專利名稱：果糖二磷酸鎂在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及果糖二磷酸鎂的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
果糖二磷酸鎂包括果糖二磷酸一鎂和果糖二磷酸二鎂。中國(guó)專利CN95100068.3公開了果糖二磷酸一鎂物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)式為 日本專利JP8-81377公開了果糖二磷酸二鎂物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)式為 以上兩物質(zhì)均可以通過以蔗糖和磷酸鹽為底物用酵母發(fā)酵，加鋇鹽生成果糖-1,6-二磷酸鋇，除鋇加鎂鹽(溶液經(jīng)凍干或結(jié)晶)而制得；也可用果糖-1,6-二磷酸鈉通過陽(yáng)離子交換柱得到果糖-1,6-二磷酸(FDPH4)，加入堿式碳酸鎂反應(yīng)，過濾，濾液經(jīng)凍干或結(jié)晶后制得。
已知果糖二磷酸鎂可以用作治療心肌缺血性疾病如心肌梗塞、冠心病等的活性組分。
本發(fā)明的目的在于提供果糖二磷酸鎂的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
本發(fā)明主要涉及果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥中的應(yīng)用。
涉及果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病(老年性癡呆)的藥中的應(yīng)用。
涉及果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防腦缺血性疾病藥中的應(yīng)用。
涉及果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防癲癇病的藥中的應(yīng)用。
涉及果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防腦損傷疾病的藥中的應(yīng)用。
發(fā)明人經(jīng)過探索性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，果糖二磷酸鎂10～150mg/kg就能治療和緩解阿茨海默病、腦缺血性疾病、癲癇、腦損傷等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
果糖二磷酸鎂的化學(xué)結(jié)構(gòu)包括兩部分，即1,6-二磷酸果糖和鎂離子。1,6-二磷酸果糖可提供能量，改善大腦由于缺血缺氧所造成的ATP不足；鎂離子有鈣拮抗作用，阻止鈣內(nèi)流，緩解細(xì)胞內(nèi)鈣超載，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣失衡，還可舒張腦血管。
1,6-二磷酸果糖(FDP)是重要的糖代謝產(chǎn)物，同時(shí)也是糖代謝的重要底物，并且在許多代謝途徑中起重要的調(diào)節(jié)作用。其中之一是對(duì)糖酵解的調(diào)節(jié)。外源性FDP可避開葡萄糖激酶和因酸性環(huán)境而受到抑制的PFK，直接刺激丙酮酸激酶，恢復(fù)已被阻斷的旁路代謝。由于未經(jīng)耗能的兩步磷酸化過程，F(xiàn)DP能產(chǎn)生比葡萄糖酵解多1倍的ATP。此外，F(xiàn)DP還可抑制中性粒細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基，減輕其組織損傷作用。
鎂離子是人體繼Na+、K+、Ca2+之后的第四位陽(yáng)離子。在細(xì)胞內(nèi)其含量?jī)H次于K+。人體33％的鎂存在于細(xì)胞內(nèi)，其余大部分以磷酸鎂或碳酸鎂形式沉積在骨骼，僅大約1％位于細(xì)胞外液。鎂能催化或激活325種酶系統(tǒng)；是體內(nèi)ATP產(chǎn)生和發(fā)揮作用所必需的陽(yáng)離子；參與體內(nèi)氧化磷酸化過程、DNA及RNA的產(chǎn)生、蛋白質(zhì)的合成以及所有膜的結(jié)構(gòu)；鎂及Mg2+-ATP螯合物對(duì)糖酵解具有調(diào)節(jié)作用；鎂是天然的生理性Ca2+拮抗劑；還可維持細(xì)胞內(nèi)K+的穩(wěn)定。
基于以上機(jī)理，果糖二磷酸鎂能很好地改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病[主要包括阿爾茨海默病(老年性癡呆)、腦缺血性疾病、癲癇、腦損傷等]的缺血缺氧狀態(tài)，增加能量供給，補(bǔ)充鎂離子，拮抗鈣超載所引起的神經(jīng)毒性作用。因此，可用于上述疾病的治療或輔助治療。
本發(fā)明用果糖二磷酸鎂制成的藥品可以是針劑和口服制劑，還包括含有藥用添加劑和/或賦形劑的果糖二磷酸鎂復(fù)合制劑。在這些制劑中，果糖二磷酸鎂的用量占0.1％～100％(重量)。
上述制劑還可含有其他藥用有效成分，它們可以按照已有的方法，用一般的方式，并加入添加劑和/或賦形劑制備上述藥用制劑。
以下實(shí)施例將對(duì)果糖二磷酸鎂的藥理試驗(yàn)及結(jié)果等作進(jìn)一步說(shuō)明，但對(duì)本發(fā)明沒有限制。
實(shí)施例1取NIH小鼠60只，隨機(jī)分為5組果糖二磷酸鎂高(30mg/kg)、中(15mg/kg)、低(7.5mg/kg)劑量組，雙益平組，生理鹽水組。給藥方法ip,qd，持續(xù)1個(gè)月。阿爾茨海默病動(dòng)物模型采用多重復(fù)制模型。測(cè)試指標(biāo)學(xué)習(xí)記憶能力、腦內(nèi)βAP含量。表1和表2結(jié)果顯示，果糖二磷酸鎂能顯著改善模型鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，降低模型鼠腦內(nèi)βAP含量，推測(cè)可改善細(xì)胞內(nèi)鈣超載。
表1果糖二磷酸鎂對(duì)阿爾茨海默病模型鼠學(xué)習(xí)記憶力的影響(X±SD)
表中，*表示與模型對(duì)照組比較P＜0.05或0.01如表1所示，大鼠Morris水迷宮潛伏期，實(shí)驗(yàn)各組均較模型對(duì)照組明顯下降(P＜0.05,P＜0.01)。提示FDP-Mg對(duì)學(xué)習(xí)記憶力有改善作用。
表2 各組小鼠大腦β-AP陽(yáng)性樣細(xì)胞數(shù)及平均光密度(OD值)的變化(X±SD)
表中*表示與正常對(duì)照組比較P＜0.05或0.01；**表示與正常對(duì)照組比較P＜0.01；△表示與生理鹽水組比較P＜0.05；△△表示與生理鹽水組比較P＜0.01。
如表2所示，海馬CA1區(qū)和額葉皮質(zhì)β-AP陽(yáng)性樣細(xì)胞數(shù)、β-AP免疫組化著色平均光密度(OD)，生理鹽水組明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.001)；FDP-Mg組低于生理鹽水組(P＜0.05)，雙益平組與生理鹽水組差異不明顯(P＞0.05)。提示，F(xiàn)DP-Mg能減少β-AP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和間質(zhì)中β-AP含量，雙益平作用不明顯。
實(shí)施例2采用大鼠四腦動(dòng)脈結(jié)扎缺血模型。戊巴比妥鈉(40mg/kg,ip)麻醉動(dòng)物，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，在其下置線而不結(jié)扎。在頸背部作正中橫切口，分離椎旁肌，暴露第一椎骨翼孔，熱凝。接著縫皮回籠，自由飲水24h后，在大鼠清醒狀態(tài)下用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，按鼠翻正反射消失，自主呼吸存在為模型成功標(biāo)志。缺血40min后，放開頸動(dòng)脈夾，使再灌注1h。結(jié)果見表3。
表3果糖二磷酸鎂對(duì)腦缺血再灌注大鼠的影響(x±s)
注各組與缺血再灌注組比較b P＜0.05,c P＜0.01；*dw=干重；△pro=蛋白質(zhì)。
結(jié)果表明，缺血再灌注組腦水分、MDH含量明顯增加，腦組織LDH含量減少(P＜0.01)；尼莫地平和果糖二磷酸鎂能使上述變化向正常方向逆轉(zhuǎn)，降低腦水分(P＜0.05)及MDA含量，提高LDH含量(P＜0.01)。缺血再灌注組腦組織鈣離子含量升高非常顯著(P＜0.01)，尼莫地平和果糖二磷酸鎂能使鈣含量明顯下降(P＜0.01)。
實(shí)施例3采用成年Wistar大鼠，體重(200～250)g，雌雄不拘，用2.5％戊巴比妥鈉(40mg/kg,ip)麻醉。分離一側(cè)坐骨神經(jīng)，以37℃～38℃液體石蠟棉條浸潤(rùn)以備刺激用，用腦立體定位儀固定大鼠頭部，以前囟后2.5mm，中線旁開2.5mm為中心，去除顱骨5mm×5mm，保留硬腦膜，在此區(qū)貼敷浸有濃度為5×10-4mol/L的馬桑內(nèi)酯(CL)濾紙(2mm×2mm)，造成大鼠急性致癇模型。借助腦立體定位儀將不銹鋼注射管插入側(cè)腦室(前囟后1.5mm，中線旁開1.5mm，距顱骨表面深3.5～4mm)，見腦脊液流出，確定已插入腦室。向側(cè)腦室注射果糖二磷酸鎂20μg/10μL，注藥時(shí)間30～40s。表4是側(cè)腦室注射果糖二磷酸鎂對(duì)CL致癇大鼠皮層誘發(fā)電位(CEP)振幅的影響(x±s)。
表4 側(cè)腦室注射果糖二磷酸鎂對(duì)CL致癇大鼠皮層誘發(fā)電位(CEP)振幅的影響(x±s)
表中**表示與對(duì)照值比較，P＜0.01。
結(jié)果顯示，應(yīng)用CL10min左右，向側(cè)腦室注射果糖二磷酸鎂(n=7),5min左右CEP振幅明顯降低，15min時(shí)抑制作用最明顯，其抑制作用可持續(xù)30min以上。
實(shí)施例4健康SD大鼠30只，雌雄各半，體重180～220g，隨機(jī)分為對(duì)照組、創(chuàng)傷組及創(chuàng)傷治療組，各組10只。動(dòng)物模型制作按自由落體致傷原理，制成一撞擊裝置，由致傷墊、擊錘及套管三部分組成。2.5％戊巴比妥鈉(40mg/kg,ip)麻醉，將動(dòng)物固定于手術(shù)臺(tái)上，矢狀切開頭皮，暴露右側(cè)頂骨，在人字縫前方2mm，中線旁右側(cè)2mm處用臺(tái)式牙科鉆鉆一小孔，用血管鉗擴(kuò)大為直徑5mm骨窗，保持硬腦膜完整。將致傷墊置于右側(cè)頂骨骨窗硬膜外，用重為20g的擊錘自30cm高處落下，沖擊致傷墊造成右頂葉局部腦挫傷。創(chuàng)傷治療組則在傷后即刻腹腔注射果糖二磷酸鎂(150mg/kg體重)。正常對(duì)照組僅切開頭皮，開同樣大小骨窗而不造成腦挫傷。各組動(dòng)物待麻醉清醒后照常供食供水，24h后處死。線粒體的提取按常規(guī)方法進(jìn)行并經(jīng)透射電鏡證實(shí)。
線粒體MDA的測(cè)定采用戊巴比妥酸(TBA)法，SOD的測(cè)定采用黃嘌呤氧化法。所有線粒體蛋白定量均按Lowry法測(cè)定。
線粒體Ca2+、Mg2+含量的測(cè)定取線粒體懸液1ml，加1mol/L HNO32ml，沸水浴加熱，冷卻后再轉(zhuǎn)入5ml容量瓶中，用8mmol/L Lacl3液稀釋至刻度，然后用火焰原子吸收光譜儀測(cè)定線粒體Ca2+、Mg2+含量。
各組大鼠腦線粒體MDA含量及SOD活性見表5，顱腦刨傷后24h線粒體MDA水平增加，SOD活性降低。治療組與創(chuàng)傷組相比，治療組SOD活性明顯升高，MDA含量則明顯降低(P＜0.05)。
表5 各組大鼠腦線粒體MDA、SOD水平
表中，*表示與對(duì)照組比較P＜0.05，與創(chuàng)傷組比較#P＜0.05；1表示蛋白質(zhì)；2為亞硝酸鹽單位。
各組線粒體Ca2+、Mg2+含量及Ca2+/Mg2+比值見表6。
表6 各組大鼠腦線粒體Ca2+、Mg2+含量及Ca2+/Mg2+比值
表中，*表示與對(duì)照組比較P＜0.05，與創(chuàng)傷組比較#P＜0.05。
顱腦創(chuàng)傷后24h創(chuàng)傷組線粒體Ca2+含量升高，Mg2+含量降低(P＜0.05)，而果糖二磷酸鎂治療組雖然也有相同的變化趨勢(shì)，但鈣超載及鎂下降的程度均明顯減輕(P＜0.05)，從Ca2+/Mg2+比值結(jié)果更能明確地反映這種變化。摘要本發(fā)明提供一種果糖二磷酸鎂(FDP-Mg)的新用途，即FDP-Mg在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用，主要包括治療阿爾茨海默病(老年性癡呆)、腦缺血性疾病、癲癇、腦損傷等。FDP-Mg可用作上述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療藥或輔助治療藥。
權(quán)利要求
1.果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥中的應(yīng)用。
2.果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病(老年性癡呆)的藥中的應(yīng)用。
3.果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防腦缺血性疾病藥中的應(yīng)用。
4.果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防癲癇病的藥中的應(yīng)用。
5.果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防腦損傷疾病的藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及果糖二磷酸鎂的新用途,涉及果糖二磷酸鎂作為制備治療或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥中的應(yīng)用,作為制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病(老年性癡呆)的藥中的應(yīng)用;作為制備治療或預(yù)防腦缺血性疾病藥中的應(yīng)用;作為制備治療或預(yù)防癲癇病的藥中的應(yīng)用;作為制備治療或預(yù)防腦損傷疾病的藥中的應(yīng)用等。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1309968SQ01107519
公開日2001年8月29日 申請(qǐng)日期2001年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月13日
發(fā)明者羅煥敏, 翁文, 高勤, 章佩芬 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)