)戊基。在另外的優(yōu)選實施方式中，R1為H，R2為丙氨酰基丁基酯、2-羧基亞氨基-2-氨基乙基、2-氨基乙基或單-或二取代的2-氨基乙基、R3為2-(4-嗎啉基)-乙基。
本發(fā)明還提供了式II化合物 其中鍵1或2可以是雙鍵或單鍵，Ar1和Ar2可以相同或不同，并且各自為芳基或雜芳基、或者在一個或多個位置用鹵素、硝基、亞硝基、低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基取代的芳基或雜芳基，其中每個環(huán)烷基基團具有3-7個環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，且其中烷基、芳基或環(huán)烷基基團均可被鹵素、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，Ra、Rb和Rc相同或不同，并且各自為氫、鹵素、硝基、亞硝基、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基、或芳基或雜芳基、或在一個或多個位置以低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基取代的芳基或雜芳基，這里每個環(huán)烷基基團具有3-7個環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，并且其中烷基、芳基或環(huán)烷基基團均可被鹵素、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，或者其中Ra，Rb和Rc可被芳族的、脂肪族的、雜芳族的、雜脂肪族的環(huán)結構或其取代方式連接。
本發(fā)明還提供了嘌呤衍生物的組合化學品文庫。在一個優(yōu)選的實施方式中，通過嘌呤環(huán)的C6位的氨化將6-氯嘌呤轉化為腺嘌呤衍生物；本發(fā)明將這些文庫叫做“N6庫”。在另一個優(yōu)選的實施方式中，在嘌呤環(huán)的N9位衍生為未取代的腺嘌呤或6-氯嘌呤；本發(fā)明將這些文庫叫做“N9庫”。還有一個實施方式中，使C6和N9位均被衍生，用胺或取代的氨基使C6位氨化；本發(fā)明將這些文庫叫做“N6/N9庫”。
在N6或N9庫的制備中，在各個“罐”或反應混合物中將起始嘌呤環(huán)結構與多種胺或取代的胺(對于N6庫)或鹵化物(對于N9庫)中的每一個反應。因此這些庫是以起始原料之間的各個反應產物的集合形式出現(xiàn)。對于N6/N9庫，最優(yōu)選首先衍生N9位、然后在C6位反應。在這些庫中，典型的是使用單一鹵化物(導致N9位的均勻取代)和多種胺(優(yōu)選2-5種胺，最優(yōu)選3種不同的胺)進行反應。由此產生化合物的一種混合物。另外，根據(jù)本發(fā)明的方法可生產區(qū)域異構體(包括N1、N3、和N7異構體)。典型的是，也可產生缺少嘌呤起始原料的反應混合物、以監(jiān)測鹵化物與不同胺之間的反應。
基于對腺嘌呤DNA甲基轉移酶的推定活性部位的理解，本發(fā)明還提供了稱謂“合理設計”的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑，如圖1所示。正如圖中所示，這種酶在DNA鏈中具有對腺嘌呤殘基的結合位點，和S-腺苷蛋氨酸結合位點，這提供了所示的供體甲基基團。所謂的“合理設計”抑制劑在酶的結合位點模仿分子的構型，如圖2所示。這些化合物通常包括一種腺嘌呤殘基，它含有或不含5’-磷酸鹽基團，通過亞甲基橋與高半胱氨酸部分共價連接。
本發(fā)明還提供了這樣的一類腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑，它們是硼酸衍生物、優(yōu)選二苯基或取代的二苯基硼酸的衍生物、最優(yōu)選其二苯基或取代的二苯基硼酸烷基胺酯。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明提供了包括二-(對氟苯基)硼酸8-羥基喹啉(quiniline)酯、二-(對-氯苯基)硼酸8-羥基喹啉酯、二苯基硼酸8-羥基喹啉酯、二-(對-氟苯基)硼酸乙醇胺酯、和二-(對-氯苯基)硼酸乙醇胺酯。
本發(fā)明還提供了使用固相化學方法合成的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑，最優(yōu)選使用包括本文所提供的用于在嘌呤環(huán)的C6或N9位取代的殘基(例如胺或鹵化物)的樹脂。在優(yōu)選的實施方式中，提供了這些樹脂、由此利用共價鍵將取代基與樹脂共價結合，這種共價鍵可被特定裂解以便在完成固相合成后從樹脂中釋放該化合物。優(yōu)選的是，該取代基存在于含活性基團的樹脂上，例如胺或鹵化物，易受與樹脂接觸的嘌呤的影響。反應后，該嘌呤通過取代基與樹脂連接，然后可逐步處理反應產物并采用本領域眾所周知的方法從樹脂中去除。參見，例如Bunin，1998，《組合索引》(THECOMBINATORIAL INDEX)，學院出版社。
在某些情況下，本發(fā)明化合物可包含一個或多個的不對稱的碳原子，因此這些化合物可以不同的立體異構形式存在。例如這些化合物可以是外消旋物或旋光體形式。在這些情況下，單一的對映體即旋光活性形式可通過不對稱合成或通過外消旋物的拆分而獲得。例如可采用常規(guī)方法如在拆分試劑存在下的結晶作用或使用如手性HPLC柱的色譜法完成外消旋物的拆分。
有利的是，采用上述樹脂的固相化學方法可測定取代基是否具有手性或與抗菌活性有關的立體定向性。在這些實施方式中，使用旋光類如氨基酸的外消旋物混合物制備各種化合物用于篩選。由于發(fā)現(xiàn)了所得到的化合物具有腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制活性，每個立體異構體的旋光純制劑可用于制備相應的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制化合物的旋光純異構體，以確定異構體之間的生物活性是否有任何不同。這種方法較可供選擇的將外消旋混合物分離成立體異構體成分的其它方法有效。
根據(jù)本發(fā)明不論推定的腺嘌呤DNA甲基轉移酶是如何制備的，對該化合物都分析其腺嘌呤和胞嘧啶特異性DNA甲基轉移酶活性。敏感細菌(已知表達一種腺嘌呤DNA甲基轉移酶)在抑制化合物存在和不存在的情況下均生長，并且測定了在該化合物存在下的生長抑制的程度與不存在該化合物的生長比較。根據(jù)國際申請公開No.W098/12206、通過使用半甲基化DNA、氚化S-腺苷蛋氨酸(C3H3)和純化腺嘌呤DNA甲基轉移酶的濾膜結合放射性檢測證實了每個生長抑制化合物的作用機制(即，腺嘌呤DNA甲基轉移酶的抑制)。
本發(fā)明化合物可以互變異構體溶液的形式存在。當對一種互變異構體形式給出了結構和名稱時，則其它互變異構體形式也包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的代表性化合物包括、但不限于本文所公開的化合物及其藥學上可接受的酸加成鹽和堿加成鹽。另外，如果得到了酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物，則可通過堿化該酸式鹽溶液獲得游離堿。反之，如果產物是游離堿，則可根據(jù)從堿化合物中制備酸加成鹽的常規(guī)方法、通過將游離堿溶解在適當?shù)挠袡C溶劑中并用酸處理該溶液而生產加成鹽，尤其是藥學上可接受的加成鹽。
本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的酰化前體藥物。本領域熟練技術人員都會清楚各種不同的合成方法可用于制備無毒性的本發(fā)明化合物的藥學上可接受的加成鹽和?；绑w藥物。
本發(fā)明中的“烷基”、“低級烷基”和“C1-C6烷基”意指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基和3-甲基戊基。
本發(fā)明中的“烷氧基”、“低級烷氧基”和“C1-C6烷氧基”意指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-戊基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基和3-甲基戊氧基。
本發(fā)明中的術語“鹵素”意指氟、氯、溴和碘。
本發(fā)明中的“環(huán)烷基”、例如C3-C7環(huán)烷基意指具有3-7個碳原子的環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。在C3-C7環(huán)烷基基團中，優(yōu)選在C5-C7環(huán)烷基基團中，形成環(huán)的一個或兩個碳原子可用諸如硫、氧或氮的雜原子任選代替。這些基團例如有哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、氮雜全氫庚因基、氧氮雜全氫庚因基、氧雜庚環(huán)基、氧氮雜全氫因基、和氧二氮雜全氫因基。具有一個被氮或氧代替的原子數(shù)的C3和C4環(huán)烷基基團包括氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、和環(huán)氧乙烷基。
“芳基”意指具有單環(huán)(例如苯基)、多環(huán)(例如二苯基)、或多稠合環(huán)的芳族碳環(huán)基團，其中至少一個是芳族的(例如1，2，3，4-四氫萘基、萘基、蒽基、或菲基)，它可用例如鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫代、三氟甲基、低級酰氧基、芳基、雜芳基、和羥基任選單、二或三取代。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基，其中每一個都如本文所述任選取代。
“雜芳基”意指一種或多種含有至少一個至四個選自氮、氧或硫的雜原子的5原、6原或7原環(huán)芳環(huán)體系。這些雜芳基基團包括，例如噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、(異)噁唑基、吡啶基、嘧啶基、(異)喹啉基、萘啶基、苯并咪唑基、苯并噁唑基。優(yōu)選的雜芳基為噻唑基、嘧啶基(優(yōu)選嘧啶-2-基)、和吡啶基。其它優(yōu)選的雜芳基包括1-咪唑基、2-噻吩基、1-，或2-喹啉基、或2-異喹啉基、1-，或2-四氫異喹啉基、2-或3-呋喃基和2-四氫呋喃基。
從本文的組合庫、固相合成、“合理的”藥物設計、或常規(guī)合成中的任一種方法均提供了本發(fā)明的細菌生長抑制的、腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制化合物。組合庫的構建根據(jù)本領域熟練技術人員所知道的方法制備組合庫。對于單取代庫(N6和N9)，將各個取代基用于單獨的反應混合物中以制備本文所述的每個嘌呤衍生物。另一方面，在組合庫(本文為N6/N9)中，典型的是將一個位置(尤其是N9)與特定的取代基反應，然后將多個取代基(最優(yōu)選3個)的混合物用于衍生其它反應位置(尤其是C6)。
在適合于經濟地產生足夠的試驗用產物的規(guī)模下進行該反應。優(yōu)選的是，這些反應并行進行，例如使用96-孔平皿、每一孔具有足夠小的體積(100-500μL)以使所需的試劑量最小。使用此類型的反應容器也有利于平行處理和分析，包括這類方法的自動改型。
a.N6庫將下列條件用于合成在N-6位取代的腺嘌呤類似物。在一種反應示意圖中，將6-氯嘌呤在85℃與伯胺或仲胺的三乙胺和正丁醇溶液反應過夜?；蛘撸瑢⑦@些試劑在85℃在碳酸鉀和二甲基甲酰胺的溶液中反應過夜。此合成過程如反應示意圖1所述。反應示意圖1 R”和R為低級烷基、雜原子取代的低級烷基、芳基、雜芳基或取代的芳基或雜芳基，例如下列化合物。在此反應中可使用任何伯胺或仲胺。這些反應中用伯胺或仲胺的優(yōu)選方案如下組胺二鹽酸鹽去甲新福林鹽酸鹽1，2-二氨基丙烷5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基胺3-異丙氧基丙基胺二苯基硼酸、乙醇胺酯2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇四氫糠胺5-甲基色胺鹽酸鹽3，3-二苯基丙胺1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)2-(2-氨基乙基)-1-甲基吡咯烷2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯水合物2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽L-肌肽(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇2-(1-環(huán)己烯基)乙胺4-(三氟甲基)芐胺2，5-二氯戊胺鹽酸鹽(+/-)-4-氨基-3-羥基丁酸N，N-二甲基1，2-乙二胺3，3-二甲基丁基胺1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽氨基甲基苯甲酸氨基羥基甲基丙二醇2-(氨基乙基)吡啶氨基丁醇金剛胺氨基己酸N-芐基乙醇胺乙基-6-氨基丁酸酯鹽酸鹽1，2-乙二胺2-環(huán)己-1-烯基乙胺這些胺產生不同的區(qū)域異構體，即，對于一些化合物，可將胺加在不同取向的6-氯嘌呤的C6位上，依此含這種胺的反應部分與C6共價結合。然而，這些區(qū)域異構體的出現(xiàn)不是有害的，因為它僅僅增加了庫中候選化合物的數(shù)目。
b.N9庫使用下列反應示意圖制備N9庫。我們發(fā)現(xiàn)了反應示意圖2的途徑2不產生含所有有機鹵化物(RivX or R4X)的產物，發(fā)現(xiàn)另一可能途徑B形成了所試驗的全部有機鹵化物的產物。在每一可選擇的途徑中，將有機鹵化物與嘌呤(或者腺嘌呤或者6-氯嘌呤)在45℃下在碳酸鉀和二甲基甲酰胺中反應過夜。但是，在途徑B中，通過在85℃下將首次反應的產物與氫氧化銨反應過夜、使N9-衍生的6-氯嘌呤轉化為N9-衍生的腺嘌呤。在相同的反應混合物中順序進行這兩種反應。反應示意圖2 Riv為低級烷基、雜原子取代的低級烷基、芳基、雜芳基或取代的芳基或雜芳基，例如下列化合物。
通過HPLC分析途徑B的產物、發(fā)現(xiàn)它是N-9和N-7取代的腺嘌呤類似物的混合物；在某些反應混合物中也可以是N-1和N-3取代的類似物。如上所討論的，這些副產物的優(yōu)點在于它們的存在只是增加了庫中的候選分子數(shù)目。
任何有機鹵化物都可用于此反應中。用于這些反應中的優(yōu)選有機鹵化物如下甲基4-碘丁酸酯1-溴-3-苯基丙烷肉桂基溴化物2-氯乙基膦酸乙基2-(2-氯乙酰氨基)-4-噻唑-醋酸鹽4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(2-溴乙基)三甲基溴化銨4-氯苯基2-溴乙基醚N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(pthalimide)異氰酸2-氯乙基酯2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺3-氯-2-羥丙基異丁烯酸酯2-溴-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺3-(2-溴乙基)吲哚5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇2-氯乙基乙基硫化物3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺L-1-對-甲苯磺酰基氨基-2-苯乙基氯甲基酮2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(3-氯丙基)三甲氧硅烷氯霉素4-(氯甲基)苯甲酸溴乙胺鹽酸鹽表溴醇碘戊烷芐基溴化物c.N6/N9組合庫已研究發(fā)現(xiàn)上面關于N6和N9庫的反應示意圖，反應示意圖3 使用反應示意圖2的途徑B的變式制備了在C6氨基和N9位上有取代基的組合庫。
于45℃下將6-氯嘌呤與上述有機鹵化物在二甲基甲酰胺的碳酸鉀溶液中反應過夜。此后，將伯胺或仲胺加入反應混合物中(雖然示意圖描述了伯胺、伯或仲胺用于反應示意圖3)并通過在85℃反應過夜制備化合物(7)。在此變式中，伯胺或仲胺在該反應中取代了反應示意圖2的途徑B所示的氫氧化銨。
任何有機鹵化物都可用于此反應的第一個步驟。用于這些反應中的優(yōu)選有機鹵化物如下甲基4-碘丁酸酯1-溴-3-苯基丙烷肉桂基溴化物2-氯乙基膦酸乙基2-(2-氯乙酰氨基)-4-噻唑-醋酸鹽4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(2-溴乙基)三甲基溴化銨4-氯苯基2-溴乙基醚N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(pthalimide)2-氯乙基異氰酸酯2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺3-氯-2-羥丙基異丁烯酸酯2-溴-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺3-(2-溴乙基)吲哚5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇2-氯乙基乙基硫化物3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺L-1-對-甲苯磺?；被?2-苯乙基氯甲基酮2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(3-氯丙基)三甲氧硅烷氯霉素4-(氯甲基)苯甲酸溴乙胺鹽酸鹽表溴醇碘戊烷芐基溴化物任何伯胺或仲胺都可用于該反應的第二個步驟。用于這些反應中的優(yōu)選伯胺或仲胺如下組胺二鹽酸鹽去甲新福林鹽酸鹽1，2-二氨基丙烷5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基胺3-異丙氧基丙基胺二苯基硼酸、乙醇胺酯2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇四氫糠基胺5-甲基色胺鹽酸鹽3，3-二苯基丙胺1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)2-(2-氨基乙基)-1-甲基吡咯烷2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯脫水物2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽L-肌肽(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇2-(1-環(huán)己烯基)乙胺4-(三氟甲基)芐胺2，5-二氯戊胺鹽酸鹽(+/-)-4-氨基-3-羥基丁酸N，N-二甲基1，2-乙二胺3，3-二甲基丁基胺1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽氨基甲基苯甲酸氨基羥基甲基丙二醇2-(氨基乙基)吡啶氨基丁醇金剛胺氨基己酸N-芐基乙醇胺乙基-6-氨基丁酸酯鹽酸鹽1，2-乙二胺2-環(huán)己-1-烯基乙胺使用任何鹵化物和任何胺組合均可重復這種化學過程得到該類型的任何腺嘌呤類似物。
正如對于反應示意圖1和2，某些N6胺產生不同的區(qū)域異構體，通過與有機鹵化物反應可在N1、N3和N7位以及N9位產生取代的嘌呤。
為了在合理時間內得到完全的組合庫，在96孔平皿中在某一時刻使用80孔進行該化學過程(1-10列，A-H排)。在每一排將單一鹵化物加入反應混合物中，反應示意圖3所示的第一部分反應如上所述進行過夜。然后將幾組三種不同胺加入1-7列每一列的每個孔中；將8、9和10列的孔中制備為僅含一種胺，尤其是對于那些有與反應混合物中的任何其它的胺反應趨向的類型。第二部分反應進行過夜。結果，大多數(shù)孔含有化合物的混合物，每一孔包括一組嘌呤衍生物、其中特定的取代基在N9位、三個不同取代的氨基之一在C6位。根據(jù)每個氨基與N9衍生的6-氯嘌呤的反應性，可認為某些反應混合物缺少C6取代基中的一個、兩個或所有三個。另外，該反應混合物含有這些產物的不同區(qū)域異構體。最終，胺的組合直接與鹵化物而不與6-氯嘌呤反應是可能的。測試了作為抗菌混合物的每個反應混合物中的這些產物，特別是腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制活性。將具有陽性結果的混合物分離以確定對該結果有意義的化合物。組合庫的篩選用體內和體外方法篩選按上述制備的每個庫的反應產物。
體內篩選方法包括測定表達細胞生長所必需的腺嘌呤DNA甲基轉移酶的細菌細胞生長的抑制作用。這些篩選方法最好不只用一種細菌、以確定具有最廣譜的抗菌活性的首要候選物。在某些實施方式中，首先篩選抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的樣品的推定抑制劑；新月柄桿菌和枯草芽孢桿菌是優(yōu)選的例子。用于檢測體內腺嘌呤DNA甲基轉移酶活性的另外優(yōu)選的細菌種類包括幽門螺桿菌、根癌土壤桿菌、流產布魯氏菌和炭疽芽孢桿菌。
在這些測定中，將細菌培養(yǎng)物例如莖菌屬在適當?shù)募毦囵B(yǎng)基例如蛋白胨酵母膏(PYE)培養(yǎng)基(DIFCO)中生長過夜至飽和。將此培養(yǎng)物的等份稀釋至600nm(OD600)時的光密度約為0.05的濃度。這種測定在96孔微量滴定板中進行，尤其是使用在這些板中制備的庫。使用這些微量滴定板，將稀釋的細菌培養(yǎng)物的等份量(100-500μL)置于96孔的該滴定板的88孔中；剩余的8孔用作陰性(無細菌)對照。8個孔用作陽性(未加入試驗化合物)對照。對于庫篩選，可將146μL征細菌等分試樣用于每個孔中、每孔加有4μL組合庫樣品。
將庫化合物的不同混合物加入每塊板的剩余80孔的每個孔中，細胞在37℃生長24小時。使用微板讀數(shù)器間隔監(jiān)測細菌的細胞生長以監(jiān)測細胞生長；可通過測定OD630監(jiān)測細胞生長。將含生長慢于對照孔的細胞的孔用于確定相應的組合庫反應混合物，然后合成并逐個測試以測定抑制化合物的特性。
采用這些方法，確定在＜100pM的估計濃度下抑制細菌的細胞生長的候選化合物。從這些庫確定的候選化合物包括6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(4-嗎啉基)-乙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基)-腺嘌呤、和6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(乙基-2-丙烯酸酯)-甲基-腺嘌呤。
體外測定是直接在本發(fā)明的組合庫的反應混合物上、或上述體內篩選測定中所確定的候選化合物上進行。這是兩種類型的測定，使用來自新月柄桿菌和枯草芽孢桿菌的純化CcrM甲基轉移酶、或使用市售的細菌的dam甲基酶和dcm甲基酶的制劑。在這些測定中，用含有推定的抑制劑和甲基轉移酶的組合庫樣品在30℃下培養(yǎng)合成的半甲基化45/50 DNA底物(如在Berdis等，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 952874-2879中所公開的)，通過加入3H-標記的S-腺苷蛋氨酸(其中放射性同位素標記包括轉移的甲基)引發(fā)甲基轉移酶反應。通過比較加入對照組中的放射性標記的數(shù)量檢測抑制，對照組的反應是在有或沒有組合庫樣品的情況下進行的；抑制劑導致聚集在DE81濾器上并通過液體閃爍放射性測量的甲基化的、3H-標記DNA的數(shù)量減少。
采用這種測定，檢測到來自N6庫的四種另外的化合物在約500μM的估計濃度時可完全抑制體外DNA甲基化。這些化合物(具有如下所示結構)是腺嘌呤的核糖形式，該腺嘌呤含有二苯基硼酸乙醇胺酯或與腺嘌呤環(huán)的C6氨基共價連接的3，3-二苯基異丙基 進一步分析了來自N-6腺嘌呤庫的由上面所示結構合成的一種反應混合物并發(fā)現(xiàn)在＜50μM時抑制細胞生長。測定了該化合物的Ki約為1μM(假定孔中的最大理論濃度)，該化合物具有下列結構 采用這種測定法測試了從N-9腺嘌呤庫選擇的反應混合物對腺嘌呤DNA甲基轉移酶活性的抑制。發(fā)現(xiàn)在合成中所得到的、具有被3-乙基吲哚或2-乙基-1，3-二氧戊環(huán)取代的N9的化合物(具有如下結構)在500μM時是腺嘌呤DNA甲基轉移酶活性的抑制劑 用dcm甲基轉移酶的體外測定基本上按所述的使用來自嗜血桿菌(Hemophilus hemolyticus)(New England Biolabs，Beverly，MA)的市售甲基轉移酶和pUC18 DNA作為底物來進行；也可用其它市售dcm甲基轉移酶例如來自藤黃節(jié)桿菌、解淀粉芽孢桿菌H、埃及嗜血桿菌(Hemophilus aegyptius)、副流感嗜血桿菌、或摩拉克氏菌屬類來進行這種測定。在這些測定中，通過檢測dcm甲基轉移酶很少或無抑制作用證實了腺嘌呤特異性，因此在有或沒有組合庫混合物或推定腺嘌呤特異性抑制劑的情況下，聚集在DE81濾器上的并通過液體閃爍放射性測量的甲基化3H-標記的DNA的數(shù)量是相同的。
或者，用dam甲基酶(例如來自大腸埃希氏桿菌)進行測定，其中的抑制作用是通過聚集在DE81濾器上的并通過液體閃爍放射性測量的甲基化3H-標記的DNA的數(shù)量減少來證實的?！昂侠碓O計”的腺嘌呤DNA甲基酶抑制劑的合成a.活性部位類似物腺嘌呤DNA甲基轉移酶的“合理設計”是根據(jù)這樣的假設，即該酶的活性部位包含被修飾的腺嘌呤部分以及S-腺苷蛋氨酸甲基供體的特異性結合部位，如圖2所示。優(yōu)選的是在甲基轉移酶的活性部位內的化合物，并且特別優(yōu)選模仿推定的“過渡態(tài)”的分子，該過渡態(tài)產生酶的甲基轉移活性。制備了四種這種過渡態(tài)類似物并體外測定腺嘌呤DNA甲基轉移酶活性。
合理設計的化合物具有以下結構 1 R1＝OH R2＝H2 R1＝H R2＝H3 R1＝OH R2＝PO34 R1＝H R2＝PO3并用反應示意圖6合成該化合物，如下所示。反應示意圖6 如上所述測定這些化合物的腺嘌呤DNA甲基轉移酶活性。發(fā)現(xiàn)這些化合物可抑制具有表1所示的Ki的CcrM。由數(shù)據(jù)的Dixon圖計算化合物2和4的Ki，對于化合物3該數(shù)據(jù)在抑制劑濃度為0-150μM時測定的、對于化合物4是在0-80μM時測定的。由IC50估計化合物1和2的Ki。
表I化合物1-4的Ki 腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的固相合成使用本領域公知的固相合成法也可有效地合成本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑，參見Bunin，ibid。
在優(yōu)選的實施方式中，通過使用較大量的用于篩選的庫化合物，固相合成補充了本文所述的組合庫合成。這種合成方法具有另外的優(yōu)點，即易于操作且易于純化，因為它們通過可被特異性裂解的化學上不穩(wěn)定的基團與樹脂連接。例如，從具有相對低(mM范圍)的抑制活性的N6庫鑒定化合物(8) 運用這些結果，用固相化學方法修飾抑制劑(8)及其相關類似物(9)開發(fā)了第二代庫。例如，從終端胺和從N-9位能衍生化合物(8)產生抑制劑，該抑制劑被設計為分別與S-腺苷蛋氨酸(SAM)和DNA結合部位相互作用。將這些衍生物制備為可靶向甲基轉移酶活性部位的任何部分N9位的修飾對腺嘌呤結合部位具有特異性、而C6胺的修飾對SAM部位具特異性。
用反應示意圖4舉例說明進行固相化學過程反應示意圖4 這些實驗使用了市售的甲氧基苯基甲酸基樹脂進行被保護的二胺(11)的還原氨化，其中Rv為氫或CO2P”(這里P’和P”為保護基團)。該反應產生了仲胺(12)。加入6-氯嘌呤產生了與樹脂結合的腺嘌呤加合物(13)，這使得剩余的功能基團在樹脂上衍生。根據(jù)本領域已知的方法可從樹脂中除去這些加合物，例如用濃縮形式或5％二氯甲烷溶液的三氟醋酸處理。
反應示意圖4舉例說明了一種實施方式，其中氨基取代基包含一個手性中心(即，它以一對立體異構體的形式存在)。然而，這些立體異構體中僅有一個可能具有生物活性。為了避免不得不分離本發(fā)明化合物的非對映體形式，可以使用下列反應示意圖5反應示意圖5 這種合成法可用于檢測化合物中的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制活性，該化合物包括手性中心的一種外消旋混合物(如天門冬氨酸(16)中所存在的)；用商用純D-或L-天門冬氨酸可重復這種合成而得到本方法中光學純的方式，該方法中一種立體異構體較其它方法具有明顯多的活性。如反應示意圖5所示，用氯甲酸芐酯處理D，L-天門冬氨酸得到N-羧基芐基保護的天門冬氨酸(17)。然后用低聚甲醛將α-羧酸保護為噁唑烷酮(18)。使用二苯基磷?；B氮化物、在剩余的β-羧酸上進行庫爾提斯重排得到異氰酸酯(19)。這些反應包括本領域已知的合成方法；從此以后該化學過程是新的。使用三甲基甲硅烷基乙醇(20)截留該異氰酸酯(19)得到Teoc(三甲基甲硅烷基乙氧羰基)保護的胺(21)。用甲醇鈉使噁唑烷酮開環(huán)得到甲酯(22)。然后使用三氟醋酸除去Teoc保護基團得到單保護的二胺(23)。
已經將化合物(23)和(11)(其中Rv＝H，P’＝CBz)分別用于合成樹脂結合的腺嘌呤類似物(13)，Rv＝COMe，P’＝CBz，和(13)，Rv＝H，P’＝CBz。本發(fā)明化合物的用途本發(fā)明還提供了本文所公開的化合物用作藥物組合物的實施方式。可以按本來已知的方法制備本發(fā)明的藥物組合物，例如，通過常規(guī)的混合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨細、乳化、制膠囊、包埋、或冷凍干燥的方法。
因此可以按常規(guī)方法、用一種或多種生理學上可接受的載體配制用于本發(fā)明的藥物組合物，其中的載體包括在活性化合物加工成制劑時便于使用的賦形劑和輔助劑。合適的制劑是根據(jù)所選擇的給藥途徑而定的。
無毒性的藥用鹽包括酸鹽，其中的酸例如鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸、亞磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硝酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、馬來酸、氫碘酸、鏈烷酸如醋酸、HOOC-(CH2)n-CH3(其中n為0-4)，等等。無毒性的藥用堿加成鹽包括堿鹽，其中的堿例如鈉、鉀、鈣、銨等等。本領域熟練技術人員都知道許多無毒性的藥學上可接受的加成鹽。
用于注射的，可以將本發(fā)明化合物配制成適當?shù)乃芤?，例如生理性上相容的緩沖液如Hanks溶液、Ringer溶液或生理鹽水緩沖液。對于經粘膜的和經皮的給藥，在制劑中使用適合于滲透屏障的滲透劑。這些滲透劑是本領域通常已知的。
用于口服給藥的，通過將活性化合物與本領域眾所周知的藥學上可接受的載體結合可很容易地制備這些化合物。這些載體可使本發(fā)明化合物配制成片劑、丸劑、糖錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿劑、泥漿劑、懸浮液等，用于被治療患者的口服消化。用固體賦形劑可得到口服用的藥物制劑，如需要，在加入適合的輔助劑后，可研磨產生的混合物、并處理混合物顆粒，得到片劑或糖錠劑心層。適合的賦形劑，尤其是充填劑例如糖、包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、或山梨糖醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽例如藻酸鈉。
用適當?shù)陌卵b備糖錠劑。出于此目的，可以使用濃縮糖溶液，該溶液可含或不含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波母膠、聚乙二醇、和/或二氧化鈦、漆液、以及適當?shù)挠袡C溶劑和溶劑混合物?？梢詫⑷玖匣蛏丶尤肫瑒┗蛱清V劑包衣中用于鑒別或表明活性化合物劑量的不同組合。
可以口服使用的藥物制劑包括由明膠制成的推合的膠囊、以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨糖醇制成的封閉軟膠囊。推合的膠囊可含有活性成分和填充劑例如乳糖、粘合劑例如淀粉、和/或潤滑劑例如滑石或硬脂酸鎂、以及任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，可以將活性化合物溶解或懸浮在適當?shù)囊后w中，該液體例如脂肪油、液體石蠟、或液體聚乙二醇。另外，可以加入穩(wěn)定劑。所有用于口服給藥的制劑應該是適合于該給藥方法的劑量形式。對于頰部的給藥，該組合物可采用按常規(guī)方法配制的片劑或錠劑形式。
對于吸入給藥，本發(fā)明使用的化合物是以從加壓袋或霧化器產生的氣溶膠噴霧形式可方便地釋放，同時使用適當?shù)耐七M劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適合的氣體。在加壓氣溶膠中，可通過提供一個釋放計量數(shù)量的活門來確定劑量單位?？梢詫⒂糜谖肫骰虼等肫髦械哪z囊和明膠藥筒制備成含有該化合物和適當?shù)姆勰┗|如乳糖或淀粉的混合粉末。
可以將這些化合物配制成用于通過注射的非腸道給藥制劑，例如通過大丸劑注射或連續(xù)輸入。注射用制劑可以是單位劑型形式，例如，置于安瓿或多劑量容器中，同時加入防腐劑。這些組合物可采用這類形式，例如油性或含水載體中的懸浮液、溶液或乳狀液形式，并且可含有調配劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
非腸道給藥的藥學制劑包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，可以將活性化合物的懸浮液制備成適當?shù)挠托宰⑸鋺腋∫骸＿m合的親油性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油、或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯、或脂質體。含水注射懸浮液可含有增加懸浮液粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、或葡聚糖?？蛇x擇地，該懸浮液也可含有適當?shù)姆€(wěn)定劑或增加化合物溶解度的試劑以使該制劑為高度濃縮溶液?；蛘撸褂们?，活性成分可以是與適當?shù)妮d體構成的粉末形式，該載體例如無菌無致熱物水。也可將這些化合物配制成直腸用制劑形式，例如栓劑或保留性灌腸劑，例如含有常規(guī)栓劑基質如可可脂或其它甘油酯。
除了前面所述的制劑外，也可將這些化合物配制成儲存制劑。這類長效性制劑可通過植入法(例如皮下或肌內)或通過肌內注射給藥。因此，例如可將這類化合物與適當?shù)木酆衔锘蚴杷镔|(例如作為可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂一起配制，或用作少量可溶的衍生物，例如少量可溶的鹽。
用于本發(fā)明疏水的化合物的藥用載體是一種助溶劑體系，該體系包括芐基醇、非極性表面活性劑、水可混溶的有機聚合物、和含水相。該助溶劑體系可以是VPD助溶劑體系。VPD是一種3％w/v芐基醇、8％w/v非極性表面活性劑聚山梨酯80和65％w/v聚乙二醇300的溶液，以無水乙醇的體積為基礎。該VPD助溶劑體系(VPD5W)由用5％葡萄糖水溶液1∶1稀釋的VPD組成。這種助溶劑可很好地溶解疏水化合物，并且在系統(tǒng)給藥時本身產生的毒性低。自然，在不破壞助溶劑的溶解度和毒性的情況下，可以顯著改變助溶劑的比例。而且，可以改變助溶劑成分的特性例如，可以用其它低毒性非極性表面活性劑代替聚山梨酯80；也可以改變聚乙二醇部分的多少；其它生物相容性聚合物可以代替聚乙二醇，例如聚乙烯基吡咯烷酮；其它糖或多糖可取代葡萄糖。
或者，可使用其它用于疏水藥用化合物的傳遞體系。脂質體和乳狀液是眾所周知的用于疏水藥物的傳遞賦形劑或載體的例子。也可使用某些有機溶劑例如二甲基亞砜，盡管通常其代價是毒性更大。另外，可以用一種持續(xù)釋放體系傳遞這些化合物，例如含該治療劑的固體疏水聚合物的半滲透基質。已經確立了各種持續(xù)釋放物質、并且它們是本領域熟練技術人員所公知的。持續(xù)釋放膠囊可根據(jù)化合物的化學特性釋放該化合物數(shù)周至100天。根據(jù)治療試劑的化學特性和生物學穩(wěn)定性，可以采用另外措施使蛋白質和核酸穩(wěn)定。
該藥物組合物也可含有適當?shù)墓腆w或凝膠相載體或賦形劑。這些載體或賦形劑的例子包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物如聚乙二醇。
本發(fā)明化合物可以是藥學上相容的抗衡離子的鹽形式?？梢杂迷S多酸形成藥學上相容的鹽，這些酸包括但不限于鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸、磷酸、氫溴酸、亞磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、硝酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、馬來酸、氫碘酸、鏈烷酸如醋酸、HOOC-(CH2)n-CH3(其中n為0-4)，等等。鹽趨向于更易溶于相應的游離堿形式的含水溶劑或其它質子溶劑中。無毒性藥用堿加成鹽包括諸如鈉、鉀、鈣、銨等堿的鹽。本領域熟練技術人員都知道許多無毒性的藥學上可接受的加成鹽。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可通過各種方法配制和給藥，包括全身的、局部的或表面的給藥。在“Remington’s藥物科學”Mack出版公司，Easton，PA中可找到配制和給藥的技術?？梢赃x擇給藥方式使傳遞至身體各所需靶部位達到最大化。適合的給藥途徑可以是例如口服的、直腸的、經粘膜的、經皮的、或腸內的給藥；非腸道傳遞包括肌內的、皮下的、髓內的注射，以及鞘內的、直接心室內的、靜脈內的、腹膜內的、鼻內的、或眼內的注射。
或者，可以以局部而不是全身的方式給藥，例如，通過將化合物直接注射至特定組織，通常以儲存或持續(xù)釋放制劑的形式。
適用于本發(fā)明的藥物組合物包括以下組合物，其中含有有效量的活性成分以達到其預期的目的。更具體的是，治療上有效量是指有效預防受治療的患者現(xiàn)有癥狀的發(fā)展或緩解該癥狀的劑量。有效量的確定在本領域熟練技術人員的能力范圍內，尤其是可根據(jù)本文所提供的詳細說明來確定。
如本文所公開的，對于用于本發(fā)明方法中的任何化合物，最初可從細胞培養(yǎng)測定估計治療上的有效量。例如，可在動物模型中配制一種劑量以達到循環(huán)濃度范圍，該范圍包括在細胞培養(yǎng)物中所測定的EC50(增加50％的有效量)，即，所試驗的化合物達到最大抑制細菌的細胞生長的半數(shù)時的濃度。該制劑可用于更準確地確定用于人的劑量。
但是，我們知道任何特殊患者的特定劑量水平是根據(jù)各種因素來確定的，包括所用特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀態(tài)、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、和排泄速度、藥物組合、進行治療的特定疾病的嚴重度、以及處方醫(yī)師的判斷。
對于對非人動物的給藥，也可將該藥物或含該藥物的藥物組合物加入動物飼料或飲水中。配制含預定劑量藥物的動物飼料和飲水產品是很方便的，因此動物可在飲食的同時攝入適當量的藥物。大約在被動物消耗之前，立即將含藥物的預混合物加入飼料或飲水中也是很方便的。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物具有某些藥理學特性。這些特性包括但不限于口服生物可利用率、低毒性、低血清蛋白結合和理想的體外和體內半衰期?？梢赃M行試驗以預知理想的藥理學特性。用于估計生物可利用率的試驗包括經過人腸細胞單層(包括Caco-2細胞單層)的運輸?？蓮陌椎鞍捉Y合試驗預知血清蛋白結合。這些試驗在OR2vcova等(1996，J.Chroma.B 6771-27)的評論中有描述?；衔锇胨テ谂c化合物的劑量頻數(shù)成反比。從Kuhnz和Gieschen(藥物代謝和布置，(1998)volume 26，第1120-1127頁)所述的微粒體的半衰期的測定可預知化合物的體外半衰期。
這些化合物毒性和療效可以根據(jù)細胞培養(yǎng)物或實驗動物中的標準藥學方法確定，例如，確定LD50(50％的致死量)和ED50(50％有效治療量)。毒性作用和治療作用之間的劑量比例為治療指數(shù)，可將其表示為LD50與ED50的比例。優(yōu)選具有高的治療指數(shù)的化合物。從這些細胞培養(yǎng)測定和動物研究所得到的數(shù)據(jù)可用于配制用于人的劑量范圍。這些化合物的劑量優(yōu)選在循環(huán)濃度范圍內，它包括很少毒性或沒有毒性的ED50。根據(jù)所用的劑型和采用的給藥途徑、該劑量可在此范圍內改變。各個醫(yī)師根據(jù)患者的病情可選擇準確的制劑、給藥途徑和劑量(參見例如Fingl等，1975，在“治療的藥理學基礎”，Ch.1，p.1)。
劑量和用藥時間間隔可以逐個調節(jié)以便使活性部分的血漿足以保持細菌的細胞生長抑制作用的水平。用于全身給藥的可耐受劑量為100-2000mg/天。根據(jù)患者的體表面積確定的有用劑量范圍為50-910mg/m2/天。有用的平均血漿水平應保持在0.1-1000μM。在局部給藥或選擇性吸收的情況下，化合物的有效局部濃度與血漿濃度無關。
本發(fā)明化合物是感染植物、動物和人的細菌中的細胞處理過程的調節(jié)劑。本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制化合物的藥物組合物可用作抗生素治療動物和人的疾病，包括但不限于放線菌病、炭疽、菌痢、肉毒中毒、布魯氏菌病、蜂窩織炎、霍亂、結膜炎、膀胱炎、白喉、細菌性心內膜炎、會厭炎、胃腸炎、鼻疽、淋病、Legionnaire氏病、鉤端螺旋體病、細菌性腦膜炎、鼠疫、細菌性肺炎、產后的敗血癥、風濕熱、巖石山斑點熱(RockyMountain spotted fever)、猩紅熱、鏈球菌咽炎、梅毒、破傷風、兔熱病、傷寒熱、斑疹傷寒和百日咳。
在本申請說明書中的所有文章和參考資料包括專利，均作為參考文獻引用。
下列實施例是為了舉例說明而不是要限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明并不限定于所舉例的實施方式范圍內，該實施方式旨在作為本發(fā)明個別的舉例說明。實際上，除本文所示和所述之外的本發(fā)明的各種改變，對于本領域熟練技術人員來說都可從說明書和附圖中顯而易見。當然這些改變應在所附的權利要求的范圍內。
實施例1溶液相化學庫的制備在96孔微滴定板中按如下方法制備上述溶液相組合庫。
在1-7列的每個孔中加入K2CO3(7-10mg)、然后加入DMF(140μL)和6-氯嘌呤(30μL 0.5M DMF溶液)。在每一排中加入鹵化物(15μL 1M DMF溶液)，該鹵化物選自本文所公開的鹵化物名單。
在8-10列的每個孔中加入K2CO3(3-5mg)、然后加入DMF(180μL)和6-氯嘌呤(10μL的0.5M DMF溶液)。在每一排中加入鹵化物(5μL的1M DMF溶液)，該鹵化物選自本文所公開的鹵化物名單。
將微滴定板加熱至45℃并反應過夜。將反應物冷卻至室溫、并按如下進行第二次合成反應。
在1-7列的每個孔中加入3種不同的胺(每孔5μL的1M DMF溶液)，此胺選自本文所公開的胺的名單。
在8-10列的每個孔中加入一種胺(每孔5μL的1M DMF溶液)，此胺選自本文所公開的胺的名單。
將微滴定板加熱至85℃并反應過夜。將反應物冷卻至室溫，分別收集每一孔并將溶液的最終體積調節(jié)為300μL(代替丟失的溶劑以蒸發(fā))。
然后用本文所公開的體內細菌生長測定法對這些反應中所產生的化合物進行測試。
實施例2腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的制備篩選本發(fā)明組合庫的腺嘌呤DNA甲基轉移酶上述的抑制活性。根據(jù)下列反應示意圖，將具有甲基轉移酶抑制活性和含有與二苯基硼酸乙醇胺酯共價連接的C6氨基的化合物用作制備相關類似物的基本化合物 條件i)R-X，DMF，K2CO3，45-95℃；ii)Pb2BOCH2CH2NH2，DMF，K2CO3，90-95℃具體說，于室溫和氬氣下將6-氯嘌呤(1)溶解在干DMF(約0.3mmol/mL)中。加入碳酸鉀(K2CO3；2-3當量)、然后加入1當量烷基鹵化物(R-X)。將反應物加熱至45度或95度(如果鹵化物在較低溫度下不反應)并攪拌18小時。此時間后，進行薄層色譜法(用二氯甲烷中的2％-5％甲醇作溶劑)并證實在反應混合物中很少或沒有剩余的起始物質。將該反應物冷卻至室溫、通過過濾除去固體并用干二甲基甲酰胺(DMF)洗滌。得到濾液、并在真空除去任何剩余的DMF得到油狀的粗制品。通過硅膠上的柱色譜法(用二氯甲烷中的2％-5％甲醇作溶劑)純化該產品。在組合的N-9和N-7區(qū)域異構體洗脫為混合物之前，將N-9區(qū)域異構體洗脫為純的部分?；旌虾琋-9異構體的部分并在真空除去溶劑得到儲藏時固化的固體或油狀中間產物2b-2e。
按如下制備終化合物。于室溫和氬氣下將6-綠嘌呤(1)或9-烷基-6-氯嘌呤(2b-2e)溶解在干DMF(0.03-0.5mmol/mL)中。加入碳酸鉀(K2CO3；2-3當量)、然后加入1當量二苯基硼酸乙醇胺酯。將反應物加熱至90-95℃并攪拌18小時。使該混合物冷卻至室溫并如上所述通過過濾除去固體。用1H-NMR、13C-NMR、和兩維NMR分光鏡法如HMQC和HMBC確定這些化合物的結構。
或者，于室溫在氬氣下將6-氯嘌呤(1)或N-9烷基-6-氯嘌呤(2b-2e)溶解在1-丁醇(0.1mmol/mL)中。加入3當量二異丙基乙胺，然后加入1.2當量烷基鹵化物。將此反應混合物加熱至110℃并攪拌18小時。然后將該反應物冷卻至室溫并在真空除去溶劑。通過硅膠上的柱色譜法(用2％-5％甲醇的二氯甲烷溶液作溶劑)純化殘余物。收集產物部分并在真空除去溶劑而留下白色固體。
本領域人員都知道起始物質二苯基硼酸乙醇胺酯的結構是環(huán)狀的，硼是四面體的結構。因此抑制本發(fā)明化合物的腺嘌呤DNA甲基轉移酶的環(huán)狀和線性類似物可有利于開發(fā)另外的抑制化合物。 對于體內測定，將含剩余的DMF或二甲基亞砜(DMSO)的未純化制劑稀釋至16.7mM并直接用作粗混合物。使用各種細菌種類基本上按上述進行細菌的細胞生長抑制的體內測定。在這些測定中化合物(3a)-(3e)顯示下列結果新月柄桿菌化合物3a-IC50＜25μM化合物3b-IC50＜25μM化合物3c-IC50＜25μM化合物3d-IC50＜25μM化合物3e-IC50＜25μM流產布魯氏菌化合物3a-12小時后幾乎全部細胞死亡-100μM化合物3b-12小時后全部細胞死亡-100μM化合物3c-從開始細胞生長被抑制-100μM化合物3d-從開始細胞生長被抑制-100μM化合物3e-從開始細胞生長被抑制-100μM幽門螺桿菌化合物3a-IC50＜25μM化合物3b-IC50＜25μM化合物3c-IC50在25-100μM之間化合物3d-IC50在25-100μM之間化合物3e-IC50＝25μM根癌土壤桿菌化合物3a-IC50＞100μM化合物3b-IC50＝25μM化合物3c-IC50＝25μM化合物3d-IC50＜＜25μM化合物3e-IC50＜＜25Mm枯草芽孢桿菌化合物3a-IC50在10-50μM之間化合物3b-IC50在1-10μM之間化合物3c-IC50在1-10μM之間化合物3d-IC50在10-50μM之間化合物3e-未測另外，使用體外腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制測定法得到下列結果CcrM化合物3a-在100μM時全部抑制化合物3b-在100μM時全部抑制化合物3c-在100μM時全部抑制化合物3d-在100μM時全部抑制化合物3e-在100μM時全部抑制dam甲基酶(大腸桿菌)化合物3a-在100μM時全部抑制化合物3b-在100μM時全部抑制化合物3c-在100μM時全部抑制化合物3d-在100μM時全部抑制化合物3e-在100μM時全部抑制dcm甲基轉移酶(HhaI)化合物3a-在500μM時根本無抑制化合物3b-在500μM時根本無抑制化合物3c-在500μM時根本無抑制化合物3d-在500μM時根本無抑制化合物3e-在500μM時根本無抑制這些結果證實了化合物(3a)-(3e)是腺嘌呤特異性DNA甲基轉移酶、沒有可檢測的dcm交叉反應性。
實施例3腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的制備通過優(yōu)化上述組合庫篩選期間所發(fā)現(xiàn)的先導物而開發(fā)了另外的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑。1.6-(2-二苯基甲基環(huán)戊基氨基)嘌呤(化合物73)將6-氯嘌呤與正丁醇和2當量二異丙基乙胺(N(iPr)2Et)中的S-(-)-2-(二苯基甲基)-吡咯烷混合。將反應加熱至105℃并令其反應24小時。在真空下從反應混合物除去溶劑、并通過硅膠色譜法純化粗制品。2.6-(2-二苯基羥基甲基環(huán)戊基氨基)嘌呤(化合物71)將6-氯嘌呤在正丁醇和2當量N(iPr)2Et中的R-(+)-α，α-二苯基-2-吡咯烷甲醇混合。將反應加熱至95℃并令其反應24小時。在真空下從反應混合物除去溶劑、并通過硅膠色譜法純化粗制品。 3.2-二苯基吡咯(化合物76)將2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)與苯中的二甲基硫酸鹽混合并回流3小時。在包括蒸餾的純化后，在室溫下將所得到的2-甲基亞氨基酯吡咯烷在干醚中與過量的苯氧化鋰(PhLi)混合18小時得到標題化合物。 4.6-氨基-4(2-二苯基硼酸酯)乙基氨基嘧啶(化合物III168)用阮內鎳(RaNi)的氨水溶液處理4-氨基-6-羥基-2-硫代嘧啶并加熱回流2小時。純化得到4-氨基-6-羥基嘧啶，將它與氯氧化磷和N，N-二乙基苯胺混合、加熱回流4小時得到4-氨基-6-氯嘧啶。將該產物與二異丙基乙胺的甲苯溶液中的二異丙基硼酸乙醇酯混合、并加熱回流過夜產生標題化合物。 5.4-氨基-5(2-二苯基硼酸酯乙基亞氨基酯)咪唑(化合物III170)將4-氨基-5-咪唑羧酰胺鹽酸鹽在氯氧化磷中加熱回流3.5小時，純化后得到4-氨基-5-腈咪唑。將此產物再懸浮在HCl飽和的乙醇中過夜并純化得到4-氨基-5-乙基亞氨基酯咪唑鹽酸鹽。將此鹽酸鹽與四氫呋喃(THF)中的二苯基硼酸乙醇胺酯混合過夜得到標題化合物。 實施例4第二代庫根據(jù)下列化合物制備兩種“第二代庫” 從母化合物78按如下所示構建第一個第二代庫(“庫A”)。在加熱器-搖動器中在25℃將化合物78與甲醇中的1當量醛(或酮)混合。重復反應。反應1小時后，加入BH3-樹脂并將混合物反應過夜。在一組反應中加入第二當量的下列一種醛環(huán)己烷羧乙醛；3-糠醛；1-甲基-2-吡咯羧乙醛；氫化肉桂醛；4-吡啶羧乙醛；2-苯基丙酰基(proprion)乙醛；苯乙醛；間-茴香醛；庚醛；3-硝基苯甲醛；3-苯基丁醛；3-吡啶基乙醛N-氧化物；ethyl leveulinate；乙基-2-乙基乙酰丙酮；乙基-4-丁酸乙酰酯；丙酰(proprionyl)醋酸乙酯；乙基2-芐基乙酰丙酮；1-苯基-2-戊酮；1-乙酯基-4-哌啶酮；N-丙酮基鄰苯二甲酰亞胺；2-氟苯基丙酮；4-(3-氧丁基)醋酸苯酯。
然后使整個板反應24小時。所產生的化合物或者是單烷基化的(R＝H，R’＝烷基、芳基)、或者是二烷基化的(R＝R’＝烷基或芳基)。
在三甲基鋁(AlMe3)存在下在二氯甲烷中于50℃下將母化合物III142與用于構建N6庫且如上所述的胺反應過夜來構建其它的第二代庫(“庫B”)。通過蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物溶解在乙腈中、并用三甲基甲硅烷基碘化物處理過夜。通過加入甲醇、蒸發(fā)溶劑、將殘余物分配在醚和水/醋酸(7∶3)之間并萃取產物成含水層，逐步完成反應。
第二代庫A 第二代庫B 實施例5基于二苯基硼酸酯的化合物根據(jù)上述結果，本發(fā)明的數(shù)個腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑中的一個共同成分是二苯基硼酸酯。因此，按如下制備數(shù)個基于該酯的另外的化合物。這些化合物具有如下結構 這些化合物的一般合成如反應示意圖7所示。1.硼酸的合成(化合物8).
在氬氣下將二氯硼烷二甲基硫化物復合體(0.5-2mL)溶解在四氫呋喃或二醚中、并冷卻至-78℃。將在四氫呋喃、二乙醚、環(huán)己烷或這些溶劑的混合物中的適當?shù)谋交窭旁噭?2摩爾當量)逐滴加入冷的反應物中。令該反應物加溫至室溫并攪拌過夜。在反應物中加入二乙醚并通過緩慢加入1N鹽酸使反應物水解。分離各層并用飽和含水NaCI洗滌有機層。將有機層經硫酸鎂(MgSO4)干燥、過濾、并在真空下除去溶劑得到澄清油狀的粗制品。將標題化合物的這種粗制劑直接用于合成的下一階段。反應示意圖7 其中反應條件為i)四氫呋喃(THF)或乙醚(Et2O)，-78℃至室溫過夜；ii)EtOH，8-羥基喹啉，室溫；iii)EtOH，2-氨基乙醇，室溫。
每個苯環(huán)上X可代表5個以下取代基，它們可各自為氫、低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，這里每個環(huán)烷基基團具有3-7個原子數(shù)，環(huán)烷基原子數(shù)中有兩個可以任選是選自氧和氮的雜原子，并且烷基、芳基或環(huán)烷基基團的任何原子可被鹵素、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酯、酰胺、或硫酸鹽任選取代。2.硼酸8-羥基喹啉酯(化合物9)的合成將粗制硼酸(8)溶解在0.05-5mL乙醇中并用乙醇中1-2當量的1M 8-羥基喹啉處理。將從溶液中沉淀出的產物或溶液濃縮并進行結晶，一旦固體形成、則通過過濾收集產物并用乙醇洗滌。3.硼酸乙醇胺酯(化合物10)的合成將粗制硼酸(8)溶解在0.05-5mL乙醇中并用乙醇中1-2當量的1M乙醇胺處理。將從溶液中沉淀出的產物或溶液濃縮并進行結晶，一旦固體形成、則通過過濾收集產物并用乙醇洗滌。
使用本發(fā)明的體內測定法、用新月柄桿菌對如上所述制備的化合物(1)-(5)進行測試，對化合物(1)、(2)、(4)和(5)已經測試了其對枯草芽孢桿菌的細胞生長抑制作用。IC50值如下表II所示。
表II

這些化合物具有優(yōu)越的物理特性，并且被分離為能適應大規(guī)模生產的純的穩(wěn)定的固體。本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉移酶抑制劑的另外的特殊實施方式包括具有下列這些附加特征的相關化合物1)在苯環(huán)上、在鄰位、間位和對位中任一位或其組合上含有不同取代基的類似物，包括稠環(huán)和取代的稠環(huán)；2)在一個或兩個苯基基團上具有各種環(huán)大小、取代的雜環(huán)、稠雜環(huán)和取代稠雜環(huán)的芳雜環(huán)的類似物；3)利用上述1)和2)的芳族體系的組合、具有兩個與硼原子結合的不相同芳環(huán)的類似物；4)用在任何可能位置含不同的取代基的喹啉(9)制備的類似物、或者包括在任何可能位置含一個或多個雜原子的稠雜芳環(huán)或在任何可能位置含一個或多個雜原子且在任何可能位置含不同取代基的稠雜芳環(huán)的結構類似物；以及5)在(10)的2-氨基乙醇的亞乙基的C-1和C-2位中的任一或兩者上具有取代基的類似物。
應該認識到前面的說明書著重公開了本發(fā)明的某些特定實施方式及對其所做的等同改變或替換都是在所附權利要求書所述的構思和范圍內。
權利要求
1.下式的化合物或其藥學上可接受的鹽， 其中R1、R2和R3相同或不同，并且各自為氫、低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，其中每個環(huán)烷基基團具有3-7個環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個是或不是選自氧和氮的雜原子，且其中每個烷基、芳基或環(huán)烷基基團均可被氫、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基取代或不取代，并且其中R3可以是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物，其中R1，R2，和R3不都是氫，且其中當R3是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物，R1或R2之一不是氫。
2.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R1和R2相同或不同并且各自為氫、組胺二鹽酸鹽、去甲苯福林鹽酸鹽、1，2-二氨基丙烷、5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基-胺、3-異丙氧基丙基胺、二苯基硼酸、乙醇胺酯、2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇、四氫糠胺、5-甲基色胺鹽酸鹽、3，3-二苯基丙基胺、1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮、2-(2-氨基乙基)-1-甲基吡咯烷、2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯化水合物、2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽、L-肌肽、(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇、2-(1-環(huán)己烯基)乙胺、4-(三氟甲基)芐胺、2，5-二氯戊胺鹽酸鹽、(+/-)-4-氨基-3-羥丁酸、N，N-二甲基1，2-乙二胺、3，3-二甲基丁胺、1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽、氨基甲基苯甲酸、氨基羥基甲基丙二醇、2-(氨基乙基)吡啶、氨基丁醇、金剛胺、氨基己酸、N-芐基乙醇胺、乙基-6-氨基丁酸鹽鹽酸鹽、1，2-乙二胺、或2-環(huán)己-1-烯基乙胺。
3.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R3為甲基4-碘丁酸酯、1-溴-3-苯基丙烷、肉桂基溴化物、2-氯乙基膦酸、乙基2-(2-氯乙酰氨基)-4-噻唑-醋酸鹽、4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽、(2-溴乙基)三甲基溴化銨、4-氯苯基2-溴乙醚、N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺、異氰酸2-氯乙酯、2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺、3-氯-2-羥基丙基異丁烯酸酯、2-溴-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺、3-(2-溴乙基)吲哚、5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇、2-氯乙基乙基硫化物、3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺、L-1-對-甲苯磺酰基氨基-2-苯乙基氯甲基酮、2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)、乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯、2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇、(3-氯丙基)三甲氧基硅烷、氯霉素、4-(氯甲基)苯甲酸、溴乙胺鹽酸鹽、表溴醇、碘戊烷、或苯甲基溴化物。
4.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R1為H，R2為(2-二苯基硼酸酯)乙基或二苯基丙基，且R3為H、2-(4-嗎啉基)-乙基、3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基、2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基、或乙基-2-(丙烯酸酯)-甲基。
5.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R1為H，R2為(S-高胱氨酸基)甲基，R3為核糖、5’-磷?；颂?、脫氧核糖或5’-磷?；撗鹾颂?。
6.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R3為H，R1和R2一起為2-(二苯基甲基)環(huán)戊基或2-(二苯基羥基甲基)環(huán)戊基。
7.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R1為H，R2為丙氨?；』ァ?-烷基酮-2-氨基乙基、2-氨基乙基或單-或二取代的2-氨基乙基、R3為2-(4-嗎啉基)-乙基。
8.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R1和R2相同或不同，并且各自為氫、組胺二鹽酸鹽、去甲苯福林鹽酸鹽、1，2-二氨基丙烷、5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基-胺、3-異丙氧基丙基胺、二苯基硼酸、乙醇胺酯、2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇、四氫糠基胺、5-甲基色胺鹽酸鹽、3，3-二苯基丙基胺、1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮、2-(2-氨基氨基乙基)-1-甲基吡咯烷、2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯化水合物、2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽、L-肌肽、(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇、2-(1-環(huán)己烯基)乙胺、4-(三氟甲基)芐胺、2，5-二氯戊胺鹽酸鹽、(+/-)-4-氨基-3-羥丁酸、N，N-二甲基1，2-乙二胺、3，3-二甲基丁胺、1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽、氨基甲基苯甲酸、氨基羥基甲基丙二醇、2-(氨基乙基)吡啶、氨基丁醇、金剛胺、氨基己酸、N-芐基乙醇胺、乙基-6-氨基丁酸鹽鹽酸鹽、1，2-乙二胺、或2-環(huán)己-1-烯基乙胺，R3為甲基4-碘丁酸酯、1-溴-3-苯丙烷、肉桂基溴化物、2-氯乙基膦酸、乙基2-(2-氯乙酰胺基)-4-噻唑-醋酸鹽、4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽、(2-溴乙基)三甲基溴化銨、4-氯苯基2-溴乙醚、N-(3-溴丙基)苯鄰二甲酰亞胺，異氰酸2-氯乙基酯、2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺、3-氯-2-羥丙基甲基丙烯酸酯、2-溴基-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺、3-(2-溴乙基)吲哚、5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇、2-氯乙基乙基硫化物、3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺、L-1-對-甲苯磺酰基氨基-2-苯乙基氯甲基酮、2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)、乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯、2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇、(3-氯丙基)三甲氧基硅烷、氯霉素、4-(氯甲基)苯甲酸、溴乙胺鹽酸鹽、表溴醇、碘戊烷、或苯甲基溴化物。
9.根據(jù)權利要求1的化合物，選自6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(4-嗎啉基)-乙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基)-腺嘌呤、和6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(乙基-2-丙烯酸酯)-甲基-腺嘌呤。
10.一種藥物組合物，含有權利要求1的化合物和至少一種藥學上可接受的載體或賦形劑的組合。
11.一種治療與表達腺嘌呤DNA甲基轉移酶的致病菌感染相關的疾病或失調的方法，該方法包括給需要這種治療的患者服用治療上有效量的權利要求1的化合物。
12.根據(jù)權利要求11的方法，其中與該疾病或失調相關的感染致病菌為金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、釀膿鏈球菌、無乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒桿菌、產氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風梭菌、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、銅綠假單胞菌、侵肺軍團菌、大腸埃希氏菌、鼠疫耶爾森氏菌、流感嗜血桿菌、幽門螺桿菌、胚胎彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、蒼白密螺旋體、衣氏放線菌、普氏立克次氏體、立氏立克次氏體、砂眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、流產布魯氏菌或根癌土壤桿菌。
13.下式的化合物或其藥學上可接受的鹽， 其中Ra、Rb和Rc相同或不同，并且各自為氫、鹵素、硝基、亞硝基、低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，這里每個環(huán)烷基基團具有3-7個環(huán)原子，其中該環(huán)烷基的環(huán)原子中至多兩個是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，并且其中每個烷基、芳基或環(huán)烷基基團均可被鹵素、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，或者其中Ra，Rb和Rc可被芳族的、脂肪族的、雜芳族的、雜脂肪族的環(huán)結構或其取代方式連接，并且其中Ar1和Ar2可以相同或不同，并且各自為芳基或在一個或多個位置以鹵素、硝基、亞硝基、低級烷基、芳基或取代的芳基、低級烷氧基、低級烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基取代的芳基，其中每個環(huán)烷基基團具有3-7個環(huán)原子，其中該環(huán)中至多兩個是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，且其中每個烷基、芳基或環(huán)烷基基團均可被鹵素、低級烷基或低級烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，且其中鍵1和鍵2各自為單鍵或雙鍵。
14.根據(jù)權利要求14的化合物，選自二-(對氟苯基)硼酸8-羥基喹啉酯、二-(對-氯苯基)硼酸8-羥基喹啉酯、二苯基硼酸8-羥基喹啉酯、二-(對-氟苯基)硼酸乙醇胺酯、和二-(對-氯苯基)硼酸乙醇胺酯。
15.一種藥物組合物，含有權利要求1的化合物和至少一種藥學上可接受的載體或賦形劑的組合。
16.一種治療與表達腺嘌呤DNA甲基轉移酶的致病菌感染相關的疾病或失調的方法，該方法包括給需要這種治療的患者服用治療上有效量的權利要求1的化合物。
17.根據(jù)權利要求11的方法，其中與該疾病或失調相關的感染致病菌為金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、釀膿鏈球菌、無乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒桿菌、產氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風梭菌、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、銅綠假單胞菌、侵肺軍團菌、大腸埃希氏菌、鼠疫耶爾森氏菌、流感嗜血桿菌、幽門螺桿菌、胚胎彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、蒼白密螺旋體、衣氏放線菌、普氏立克次氏體、立氏立克次氏體、砂眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、流產布魯氏菌或根癌土壤桿菌。
18.一種組合庫，含有權利要求1的多種化合物。
19.一種組合庫，含有權利要求13的多種化合物。
20.一種封裝的藥物組合物，含有裝在容器中的權利要求10的藥物組合物和使用該組合物治療患者中與致病菌感染相關的疾病或失調的說明書。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類廣譜抗生素,它們是細菌性腺嘌呤DNA甲基轉移酶的抑制劑。
文檔編號A61K31/7076GK1370170SQ00809844
公開日2002年9月18日 申請日期2000年5月25日 優(yōu)先權日1999年5月25日
發(fā)明者斯蒂芬·J·本科維克, 露西爾·夏皮羅, 斯蒂芬·J·貝克, 達夫尼·C·沃農, 馬克·沃爾 申請人:賓夕法尼亞州研究基金會