專利名稱：：抗Fcα受體(CD89)的人單克隆抗體的制作方法相關(guān)申請本申請要求于2001年2月12日申請的美國臨時申請第60/268,075號和于2001年11月5日申請的美國臨時申請第60/338,956號的優(yōu)先權(quán)，所述美國臨時申請通過引用全部結(jié)合到本文中。
背景技術(shù)：
：免疫球蛋白Fc部分的受體在觸發(fā)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和多形核細(xì)胞的許多保護(hù)性功能方面是重要的。已經(jīng)廣泛地研究了這些細(xì)胞上的IgG受體(Fcγ受體或FcγR)，并且產(chǎn)生了針對這些受體的單克隆抗體，表明所述單克隆抗體在治療上是有效的(參見例如歐洲專利第255249號，題為″MonoclonalAntibodiestoFcReceptorforImmunoglobulinGonHumanMononuclearPhagocytes″)。IgA受體(Fcα受體或CD89)也能夠促進(jìn)效應(yīng)細(xì)胞功能。配體與CD89結(jié)合，在白細(xì)胞和帶有CD89的細(xì)胞系中觸發(fā)吞噬作用和抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。CD89也可以與效應(yīng)細(xì)胞上的IgG受體協(xié)作，增強靶細(xì)胞的吞噬作用。CD89是一種與人抗體中豐度最高的Ig-IgA的Fc部分結(jié)合的受體(Kerr，M.A.1990，Biochem.J.271285-296)。CD89主要在包括多形核白細(xì)胞(PMN)、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞上組成型表達(dá)。(Morton，H.C.等，1996CriticalReviewsinImmunology16423)。CD89在淋巴細(xì)胞一個亞群(Morton，H.C.等，1996CriticalReviewsinImmunology16423)和腎小球血管系膜細(xì)胞上的表達(dá)也有報道(Gomez-Guerrero，C.等，1996J.Immunol.1564369-4376)。此外，CD89在單核細(xì)胞和PMN上的表達(dá)被TNF-α(Gesl，A.等，1994Scad.J.Immunol.39151-156；Hostoffer，R.W.等，1994，TheJ.InfectiousDiseases17082-87)、IL-1、GM-CSF、LPS或佛波醇酯(ShenL.等，J.Immunol.1524080-4086；Schiller，C.A.等，1994，Immunology，81598-604)增強，而IFN-γ和TGF-β1降低FcαRI的表達(dá)(Reterink，T.J.F.等，1996，Clin.Exp.Immunol.103161-166)。人CD89的α-鏈?zhǔn)歉叨忍腔?型跨膜分子，屬于Ig超基因家族，該超基因家族也包括IgG和IgE的受體。位于19號染色體的一個基因編碼幾種可變剪接同種型的FcαRIα鏈(55-110kDa；Morton，H.C.等，1996CriticalReviewsinImmunology16423)。已表明髓細(xì)胞CD89與FcRγ鏈締合，有提示FcRγ鏈在CD89信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用(Morton，H.C.等1995，J.Biol.Chem.27029781；Pfefferkorn，L.C.等1995，J.Immunol.，1533228-3236，Saito，K.等，1995，J.AllergyClin.Immunol.961152)。CD89既與抗原復(fù)合型也與單體型IgA1和IgA2結(jié)合(Mazangera，R.L.等，1990Biochem.J.272159-165)，這與所述受體在體內(nèi)以與FcγR相同的方式被單體IgA飽和，而FcεRI分別被IgG和IgE飽和相一致。髓細(xì)胞樣效應(yīng)細(xì)胞上CD89被多聚IgA、IgA免疫復(fù)合物或所述配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域內(nèi)或之外的表位特異性的mAb交聯(lián)，刺激脫顆粒、釋放超氧化物、分泌炎性細(xì)胞因子、內(nèi)吞和吞噬作用(Patty，C.，A.Herbelin，A.Lihuen，J.F.Bach和R.C.Monteiro.1995Immunology.861-5；Stewart，W.W.，R.L.MazYegera，L.Shen和M.A.Kerr.1994J.LeucocyteBiology.56481-487；Stewart，W.W.和M.A.Kerr.1990.Immunology.71328-334；Shen，L.1992.J.LeukocyteBiology.51373-378.)。通過CD89觸發(fā)的這些生理反應(yīng)可能在粘膜表面的第一道體液防線中是重要的(Morton，H.C.，M.vanEgmond和J.G.J.vandeWinkel.1996CriticalReviewsinImmunology.16423)。發(fā)明概述本發(fā)明提供利用細(xì)胞毒性觸發(fā)分子-人CD89的治療能力的改良免疫治療藥。特別是，本發(fā)明提供與人CD89結(jié)合的分離的人單克隆抗體、以及含有這種抗體的治療組合物、雙特異性抗體和分子復(fù)合物。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述抗體不被IgA抑制，例如它在與IgA結(jié)合位點不同的位點與CD89結(jié)合。在另一實施方案中，所述抗體抑制IgA與CD89的結(jié)合，例如它在IgA結(jié)合位點內(nèi)或附近的位點與CD89結(jié)合。在本發(fā)明的另一具體實施方案中，所述抗體具有在體內(nèi)不激活補體(例如不誘導(dǎo)靶細(xì)胞的補體介導(dǎo)裂解)的附加的益處，這減小了治療期間的毒副作用。在再一實施方案中，所述抗體觸發(fā)至少一種Fc受體介導(dǎo)的效應(yīng)細(xì)胞活性，例如吞噬作用或超氧化物陰離子的分泌。在本發(fā)明的另一具體實施方案中，所述抗體是IgG1(例如IgG1k)抗體，例如具有IgG1重鏈和κ輕鏈的抗體。本發(fā)明也包括的其它抗體同種型包括IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgD和IgE。所述抗體可以是完整抗體或所述抗體的抗原結(jié)合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fv和鏈Fv片段。在本發(fā)明的另一具體實施方案中，所述抗體由人IgG重鏈和人κ輕鏈核酸編碼，所述人IgG重鏈和人κ輕鏈核酸在其可變區(qū)中分別包含SEQIDNO1或5和SEQIDNO3或7中所示的核苷酸序列及其保守序列修飾。在另一實施方案中，所述人抗體包括分別包含SEQIDNO2或6和SEQIDNO4或8中所示的氨基酸序列及其保守序列修飾的IgG重鏈可變區(qū)和κ輕鏈可變區(qū)。本發(fā)明的具體抗體包括例如人單克隆抗體(mAb)14.1、7.4和8.2(也分別稱為14A8、7F12和8D2)、或者結(jié)合于與抗體14.1、7.4或8.2相同的表位(例如與其競爭)或者具有與抗體14.1、7.4或8.2相同的功能結(jié)合特性的抗體。本發(fā)明的人抗體可以在宿主細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞或淋巴細(xì)胞)中重組生產(chǎn)，或者直接從表達(dá)所述抗體的雜交瘤(即它包括從其基因組中包含編碼所述抗體的人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得的、與無限增殖化細(xì)胞融合的B細(xì)胞)中獲得。在本發(fā)明的另一具體實施方案中，本發(fā)明的人抗體的特征可以是以下特性中的一個或多個(a)對人CD89有結(jié)合特異性；(b)與人CD89的結(jié)合平衡締合常數(shù)(Ka)為至少約107M-1；(c)與人CD89的解離常數(shù)(Kd)為約10-8S-1或更低；(c)在體內(nèi)與CD89結(jié)合時不激活補體；(d)在不抑制人IgA結(jié)合的位點上與人CD89結(jié)合；(e)一條包含SEQIDNO2或6中所示氨基酸序列及其保守序列修飾的重鏈、和一條包含SEQIDNO4或8中所示氨基酸序列及其保守序列修飾的輕鏈。另一方面，本發(fā)明提供編碼所述人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的核酸分子。本發(fā)明也包括包含編碼本發(fā)明抗體的核酸的重組表達(dá)載體以及用這種載體轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞，還包括通過培養(yǎng)這種宿主細(xì)胞制備本發(fā)明抗體的方法，例如包含編碼mAb14.1、7.4或8.2的重鏈和輕鏈可變區(qū)和恒定區(qū)的核苷酸序列的表達(dá)載體。再一方面，本發(fā)明提供得自轉(zhuǎn)基因非人類動物的分離的B細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)基因非人類動物例如表達(dá)本發(fā)明的人抗CD89抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠。優(yōu)選所述分離的B細(xì)胞得自已經(jīng)用CD89抗原純化或富集制備物和/或表達(dá)CD89的細(xì)胞免疫的轉(zhuǎn)基因非人類動物，例如轉(zhuǎn)基因小鼠。優(yōu)選所述轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠具有包含編碼完整的本發(fā)明抗體或其一部分的人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組。然后將所述分離的B細(xì)胞無限增殖化，以提供人抗CD89抗體源(例如雜交瘤)。因此，本發(fā)明也提供能夠產(chǎn)生與CD89特異性結(jié)合的本發(fā)明的人單克隆抗體的雜交瘤。在一個實施方案中，所述雜交瘤包括從其基因組中包含編碼完整的本發(fā)明抗體或其一部分的人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得的、與無限增殖化細(xì)胞融合的B細(xì)胞。具體的本發(fā)明雜交瘤包括14.1、7.4和8.2。再一方面，本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)基因非人類動物，如轉(zhuǎn)基因小鼠(這里也稱為″HuMab″)，所述轉(zhuǎn)基因非人類動物表達(dá)與CD89特異性結(jié)合的人單克隆抗體。在一個具體實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因非人類動物是其基因組中包含編碼完整的本發(fā)明抗體或其一部分的人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠?？梢杂肅D89抗原的純化或富集制備物和/或表達(dá)CD89的細(xì)胞免疫所述轉(zhuǎn)基因非人類動物。優(yōu)選所述轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠能夠通過經(jīng)過V-D-J重組和同種型轉(zhuǎn)換，產(chǎn)生人多種同種型的抗CD89單克隆抗體(例如IgG、IgA和/或IgM)。同種型轉(zhuǎn)換可以通過例如經(jīng)典或非經(jīng)典同種型轉(zhuǎn)換而發(fā)生。另一方面，本發(fā)明提供生產(chǎn)與CD89特異性反應(yīng)的人單克隆抗體的方法。在一個實施方案中，所述方法包括用CD89抗原的純化或富集制備物和/或表達(dá)CD89的細(xì)胞，免疫其基因組中包含編碼完整的本發(fā)明抗體或其一部分的人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠。然后獲得所述動物的B細(xì)胞(例如脾B細(xì)胞)，將其與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成分泌抗CD89的人單克隆抗體的無限增殖雜交瘤細(xì)胞。再一方面，本發(fā)明的人抗CD89抗體用另一功能性分子如另一種肽或蛋白質(zhì)(例如抗體或抗體片段，例如Fab’片段)衍生化、連接或與其共表達(dá)。例如，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合部分可以與一種或多種其它分子實體功能性連接(例如通過化學(xué)偶聯(lián)、基因融合、非共價締合或其它方式)，所述其它分子實體例如另一種抗體(例如以產(chǎn)生雙特異性或多特異性抗體)、細(xì)胞毒素(cytoxin)、細(xì)胞配體或抗原。本發(fā)明的雙特異性和多特異性抗體可用于將表達(dá)CD89的細(xì)胞如效應(yīng)細(xì)胞靶向所選抗原，例如腫瘤細(xì)胞、產(chǎn)生自身抗體的細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞或任何其它不想要的細(xì)胞上的表位，從而引起所述細(xì)胞或者與所述抗原相關(guān)的病原體的細(xì)胞溶解或吞噬。其它靶抗原包括可溶性抗原或抗原復(fù)合物以及微生物，例如病毒、寄生蟲和細(xì)菌。本發(fā)明的多特異性分子也包括三特異性、四特異性和其它的多特異性分子。在一個實施方案中，所述多特異性分子包括抗增強因子(EF)部分，例如與涉及細(xì)胞毒性活性的表面蛋白結(jié)合的分子。因此，本發(fā)明包括與CD89表達(dá)細(xì)胞結(jié)合并且將其它分子靶向所述細(xì)胞、或者與CD89結(jié)合及與其它分子或細(xì)胞結(jié)合的、種類繁多的抗體綴合物、雙特異性和多特異性分子以及融合蛋白。另一方面，本發(fā)明提供包含與治療部分連接的本發(fā)明的人抗CD89抗體的綴合物，所述治療部分例如細(xì)胞毒性藥、酶活性毒素或其片段、放射性同位素或小分子抗腫瘤藥?；蛘?，本發(fā)明的人抗體可以與這樣的治療和細(xì)胞毒性藥共同給予，但不與其連接。它們可以與這類藥物同時共同給予(例如在一種組合物中給予或者分別給予)，或者它們可以在給予這類藥物之前或之后給予。這類藥物可以包括細(xì)胞因子，例如G-CSF、GM-CSF、IL-2或IFN-α；和化療藥，例如多柔比星(阿霉素)、順鉑、硫酸博來霉素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥和環(huán)磷酰胺羥基脲。本發(fā)明的人抗體也可以結(jié)合放射治療給予。另一方面，本發(fā)明提供包含藥學(xué)上可接受的載體和至少一種與CD89特異性結(jié)合的本發(fā)明的人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的組合物，例如藥用和診斷組合物/試劑盒。在一個實施方案中，所述組合物包含所述人抗體或其抗原結(jié)合部分的組合，優(yōu)選每種所述人抗體或其抗原結(jié)合部分與不同的表位結(jié)合。包含至少一種本發(fā)明的人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分和至少一種本發(fā)明的雙特異性或多特異性分子的組合的組合物如藥用組合物，也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。對于在體內(nèi)治療和預(yù)防與CD89表達(dá)(例如過量表達(dá))相關(guān)的疾病中的應(yīng)用，可以將本發(fā)明的人抗體，用任何合適的給藥途徑，例如采用注射和本領(lǐng)域已知的用于基于抗體的臨床制品的其它給藥途徑，以治療有效量給予患者(例如人類受治療者)。本發(fā)明的人抗體也可以用來調(diào)節(jié)效應(yīng)細(xì)胞上的CD89水平，例如通過覆蓋和消除所述細(xì)胞表面上的受體來進(jìn)行調(diào)節(jié)?？笷c受體的混合物也可以用于此目的。在另一實施方案中，阻斷或抑制IgA與CD89結(jié)合的本發(fā)明的人抗體，可用于治療特征為循環(huán)的含IgA復(fù)合物和/或IgA-免疫復(fù)合物沉淀的疾病，例如慢性肝炎、Henoch-Schonlein紫癜(HSP)、IgA性腎病(Berger病)或IgA性腎小球性腎炎?？梢詫⒈景l(fā)明的人抗體給予患有這種疾病的患者，以在體內(nèi)抑制或負(fù)調(diào)節(jié)內(nèi)源IgA與CD89的結(jié)合?；谒鼈兗冉Y(jié)合帶有CD89的免疫細(xì)胞、又結(jié)合特定靶細(xì)胞(即其消除可能對宿主有益的細(xì)胞)的能力，本發(fā)明的雙特異性和多特異性分子可以用于治療各種各樣的疾病。這類疾病包括但不限于自身免疫病和癌癥(例如膀胱、乳腺、結(jié)腸、腎、卵巢、睪丸、前列腺、肺、腦、直腸、胰腺、肝、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、頭頸部、腎、骨、血液和淋巴系統(tǒng))、病原體感染例如病毒(例如HIV、HTLV和FELV)、原生動物(例如鼠弓形體(Toxoplasmagondii))、真菌(例如白色念珠菌(Candidaalbicans))和細(xì)菌(例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、溶血性鏈球菌(Streptococcushemolyticus)和結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculsis))感染。本發(fā)明的另一方面提供通過包括得自患病生物體、受感染細(xì)胞、患病生物體的基因產(chǎn)物或癌細(xì)胞的抗原、可供抵抗疾病和癌癥的疫苗接種用的分子。為此，本發(fā)明提供組合物，所述組合物是使有用的有效抗原與將所述抗原靶向免疫系統(tǒng)的結(jié)合決定簇連接的結(jié)合劑。在一個實施方案中，所述患者另外用化療藥、放射或調(diào)節(jié)如增強或抑制Fc受體如Fcα受體或Fcγ受體的表達(dá)或活性的因子如細(xì)胞因子來治療。在治療期間給藥用的典型的細(xì)胞因子包括粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-γ(IFN-γ)和腫瘤壞死因子(TNF)。典型的治療藥其中包括抗腫瘤藥如多柔比星(阿霉素)、順鉑硫酸博來霉素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥和環(huán)磷酰胺羥基脲。再一方面，本發(fā)明提供一種在體外或體內(nèi)檢測樣品中CD89存在的方法，例如用于診斷CD89相關(guān)疾病的方法。在一個實施方案中，這通過使受試樣品、任選地和對照樣品，與本發(fā)明的人單克隆抗體(或其抗原結(jié)合部分)在允許所述抗體和CD89之間形成復(fù)合物的條件下接觸來實現(xiàn)。然后檢測復(fù)合物的形成(例如運用ELISA)。當(dāng)使用對照樣品與受試樣品時，在兩種樣品中檢測到復(fù)合物，并且在所述樣品之間復(fù)合物形成的任何統(tǒng)計學(xué)顯著性差異，指示受試樣品中存在CD89。根據(jù)以下詳述和實施例，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點是顯而易見的，所述實施例不應(yīng)解釋為是限制性的。本申請中引用的所有參考文獻(xiàn)、專利和已公開的專利申請的內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。附圖簡述圖1顯示了得自HuMAb14.1的VH區(qū)的核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列。也描繪了CDR區(qū)。用于HuMAb14.1VH區(qū)的種系區(qū)段包括VH3-30.3、D6-13和JH4b。圖2顯示了得自HuMAb14.1的VK區(qū)的核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列。也描繪了CDR區(qū)。用于HuMAb14.1VK區(qū)的種系區(qū)段包括VKL18和JK3。圖3顯示了得自HuMAb8D2的VH區(qū)的核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列。也描繪了CDR區(qū)。用于HuMAb8D2VH區(qū)的種系區(qū)段包括VH3-30.3、D7-27和JH3b。圖4顯示了得自HuMAb8D2的VK區(qū)的核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列。也描繪了CDR區(qū)。用于HuMAb8D2VK區(qū)的種系區(qū)段包括VKA27和JK2。發(fā)明詳述本發(fā)明提供與人IgA受體(CD89)上存在的表位結(jié)合的分離的人單克隆抗體，包括其抗原結(jié)合部分。在一個實施方案中，所述人抗體在能夠通過經(jīng)過V-D-J重組和同種型轉(zhuǎn)換而產(chǎn)生多種同種型的人抗CD89單克隆抗體(例如IgG、IgA和/或IgE)的轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生。因此，本發(fā)明的特定方面不僅包括抗體、抗體片段及其藥用組合物，而且還包括產(chǎn)生單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因非人類動物、B細(xì)胞和雜交瘤。本發(fā)明也包括用本發(fā)明的抗體在體外或者體內(nèi)檢測表達(dá)CD89的細(xì)胞或者在表達(dá)CD89的細(xì)胞中觸發(fā)效應(yīng)子功能(例如通過用包含本發(fā)明抗CD89抗體和針對靶細(xì)胞上抗原的另一種抗體的雙特異性抗體來交聯(lián)CD89分子)的方法。也提供用本發(fā)明的抗體阻斷或抑制IgA與CD89結(jié)合的方法，所述方法可用于治療特征為異常內(nèi)源性IgA的疾病，例如特征為循環(huán)的含IgA復(fù)合物和/或IgA免疫復(fù)合物沉淀的疾病，例如慢性肝炎、Henoch-Schonlein紫癜(HSP)、IgA性腎病(Berger病)或IgA性腎小球性腎炎。為了更好地理解本發(fā)明，首先定義某些術(shù)語。其它定義在詳述中敘述。此中所用的術(shù)語“CD89”、“人IgA受體”和“Fcα受體”(FcαRI)可互換使用，意指包括位于19號染色體上的一個α基因(FcαRI)的基因產(chǎn)物。已知該基因編碼55-110kDa的幾種可變剪接的跨膜同種型。FcαRI(CD89)在單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞上組成型表達(dá)，但不在非效應(yīng)細(xì)胞群體上組成型表達(dá)。FcαRI對IgA1和IgA2有中等親和力(≈5×107M-1)，它在暴露于細(xì)胞因子如G-CSF或GM-CSF后增加(Morton，H.C.等(1996)CriticalReviewsinImmunology16423-440)。FcαRI受體是供本發(fā)明用的優(yōu)選觸發(fā)受體，因為它們(1)主要在免疫效應(yīng)細(xì)胞例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞上表達(dá)；(2)以高水平表達(dá)(例如5,000-100,000/細(xì)胞)；(3)是細(xì)胞毒性活性的介質(zhì)(例如ADCC、吞噬作用)；(4)介導(dǎo)增強的靶向抗原包括自身抗原靶向其自身的抗原呈遞。此中所用的術(shù)語“效應(yīng)細(xì)胞”是指參與免疫應(yīng)答效應(yīng)期的免疫細(xì)胞，而不是參與免疫應(yīng)答的識別期和激活期的免疫細(xì)胞。示例性的免疫細(xì)胞包括骨髓起源或淋巴起源的細(xì)胞，例如淋巴細(xì)胞(例如B細(xì)胞和T細(xì)胞，包括溶細(xì)胞性T細(xì)胞(CTL))、殺傷細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、多形核細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。某些效應(yīng)細(xì)胞表達(dá)特異性Fc受體，并且執(zhí)行特定的免疫功能。在優(yōu)選實施方案中，效應(yīng)細(xì)胞能夠誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC)，例如能夠誘導(dǎo)ADCC的嗜中性粒細(xì)胞。例如，表達(dá)FcR的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞參與特異性殺傷靶細(xì)胞并且將抗原呈遞給免疫系統(tǒng)的其它組分，或者與呈遞抗原的細(xì)胞結(jié)合。在其它實施方案中，效應(yīng)細(xì)胞可以吞噬靶抗原、靶細(xì)胞或微生物。效應(yīng)細(xì)胞上特定FcR的表達(dá)，可以受體液因子如細(xì)胞因子的調(diào)控。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)FcαRI的表達(dá)被G-CSF或GM-CSF正調(diào)節(jié)。這種增強的表達(dá)，增強了帶有FcαRI的細(xì)胞針對靶的效應(yīng)子功能。效應(yīng)細(xì)胞可以吞噬或裂解靶抗原或靶細(xì)胞?！鞍屑?xì)胞”是指受治療者(例如人或動物)體內(nèi)可以被本發(fā)明組合物(例如人單克隆抗體、雙特異性或多特異性分子)所靶向的任何不想要的細(xì)胞。在一個實施方案中，所述靶細(xì)胞是表達(dá)或過量表達(dá)CD89的細(xì)胞。在另一實施方案中，靶細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞?？梢员话邢虻哪[瘤細(xì)胞是任何癌類型的腫瘤細(xì)胞，包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、肝癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、腎癌、頭部癌癥、頸部癌癥、骨癌、血癌和淋巴系統(tǒng)癌癥。除腫瘤細(xì)胞以外，所述效應(yīng)細(xì)胞可以被靶向產(chǎn)生自身抗體的淋巴細(xì)胞以治療自身免疫病，或者被靶向產(chǎn)生IgE的淋巴細(xì)胞以治療變態(tài)反應(yīng)。所述靶也可以是微生物(細(xì)菌或病毒)或可溶性抗原(例如類風(fēng)濕因子或其它自身抗體和毒素)。微生物意指包括病原體，例如病毒、細(xì)菌、真菌、原生動物。術(shù)語“抗原”是指任何天然或合成的免疫原性物質(zhì)、免疫原性物質(zhì)的片段或部分、肽表位或半抗原。術(shù)語“抗原”也包括以非復(fù)合形式時無免疫原性、但在復(fù)合時有免疫原性的物質(zhì)。術(shù)語“非復(fù)合的”包括未連接形成本發(fā)明的分子復(fù)合物的物質(zhì)。術(shù)語“復(fù)合的”包括連接形成本發(fā)明的分子復(fù)合物的物質(zhì)。此中所用的術(shù)語“抑制生長”(例如涉及細(xì)胞)意指包括與未接觸抗CD89抗體的相同細(xì)胞的生長相比，使與抗CD89抗體接觸時細(xì)胞生長的任何可測量的降低，例如，細(xì)胞的生長被抑制至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。此中所用的術(shù)語“抑制結(jié)合”和“阻斷結(jié)合”(例如涉及抑制/阻斷CD89配體的結(jié)合，例如IgA與CD89的結(jié)合)可互換使用，包括部分抑制/阻斷，也包括完全抑制/阻斷。抑制/阻斷IgA與CD89結(jié)合，優(yōu)選降低或改變在無抑制或阻斷下IgA與CD89結(jié)合時發(fā)生的效應(yīng)細(xì)胞功能的正常水平或類型。抑制和阻斷也意指包括與未接觸抗CD89抗體時的配體相比，與抗CD89抗體接觸時IgA對CD89的結(jié)合親和力的任何可測量的降低，例如CD89配體與CD89結(jié)合被阻斷至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。此中涉及的術(shù)語“抗體”包括完整的抗體及其任何抗原結(jié)合片段(即“抗原結(jié)合部分”)或單鏈?！翱贵w”是指包含通過二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈或其抗原結(jié)合部分的糖蛋白。每條重鏈由重鏈可變區(qū)(此中縮寫為VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由三個結(jié)構(gòu)域-CH1、CH2和CH3組成。每條輕鏈由輕鏈可變區(qū)(在此縮寫為VL)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個結(jié)構(gòu)域-CL組成。VH和VL區(qū)還可以細(xì)分為散布有更為保守的稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)的超變區(qū)-稱為互補決定區(qū)(CDR)。每個VH和VL由三個CDR和四個FR組成，從氨基末端到羧基末端以下述順序排布FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)含有一個與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。所述抗體的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，所述宿主組織或因子包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補體系統(tǒng)的第一組分(C1q)。此中所用的術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”(或簡稱“抗體部分”)是指保留與抗原(例如CD89)特異性結(jié)合能力的抗體的一個或多個片段。已經(jīng)表明，抗體的抗原結(jié)合功能可以由全長抗體的片段來執(zhí)行。包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”的結(jié)合片段的實例包括(i)Fab片段，一種由VL、VH、CL和CH1區(qū)組成的單價片段；(ii)F(ab’)2片段，一種包含由通過二硫橋在鉸鏈區(qū)連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)由VH區(qū)和CH1區(qū)組成的Fd片段；(iv)由抗體一條臂的VL和VH區(qū)組成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature341544-546)，由一個VH區(qū)組成；和(vi)分離的互補決定區(qū)(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個區(qū)-VL和VH由不同基因編碼，但可以運用重組方法，通過合成接頭將它們連接，使它們成為單鏈蛋白質(zhì)，其中VL區(qū)和VH區(qū)配對形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv)；參見例如Bird等(1988)Science242423-426，和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.SciUSA，855879-5883)。這樣的單鏈抗體也包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”中。采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)，獲得這些抗體片段，并且可以以與完整抗體的相同方式，根據(jù)用途對所述片段進(jìn)行篩選。術(shù)語“表位”是指能夠與抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)決定簇。表位通常由如氨基酸或糖側(cè)鏈的分子的化學(xué)活性表面集合(surfacegrouping)組成，通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征以及特定的電荷特征。構(gòu)象和非構(gòu)象表位的區(qū)別在于，在變性溶劑存在下，是與前者的結(jié)合而非與后者的結(jié)合喪失。術(shù)語“雙特異性分子”意指包括具有兩種不同結(jié)合特異性的任何因子，例如蛋白質(zhì)、肽或者蛋白質(zhì)或肽的復(fù)合物。例如，所述分子可以與(a)細(xì)胞表面抗原和(b)效應(yīng)細(xì)胞表面的Fc受體如CD89結(jié)合或相互作用。術(shù)語“多特異性分子”或者“異特異性分子”意指包括具有不止兩種不同結(jié)合特異性的任何因子，例如蛋白質(zhì)、肽或者蛋白質(zhì)或肽的復(fù)合物。例如，所述分子可以與(a)細(xì)胞表面抗原、(b)效應(yīng)細(xì)胞表面的Fc受體和(c)至少一種其它組分結(jié)合或相互作用。因此，本發(fā)明包括但不限于針對細(xì)胞表面抗原如CD89和針對其它靶如效應(yīng)細(xì)胞上的Fc受體的雙特異性、三特異性、四特異性和其它多特異性分子。術(shù)語“雙特異性抗體”也包括雙抗體(diabody)。雙抗體是二價的雙特異性抗體，其中VH區(qū)和VL區(qū)在一條多肽鏈上表達(dá)，但使用一個接頭來表達(dá)，所述接頭太短而不允許同一鏈上的兩個區(qū)之間配對，從而迫使所述區(qū)與另一條鏈的互補區(qū)配對，產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(參見例如Holliger，P.等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA906444-6448；Poljak，R.J.等(1994)Structure21121-1123)。此中所用的術(shù)語“異抗體(heteroantibody)”是指連接在一起兩個或更多個抗體、抗體結(jié)合片段(例如Fab)、其衍生物或抗原結(jié)合區(qū)，其中至少兩個具有不同的特異性。這些不同的特異性包括對效應(yīng)細(xì)胞上的Fc受體的結(jié)合特異性和對靶細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞上抗原或表位的結(jié)合特異性。此中所用的術(shù)語“人抗體”意指包括具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機誘變或定點誘變或者通過體內(nèi)體細(xì)胞突變而引入的突變)。然而，此中所用的術(shù)語“人抗體”不包括其中來源于另一哺乳動物種如小鼠種系的CDR序列已被移植到人構(gòu)架序列上的抗體。此中所用的術(shù)語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”是指單分子組合物的抗體分子制劑。單克隆抗體組合物表現(xiàn)出對特定表位的單一的結(jié)合特異性和親和性。因此，術(shù)語“人單克隆抗體”是指具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)、顯示出單一結(jié)合特異性的抗體。在一個實施方案中，所述人單克隆抗體由雜交瘤產(chǎn)生，所述雜交瘤包括從其基因組中包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得的、與無限增殖化細(xì)胞融合的B細(xì)胞。此中所用的術(shù)語“重組人抗體”包括通過重組方法制備、表達(dá)、構(gòu)建或分離的所有人抗體，例如(a)從對于人免疫球蛋白基因為轉(zhuǎn)基因的動物(例如小鼠)中分離的抗體(在以下小節(jié)I中有進(jìn)一步的描述)，(b)利用轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體，(c)從重組組合人抗體文庫分離的抗體，和(c)通過涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接至其它DNA序列上的任何其它方法制備、表達(dá)、構(gòu)建或分離的抗體。這樣的重組人抗體具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。然而，在某些實施方案中，可以對這樣的重組人抗體進(jìn)行體外誘變(或者當(dāng)使用對于人Ig序列為轉(zhuǎn)基因的動物時，進(jìn)行體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，因此所述重組抗體的VH區(qū)和VL區(qū)的氨基酸序列是來源于人種系VH和VL序列并且與之相關(guān)、但可能在體內(nèi)于通常情況下并不存在于人抗體種系庫中的序列。此中所用的“異源抗體”是對于產(chǎn)生這種抗體的轉(zhuǎn)基因非人類生物體而言定義的。該術(shù)語是指具有對應(yīng)于在不是由所述轉(zhuǎn)基因非人類動物構(gòu)成的生物體中存在的、一般得自除所述轉(zhuǎn)基因非人類動物以外的物種的氨基酸序列或編碼核酸序列的抗體。此中所用的“異源雜種抗體”是指具有來源于不同生物體的輕鏈和重鏈的抗體。例如，具有與鼠輕鏈結(jié)合的人重鏈的抗體是一種異源雜種抗體。異源雜種抗體的實例包括嵌合抗體和人源化抗體，在上文有論述。此中所用的術(shù)語“分離的抗體”是指基本上沒有具有不同抗原特異性的其它抗體的抗體(例如基本上沒有特異性結(jié)合非CD89的抗原的抗體的、與CD89特異性結(jié)合的分離的抗體)。然而，與人CD89的表位、同種型或變異體特異性結(jié)合的分離的抗體，可以與其它相關(guān)抗原如來自其它物種的抗原(例如CD89種同源物)有交叉反應(yīng)性。此外，分離的抗體可以基本上無其它細(xì)胞材料和/或化學(xué)物質(zhì)。在本發(fā)明的一個實施方案中，具有不同特異性的“分離的”單克隆抗體的組合在一種成分充分確定的組合物中組合。此中所用的“特異性結(jié)合”是指抗體與預(yù)定抗原結(jié)合。通常，所述抗體以至少大約1×107M-1的親和力結(jié)合，并且與所述預(yù)定抗原的結(jié)合親和力至少兩倍于與除所述預(yù)定抗原或密切相關(guān)抗原以外的非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)結(jié)合的親和力。短語“識別一種抗原的抗體”和“對一種抗原特異性的抗體”在此與術(shù)語“與抗原特異性結(jié)合的抗體”可互換使用。此中所用的術(shù)語IgG抗體的“高親和性”是指結(jié)合親和力至少為大約107M-1、優(yōu)選至少大約108M-1、更優(yōu)選至少大約109M-1、1010M-1、1011M-1或更高，例如高達(dá)1013M-1或更高。然而，“高親和性”結(jié)合對于其它抗體同種型而言可能改變。例如，IgM同種型的“高親和性”結(jié)合是指至少約為1×107M-1的結(jié)合親和力。此中所用的術(shù)語“Kassoc”或“Ka”是指特定抗體-抗原相互作用的締合常數(shù)。此中所用的術(shù)語“Kdis”或“Kd”是指特定抗體-抗原相互作用的解離常數(shù)。此中所用的“同種型”是指由重鏈恒定區(qū)基因編碼的抗體類別(例如IgM或IgG1)。此中所用的“同種型轉(zhuǎn)換”是指抗體的類別或同種型從一種Ig類別變?yōu)槠渌麵g類別之一的現(xiàn)象。此中所用的“非轉(zhuǎn)換同種型”是指當(dāng)不發(fā)生同種型轉(zhuǎn)換時產(chǎn)生的重鏈的同種型類別；編碼所述非轉(zhuǎn)換同種型的CH基因通常是緊接功能性重排VDJ基因下游的第一個CH基因。同種型轉(zhuǎn)換分為經(jīng)典或非經(jīng)典同種型轉(zhuǎn)換。經(jīng)典同種型轉(zhuǎn)換通過涉及所述轉(zhuǎn)基因中至少一個轉(zhuǎn)換序列區(qū)的重組事件而發(fā)生。非經(jīng)典同種型轉(zhuǎn)換可能通過例如人σμ和人∑μ(δ相關(guān)缺失)之間同源重組而發(fā)生。替代的非經(jīng)典轉(zhuǎn)換機制例如其中有可能發(fā)生轉(zhuǎn)基因間和/或染色體間重組，而完成同種型轉(zhuǎn)換。此中所用的術(shù)語“轉(zhuǎn)換序列”是指負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)換重組的那些DNA序列?！稗D(zhuǎn)換供體”序列通常為μ轉(zhuǎn)換區(qū)，位于在所述轉(zhuǎn)換重組期間將被缺失的構(gòu)建體區(qū)的5’(即上游)。“轉(zhuǎn)換受體”區(qū)位于構(gòu)建體待缺失區(qū)和取代恒定區(qū)(例如γ、ε等)之間。由于沒有總是發(fā)生重組的特定位點，故此最終的基因序列通常不能根據(jù)所述構(gòu)建體來預(yù)測。此中所用的“糖基化模式”定義為與蛋白質(zhì)共價連接、更具體地說與免疫球蛋白共價連接的糖單位的模式。當(dāng)本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為，與所述轉(zhuǎn)基因的CH基因來源的物種相比，所述異源抗體的糖基化模式與所述轉(zhuǎn)基因非人類動物物種中的所述糖基化模式更為相似時，異源抗體的糖基化模式可以被描述為與在所述轉(zhuǎn)基因非人類動物的物種所產(chǎn)生的抗體上正常發(fā)生的糖基化模式基本相似。此中所用的術(shù)語“天然存在的”當(dāng)用于物體時，是指物體可以在自然界中被發(fā)現(xiàn)的事實。例如，生物體(包括病毒)中存在的、可以從自然界的來源分離并且未經(jīng)人類在實驗室中有意修飾的多肽或多核苷酸序列就是天然存在的。此中所用的術(shù)語“重排的”是指其中在分別編碼基本上完整的VH或VL區(qū)的構(gòu)象中V區(qū)段緊鄰D-J或J區(qū)段定位的重鏈或輕鏈免疫球蛋白基因座的構(gòu)型。通過與種系DNA比較，可以鑒定重排的免疫球蛋白基因座；重排的基因座具有至少一個重組的七聚體/九聚體同源性元件。此中所用的涉及V區(qū)段的術(shù)語“未經(jīng)重排的”或“種系構(gòu)型”是指其中V區(qū)段未經(jīng)過重組而緊鄰D區(qū)段或J區(qū)段的構(gòu)型。此中所用的術(shù)語“核酸分子”是指包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，但優(yōu)選是雙鏈DNA。此中所用的涉及編碼與CD89結(jié)合的抗體或抗體部分(例如VH、VL、CDR3)的核酸的術(shù)語“分離的核酸分子”，是指其中編碼所述抗體或抗體部分的核苷酸序列不含編碼與除CD89以外的抗原結(jié)合的抗體或抗體部分的其它核苷酸序列的核酸分子，所述其它序列在人基因組DNA中可能天然位于所述核酸的側(cè)翼。在一個實施方案中，所述人抗CD89抗體或其部分包括14.1、7.4、8.2的核苷酸序列或氨基酸序列以及分別具有SEQIDNO1、3、5、7和2、4、6、8中所示序列的重鏈(VH)和輕鏈(VL)可變區(qū)。正如此中公開的和要求保護(hù)的，SEQIDNO1-8中所示的序列包括“保守的序列修飾”即不顯著影響或改變所述核苷酸序列所編碼的或者含有所述氨基酸序列的抗體的結(jié)合特性的核苷酸序列和氨基酸序列的修飾。這樣的保守序列修飾包括核苷酸和氨基酸取代、添加和缺失。可以采用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，例如定點誘變和PCR介導(dǎo)的誘變，將修飾引入SEQIDNO1-8中。保守氨基酸取代包括其中氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的一種氨基酸殘基取代的保守氨基酸取代。在本領(lǐng)域已經(jīng)確定了多組具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基。這些組包括具有堿性側(cè)鏈的氨基酸(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、具有酸性側(cè)鏈的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不帶電荷的極性側(cè)鏈的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β-支鏈側(cè)鏈的氨基酸(例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和具有芳族側(cè)鏈的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，人抗CD89抗體中的預(yù)測非必需氨基酸殘基優(yōu)選被來自同一側(cè)鏈組的另一氨基酸殘基取代?；蛘?，在另一實施方案中，可以例如通過飽和誘變，沿完整的抗CD89抗體編碼序列或其部分隨機引入突變，并且可以根據(jù)結(jié)合活性對所得的經(jīng)修飾抗CD89抗體進(jìn)行篩選。因此，由此中公開的(重鏈和輕鏈可變區(qū))核苷酸序列(即SEQIDNO1、3、5和7)所編碼的和/或含有此中公開的(重鏈和輕鏈可變區(qū))氨基酸序列(即SEQIDNO2、4、6和8)的抗體，包括由已經(jīng)過保守修飾的相似序列所編碼的或含有已經(jīng)過保守修飾的相似序列的基本上相似的抗體。在下文提供可以如何根據(jù)此中公開為SEQIDNO1-8的部分的(即重鏈和輕鏈可變區(qū))序列產(chǎn)生這類基本相似抗體的進(jìn)一步的論述。對于核酸而言，術(shù)語“實質(zhì)同源性”表示當(dāng)進(jìn)行最佳比對和比較時，在適當(dāng)插入或缺失核苷酸的情況下，兩種核酸或其指定序列在至少約80％、通常至少約90％至95％、更優(yōu)選至少約98％至99.5％的核苷酸中是相同的?；蛘?，當(dāng)所述區(qū)段在選擇性雜交條件下與所述鏈的互補鏈雜交時，存在實質(zhì)同源性。考慮到進(jìn)行兩個序列最佳比對所需要引入的空位數(shù)和每個空位的長度，兩個序列之間的百分同一性是所述序列共享的相同位置數(shù)的函數(shù)(即％同源性＝相同位置數(shù)/總位置數(shù)×100)。兩種序列之間的序列比較和百分同一性的確定，可以用數(shù)學(xué)算法(如以下非限制性實施例中所述的)來完成?？梢赃\用GCG軟件包中的GAP程序(可得自http//www.gcg.com)，使用NWSgapdna.CMP矩陣以及40、50、60、70或80的空位權(quán)重和1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重，測定兩個核苷酸序列之間的百分同一性。也可以用已經(jīng)加入到ALIGN程序(version2.0)中的E.Meyers和W.Miller的算法(Comput.Appl.Biosci.，411-17(1988))，用PAM120權(quán)重殘基表、空位長度罰分為12以及空位罰分為4，測定兩種核苷酸序列或氨基酸序列之間的百分同一性。另外，可以用已經(jīng)加入到GCG軟件包的GAP程序(可得自http//www.gcg.com)中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48444-453(1970))算法，使用Blossum62矩陣或PAM250矩陣以及空位權(quán)重為16、14、12、10、8、6、或4和長度權(quán)重為1、2、3、4、5或6，測定兩個氨基酸序列之間的百分同一性。本發(fā)明的核酸序列和蛋白質(zhì)序列還可以用作“查詢序列”，對公共數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索，以便例如鑒定相關(guān)序列。這樣的搜索可以用Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215403-10的NBLAST和XBLAST程序(version2.0)來進(jìn)行。BLAST核苷酸搜索可以用NBLAST程序、score(分值)＝100、wordlength(字長)＝12來進(jìn)行，以獲得與本發(fā)明的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質(zhì)搜索可以用XBLAST程序、score(分值)＝50、wordlength(字長)＝3來進(jìn)行，以獲得與本發(fā)明的蛋白質(zhì)分子同源的氨基酸序列。為了獲得加入空位的比對以供比較，可以如Altschul等，(1997)NucleicAcidsRes.25(17)3389-3402中所述，利用GappedBLAST。當(dāng)用BLAST和GappedBLAST程序時，可以使用相應(yīng)程序(例如XBLAST和NBLAST)的缺省參數(shù)。參見http//www.ncbi.nlm.nih.gov。所述核酸可能存在于全細(xì)胞、細(xì)胞裂解液中，或者以部分純化或基本純化形式存在。當(dāng)用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，包括堿/SDS處理、CsCl分帶、柱層析、瓊脂糖凝膠電泳和本領(lǐng)域熟知的其它技術(shù)經(jīng)過純化而與其它細(xì)胞組分或其它污染物例如其它細(xì)胞核酸或蛋白質(zhì)分離時，核酸是“分離的”或“成為基本純的”。參見F.Ausubel等編著.CurrentProtocolsinMolecularBiology，GreenePublishingandWileyInterscience，NewYork(1987)。本發(fā)明的核酸組合物雖然常常在來自cDNA、基因組或混合物的天然序列中(除經(jīng)修飾的限制位點等之外)，但可以依照提供基因序列的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對其進(jìn)行突變。對于編碼序列，這些突變可以影響所需的氨基酸序列。特別是，考慮了與天然V序列、D序列、J序列、恒定區(qū)序列、轉(zhuǎn)換序列和此中所述的其它這類序列基本同源或來源于此的DNA序列(其中“來源于”是指一種序列與另一序列相同，或者由另一序列經(jīng)修飾而來)。當(dāng)將核酸置于與另一核酸序列的功能關(guān)系中時，所述核酸被“操作上連接”。例如，如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則所述啟動子或增強子與所述序列操作上連接。關(guān)于轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，操作上連接是指所連接的DNA序列相鄰，并且必要時使兩個蛋白質(zhì)編碼序列相鄰并且符合讀框地連接。對于轉(zhuǎn)換序列，操作上連接表示所述序列能夠影響轉(zhuǎn)換重組。此中所用的術(shù)語“載體”是指能夠轉(zhuǎn)運與之連接的另一種核酸的核酸分子。一種類型的載體是“質(zhì)粒”，質(zhì)粒是指可以將額外的DNA區(qū)段連接到其中的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。另一種類型的載體是病毒載體，其中額外的DNA區(qū)段可以被連接到所述病毒基因組中。某些載體能夠在所導(dǎo)入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如具有細(xì)菌復(fù)制起點的細(xì)菌載體和附加型哺乳動物載體)。其它載體(例如非附加型哺乳動物載體)在被導(dǎo)入宿主細(xì)胞后可以整合到宿主細(xì)胞的基因組中，從而隨宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能夠指導(dǎo)與之操作上連接的基因的表達(dá)。這類載體在此被稱為“重組表達(dá)載體”(或者簡稱“表達(dá)載體”)。一般而言，重組DNA技術(shù)中應(yīng)用的表達(dá)載體通常為質(zhì)粒形式。在本說明書中，“質(zhì)?！焙汀拜d體”可以互換使用，因為質(zhì)粒是最常用的載體形式。然而，本發(fā)明包括用于等同功能的這樣的其它形式的表達(dá)載體，例如病毒載體(例如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒)。此中所用的術(shù)語“重組宿主細(xì)胞”(或簡稱“宿主細(xì)胞”)是指其中導(dǎo)入了重組表達(dá)載體的細(xì)胞。應(yīng)該理解，這類術(shù)語不僅指特定的題述細(xì)胞，而且也指這種細(xì)胞的后代。因為在后續(xù)世代中可能由于或者突變或者環(huán)境影響而發(fā)生某些修飾，所以這樣的后代可能事實上與親代細(xì)胞不完全相同，但仍包括在此中所用的術(shù)語“宿主細(xì)胞”的范圍內(nèi)。重組宿主細(xì)胞包括例如CHO細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。在以下小節(jié)中更詳細(xì)地描述本發(fā)明的各個方面。I.人抗CD89抗體的產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體(mAb)可以用各種各樣的技術(shù)，包括常規(guī)單克隆抗體方法，例如Kohler和Milstein(1975)Nature256495的標(biāo)準(zhǔn)體細(xì)胞雜交技術(shù)來產(chǎn)生。雖然優(yōu)選體細(xì)胞雜交法，但是原則上，可以利用其它產(chǎn)生單克隆抗體的技術(shù)，例如B淋巴細(xì)胞的病毒或癌基因轉(zhuǎn)化。用于制備雜交瘤的優(yōu)選動物系統(tǒng)是鼠系統(tǒng)。在小鼠中產(chǎn)生雜交瘤是一種非常充分確立的方法。用于分離經(jīng)免疫的脾細(xì)胞以供融合的免疫方案和技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。融合組分(fusionpartner)(例如鼠骨髓瘤細(xì)胞)和融合方法也是已知的。在一個優(yōu)選實施方案中，可以用攜帶人免疫系統(tǒng)的部分而非小鼠系統(tǒng)的部分的轉(zhuǎn)基因小鼠，產(chǎn)生針對CD89的人單克隆抗體。這些轉(zhuǎn)基因小鼠在此稱為“HuMab”小鼠，含有編碼未經(jīng)重排的人重鏈(μ和γ)和κ輕鏈免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因小基因座(miniloci)以及使內(nèi)源μ鏈和κ鏈基因座失活的靶突變(Lonberg等(1994)Nature368(6474)856-859)。因此，所述小鼠表現(xiàn)出小鼠IgM或κ表達(dá)減少，并且對免疫應(yīng)答，所導(dǎo)入的人重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因經(jīng)歷類別轉(zhuǎn)換和體細(xì)胞突變，產(chǎn)生高親和力的人IgGκ單克隆抗體(Lonberg，N.等，(1994)，參見上文；有關(guān)綜述參見Lonberg，N.(1994)HandbookofExperimentalPharmacology11349-101；Lonberg，N.和Huszar，D.(1995)Intern.Rev.Immunol.Vol.1365-93，以及Harding，F(xiàn).和Lonberg，N.(1995)Ann.N.Y.AcadSci764536-546)。HuMab小鼠的制備在以下小節(jié)II和以下文獻(xiàn)中有描述Taylor，L.等(1992)NucleicAcidsResearch206287-6295；Chen，J.等(1993)InternationalImmunology5647-656；Tuaillon等(1993)Proc.Natl.Acad.SciUSA903720-3724；Choi等(1993)NatureGenetics4117-123；Chen，J.等(1993)EMBOJ.12821-830；Tuaillon等(1994)J.Immunol.1522912-2920；Lonberg等，(1994)Nature368(6474)856-859；Lonberg，N.(1994)HandbookofExperimentalPharmacology11349-101；Taylor，L.等(1994)InternationalImmunology6579-591；Lonberg，N.和Huszar，D.(1995)Intern.Rev.Immunol.Vol.1365-93；Harding，F(xiàn).和Lonberg，N.(1995)Ann.N.Y.Acad.Sci764536-546；Fishwild，D.等(1996)NatureBiotechnology14845-851，所有上述文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用全部結(jié)合到本文中。還參見Lonberg和Kay的GenPharmInternational-美國專利第5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；和5,770,429號；Surani等的美國專利第5,545,807號；國際公開說明書WO98/24884，于1994年6月11日公開；WO94/25585，于1994年11月10日公開；WO93/1227，于1993年6月24日公開；WO92/22645，于1992年12月23日公開；WO92/03918，于1992年3月19日公開，所有上述文獻(xiàn)的公開內(nèi)容通過引用全部結(jié)合到本文中。另一方面，可以用實施例2中描述的HCO12轉(zhuǎn)基因小鼠，來產(chǎn)生人抗CD89抗體。HuMab免疫為了產(chǎn)生全人抗CD89單克隆抗體，如以下文獻(xiàn)所述Lonberg，N.等(1994)Nature368(6474)856-859；Fishwild，D.等(1996)NatureBiotechnology14845-851和WO98/24884，可以用CD89抗原的純化或富集制備物和/或表達(dá)CD89的細(xì)胞，免疫HuMab小鼠。優(yōu)選所述小鼠在首次輸注時為6-16周齡。例如，可以用CD89抗原的純化或富集制備物(5-20μg)(例如從表達(dá)CD89的LNCaP細(xì)胞中純化的)，腹膜內(nèi)免疫所述HuMab小鼠。在用CD89抗原的純化或富集制備物的免疫不產(chǎn)生抗體時，也可以用表達(dá)CD89的細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞系來免疫小鼠，以促進(jìn)免疫應(yīng)答。使用各種抗原的積累的經(jīng)驗表明，所述HuMab轉(zhuǎn)基因小鼠最初用完全弗氏佐劑中的抗原腹膜內(nèi)(IP)免疫、然后每隔一周用不完全弗氏佐劑中的抗原腹膜內(nèi)免疫(直至總共6次)時，應(yīng)答最佳。可以在免疫方案實施的過程中，用通過眶后放血獲得血漿樣品，監(jiān)測免疫應(yīng)答。可以通過ELISA(如下所述)對血漿進(jìn)行篩選，用具有足夠效價的抗CD89人免疫球蛋白的小鼠進(jìn)行融合。在處死和取出脾臟之前3天，可以用抗原給小鼠靜脈內(nèi)加強免疫。預(yù)計可能需要每種抗原進(jìn)行2-3次融合。每種抗原免疫數(shù)只小鼠。例如，可以免疫總共12只HC07和HC012品系的HuMab小鼠。生產(chǎn)人抗CD89單克隆抗體的雜交瘤的產(chǎn)生可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案，分離小鼠脾細(xì)胞，用PEG使其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系融合。然后根據(jù)抗原特異性抗體的產(chǎn)生，對所得的雜交瘤進(jìn)行篩選。例如，使用50％PEG，使得自免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液與1/6數(shù)目的P3X63-Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤細(xì)胞(ATCC，CRI1580)融合。細(xì)胞以約2×105接種到平底微量滴定板中，然后在含有20％胎兒CloneSerum、18％″653″條件培養(yǎng)基、5％origen(IGEN)、4mML-谷氨酰胺、1mML-谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉、5mMHEPES、0.055mM2-巰基乙醇、50單位/ml青霉素、50mg/ml鏈霉素、50mg/ml慶大霉素和1×HAT(Sigma；HAT在融合后24小時加入)的選擇培養(yǎng)基中孵育2周。2周后，在其中HAT被HT取代的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。然后通過ELISA，針對人抗CD89單克隆IgM和IgG抗體對各孔進(jìn)行篩選。一旦發(fā)生廣泛的雜交瘤生長，則通常在10-14天后觀測培養(yǎng)基。將分泌所述抗體的雜交瘤再接種，再次進(jìn)行篩選，如果人IgG仍為陽性，則可以通過有限稀釋，將抗CD89單克隆抗體亞克隆至少兩次。然后，體外培養(yǎng)穩(wěn)定的亞克隆，以便在組織培養(yǎng)基中產(chǎn)生少量抗體，以供表征。應(yīng)用部分抗體序列來表達(dá)完整的抗體抗體主要通過位于所述6個重鏈和輕鏈互補決定區(qū)(CDR)中的氨基酸殘基，與靶抗原相互作用。因此，在各種抗體之間，CDR內(nèi)的氨基酸序列比CDR之外的序列更為多樣化。因為CDR序列負(fù)責(zé)大多數(shù)的抗體-抗原相互作用，所以有可能通過構(gòu)建包含移植到得自具有不同特性的不同抗體的構(gòu)架序列上的得自特定天然存在的抗體的CDR序列的表達(dá)載體，來表達(dá)模擬特定天然存在的抗體特性的重組抗體(參見例如Riechmann，L.等，1998，Nature332323-327；Jones，P.等，1986，Nature321522-525；和Queen，C.等，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.8610029-10033)。這樣的構(gòu)架序列可以得自包括種系抗體基因序列的公共DNA數(shù)據(jù)庫。這些種系序列將不同于成熟抗體基因序列，因為它們將不包括完全裝配的可變區(qū)基因，后者在B細(xì)胞成熟期間通過V(D)J連接而形成。種系基因序列也將不同于在個體水平上均勻跨越的高親和性次級抗體庫的序列。例如體細(xì)胞突變在構(gòu)架區(qū)的氨基端部分中相對稀少。例如，體細(xì)胞突變在構(gòu)架區(qū)1的氨基端部分和構(gòu)架區(qū)4的羧基端部分中相對稀少。此外，許多體細(xì)胞突變并不顯著改變抗體的結(jié)合特性。因此，不必獲得特定抗體的完整DNA序列，來重構(gòu)建具有與原始抗體相似的結(jié)合特性的完整重組抗體(參見1999年3月12日申請的PCT/US99/05535，該文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中用于所有目的)。對于這一目的，跨越所述CDR區(qū)的部分重鏈和輕鏈序列通常是足夠的。用所述部分序列來確定哪些種系可變區(qū)基因區(qū)段和連接基因區(qū)段構(gòu)成所述重組抗體可變區(qū)基因。然后，用所述種系序列補上所述可變區(qū)的丟失部分。重鏈和輕鏈前導(dǎo)序列在蛋白質(zhì)成熟期間被切割，并不影響最終抗體的特性。因此，表達(dá)構(gòu)建體不必使用相應(yīng)的種系前導(dǎo)序列。為了添加丟失的序列，可以通過連接或PCR擴(kuò)增，將克隆化cDNA序列與合成寡核苷酸結(jié)合。或者，可以將完整的可變區(qū)作為一組短的重疊寡核苷酸來合成，然后通過PCR擴(kuò)增連接，構(gòu)建完全的合成可變區(qū)克隆。這一方法有一些優(yōu)點，例如消除或包含特定的限制位點或者優(yōu)化特定的密碼子。利用得自雜交瘤的重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)錄物的核苷酸序列，來設(shè)計一組重疊的合成寡核苷酸，以構(gòu)建具有與天然序列相同的氨基酸編碼能力的合成V序列。所述合成重鏈和κ鏈序列可以以三種方式不同于天然序列重復(fù)核苷酸堿基序列段被中斷，以有助于寡核苷酸合成和PCR擴(kuò)增；依照Kozak規(guī)則(Kozak，1991，J.Biol.Chem.266L19867019870)摻入最適翻譯起始位點；以及將HindIII位點工程化到翻譯起始位點的上游。對于重鏈和輕鏈可變區(qū)，將優(yōu)化的編碼鏈序列和相應(yīng)的非編碼鏈序列在相應(yīng)的非編碼寡核苷酸的大約中點處打斷為30-50個核苷酸的區(qū)段。因此，對于每條鏈，可以將所述寡核苷酸裝配為跨越150-400個核苷酸的區(qū)段的多組重疊雙鏈。然后用所述庫作為模板，產(chǎn)生150-400個核苷酸的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。通常，將一組可變區(qū)寡核苷酸分為兩個庫，分別擴(kuò)增所述庫，產(chǎn)生兩種重疊PCR產(chǎn)物。然后，通過PCR擴(kuò)增合并這些重疊產(chǎn)物，形成完整的可變區(qū)。也可能需要在PCR擴(kuò)增中包括重鏈或輕鏈恒定區(qū)的重疊片段(包括κ輕鏈的BbsI位點或γ重鏈的AgeI位點)，以產(chǎn)生可以容易被克隆到所述表達(dá)載體構(gòu)建體中的片段。重構(gòu)建的重鏈和輕鏈可變區(qū)然后與克隆的啟動子序列、翻譯起始序列、恒定區(qū)序列、3’非翻譯序列、聚腺苷酸化序列和轉(zhuǎn)錄終止序列結(jié)合，構(gòu)成表達(dá)載體構(gòu)建體?？梢詫⑺鲋劓満洼p鏈表達(dá)構(gòu)建體結(jié)合到一種載體中、共轉(zhuǎn)染、順序轉(zhuǎn)染或分別轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，然后融合形成表達(dá)這兩條鏈的宿主細(xì)胞。下面描述用于構(gòu)建人IgGκ表達(dá)載體的質(zhì)粒。構(gòu)建所述質(zhì)粒，使得PCR擴(kuò)增的V重鏈和Vκ輕鏈cDNA序列可以用來重構(gòu)建完整的重鏈和輕鏈小基因(minigene)。這些質(zhì)?？梢杂脕肀磉_(dá)完整的人或嵌合IgG1κ或IgG4κ抗體。可以構(gòu)建相似的質(zhì)粒，用于表達(dá)其它重鏈同種型，或者用于表達(dá)包含λ輕鏈的抗體。因此，在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的人抗CD89抗體14.1、7.4或8.2的結(jié)構(gòu)特征用來構(gòu)建保留本發(fā)明抗體的至少一種功能特性如與CD89結(jié)合的、結(jié)構(gòu)相關(guān)的人抗CD89抗體。更具體地講，可以將14.1、7.4或8.2的一個或多個CDR區(qū)與已知的人構(gòu)架區(qū)和CDR重組結(jié)合，構(gòu)建另外的本發(fā)明的重組工程化人抗CD89抗體。因此，在另一實施方案中，本發(fā)明提供一種制備抗CD89抗體的方法，所述方法包括制備一種抗體，所述抗體包含(1)人重鏈構(gòu)架區(qū)和人重鏈CDR，其中所述人重鏈CDR中至少一個包含選自圖1或圖3中所示CDR的氨基酸序列(或SEQIDNO2或6中的相應(yīng)氨基酸殘基)的氨基酸序列；和(2)人輕鏈構(gòu)架區(qū)和人輕鏈CDR，其中所述人輕鏈CDR中至少一個包含選自圖2或圖4中所示CDR的氨基酸序列(或SEQIDNO4或8中的相應(yīng)氨基酸殘基)的氨基酸序列；其中所述抗體保留與CD89結(jié)合的能力。所述抗體結(jié)合CD89的能力可以用標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合測定例如實施例中所述的結(jié)合測定(例如ELISA)來測定。由于本領(lǐng)域眾所周知抗體重鏈和輕鏈的CDR3區(qū)在抗體對抗原的結(jié)合特異性/親和性方面起著特別重要的作用，所以如上所述制備的本發(fā)明的重組抗體優(yōu)選包含14.1、7.4或8.2的重鏈和輕鏈CDR3。所述抗體還可以包含14.1、7.4或8.2的CDR2。所述抗體還可以包含14.1、7.4或8.2的CDR1。因此，本發(fā)明還提供抗CD89抗體，所述抗CD89抗體包含(1)人重鏈構(gòu)架區(qū)、人重鏈CDR1區(qū)、人重鏈CDR2區(qū)和人重鏈CDR3區(qū)，其中所述人重鏈CDR3區(qū)選自圖1或圖3中所示的14.1、7.4和8.2的CDR3(或SEQIDNO2或6中的相應(yīng)氨基酸殘基)；和(2)人輕鏈構(gòu)架區(qū)、人輕鏈CDR1區(qū)、人輕鏈CDR2區(qū)和人輕鏈CDR3區(qū)，其中所述人輕鏈CDR3區(qū)選自圖2或圖4中所示的14.1、7.4和8.2的CDR3(或SEQIDNO4或8中的相應(yīng)氨基酸殘基)，其中所述抗體結(jié)合CD89。所述抗體還可以包含14.1、7.4或8.2的重鏈CDR2和/或輕鏈CDR2。所述抗體還可以包含14.1、7.4或8.2的重鏈CDR1和/或輕鏈CDR1。最好是，上述工程抗體的CDR1、CDR2和/或CDR3包含與此中公開的14.1、7.4或8.2完全相同的氨基酸序列。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到，可以允許與14.1、7.4和8.2準(zhǔn)確的CDR序列有一些偏離，但仍保留所述抗體有效結(jié)合CD89的能力(例如保守取代)。因此，在另一實施方案中，所述工程抗體可以由例如與14.1、7.4或8.2的一個或多個CDR有90％、95％、98％或99.5％相同的一個或多個CDR組成。除簡單地結(jié)合CD89之外，可以對工程抗體例如上述那些抗體，根據(jù)其保留本發(fā)明抗體的其它功能特性的情況來進(jìn)行選擇。其它功能特性例如1)與表達(dá)CD89的活細(xì)胞結(jié)合；2)與CD89高親和性結(jié)合；3)與CD89上的特有表位結(jié)合(以消除聯(lián)合應(yīng)用時具有互補活性的單克隆抗體競爭與同一表位結(jié)合的可能性)；4)對表達(dá)CD89的細(xì)胞的調(diào)理作用；和/或5)在人效應(yīng)細(xì)胞存在下介導(dǎo)對表達(dá)CD89的細(xì)胞的生長抑制、吞噬作用和/或殺傷。人抗CD89單克隆抗體結(jié)合的表征為了表征本發(fā)明的人CD89單克隆抗體的結(jié)合，可以例如通過ELISA，檢驗得自免疫小鼠的血清。在ELISA方案的一個典型(但非限制性的)實施例中，用含0.25μg/ml純化CD89的PBS溶液包被微量滴定板，然后用含5％牛血清白蛋白的PBS溶液封閉。將得自CD89免疫小鼠的血漿的稀釋液加入到各孔中，于37℃保溫1-2小時。所述板用PBS/Tween洗滌，然后與綴合了堿性磷酸酶的山羊抗人IgGFc特異性多克隆試劑一起于37℃保溫1小時。洗滌后，所述板用pNPP底物(1mg/ml)顯色，分析405-650的OD。優(yōu)選將產(chǎn)生最高效價的小鼠用于融合。也可以用如上所述的ELISA測定，篩選顯示出與CD89免疫原陽性反應(yīng)的雜交瘤。將以高親和力結(jié)合CD89的雜交瘤亞克隆，并且對其進(jìn)一步表征?？梢詮拿總€雜交瘤中選擇一個保留親代細(xì)胞反應(yīng)性(通過ELISA)的克隆，用于制備貯存于-140℃的5-10個小瓶的細(xì)胞庫以及用于抗體純化。為了純化人抗CD89抗體，可以讓所選雜交瘤在2升旋動燒瓶中生長，以供純化單克隆抗體用。在用A蛋白-sepharose(Pharmacia，Piscataway，NJ)進(jìn)行親和色譜之前，可以將上清液過濾并濃縮。可以通過凝膠電泳和高效液相色譜檢查洗脫的IgG，以確保純度。可以將緩沖液交換為PBS，用1.43消光系數(shù)，根據(jù)OD280確定濃度。將單克隆抗體分成等份，貯存于-80℃。為了確定所選的人抗CD89單克隆抗體是否與特有表位結(jié)合，可以用市售試劑(Pierce，Rockford，IL)將每種抗體生物素?；??？梢杂萌缟纤龅腃D89包被的ELISA板，進(jìn)行用未標(biāo)記單克隆抗體和生物素酰化單克隆抗體的競爭研究?？梢杂面溍褂H和素-堿性磷酸酶探針檢測生物素?；痬Ab結(jié)合。為了確定純化抗體的同種型，可以進(jìn)行同種型ELISA。例如，可以用10μg/ml抗人Ig于4℃包被微量滴定板各孔過夜。在用5％BSA封閉后，讓所述板與10μg/ml單克隆抗體或純化的同種型對照在周圍溫度下反應(yīng)2小時。然后，讓各孔與人IgG1或人IgM特異性堿性磷酸酶綴合探針反應(yīng)。如上所述使板顯色和進(jìn)行分析。為了證明單克隆抗體與表達(dá)CD89的活細(xì)胞結(jié)合，可以使用流式細(xì)胞術(shù)。在流式細(xì)胞術(shù)方案的一個典型(但非限制性)的實施例中，將表達(dá)CD89的細(xì)胞系(在標(biāo)準(zhǔn)生長條件下生長的)與含有0.1％Tween80和20％小鼠血清的含各種濃度單克隆抗體的PBS溶液混合，于37℃孵育1小時。洗滌后，讓細(xì)胞與熒光素標(biāo)記的抗人IgG抗體在與第一抗體染色的相同條件下反應(yīng)?？梢赃\用FACScan儀器，利用光散射和側(cè)向散射特性對單細(xì)胞進(jìn)行門控來分析樣品。(除了或者替代)流式細(xì)胞術(shù)測定，可以使用利用熒光顯微鏡的替代測定?？梢酝耆缟纤鰧⒓?xì)胞染色，然后用熒光顯微鏡檢查。這一方法允許顯現(xiàn)出各個細(xì)胞，但基于抗原的密度，可能降低了靈敏度。還可以通過蛋白質(zhì)印跡分析，檢驗抗CD89人IgG與CD89抗原的反應(yīng)性。例如，可以制備得自表達(dá)CD89的細(xì)胞的細(xì)胞提取物，并且進(jìn)行十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳之后，將分離的抗原轉(zhuǎn)移到硝化纖維素膜上，用20％小鼠血清封閉，然后用待測單克隆抗體探測。人IgG結(jié)合可以用抗人IgG堿性磷酸酶來檢測，并且用BCIP/NBT底物片(tablets)(SigmaChem.Co.，St.Louis，MO)來顯色。II.產(chǎn)生人抗CD89單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因非人類動物的產(chǎn)生再一方面，本發(fā)明提供能夠表達(dá)與CD89特異性結(jié)合(優(yōu)選以高親和力結(jié)合)的人單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因非人類動物，例如轉(zhuǎn)基因小鼠。在一個優(yōu)選實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠(HuMab小鼠)具有包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組。在一個實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因非人類功能如轉(zhuǎn)基因小鼠已用CD89抗原的純化或富集制備物和/或表達(dá)CD89的細(xì)胞免疫。最好是，所述轉(zhuǎn)基因非人類動物如轉(zhuǎn)基因小鼠能夠通過經(jīng)歷V-D-J重組和同種型轉(zhuǎn)換，產(chǎn)生多種同種型的人抗CD89單克隆抗體(例如IgG、IgA和/或IgE)。同種型轉(zhuǎn)換可以通過例如經(jīng)典或非經(jīng)典同種型轉(zhuǎn)換而發(fā)生。具有異源抗體庫、對外源抗原刺激應(yīng)答的轉(zhuǎn)基因非人類動物的設(shè)計，要求在所述轉(zhuǎn)基因動物體內(nèi)所含有異源免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因，在B細(xì)胞發(fā)育途徑中正確發(fā)揮功能。在一個優(yōu)選實施方案中，異源重鏈轉(zhuǎn)基因的正確功能包括同種型轉(zhuǎn)換。因此，構(gòu)建本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因，以便產(chǎn)生同種型轉(zhuǎn)換和以下功能中的一個或多個(1)高水平和細(xì)胞類型特異性的表達(dá)，(2)功能性基因重排，(3)激活等位基因排斥或者對等位基因排斥應(yīng)答，(4)表達(dá)足夠的初級庫，(5)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，(6)體細(xì)胞超變，和(7)在免疫應(yīng)答期間所述轉(zhuǎn)基因抗體基因座的顯性化。不是所有上述標(biāo)準(zhǔn)都需要符合。例如，在其中轉(zhuǎn)基因動物的內(nèi)源免疫球蛋白基因座被功能性破壞的那些實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因不需要激活等位基因排斥。此外，在其中所述轉(zhuǎn)基因包含功能性重排的重鏈和/或輕鏈免疫球蛋白基因的那些實施方案中，功能性基因重排的第二條標(biāo)準(zhǔn)是不必要的，至少對于已經(jīng)重排的所述轉(zhuǎn)基因而言。關(guān)于分子免疫學(xué)的背景，參見FundamentalImmunology，2ndedition(1989)，PaulWilliamE.編著RavenPress，N.Y.，該文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中。在某些實施方案中，用以產(chǎn)生本發(fā)明的人單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因非人類動物，在其種系中含有重排的、未經(jīng)重排的或者重排和未經(jīng)重排的組合的異源免疫球蛋白重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因。每個重鏈轉(zhuǎn)基因包含至少一個CH基因。另外，所述重鏈轉(zhuǎn)基因可以含有功能性同種型轉(zhuǎn)換序列，所述同種型轉(zhuǎn)換序列能夠支持所述轉(zhuǎn)基因動物的B細(xì)胞中編碼多個CH基因的異源轉(zhuǎn)基因的同種型轉(zhuǎn)換。這樣的轉(zhuǎn)換序列可以是在得自用作所述轉(zhuǎn)基因CH基因來源的物種的種系免疫球蛋白基因座中天然存在的那些轉(zhuǎn)換序列，或者這樣的轉(zhuǎn)換序列可以來源于在待接受所述轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體的物種(所述轉(zhuǎn)基因動物)體內(nèi)存在的轉(zhuǎn)換序列。例如，用來產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠的人轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體，當(dāng)其摻入了與在小鼠重鏈基因座中天然存在的轉(zhuǎn)換序列相似的轉(zhuǎn)換序列時，可以產(chǎn)生較高頻率的同種型轉(zhuǎn)換事件，因為推測所述小鼠轉(zhuǎn)換序列被優(yōu)化，從而可與小鼠轉(zhuǎn)換重組酶系統(tǒng)一起發(fā)揮作用，而所述人轉(zhuǎn)換序列則不能?？梢杂贸Ｒ?guī)克隆方法分離和克隆轉(zhuǎn)換序列，或者可以從基于涉及免疫球蛋白轉(zhuǎn)換區(qū)序列的已發(fā)表的序列信息(Mills等，Nucl.AcidsRes.157305-7316(1991)；Sideras等，Intl.Immunol.1631-642(1989)，所述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中)設(shè)計的重疊合成寡核苷酸，從頭合成轉(zhuǎn)換序列。對于每種上述轉(zhuǎn)基因動物，在所述轉(zhuǎn)基因動物的顯著比率的B細(xì)胞(至少10％)中，發(fā)現(xiàn)功能性重排的異源重鏈和輕鏈免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因。用來產(chǎn)生本發(fā)明轉(zhuǎn)基因動物的轉(zhuǎn)基因包括一種重鏈轉(zhuǎn)基因，所述重鏈轉(zhuǎn)基因包含編碼至少一個可變區(qū)基因區(qū)段、一個多樣性基因區(qū)段、一個連接基因區(qū)段和至少一個恒定區(qū)基因區(qū)段的DNA。免疫球蛋白輕鏈轉(zhuǎn)基因包含編碼至少一個可變區(qū)基因區(qū)段、一個連接基因區(qū)段和至少一個恒定區(qū)基因區(qū)段的DNA。編碼所述輕鏈和重鏈基因區(qū)段的基因區(qū)段，對于它們來源的轉(zhuǎn)基因非人類動物是異源的，或者對應(yīng)于來自不構(gòu)成所述轉(zhuǎn)基因非人類動物的物種的編碼免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因區(qū)段的DNA。在本發(fā)明的一個方面，構(gòu)建所述轉(zhuǎn)基因，使得所述各個基因區(qū)段是未經(jīng)重排的，即沒有重排而編碼功能性免疫球蛋白輕鏈或重鏈。這樣的未經(jīng)重排的轉(zhuǎn)基因支持V、D和J基因區(qū)段的重組(功能性重排)，優(yōu)選支持在暴露于CD89抗原時整個D區(qū)基因區(qū)段或其部分摻入到所述轉(zhuǎn)基因非人類動物的所產(chǎn)生的重排免疫球蛋白重鏈中。在一個替代實施方案中，所述轉(zhuǎn)基因包含未經(jīng)重排的“小基因座(mini-locus)”。這種轉(zhuǎn)基因通常包含C、D和J區(qū)段的顯著部分以及一個亞組的V基因區(qū)段。在這種轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體中，所述各種調(diào)控序列例如啟動子、增強子、類別轉(zhuǎn)換區(qū)、供RNA加工用的剪接供體和剪接受體序列、重組信號等，包含來源于所述異源DNA的相應(yīng)序列。這樣的調(diào)控序列可以摻入到來自與本發(fā)明中所用的非人類動物相同或相關(guān)的物種的轉(zhuǎn)基因中。例如，人免疫球蛋白基因區(qū)段可以在轉(zhuǎn)基因中與嚙齒動物免疫球蛋白增強子序列結(jié)合，以供用于轉(zhuǎn)基因小鼠。另一方面，可以將合成調(diào)控序列摻入到所述轉(zhuǎn)基因中，其中這樣的合成調(diào)控序列與已知在哺乳動物基因組中天然存在的功能性DNA序列不同源。根據(jù)共有序列規(guī)則(consensusrules)，例如確定剪接受體位點或啟動子/增強子模體的允許序列(permissiblesequence)的那些規(guī)則，設(shè)計合成調(diào)控序列。例如，小基因座包含與天然存在的種系Ig基因座相比具有至少一個非必需DNA部分(例如間插序列；內(nèi)含子或其部分)的內(nèi)部(即不在所述部分的末端)缺失的基因組免疫球蛋白基因座的一部分。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，用來產(chǎn)生人抗CD89抗體的轉(zhuǎn)基因動物含有至少一個、通常2-10個、有時25-50個或更多拷貝的WO98/24884的實施例12中所述的轉(zhuǎn)基因(例如pHC1或pHC2)，讓其與含有一個拷貝的WO98/24884的實施例5、6、8或14中所述輕鏈轉(zhuǎn)基因的動物配種，讓其后代與WO98/24884的實施例10中所述的JH缺失型動物配種，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。讓動物繁育至這三個性狀中的每個性狀為純合性。這樣動物具有以下基因型一個拷貝(每個單倍體組的染色體)的人重鏈未經(jīng)重排的小基因座(WO98/24884的實施例12中描述的)、一個拷貝(每個單倍體組的染色體)的重排人K輕鏈構(gòu)建體(WO98/24884的實施例14中描述的)和每個內(nèi)源小鼠重鏈基因座的除去所有功能性JH區(qū)段的缺失(WO98/24884的實施例10中所述的)。讓這樣的動物與JH區(qū)段缺失(WO98/24884的實施例10)純合型小鼠配種，產(chǎn)生JH缺失純合型以及人重鏈構(gòu)建體和輕鏈構(gòu)建體半合型的后代。給所得的動物注射抗原，用來生產(chǎn)抗這些抗原的人單克隆抗體。從這樣的動物分離出的B細(xì)胞對于所述人重鏈和輕鏈而言是單特異性的，因為它們僅含有一個拷貝的每種基因。此外，它們對于人或小鼠重鏈?zhǔn)菃翁禺愋缘模驗閮蓚€小鼠內(nèi)源重鏈基因拷貝由于如WO98/24884的實施例9和12中所述引入的跨越JH區(qū)的缺失是無功能性的。此外，相當(dāng)大部分的B細(xì)胞對于人或小鼠輕鏈?zhǔn)菃翁禺愋缘?，因為單拷貝的重排人κ輕鏈基因的表達(dá)，將會在相當(dāng)大部分的B細(xì)胞中等位基因和同種型地排斥小鼠內(nèi)源κ鏈和λ鏈基因的重排。所述優(yōu)選實施方案的轉(zhuǎn)基因小鼠將表現(xiàn)出產(chǎn)生具有相當(dāng)大的庫(repertoire)、理想的是與天然小鼠的基本相似的庫的免疫球蛋白。因此，例如，在其中內(nèi)源Ig基因已被失活的實施方案中，總免疫球蛋白水平的范圍將為約0.1-10mg/ml血清、優(yōu)選0.5-5mg/ml，理想的是至少約1.0mg/ml。當(dāng)將能夠?qū)崿F(xiàn)從IgM轉(zhuǎn)換為IgG的轉(zhuǎn)基因引入到所述轉(zhuǎn)基因小鼠中時，成年小鼠的血清IgG與IgM之比優(yōu)選約為10∶1。IgG與IgM之比在未成熟小鼠中將低得多。一般而言，超過約10％、優(yōu)選40-80％的脾和淋巴結(jié)B細(xì)胞僅表達(dá)人IgG蛋白。所述庫理想的是接近非轉(zhuǎn)基因小鼠的所述庫，通常至少高達(dá)約10％，優(yōu)選25-50％或更高。一般而言，將產(chǎn)生至少約1000種不同的免疫球蛋白(理想的是IgG)，優(yōu)選104-106或更多，主要取決于被引入到小鼠基因組中的不同V、J和D區(qū)的數(shù)目。這些免疫球蛋白通常將識別約一半或更多的高抗原性蛋白，例如葡萄球菌蛋白A。通常，所述免疫球蛋白將表現(xiàn)出對于預(yù)選抗原的親和力至少約為107M-1，優(yōu)選至少約109M-1，更優(yōu)選至少約1010M-1、1011M-1、1012M-1或更高，例如高至1013M-1或更高。在某些實施方案中，可能優(yōu)選產(chǎn)生具有預(yù)定庫的小鼠，以限制在對預(yù)定抗原類型的抗體應(yīng)答中所表現(xiàn)出的V基因的選擇。具有預(yù)定庫的重鏈轉(zhuǎn)基因可以包含例如在人類中優(yōu)先用于針對預(yù)定抗原類型的抗體應(yīng)答的人VH基因。另一方面，某些VH基因由于各種原因(例如有很小編碼對預(yù)定抗原具有高親和性的V區(qū)的可能性；有很小的經(jīng)歷體細(xì)胞突變和親和性突降(sharpening)的傾向；或?qū)τ谀承┤擞忻庖咴?可能從特定庫中被排斥。因此，在含有各種重鏈或輕鏈基因區(qū)段的轉(zhuǎn)基因重排之前，可以例如通過雜交或DNA測序，容易將這樣的基因區(qū)段鑒定為來自非轉(zhuǎn)基因動物的生物體物種。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因小鼠可以如上所述，用CD89抗原的純化或富集制備物和/或表達(dá)CD89的細(xì)胞免疫。所述小鼠將產(chǎn)生通過轉(zhuǎn)基因內(nèi)轉(zhuǎn)換重組(順式轉(zhuǎn)換)經(jīng)歷類別轉(zhuǎn)換并且表達(dá)與CD89反應(yīng)的免疫球蛋白的B細(xì)胞。所述免疫球蛋白可以是人序列抗體，其中所述重鏈和輕鏈多肽由人轉(zhuǎn)基因序列編碼，所述序列可以包括通過體細(xì)胞突變和V區(qū)重組連接衍生的序列以及種系編碼的序列；這些人序列免疫球蛋白可以被認(rèn)為與人VL或VH基因區(qū)段和人JL或JL區(qū)段所編碼的多肽序列基本上相同，即使由于體細(xì)胞突變和差別V-J和V-D-J重組連接，可能存在其它非種系序列。關(guān)于這樣的人序列抗體，每條鏈的可變區(qū)通常至少80％由人種系V、J基因區(qū)段編碼以及就重鏈而言由D基因區(qū)段編碼；常常至少85％的所述可變區(qū)由存在于所述轉(zhuǎn)基因上的人種系序列編碼；通常90％或95％或更多的所述可變區(qū)序列由存在于所述轉(zhuǎn)基因上的人種系序列編碼。然而，由于非種系序列由于體細(xì)胞突變以及VJ和VDJ連接而被引入，所以所述人序列抗體將常常具有某些不為在小鼠種系的人轉(zhuǎn)基因中發(fā)現(xiàn)的人V、D或J基因區(qū)段所編碼的可變區(qū)序列(和極少的恒定區(qū)序列)。通常，這樣的非種系序列(或者個別核苷酸位置)將在CDR或已知體細(xì)胞突變聚集的區(qū)中或其附近聚集。與預(yù)定抗原結(jié)合的人序列抗體，可以因同種型轉(zhuǎn)換而產(chǎn)生，使得產(chǎn)生包含人序列γ鏈(例如γ1、γ2a、γ2B或γ3)和人序列輕鏈(例如K)的人抗體。這樣的同種型轉(zhuǎn)換的人序列抗體，由于親和性成熟和抗原對B細(xì)胞的選擇，特別是在二次(或后續(xù))抗原攻擊之后，通常含有一個或多個體細(xì)胞突變，通常在可變區(qū)中，通常在CDR中或在CDR的約10個殘基內(nèi)含有體細(xì)胞突變。這些高親和性人序列抗體可以具有至少1×109M-1、通常至少5×109M-1、常常高于1×1010M-1、有時為5×1010M-1至1×1011M-1或更高的結(jié)合親和力。本發(fā)明的另一方面涉及得自這種小鼠的B細(xì)胞，所述B細(xì)胞可以用來產(chǎn)生表達(dá)以高親和性(例如高于2×109M-1)與CD89結(jié)合的人單克隆抗體的雜交瘤。因此，在本發(fā)明的另一實施方案中，這些雜交瘤用來產(chǎn)生包含結(jié)合CD89的親和性常數(shù)(Ka)至少約2×109M-1的免疫球蛋白的組合物，其中所述免疫球蛋白包含人序列輕鏈，所述人序列輕鏈由以下區(qū)組成(1)輕鏈可變區(qū)，具有與人VL基因區(qū)段和人JL區(qū)段編碼的多肽序列基本相同的多肽序列，和(2)輕鏈恒定區(qū)，具有與人CL基因區(qū)段編碼的多肽序列基本相同的多肽序列；和人序列重鏈，所述人序列重鏈由以下區(qū)組成(1)重鏈可變區(qū)，具有與人VH基因區(qū)段、任選的D區(qū)和人JH區(qū)段編碼的多肽序列基本相同的多肽序列，和(2)恒定區(qū)，具有與人CH基因區(qū)段編碼的多肽序列基本相同的多肽序列。采用一種在其基因組中包含整合的人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠中擴(kuò)增人可變區(qū)基因區(qū)段庫的方法，有助于研制高親和性人抗CD89單克隆抗體，所述方法包括將包含所述整合人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因中不存在的V區(qū)基因區(qū)段的V基因轉(zhuǎn)基因引入到所述基因組中。通常，所述V區(qū)轉(zhuǎn)基因是包含人VH或VL(Vκ)基因區(qū)段排布的一部分的酵母人工染色體，所述人基因區(qū)段可以是人基因組中天然存在的，或者可以是通過重組方法分別剪接在一起的，可以包括次序顛倒的或缺失型V基因區(qū)段。通常，在所述YAC中含有至少5個或更多個功能性V基因區(qū)段。在這種變體中，有可能制備通過所述V庫擴(kuò)增法產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因小鼠，其中所述小鼠表達(dá)包含V區(qū)轉(zhuǎn)基因上存在的V區(qū)基因區(qū)段編碼的可變區(qū)序列和人Ig轉(zhuǎn)基因上編碼的C區(qū)的免疫球蛋白鏈。借助所述V庫擴(kuò)增法，可以產(chǎn)生具有至少5個不同V基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，也可以產(chǎn)生含有至少約24個或更多個V基因的小鼠。某些V基因區(qū)段可能是非功能性的(例如假基因等)；這些區(qū)段可以被保留，或者如果需要，可以通過技術(shù)人員可利用的重組方法來選擇性地缺失。一旦將小鼠種系工程改造，以使其含有具有在含有所述J和C基因區(qū)段的人Ig轉(zhuǎn)基因中基本上不存在的擴(kuò)增V區(qū)段庫的功能性YAC，則可以將所述性狀傳播和繁育到其它遺傳背景中，包括其中具有擴(kuò)增V區(qū)段庫的功能性YAC被繁育到具有不同人Ig轉(zhuǎn)基因的小鼠種系中的背景。具有擴(kuò)增V區(qū)段庫的多種功能性YAC可以被繁育到一個種系中，從而與人Ig轉(zhuǎn)基因(或多個人Ig轉(zhuǎn)基因)一起起作用。雖然這樣的轉(zhuǎn)基因在此被稱為YAC轉(zhuǎn)基因，但當(dāng)它們被整合到基因組中時，則可能基本上缺乏酵母序列，例如在酵母中自主復(fù)制所需的序列；這樣的序列可以任選地在不再需要在酵母中復(fù)制之后(即在導(dǎo)入到小鼠ES細(xì)胞或小鼠prozygote中之前)，通過基因工程(例如限制性消化和脈沖場凝膠電泳或其它合適的方法)來去除。傳播人序列免疫球蛋白表達(dá)的性狀的方法，包括繁育具有人Ig轉(zhuǎn)基因和任選地也具有有擴(kuò)增V區(qū)段庫的功能性YAC的轉(zhuǎn)基因小鼠。VH和VL基因區(qū)段可以都存在于YAC上?？梢詫⑺鲛D(zhuǎn)基因小鼠繁育到從業(yè)者所需的任何背景中，包括帶有其它人轉(zhuǎn)基因、包括人Ig轉(zhuǎn)基因和/或編碼其它人淋巴細(xì)胞蛋白的轉(zhuǎn)基因的背景。本發(fā)明也提供由具有擴(kuò)增V區(qū)庫YAC轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠所產(chǎn)生的高親和性人序列免疫球蛋白。雖然，上文描述了本發(fā)明轉(zhuǎn)基因動物的優(yōu)選實施方案，但考慮了其它實施方案，所述其它實施方案分為四類I.含有未經(jīng)重排的重鏈和重排輕鏈的免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物；II.含有未經(jīng)重排的重鏈和未經(jīng)重排的輕鏈的免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物；III.含有重排重鏈和未經(jīng)重排的輕鏈的免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物；和IV.含有重排重鏈和重排輕鏈的免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動物。在這些類別的轉(zhuǎn)基因動物中，優(yōu)選的優(yōu)先順序如下II＞I＞III＞IV，其中內(nèi)源輕鏈基因(或至少K基因)已經(jīng)通過同源重組(或其它方法)而被敲除；和I＞II＞III＞IV，其中內(nèi)源輕鏈基因未被敲除并且必需通過等位基因排斥而顯性化。III.與CD89結(jié)合的雙特異性/多特異性分子在本發(fā)明的再一實施方案中，可以將人抗CD89單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分衍生化，或者與另一功能性分子例如另一種肽或蛋白質(zhì)(例如Fab’片段)連接，產(chǎn)生與多個結(jié)合部位或靶表位結(jié)合的雙特異性或多特異性分子。例如，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合部分可以與一種或多種其它結(jié)合分子(例如另一種抗體、抗體片段、肽或結(jié)合模擬物)功能性地連接(例如通過化學(xué)偶聯(lián)、基因融合、非共價締合或其它方法)。也可以將所述抗體或抗體片段與抗原如腫瘤抗原連接，使得所述抗原被靶向表達(dá)CD89的免疫細(xì)胞，例如如果所述抗原被內(nèi)化和呈遞，則增強所述過程，并且最終刺激免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明包括包含至少一種對CD89的第一結(jié)合特異性和對靶細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞的靶表位的第二結(jié)合特異性的雙特異性和多特異性分子。包含針對CD89的鼠抗體和針對腫瘤抗原的第二抗體的雙特異性抗體，已經(jīng)證明是有效的抗腫瘤藥。參見例如Valerius，T.等(1997)Blood904485-4492(描述結(jié)合或不結(jié)合G-CSF療法使用的FcαRI×HER-2/Neu雙特異性抗體的抗腫瘤活性)；Elsasser，D.等(1999)AnticancerRes.191525-1528(描述結(jié)合或不結(jié)合G-CSF或GM-CSF療法使用的FcαRI×EGFR雙特異性抗體的抗腫瘤活性)；Stockmeyer，B.等(2000)J.Immunol.1655954-5961(描述結(jié)合或不結(jié)合G-CSF或GM-CSF療法使用的FcαRI×CD20雙特異性抗體的抗腫瘤活性)；Stockmeyer，B.等(2001)J.Immunol.Methods248103-111(描述結(jié)合或不結(jié)合G-CSF或GM-CSF療法使用的FcαRI×CD20和FcαRI×HER-2/neu雙特異性抗體的抗腫瘤活性)；和Sundarapandiyan，K.等(2001)J.Immunol.Methods248，113-123(描述FcαRI×CD30雙特異性抗體的抗腫瘤活性)。本發(fā)明的人抗CD89抗體可以用于作為抗腫瘤藥的同一類型的雙特異性構(gòu)建體中。可以作為靶的腫瘤細(xì)胞是任何類型癌的腫瘤細(xì)胞，包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、肝癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、腎癌、頭部癌癥、頸部癌癥、骨癌、血癌和淋巴系統(tǒng)癌癥。優(yōu)選的靶抗原包括癌胚抗原(CEA)、胃泌素釋放肽受體抗原(GRP)、粘蛋白抗原、EGF-R、HER2/neu、HER3、HER4、CD20、CD30、MAGE抗原、SART抗原、MUC1抗原、c-erb-2抗原和TAG72。TAG72見于例如乳腺、結(jié)腸和卵巢的腫瘤。對CEA特異性的抗原結(jié)合區(qū)可以例如來自稱為MFE-23的單鏈抗體，描述于Casey等(1994)J.Immunol.Methods179105和Chester等(1994)Lancet343455?？笻ER2/neu抗體可以用細(xì)胞系520C9(Ring等1991J.Immunol.28915-917)生產(chǎn)?？贵wH425是一種人源化形式的抗EGF-R抗體M425。針對TAG72的抗體是以下文獻(xiàn)中描述的單克隆抗體cc49公開的PCT申請WO93/11161、對應(yīng)于已授權(quán)的EP專利365997號的公開的PCT申請WO90/04410、公開的PCT申請WO93/12231；和公開的PCT申請WO89/01783。其它抗原可以是與B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的抗原，例如HLA-DR、CD74、CD79、CD20、CD30、CD37和CD19。與其它血液疾病相關(guān)的抗原也在本發(fā)明范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明也提供治療血細(xì)胞疾病例如白血病和淋巴瘤的方法。乳腺癌和卵巢癌可以是性激素依賴性癌癥。乳腺腫瘤的特征可以是異常表達(dá)的受體，例如人EGF樣受體家族(human-EGF-likereceptorfamily)(HER)的那些受體，例如HER-2、HER-3和HER-4。本發(fā)明不限于HER抗原的這些實施方案?？梢詫⑻烊坏腍ER配體-Heregulin，摻入到人單克隆抗體中，例如摻入到雙特異性抗體(BsAb)或多特異性分子中，作為靶向在癌癥期間表達(dá)一種或多種HER受體的乳腺腫瘤細(xì)胞的工具。再者，heregulin分子是例如組合含有HER-2、HER-3或HER-4中每個的單體的異二聚體HER受體的結(jié)合決定因子。在一個實施方案中，單克隆抗體包含美國專利第5,367,060號中所示的heregulinβ2的氨基酸171-239。也可以使用heregulinβ2的其它部分以及其它heregulin分子的部分，例如美國專利第5,367,060號所公開的那些部分。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合部分也可以用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤。在正常哺乳動物胎兒發(fā)育期間表達(dá)的nestin蛋白，在包括大多數(shù)形式的腦癌在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤上表達(dá)(McKay，D.G.Ronald，美國專利第5,338,839號，8/16/94)。nestin也在皮膚的黑素瘤以及已經(jīng)轉(zhuǎn)移到其它器官且難以檢測和治療的黑素瘤上表達(dá)(V.A.Florenes，R.Holm，O.Myklebost，U.Lendahl，O.Fodstad，CancerRes.54354-6，1994)。對于用本發(fā)明的分子治療腦部腫瘤的優(yōu)選遞藥部位是直接遞藥到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，或者通過脊髓注射或細(xì)針遞藥直接遞藥到腦部。對于轉(zhuǎn)移癌，優(yōu)選的遞藥途徑是直接注射到循環(huán)系統(tǒng)中，或者通過此中所述的離體血液法。本發(fā)明的方法適用的其它腫瘤類型例如但不限于Wilm腫瘤(A.J.Buckler，K.M.Call，T.M.Glaser，D.A.Haber，D.E.Housman，C.Y.Ito，J.Pelletier，Rose，E.A.Rose，美國專利第5,350,840號)，一種由于在患者的兩個完整拷貝中通常發(fā)現(xiàn)的單拷貝基因中發(fā)生體細(xì)胞突變所致的小兒腎癌。Wilm腫瘤在95％的病例中可以通過手術(shù)治愈，設(shè)想一種結(jié)合劑適合作為手術(shù)患者的輔助治療形式。本發(fā)明物質(zhì)的組合物和方法所適合的已知癌相關(guān)蛋白的其它實例包括與胃腸癌相關(guān)的那些蛋白(R.Fishel等，國際申請WO95/14085，05/26/95)、特征為在化療期間產(chǎn)生多種藥物抗性的那些蛋白(J.M.Croop等，美國專利第5,198,344號)和技術(shù)人員熟知的大量癌基因，例如Rb、ras和c-myc，其序列是本領(lǐng)域技術(shù)人員可得到用于分析的。本發(fā)明的組合物例如適合于抑制被認(rèn)為加強腫瘤轉(zhuǎn)移的分泌型酶，例如基質(zhì)金屬蛋白酶(Liotta，L.A.等，(1991)，Cell，64327-336)。在后一實施方案中，具有對于基質(zhì)金屬蛋白酶的結(jié)合決定簇和另一個對于FcαR的結(jié)合決定簇的結(jié)合劑，可能有助于抑制和清除這些酶的原位活性。如果與標(biāo)準(zhǔn)外科方案和化療方案結(jié)合使用，則預(yù)期所述組合物降低癌癥的復(fù)發(fā)并且增強長期存活。除腫瘤細(xì)胞之外，可以將效應(yīng)細(xì)胞靶向產(chǎn)生自身抗體的淋巴細(xì)胞以治療自身免疫病，或者靶向產(chǎn)生IgE的淋巴細(xì)胞以治療變態(tài)反應(yīng)。可以用本發(fā)明的結(jié)合劑治療的自身免疫病包括糖尿病、關(guān)節(jié)炎(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎)、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性甲狀腺炎、皮炎(包括特應(yīng)性皮炎和濕疹性皮炎)、牛皮癬、Sjgren綜合征包括Sjgren綜合征后繼發(fā)的干性角膜結(jié)膜炎、斑形脫發(fā)、由于節(jié)肢動物叮咬反應(yīng)引起的變態(tài)反應(yīng)、節(jié)段性回腸炎、口瘡潰瘍、虹膜炎、結(jié)膜炎、角膜結(jié)膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎、哮喘、變應(yīng)性哮喘、皮膚紅斑狼瘡、硬皮病、陰道炎、直腸炎、藥疹、麻風(fēng)逆轉(zhuǎn)反應(yīng)、麻風(fēng)性結(jié)節(jié)性紅斑、自身免疫性眼色素層炎、變應(yīng)性腦脊髓炎、急性壞死性出血性腦病、特發(fā)性雙側(cè)進(jìn)行性感覺神經(jīng)性聽覺損失、再生障礙性貧血、純紅細(xì)胞性貧血、特發(fā)性血小板減少、多軟骨炎、Wegener肉芽腫病、慢性活動型肝炎、Stevens-Johnson綜合征、特發(fā)性口炎性腹瀉、扁平苔癬、節(jié)段性回腸炎、Graves眼病、肉樣瘤病、原發(fā)性膽汁性肝硬變、后眼色素層炎和間質(zhì)性肺纖維化。因此，通過例如給予患有自身免疫病的受治療者一種具有至少一個對人CD89特異性的抗原結(jié)合區(qū)和對自身免疫細(xì)胞上表位特異性的抗原結(jié)合區(qū)的抗體，可以治療自身免疫病。在一個實施方案中，所述靶表位是自身抗體上的表位。因此，橋連所述B淋巴細(xì)胞和表達(dá)CD89的效應(yīng)細(xì)胞的多特異性抗體，可以靶向并且破壞其表面具有自身抗體的靜息B淋巴細(xì)胞，從而誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞功能，導(dǎo)致所述B淋巴細(xì)胞裂解。同樣，具有至少一種對CD89的結(jié)合特異性和至少一種對產(chǎn)生IgE的淋巴細(xì)胞上表位的結(jié)合特異性的抗體，可以用來治療變態(tài)反應(yīng)。供治療受治療者的變態(tài)反應(yīng)的抗體，也可以是具有至少一個對IgE抗體上表位特異性的抗原結(jié)合區(qū)的結(jié)合劑。因此，這樣一種結(jié)合劑可以連接表達(dá)CD89的效應(yīng)細(xì)胞和其表面覆蓋有IgE的靶細(xì)胞如嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞，導(dǎo)致所述靶細(xì)胞裂解。這樣一種治療也可以防治抗原與IgE分子結(jié)合，從而防止這些細(xì)胞分泌參與變態(tài)反應(yīng)的介質(zhì)，例如組胺。另外，所述抗體可以結(jié)合可溶性IgE，從而防止IgE與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)合。所述靶也可以是微生物(細(xì)菌或病毒)或可溶性抗原(例如類風(fēng)濕因子或其它自身抗體和毒素)。微生物包括病原體，例如病毒、細(xì)菌、真菌、原生動物。通過靶向受微生物感染的細(xì)胞，例如病原體感染的細(xì)胞，也可以靶向微生物。因此，本發(fā)明提供治療傳染病的方法，所述方法包括例如通過給予患有傳染病的受治療者有效量的本發(fā)明的雙特異性分子，所述雙特異性分子具有至少一個對CD89特異性的抗原結(jié)合區(qū)和至少一個對微生物上表位特異性的抗原結(jié)合區(qū)。術(shù)語“傳染病”意指包括由引起疾病的生物(統(tǒng)稱為“病原體”)的細(xì)菌、病毒、真菌和原生動物中的一種或多種引起的疾病。在本發(fā)明中，病原體例如但不限于結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)、麻風(fēng)分枝桿菌(M.leprae)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、痢疾志賀氏菌(Shigelladysenteria)、傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphi)、副傷寒沙門氏菌(S.paratyphi)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、溶血性鏈球菌(Streptococcushemolyticus)、肺炎嗜血菌(Hemophiluspneumoniae)、大腸桿菌(Escherichiacoli)血清型0157、衣原體(Chlamydiaspecies)、螺桿菌(Helicobacterspecies)；HIV-1、-2和-3、HTLV、FELV、HSV-I和-II、乙型肝炎病毒、(例如HBV主要表面抗原)、非甲非乙非丙型肝炎病毒、EB病毒(EBV糖蛋白)、痘病毒、狂犬病病毒；曲霉(Aspergillusspecies)；溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoebahistolytica)、賈第鞭毛蟲(Giardiaspecies)；新城疫病毒；鼠弓形體(Toxoplasmagondii)；以及白色念珠菌(Candidaalbicans)。通過篩選蛋白質(zhì)以及通過體外分析肽從這些生物獲得獨特表位是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。因此，本發(fā)明的優(yōu)選抗體具有至少一個對任何這些微生物上的表位特異性的抗原結(jié)合區(qū)。在一個優(yōu)選實施方案中，所述抗體具有對HIV病毒的包膜糖蛋白如HIV的gp41特異性的抗原結(jié)合區(qū)。對gp120或CD4特異性的抗體也在本發(fā)明范圍內(nèi)。在一個實施方案中，所述抗體來源于人抗HIV-1IgG1mAb，即DZ33。IgA在粘膜防御中起重要作用，CD89已經(jīng)在效應(yīng)細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)，例如在得自粘膜區(qū)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)(參見例如Shen，L.和Collins，J.(1989)Immunology68491)。例如，發(fā)現(xiàn)粘膜表面例如肺部的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)CD89(Shen，L.和Collins，J.(1989)Immunology68491)。因此，本發(fā)明提供從粘膜區(qū)消除微生物或任何不想要的細(xì)胞的方法。這樣的方法從粘膜部位是入侵生物體通常的進(jìn)入點這一事實以及超氧化物是有效的微生物劑這一事實來看特別有用。例如，已經(jīng)表明氧代謝產(chǎn)物例如超氧化物陰離子(superanion)具有殺細(xì)菌和抑制細(xì)菌的效應(yīng)。針對靶表位的抗原結(jié)合區(qū)也可以是針對受體的配體，例如生長因子或分化因子，它們可以將所述結(jié)合劑靶向具有這些生長因子或分化因子的受體的細(xì)胞。例如，本發(fā)明的抗體可以包含表皮生長因子(EGF)或其能夠與表皮生長因子受體(EGF-R)相互作用的至少其一部分或修飾形式。所述抗體也可以包含heregulin的結(jié)合部分。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，所述配體是小肽，例如鈴蟾肽、胃泌素釋放肽(GRP)、雨濱蛙肽、神經(jīng)調(diào)節(jié)肽B或神經(jīng)調(diào)節(jié)肽C。所述肽的序列可以例如在美國專利第5,217,955號中找到，其內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。所述配體也可以是這些肽中任一種的修飾形式。所述修飾可以增強與所述受體的結(jié)合、降低與受體的結(jié)合或不影響與受體的結(jié)合。所述配體的修飾也可以將激動劑轉(zhuǎn)變?yōu)檗卓箘?，使得所述配體抑制而不是刺激細(xì)胞增殖。所述配體的修飾可以是添加、缺失、取代或修飾至少一個氨基酸。用于靶向的效應(yīng)細(xì)胞可以是人白細(xì)胞，優(yōu)選巨噬細(xì)胞。其它細(xì)胞包括單核細(xì)胞和其它帶有IgA受體的細(xì)胞。如果需要，可以從待治療宿主獲得用于靶向的效應(yīng)細(xì)胞。靶效應(yīng)細(xì)胞，即包有本發(fā)明結(jié)合劑的效應(yīng)細(xì)胞，可以以生理上可接受的溶液中的細(xì)胞懸浮液給予。給予的細(xì)胞數(shù)可以約為108-109，但將視治療目的而變。一般而言，所述量足以獲得在靶細(xì)胞上定位，并且通過依賴抗體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解(ADCC)實現(xiàn)殺傷靶細(xì)胞。給藥途徑也可以改變。例如，在腫瘤治療中，根據(jù)腫瘤的定位，可以將所述靶效應(yīng)細(xì)胞靜脈內(nèi)給予或者直接給予腫瘤部位，例如在卵巢癌的情況下直接給予腹腔。本發(fā)明的雙特異性和多特異性分子還可以包括第三結(jié)合特異性。在一個實施方案中，所述第三結(jié)合特異性是抗增強因子(EF)部分，例如與參與細(xì)胞毒性活性的表面蛋白結(jié)合的分子，從而增強針對所述靶細(xì)胞的免疫應(yīng)答?！翱乖鰪娨蜃硬糠帧笨梢允桥c給定分子如抗原或受體結(jié)合的抗體、功能性抗體片段或配體，從而導(dǎo)致增強針對Fc受體或靶細(xì)胞抗原的結(jié)合決定簇的效應(yīng)?！翱乖鰪娨蜃硬糠帧笨梢越Y(jié)合Fc受體或靶細(xì)胞抗原。另一方面，所述抗增強因子部分可以與不同于所述第一和第二結(jié)合特異性所結(jié)合的實體的實體結(jié)合。例如，所述抗增強因子部分可以結(jié)合細(xì)胞毒性T細(xì)胞(例如通過CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、CD40、ICAM-1或?qū)е略鰪娽槍Π屑?xì)胞的免疫應(yīng)答的其它免疫細(xì)胞)。在一個實施方案中，本發(fā)明的雙特異性和多特異性分子包含作為結(jié)合特異性的至少一種抗體或其抗體片段，包括例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或單鏈Fv。所述抗體也可以是輕鏈或重鏈二聚體、或者任何其最小片段，例如Fv或1990年8月7日授予的Ladner等的美國專利第4,946,778號中所述的單鏈構(gòu)建體，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。雖然優(yōu)選人單克隆抗體，但是可以用于本發(fā)明的雙特異性或多特異性分子中的其它抗體是鼠單克隆抗體、嵌合單克隆抗體和人源化單克隆抗體。嵌合小鼠-人單克隆抗體(即嵌合抗體)可以用本領(lǐng)域已知的重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。例如，編碼鼠(或其它物種)單克隆抗體分子的Fc恒定區(qū)的基因用限制性酶消化，以除去編碼鼠Fc的區(qū)，并且用編碼人Fc恒定區(qū)的基因的等同部分取代。(參見Robinson等，國際專利公開說明書PCT/US86/02269；Akira等，歐洲專利申請184,187；Taniguchi，M.，歐洲專利申請171,496；Morrison等，歐洲專利申請173,494；Neuberger等，國際申請WO86/01533；Cabilly等，美國專利第4,816,567號；Cabilly等，歐洲專利申請125,023；Better等(1988Science2401041-1043)；Liu等(1987)PNAS843439-3443；Liu等，1987，J.Immunol.1393521-3526；Sun等(1987)PNAS84214-218；Nishimura等，1987，Cane.Res.47999-1005；Wood等(1985)Nature314446-449；和Shaw等，1988，J.NatlCancerInst.801553-1559)。還可以通過將不直接參與抗原結(jié)合的Fv可變區(qū)的序列用得自人Fv可變區(qū)的等同序列取代，使所述嵌合抗體進(jìn)一步人源化。Morrison，S.L.，1985，Science2291202-1207以及Oi等，1986，BioTechniques4214提供了有關(guān)人源化嵌合抗體的全面綜述。那些方法包括分離、操作和表達(dá)編碼得自重鏈或輕鏈中至少一種的完整免疫球蛋白Fv可變區(qū)或其部分的核酸序列。這類核酸的來源是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，例如可以得自7E3，一種抗GPIIbIIIa抗體生產(chǎn)雜交瘤。然后，可以將編碼所述嵌合抗體或其片段的重組DNA克隆到合適的表達(dá)載體中?；蛘?，合適的人源化抗體可以通過CDR置換來產(chǎn)生，美國專利5,225,539；Jones等1986Nature321552-525；Verhoeyan等1988Science2391534；以及Beidler等1988J.Immunol.1414053-4060。特定人抗體的所有CDR都可以用非人CDR的至少一部分取代，或者僅所述CDR中的一些被非人類CDR取代。僅需要取代所述人源化抗體與Fc受體結(jié)合所需數(shù)目的CDR?？梢杂媚軌蛴脕碓从诜侨祟惪贵w的CDR取代人抗體的至少一部分CDR的任何方法將抗體人源化。Winter描述了一種可以用來制備本發(fā)明的人源化抗體的方法(英國專利申請GB2188638A，于1987年3月26日申請)，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。所述人CDR可以用寡核苷酸定點誘變，用非人類CDR來取代，如下述文獻(xiàn)中所述國際申請WO94/10332，題為HumanizedAntibodiestoFcReceptorsforImmunoglobulinGonHumanMononuclearPhagocytes。其中取代、缺失或添加特定氨基酸的嵌合抗體和人源化抗體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。特別是，優(yōu)選的人源化抗體在構(gòu)架區(qū)中有氨基酸取代，例如以改進(jìn)與抗原的結(jié)合。例如，在具有小鼠CDR的人源化抗體中，位于人構(gòu)架區(qū)中的氨基酸可以用位于小鼠抗體中相應(yīng)位置的氨基酸取代。已知這樣的取代在某些情況下改進(jìn)人源化抗體與抗原的結(jié)合。其中有氨基酸添加、缺失或取代的抗體在此被稱為修飾型抗體或改變型抗體。術(shù)語修飾型抗體也包括通過例如缺失、添加或取代所述抗體的部分而修飾的抗體，例如單克隆抗體、嵌合抗體和人源化抗體。例如，抗體可以通過缺失恒定區(qū)并且用意圖增加所述抗體的半壽期如血清半壽期、穩(wěn)定性或親和力的恒定區(qū)取代來修飾。任何修飾都在本發(fā)明的范圍內(nèi)，只要所述雙特異性和多特異性分子具有至少一個對CD89特異性的抗原結(jié)合區(qū)并且觸發(fā)至少一種效應(yīng)子功能。本發(fā)明的雙特異性和多特異性分子可以用化學(xué)技術(shù)(參見例如D.M.Kranz等(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA785807)、“polydoma”技術(shù)(參見Reading的美國專利4,474,893)或重組DNA技術(shù)來制備。特別是，通過用本領(lǐng)域已知的和此中提供的實施例中描述的方法，將組成結(jié)合特異性例如抗靶細(xì)胞和抗CD89結(jié)合特異性綴合，可以制備本發(fā)明的雙特異性和多特異性分子。例如，所述雙特異性和多特異性分子的每種結(jié)合特異性可以分別產(chǎn)生，然后相互連接。當(dāng)所述結(jié)合特異性是蛋白質(zhì)或肽時，可以用各種各樣的偶聯(lián)劑或交聯(lián)劑進(jìn)行共價綴合。交聯(lián)劑的實例包括蛋白A、碳二亞胺、N-琥珀酰亞胺基-S-乙酰-硫代乙酸(SATA)、5，5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、鄰苯二馬來酰亞胺(oPDM)、N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸(SPDP)和4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亞胺基酯(sulfo-SMCC)(參見例如Karpovsky等(1984)J.Exp.Med.1601686；Liu，MA等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA828648)。其它方法包括Paulus(BehringIns.Mitt.(1985)No.78，118-132)；Brennan等(Science(1985)22981-83)，和Glennie等(J.Immunol.(1987)1392367-2375)所述的方法。優(yōu)選的綴合劑是SATA和sulfo-SMCC，都可得自PierceChemicalCo.(Rockford，IL)。當(dāng)所述結(jié)合特異性是抗體(例如兩種人源化抗體)時，它們可以通過兩條重鏈C末端鉸鏈區(qū)的硫氫基結(jié)合來綴合。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，在綴合之前修飾所述鉸鏈區(qū)，以使其含有奇數(shù)的硫氫基殘基，優(yōu)選為一個硫氫基殘基。或者，兩種結(jié)合特異性可以在同一載體中編碼，并且在同一宿主細(xì)胞中表達(dá)和裝配。這一方法在所述雙特異性和多特異性分子為mAb×mAb、mAb×Fab、Fab×F(ab′)2或配體×Fab融合蛋白時特別有用。本發(fā)明的雙特異性和多特異性分子例如雙特異性分子，可以是單鏈分子，例如單鏈雙特異性抗體、包含一個單鏈抗體和一個結(jié)合決定簇的單鏈雙特異性分子或者包含兩個結(jié)合決定簇的單鏈雙特異性分子。雙特異性和多特異性分子也可以是單鏈分子，或者可以包含至少兩個單鏈分子。用于制備雙特異性和多特異性分子的方法描述于例如美國專利第5,260,203號；美國專利第5,455,030號；美國專利第4,881,175號；美國專利第5,132,405號；美國專利第5,091,513號；美國專利第5,476,786號；美國專利第5,013,653號；美國專利第5,258,498號；和美國專利第5,482,858號。所述雙特異性和多特異性分子與其特異性靶的結(jié)合，可以通過以下測定來證實酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、FACS分析、生物測定(例如生長抑制)或蛋白質(zhì)印跡測定。這些測定中的每種一般通過用對感興趣的復(fù)合物特異性的標(biāo)記試劑(例如抗體)來檢測特別感興趣的蛋白質(zhì)-抗體復(fù)合物的存在。例如，F(xiàn)cR-抗體復(fù)合物可以用例如識別和特異性結(jié)合所述抗體-FcR復(fù)合物的酶聯(lián)抗體或抗體片段來檢測?；蛘?，所述復(fù)合物可以用多種其它免疫測定中的任一種來檢測。例如，可以對所述抗體進(jìn)行放射性標(biāo)記，并且用于放射免疫測定(RLA)(參見例如Weintraub，B.，PrinciplesofRadioimmunoassays，SeventhTrainingCourseonRadioligandAssayTechniques，TheEndocrineSociety，March，1986，所述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中)。所述放射性同位素可以通過諸如應(yīng)用γ計數(shù)器或閃爍計數(shù)器或通過放射自顯影的方法來檢測。IV.結(jié)合測定可以進(jìn)行幾種測定來表明本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分與CD89如人CD89特異性地結(jié)合。例如，可以進(jìn)行結(jié)合測定，所述結(jié)合測定比較所述抗體和IgA與多種細(xì)胞的結(jié)合，其中某些細(xì)胞被IgA結(jié)合(例如單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)，而某些細(xì)胞不被IgA結(jié)合(例如K-562細(xì)胞)。本發(fā)明的抗體應(yīng)該基本上結(jié)合與IgA所結(jié)合的相同的細(xì)胞群。使用所述抗體和IgA的競爭結(jié)合實驗將指出兩種因子是否識別同一表位。結(jié)合實驗其中可以是流式細(xì)胞術(shù)實驗、間接免疫熒光測定或ELISA。此外，IgA和所述抗體應(yīng)該免疫沉淀來自同一細(xì)胞的具有相似分子量的蛋白質(zhì)。另外，用IgA預(yù)先清除具有CD89的細(xì)胞裂解液，應(yīng)該導(dǎo)致與在無所預(yù)先清除的情況下相比，用所述抗體免疫沉淀的蛋白質(zhì)較少。同樣，用所述抗體預(yù)先清除所述細(xì)胞裂解液，應(yīng)該導(dǎo)致與在無所預(yù)先清除的情況下相比，用IgA免疫沉淀的蛋白質(zhì)較少。用以表明本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分與IgA識別相同的抗原的其它試驗是本領(lǐng)域已知的。另外，由于已經(jīng)克隆了CD89，例如人CD89，所以有可能使用重組產(chǎn)生的CD89或其部分或者經(jīng)轉(zhuǎn)染以表達(dá)CD89的細(xì)胞，來表明抗體與CD89結(jié)合。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗體在將靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞連接時，刺激所述效應(yīng)細(xì)胞吞噬所述靶細(xì)胞。例如，本發(fā)明優(yōu)選的具有至少一個對CD89特異性的抗原結(jié)合區(qū)和至少一個針對靶細(xì)胞上表位的抗原結(jié)合區(qū)的雙特異性抗體，可以誘導(dǎo)吞噬所述靶細(xì)胞。事實上，已經(jīng)表明，一種My43(一種小鼠抗CD89抗體)與抗紅細(xì)胞F(ab)’2連接的異抗體，介導(dǎo)單核細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞。吞噬作用測定可以如下進(jìn)行。將壓積(packed)靶細(xì)胞例如牛紅細(xì)胞(OE)(10μl)與20μl預(yù)先測量導(dǎo)致最大玫瑰花結(jié)形成的濃度的所述F(ab’)2-Ig綴合物，于10℃下混合16小時。洗滌異抗體包被的OE，調(diào)至4×107細(xì)胞/ml，然后與等體積2×106細(xì)胞/ml的髓細(xì)胞混合。將該混合物于37℃孵育10分鐘，將細(xì)胞沉淀，再孵育20分鐘，然后未被攝入的OE用緩沖的氯化銨于4℃裂解?？梢酝ㄟ^顯微鏡檢查Wright′s吉姆薩(Sigma)染色的cytospin標(biāo)本(preparations)，評價吞噬作用。在一式兩份的玻片中計數(shù)至少200個細(xì)胞。吞噬作用可以以含有一個或多個被攝入的紅細(xì)胞的細(xì)胞的百分率來定量。優(yōu)選的抗體觸發(fā)氧化爆發(fā)，即在與效應(yīng)細(xì)胞上的CD89結(jié)合時在效應(yīng)細(xì)胞中產(chǎn)生超氧化物陰離子。例如，已表明My43(一種小鼠抗CD89抗體)觸發(fā)經(jīng)干擾素-γ處理的U937細(xì)胞產(chǎn)生超氧化物陰離子?？梢栽诠滔嗌匣蛟谌芤褐羞M(jìn)行超氧化物測定。固相超氧化物測定可以如下進(jìn)行?？梢杂?ml/孔的含100μg/ml多聚L-賴氨酸(Sigma，St.Louis，MO)的PBS溶液，于室溫處理平底6孔PVC組織培養(yǎng)板(FalconPlasticsBaxterCorporation，BedfordMA)達(dá)30分鐘。吸干后，可以加入戊二醛(2％，Sigma)，于室溫孵育15分鐘。用PBS洗滌4次后，可以加入含有所需量Ig的1mlPBS，于周圍溫度下孵育2小時。然后各孔用PBS洗滌，裝滿含100mM甘氨酸/0.1％BSA的PBS，于4℃孵育18小時。然后它們可以用PBS洗滌2次，在KrebsRingerHepes緩沖鹽溶液(KRH)中洗滌1次，在含1mMKCN和1mg/ml馬心高鐵細(xì)胞色素c(Sigma)的KRH中加入3×10+6細(xì)胞/孔?？梢詫⒓?xì)胞以100×g離心5分鐘離心到板上，于37℃孵育。加入PMA(Sigma)至所示的終濃度，作為陽性對照。30分鐘后，可以取出內(nèi)容物，離心，在Dynatech分光光度計(DynatechLabs，Chantilly，VA)上于550nm讀取上清液的OD。懸浮液超氧化物測定可以如下進(jìn)行?？梢詫⒓?xì)胞與mAb一起于4℃孵育45分鐘，然后在KRH中洗滌，重懸于含有1mMKCN和1mg/ml馬心高鐵細(xì)胞色素c(Sigma)的KRH中，開始于37℃孵育?？梢约尤隤MA(Sigma)至所示的終濃度，作為陽性對照。30分鐘后，可以取出樣品，離心，在Dynatech分光光度計(DynatechLabs，Chantilly，VA)上于550nm讀取上清液的OD。V.抗體綴合物/免疫毒素另一方面，本發(fā)明的特征在于與治療部分綴合的人抗CD89單克隆抗體或其片段，所述治療部分例如細(xì)胞毒素、藥物或放射性同位素。當(dāng)與細(xì)胞毒素綴合時，這些抗體綴合物被稱為“免疫毒素”。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒性劑包括對細(xì)胞有害(例如殺傷)的任何藥劑。實例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、依米丁、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長春新堿、長春花堿、秋水仙素、多柔比星、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、普卡霉素、放線菌素D、1-脫氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾和嘌呤霉素及其類似物或同系物。治療藥包括但不限于抗代謝物(例如甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶decarbazine)、烷化劑(例如氮芥、thioepa苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈佐星、絲裂霉素C和順式二胺二氯鉑(II)(DDP)順鉑)、蒽環(huán)類抗生素(例如柔紅霉素(舊稱道諾霉素)和多柔比星)、抗生素類(例如放線菌素D(舊稱放線菌素)、博來霉素、普卡霉素和安曲霉素(AMC))以及抗有絲分裂藥(例如長春新堿和長春花堿)。本發(fā)明的抗體可以與放射性同位素例如放射性碘綴合，產(chǎn)生用于治療CD89相關(guān)疾病如癌癥的細(xì)胞毒性放射性藥物。本發(fā)明的抗體綴合物可以用來修飾給定的生物反應(yīng)，所述藥物部分不應(yīng)解釋為限于典型的化療藥。例如，所述藥物部分可以是具有所需生物活性的蛋白質(zhì)或多肽。這樣的蛋白質(zhì)可以包括例如酶活性毒素或其活性片段，如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、假單胞菌外毒素、或白喉毒素；蛋白質(zhì)，例如腫瘤壞死因子或干擾素-γ；或者是生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，例如淋巴因子、白介素-1(″IL-1″)、白介素-2(″IL-2″)、白介素-6(″IL-6″)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(″GM-CSF″)、粒細(xì)胞集落刺激因子(″G-CSF″)或其它生長因子。用于將這樣的治療部分與抗體綴合的技術(shù)是眾所周知的，參見例如Arnon等，″MonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapy″，載于MonoclonalAntibodiesAndCancerTherapy，Reisfeld等(編著)，pp.243-56(AlanR.Liss，Inc.1985)；Hellstrom等，″AntibodiesForDrugDelivery″，載于ControlledDrugDelivery(2ndEd.)，Robinson等(編著)，pp.623-53(MarcelDekker，Inc.1987)；Thorpe，″AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapyAReview″，載于MonoclonalAntibodies′84BiologicalAndClinicalApplications，Pinchera等(編著)，pp.475-506(1985)；″Analysis，Results，AndFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapy″，載于MonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapy，Baldwin等(編著)，pp.303-16(AcademicPress1985)，以及Thorpe等，″ThePreparationAndCytotoxicPropertiesOfAntibody-ToxinConjugates″，Immunol.Rev.，62119-58(1982)。VI.藥用組合物另一方面，本發(fā)明提供一種組合物，例如藥用組合物，所述組合物包含與藥學(xué)上可接受的載體一起配制的一種或者一個組合物本發(fā)明的人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。在一個優(yōu)選實施方案中，所述組合物包括多種(例如兩種或更多種)本發(fā)明的分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分的組合。優(yōu)選所述組合物中每種所述抗體或其抗原結(jié)合部分與CD89的不同預(yù)選表位結(jié)合。在一個實施方案中，所述組合物包含一種或者一個組合的本發(fā)明雙特異性或多特異性分子(例如它含有至少一個針對靶細(xì)胞的結(jié)合特異性和至少一個針對CD89的結(jié)合特異性)。本發(fā)明的藥用組合物也可以在聯(lián)合療法中給予，即與其它藥劑聯(lián)合給予。例如，所述聯(lián)合療法可以包括本發(fā)明的組合物與至少一種抗腫瘤藥或其它常規(guī)療法。此中所用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑以及生理上相容的類似的載體。優(yōu)選所述載體適用于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、胃腸外、脊髓或表皮給藥(例如通過注射或輸注)。根據(jù)給藥途徑，所述活性化合物即抗體、雙特異性和多特異性分子可以用保護(hù)所述化合物免遭酸和可以使所述化合物失活的其它天然條件的作用的材料來包衣?！八帉W(xué)上可接受的鹽”是指保留母體化合物的所需生物活性并且不引起任何不想要的毒理學(xué)效應(yīng)的鹽(參見例如Berge，S.M.等(1977)J.Pharm.Sci.661-19)。這樣的鹽的實例包括酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括由無毒無機酸以及無毒有機酸衍生的鹽，無毒無機酸例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等，無毒有機酸例如脂族一和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸等。堿加成鹽包括由堿土金屬以及無毒有機胺衍生的鹽，堿土金屬例如鈉、鉀、鎂、鈣等，無毒有機胺例如N，N′-二芐基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯代普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因等。本發(fā)明的組合物可以通過本領(lǐng)域已知的各種各樣的方法來給予。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到的，給藥途徑和/或方式將視所需結(jié)果而變。所述活性化合物可以與保護(hù)所述化合物抵抗快速釋放的載體一起制備，例如控釋制劑，包括植入物、透皮貼劑和微膠囊遞藥系統(tǒng)?？梢允褂蒙锟山到獾纳锵嗳菪跃酆衔铮缫蚁?醋酸乙烯共聚物、聚酐、聚羥基乙酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制備這類制劑的許多方法是專利方法或者是本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍已知的。參見例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems，J.R.Robinson編著，MarcelDekker，Inc.，NewYork，1978。為了通過某些給藥途徑給予本發(fā)明的化合物，可能必需用防止其失活的材料來包衣，或者將所述化合物與所述材料共同給予。例如，所述化合物可以在合適的載體例如脂質(zhì)體或稀釋劑中給予受治療者。藥學(xué)上可接受的稀釋劑包括鹽水和水性緩沖液。脂質(zhì)體包括水包油包水型CGF乳液以及常規(guī)的脂質(zhì)體(Strejan等(1984)J.Neuroimmunol.727)。藥學(xué)上可接受的載體包括無菌水性溶液或分散體以及用于臨時制備無菌注射液或分散體的無菌粉末。將這樣的介質(zhì)和藥劑用于藥用活性物質(zhì)是本領(lǐng)域已知的。除非由于任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑與所述活性化合物不相容，考慮了其在本發(fā)明藥用組合物中的應(yīng)用。也可以將補充的活性化合物摻入到所述組合物中。治療組合物通常必需是無菌的，并且在生產(chǎn)和貯存條件下穩(wěn)定。所述組合物可以配制為溶液、微乳劑或適合于高藥物濃度的其它有序結(jié)構(gòu)。所述載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的混合物。例如通過應(yīng)用包衣，例如卵磷脂，在分散體的情況下通過維持所需的粒徑，以及通過利用表面活性劑，可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃有浴Ｔ谠S多情況下，優(yōu)選在所述組合物中包括等滲劑，例如糖類、多元醇例如甘露醇、山梨醇或氯化鈉。通過在所述組合物中包括延遲吸收的藥劑，例如一硬脂酸鹽和明膠，可以引起注射用組合物的延長吸收。通過將所需量的所述活性化合物與根據(jù)需要的一種或一個組合的上述組分摻入到合適的溶劑中，然后微過濾除菌，可以制備無菌注射液。一般而言，通過將所述活性化合物摻入到含有基本分散介質(zhì)和上述的所需其它組分的無菌載體中，制備分散體。就供制備無菌注射液用的無菌粉末而言，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，由預(yù)先過濾除菌的其溶液得到的所述有效成分加上任何額外的所需組分的粉末。調(diào)節(jié)給藥方案，以提供最適所需反應(yīng)(例如治療反應(yīng))。例如，可以給予一次大劑量，可以在規(guī)定時間內(nèi)給予幾個分次劑量，或者根據(jù)治療情況的需要所指示的，所述劑量可以按比例減少或增加。尤其有利的是配制單位劑型的胃腸外組合物，以便于給藥和給藥的一致性。此中所用的單位劑型是指對于待治療的受治療者適合作為單位劑量的物理上分離的單位；每個單位含有計算用以與所需藥用載體結(jié)合產(chǎn)生所需療效的預(yù)定量的活性化合物。對于本發(fā)明的單位劑型的規(guī)定由以下因素決定或者直接取決于以下因素(a)所述活性化合物的獨特特性和待達(dá)到的特定療效，和(b)用于治療個體的敏感性的這樣一種活性化合物的配制領(lǐng)域中固有的限制。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實例包括(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)脂溶性抗氧化劑，例如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。對于所述治療組合物，本發(fā)明的制劑包括適合于經(jīng)口、鼻、局部(包括口腔含化和舌下)、直腸、陰道和/或胃腸外給藥的制劑。所述制劑通?？梢砸詥挝粍┬痛嬖?，并且可以采用制藥領(lǐng)域已知的任何方法來制備?？梢耘c載體材料聯(lián)合產(chǎn)生單劑量形式的有效成分的量，可以根據(jù)待治療的受治療者和特定的給藥方式而變。可以與載體材料聯(lián)合產(chǎn)生單劑量形式的有效成分的量，一般是所述組合物產(chǎn)生療效的量。一般而言，照百分率計，該量的范圍將為約0.01-99％的有效成分，優(yōu)選約0.1-70％，更優(yōu)選約1-30％。適用于陰道給藥的本發(fā)明的制劑也包括含有本領(lǐng)域已知的合適的這類載體的子宮托、陰道塞、乳油、凝膠劑、糊劑、泡沫制劑或噴霧制劑。用于本發(fā)明組合物的局部給藥或透皮給藥的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏劑、糊劑、乳油、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑。所述活性化合物可以在無菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體以及可能需要的任何防腐劑、緩沖劑或拋射劑混合。此中所用的短語“胃腸外給藥”和“在胃腸外給藥”是指腸道給藥和局部給藥之外的給藥方式，通常為注射，包括但不限于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眼眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外和胸骨內(nèi)注射和輸注。可以用于本發(fā)明藥用組合物中的合適的水性載體和非水載體的實例包括水、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和它們的混合物、植物油如橄欖油、和注射用有機酯例如油酸乙酯。例如通過應(yīng)用包衣材料例如卵磷脂、在分散體的情況下通過維持所需的粒徑，以及利用表面活性劑，可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。這些組合物也可以含有輔料，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。通過上述滅菌方法，以及通過包含各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯類、三氯叔丁醇、苯酚山梨酸等，可以確保防止微生物的存在。也可能需要在所述組合物中包括等滲劑，例如糖類、氯化鈉等。另外，通過包含延遲吸收的藥劑，例如一硬脂酸鋁和明膠，可以導(dǎo)致注射用藥物形式的延遲吸收。當(dāng)本發(fā)明的化合物作為藥物給予人類和動物時，它們可以單獨給予，或者作為含有例如0.01-99.5％(更優(yōu)選0.1-90％)的有效成分以及藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物給予。無論選擇何種給藥途徑，可以以合適的水合形式和/或本發(fā)明的藥用組合物形式應(yīng)用的本發(fā)明的化合物，可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法，配制為藥學(xué)上可接受的劑型。本發(fā)明的藥用組合物中的所述有效成分的實際劑量水平可以改變，以便對于特定患者、組合物和給藥方式而言獲得有效達(dá)到所需治療反應(yīng)且對于所述患者無毒的所述有效成分的量。所選擇的劑量水平將取決于各種各樣的藥代動力學(xué)因素，包括所用的本發(fā)明的特定組合物或其酯、鹽或酰胺的活性、給藥途徑、給藥時間、所用特定化合物的排泄速率、治療時間長度、與所用特定組合物聯(lián)合使用的其它藥物、化合物和/或材料、待治療患者的年齡、性別、體重、病癥、一般健康狀況和先前的用藥史和藥物領(lǐng)域熟知的類似因素。具有本領(lǐng)域技術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地確定和所需的藥用組合物的有效量并且開出處方。例如，所述醫(yī)師或獸醫(yī)可以開始給予水平低于達(dá)到所需療效所需的水平的所述藥用組合物中所用的本發(fā)明的化合物，然后逐漸增加劑量，直至達(dá)到所需的效應(yīng)。一般而言，本發(fā)明組合物的合適日劑量將是所述化合物有效產(chǎn)生療效的最低劑量的量。這樣的有效量一般將取決于上述因素。優(yōu)選通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下給藥，優(yōu)選接近靶部位給藥。如有需要，治療組合物的有效日劑量可以以2個、3個、4個、5個、6個或更多個分劑量，在一天內(nèi)以合適的間隔分別給予，任選地以單位劑型給予。當(dāng)有可能單獨給予本發(fā)明的化合物時，優(yōu)選所述化合物作為藥用制劑(組合物)給予。治療組合物可以用本領(lǐng)域已知的藥物裝置給予。例如，在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的治療組合物用無針皮下注射裝置，例如美國專利第5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556號中所述的裝置給予?？捎糜诒景l(fā)明的眾所周知的植入物和組件的實例包括美國專利第4,487,603號，它公開了一種用于以受控速率分配藥物的可植入微量輸注泵；美國專利第4,486,194號，它公開了一種用于透過皮膚給藥的治療裝置；美國專利第4,447,233號，它公開一種用于以精確的輸注速率遞藥的藥物輸注泵；美國專利第4,447,224號，它公開了一種用于連續(xù)遞藥的可變流動可植入輸注裝置；美國專利第4,439,196號，它公開了一種具有多室區(qū)室的滲透性遞藥系統(tǒng)；和美國專利第4,475,196號，它公開了一種滲透性遞藥系統(tǒng)。這些專利通過引用結(jié)合到本文中。許多其它這樣的植入物、遞藥系統(tǒng)和組件是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在某些實施方案中，本發(fā)明的人單克隆抗體可以配制為確保體內(nèi)的適當(dāng)分布。例如，血腦屏障(BBB)排除了許多高親水性化合物。為了確保本發(fā)明的治療化合物穿過BBB(如有需要)，它們可以例如配制在脂質(zhì)體中。關(guān)于生產(chǎn)脂質(zhì)體的方法，參見例如美國專利4,522,811；5,374,548；和5,399,331。所述脂質(zhì)體可以包含被選擇性地轉(zhuǎn)運到特定細(xì)胞或器官、從而增強靶藥物傳遞的一個或多個部分(參見例如V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29685)、示例性的靶向部分包括葉酸或生物素(參見例如Low等的美國專利5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等，(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.1531038)；抗體(P.G.Bloeman等(1995)FEBSLett.357140；M.Owais等(1995)Antimicrob.AgentsChemother.39180)；表面活性劑蛋白A受體(Briscoe等(1995)Am.J.Physiol.1233134)，其不同的種類可以包含本發(fā)明的制劑以及本發(fā)明分子的組分；p120(Schreier等(1994)J.Biol.Chem.2699090)；也參見K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBSLett.346123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods4273。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的治療化合物可以配制到脂質(zhì)體中；在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述脂質(zhì)體包含一個靶向部分。在一個最優(yōu)選的實施方案中，所述脂質(zhì)體中的所述治療化合物可以通過大劑量注射傳遞到接近腫瘤或感染的部分。所述組合物必須是流動的，使得存在易于注射性。它必須在生產(chǎn)和貯存條件下穩(wěn)定，必須加以防腐以抵抗微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用?！爸委熡行Я俊眱?yōu)選相對于未經(jīng)治療的受治療者而言，抑制腫瘤生長至少達(dá)約20％，更優(yōu)選至少約40％，甚至更優(yōu)選至少約60％，再更優(yōu)選至少約80％。化合物抑制腫瘤的能力可以用預(yù)測在人類腫瘤中的功效的動物模型系統(tǒng)來評估?；蛘?，組合物的這種特性可以通過檢查所述化合物抑制的能力來評估，這類抑制用技術(shù)人員已知的測定在體外來檢查。治療化合物的治療有效量可以減少腫瘤大小，或者緩解受治療者的癥狀。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)諸如受治療者的體型、受治療者癥狀的嚴(yán)重程度以及所選的特定組合物或給藥方式的因素，來確定這樣的量。所述組合物必須是無菌的，且是流動的，使得所述組合物可通過注射器給予。除水之外，所述載體可以是等滲緩沖鹽溶液、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)和它們的合適混合物。例如通過應(yīng)用包衣例如卵磷脂、在分散體的情況下通過維持所需的粒徑，以及通過應(yīng)用表面活性劑，可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。在許多情況下，優(yōu)選在所述組合物中包含等滲劑，例如糖類、多元醇例如甘露醇或山梨醇以及氯化鈉。通過在所述組合物中包括延遲吸收的藥劑，例如一硬脂酸鋁或明膠，可以導(dǎo)致所述注射用組合物的長期吸收。當(dāng)所述活性化合物被如上所述地適當(dāng)保護(hù)時，所述化合物可以例如與惰性稀釋劑或可吸收的食用載體一起口服給予。VII.本發(fā)明的應(yīng)用和方法本發(fā)明的組合物(例如人抗CD89單克隆抗體及其衍生物/綴合物)具有體外和體內(nèi)診斷和治療用途。例如，可以將這些分子給予培養(yǎng)的細(xì)胞，例如體外或離體給予，或者給予受治療者體內(nèi)的細(xì)胞，例如體內(nèi)給予，以治療、預(yù)防或診斷各種各樣的疾病。此中所用的術(shù)語“受治療者”是指包括人類和非人類動物。優(yōu)選的人類動物包括患有特征為表達(dá)、通常為異常表達(dá)(例如過量表達(dá))CD89的疾病的人類患者例如，所述組合物可以體外或體內(nèi)用來診斷由CD89介導(dǎo)的疾病。本發(fā)明的抗體可以用來檢測CD89的水平、或者在其膜表面含有CD89的細(xì)胞的水平，然后可以將所述水平與某些疾病癥狀相聯(lián)系。或者，所述抗體可以用來抑制或阻斷CD89功能，后者又可以與某些疾病癥狀的預(yù)防或緩解相聯(lián)系，從而暗示CD89為疾病介質(zhì)。通過使樣品和對照樣品與所述抗CD89抗體在允許在所述抗體和CD89之間形成復(fù)合物的條件下接觸，可以達(dá)到這一點。檢測所述樣品和對照中的所述抗體和CD89之間所形成的任何復(fù)合物，并將其進(jìn)行比較。在另一實施方案中，本發(fā)明的人抗體或結(jié)合部分可以用來調(diào)節(jié)效應(yīng)細(xì)胞上的CD89水平，例如通過捕獲并消除所述細(xì)胞表面的受體來調(diào)節(jié)。抗Fc受體抗體的混合物也可以用于此目的。本發(fā)明的范圍內(nèi)還有用上述雙特異性和多特異性人抗體治療疾病例如自身免疫病、癌癥或病原體感染的方法。這類抗體包括至少一個針對CD89的結(jié)合特異性和至少一個針對靶抗原的抗原結(jié)合區(qū)的結(jié)合特異性。在另一實施方案中，所述抗體對于針對同一靶抗原和/或受體的不同表位的抗原結(jié)合區(qū)的結(jié)合特異性而言，包括一個第三結(jié)合特異性。用于消除受治療者體內(nèi)不想要的細(xì)胞即靶細(xì)胞或者抗原的方法包括用本發(fā)明的雙特異性或多特異性抗體治療所述受治療者。在一個實施方案中，這樣的方法包括從受治療者中獲取等份的血液或血細(xì)胞樣品，用藥學(xué)上可接受載體中的治療有效量的本發(fā)明的雙特異性或多特異性抗體離體治療所述血液或血細(xì)胞，然后將所述經(jīng)治療的血液或血細(xì)胞回輸給所述受治療者。優(yōu)選所述血樣的細(xì)胞是分離的并且經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)充，更優(yōu)選所述血樣的細(xì)胞用增強CD89數(shù)或活性的因子治療。這樣的因子包括細(xì)胞因子、淋巴因子或生長因子，例如G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、TNF和白介素例如IL-2、IL-10和IL-12。在另一實施方案中，本發(fā)明提供給受治療者免疫以抵抗癌抗原、病原體或受病原體感染的細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的抗原的方法。這樣的方法包括給予受治療者在藥學(xué)上可接受的載體中包含雙特異性或多特異性抗體的組合物，所述抗體具有一種對CD89的結(jié)合特異性和一種對致病感染性生物體或受感染細(xì)胞或者癌細(xì)胞抗原的表位的結(jié)合特異性?；蛘?，所述組合物可以包含與致病感染性生物體的一種或多種抗原或者受感染細(xì)胞或癌細(xì)胞的抗原連接的抗CD89抗體。在另一實施方案中，本發(fā)明的阻斷或抑制IgA與CD89結(jié)合的人抗體，用于治療特征為異常內(nèi)源IgA的疾病，例如特征為循環(huán)的含IgA復(fù)合物和/或IgA免疫復(fù)合物沉淀的疾病，例如慢性肝炎、Henoch-Schonlein紫癜(HSP)、IgA腎病(Berger病)或IgA性腎小球性腎炎?？梢詫⒈景l(fā)明的人抗CD89抗體給予患有這種疾病的患者，以抑制或負(fù)調(diào)節(jié)內(nèi)源IgA與CD89的結(jié)合。例如，雖然不希望受機理的限制，但是給予本發(fā)明的抗CD89抗體，可以導(dǎo)致阻斷CD89，使得內(nèi)源異常IgA不能占用所述受體，因而不能觸發(fā)不想要的效應(yīng)子功能。在另一實施方案中，本發(fā)明的人單克隆抗體的優(yōu)點為不誘導(dǎo)或者僅在最低程度上誘導(dǎo)補體介導(dǎo)的細(xì)胞裂解，因此有很小的觸發(fā)補體激活的疾患如痤瘡方面的副作用。本發(fā)明組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)的合適給藥方法是基于抗體的療法領(lǐng)域中已知的。所述分子的合適用量將取決于所述受治療者的年齡和體重以及所用的特定藥物。所述分子可以與放射性核素例如131I、90Y、105Rh等偶聯(lián)，如Goldenberg，D.M.等(1981)CancerRes.414354-4360和EP0365997中所述。本發(fā)明的組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)也可以與抗感染藥偶聯(lián)。人抗CD89抗體及其抗原結(jié)合部分也可以與另一治療藥例如細(xì)胞因子或化療藥共同給予，或者可以與其它已知療法例如抗腫瘤療法如放射療法共同給予。這類治療藥其中包括細(xì)胞因子例如G-CSF、GM-CSF、IL-2、IFN-γ和IFN-a；本身僅在對患者有毒或亞毒性水平下有效的抗腫瘤藥，如多柔比星(阿霉素)、順鉑硫酸博來霉素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥和環(huán)磷酰胺羥基脲。順鉑以100mg/m2的劑量每4周靜脈內(nèi)給予1次，阿霉素以60-75mg/m2的劑量每21天靜脈內(nèi)給予1次。本發(fā)明的人抗CD89抗體或其抗原結(jié)合片段與化療藥共同給予，提供通過對人腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性效應(yīng)的不同機制運作的兩種抗腫瘤藥。這樣的共同給藥可以解決由于產(chǎn)生抗藥性或者腫瘤細(xì)胞的抗原性改變可能使其與所述抗體不反應(yīng)所引起的問題。具有補體結(jié)合位點例如來自結(jié)合補體的IgG1、IgG2或IgG3或IgM的部分的本發(fā)明組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)，也可以在補體存在下應(yīng)用。在一個實施方案中，通過添加補體或含補體的血清，可以補充用本發(fā)明的結(jié)合劑和適當(dāng)?shù)男?yīng)細(xì)胞對包含靶細(xì)胞的細(xì)胞群體的離體治療。對包有本發(fā)明結(jié)合劑的靶細(xì)胞的吞噬作用，可以通過補體蛋白的結(jié)合得以改進(jìn)。在另一實施方案中，包有本發(fā)明組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)的靶細(xì)胞，也可以通過補體裂解。在另一實施方案中，本發(fā)明的組合物不失活補體。本發(fā)明組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)也可以與補體一起給予。因此，包含人抗體、多特異性或雙特異性分子和血清或補體的組合物也在本發(fā)明范圍內(nèi)。這些組合物的優(yōu)點在于補體緊鄰所述人抗體、多特異性或雙特異性分子定位?；蛘?，可以分別給予本發(fā)明的人抗體、多特異性或雙特異性分子和所述補體或血清。在本發(fā)明范圍內(nèi)還有包含本發(fā)明組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)和使用說明的試劑盒。所述試劑盒可以還含有至少一種另外的試劑，例如補體，或者一種或多種另外的本發(fā)明的人抗體(例如具有補體活性、與CD89抗原上不同于第一人抗體的表位結(jié)合的人抗體)。本發(fā)明的組合物(例如人抗體、多特異性和雙特異性分子)也可以用來靶向表達(dá)CD89的細(xì)胞，例如用以標(biāo)記這類細(xì)胞。為此，所述結(jié)合劑可以與可以被檢測的分子連接。因此，本發(fā)明提供用于離體或體外定位表達(dá)CD89的細(xì)胞的方法。所述可檢測標(biāo)記可以是例如放射性同位素、熒光化合物、酶或酶輔因子。在一個實施方案中，本發(fā)明提供檢測樣品中CD89抗原存在情況、或者測量CD89抗原量的方法，所述方法包括使所述樣品和對照樣品與特異性結(jié)合CD89的人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，在允許所述抗體或其部分與CD89之間形成復(fù)合物的條件下接觸。然后檢測復(fù)合物的形成，其中復(fù)合物形成在所述樣品與對照樣品之間有差異，則指示在所述樣品中存在CD89抗原。在再一實施方案中，本發(fā)明提供一種體內(nèi)或體外檢測表達(dá)Fc的細(xì)胞存在或者定量所述細(xì)胞的量的方法。所述方法包括(i)給予受治療者與可檢測標(biāo)記綴合的本發(fā)明組合物(例如多特異性或雙特異性分子)或其片段；(ii)使所述受治療者暴露于用于檢測所述可檢測標(biāo)記的工具，以鑒定含表達(dá)Fc的細(xì)胞的區(qū)。通過以下實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，不應(yīng)解釋為以下實施例是進(jìn)一步限制性的。所有附圖和本申請中引用的所有參考文獻(xiàn)、專利和公開的專利申請的內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。實施例實施例1用于生產(chǎn)全人抗CD89單克隆抗體的轉(zhuǎn)基因(Cμ被打中)小鼠的產(chǎn)生CMD打靶載體的構(gòu)建質(zhì)粒pICEμ(即pICEmu)含有一個跨越μ基因的鼠Ig重鏈基因座的EcoRI/XhoI片段，得自Balb/C基因組λ噬菌體文庫(Marcu等，Cell，198022187)。將這一基因組片段亞克隆到質(zhì)粒pICEMI9H(Marsh等，Gene32481-485，1984)的XhoI/EcoRI位點。pICEμ中包括的重鏈序列從恰好位于μ內(nèi)含子增強子3’的EcoRI位點下游延伸至位于μ基因最后一個跨膜外顯子下游約1kb的XhoI位點；然而，μ轉(zhuǎn)換重復(fù)區(qū)中的大部分已經(jīng)由于在大腸桿菌中傳代而缺失。如下構(gòu)建所述打靶載體。從pICEμ切下一個1.3kbHindIII/SmaI片段，將其亞克隆到HindIII/SmaI消化的pBluescript(Stratagene，LaJolla，CA)中。這一pICEμ片段從位于Cμl5’大約1kb的HindIII位點延伸至Cμl內(nèi)的SmaI位點。所得的質(zhì)粒用SmaI/SpeI消化，插入得自pICEμ、從Cμl3’中的SmaI位點延伸至恰好位于最后一個Cμ外顯子下游的XbaI位點的約4kbSmaI/XbaI片段。將所得質(zhì)粒pTAR1在SmaI位點線性化，并插入一個neo表達(dá)盒。該盒由小鼠磷酸甘油酸激酶(pgk)啟動子(XbaI/TaqI片段；Adra等，(1987)Gene6065-74)的轉(zhuǎn)錄控制下并且含有pgk聚腺苷酸化位點(PvuII/HindIII片段；Boer等(1990)BiochemicalGenetics28299-308)的neo基因組成。該盒得自質(zhì)粒pKJ1(由Tybulewicz等描述，(1991)Cell651153-1163)，從所述質(zhì)粒中切取作為EcoRI/HindIII片段的neo盒，將其亞克隆到EcoRI/HindIII消化的pGEM-7Zf(+)中，產(chǎn)生pGEM-7(KJ1)。通過EcoRI/SalI消化，從pGEM-7(KJ1)中切取neo盒，將其平端化，并以與基因組Cμ序列相反的方向亞克隆到質(zhì)粒pTAR1中的SmaI位點。所得的質(zhì)粒用NotI線性化，插入單純皰疹病毒胸苷激酶(tk)盒，以便于富集帶有同源重組子的ES克隆，如Mansour等，(1988)Nature336348-352所述。該盒由以小鼠pgk啟動子和聚腺苷酸化位點作支架的tk基因的編碼序列組成，如Tybulewicz等，(1991)Cell651153-1163所述。所得的CMD打靶載體與所述重鏈基因座有總共大約5.3kb的同源性，設(shè)計用以產(chǎn)生其中neo表達(dá)盒插入第一個Cμ外顯子的唯一SmaI位點中的突變型μ基因。所述打靶載體電穿孔到ES細(xì)胞中之前，用在質(zhì)粒序列內(nèi)切割的PvuI線性化。被打中ES細(xì)胞的產(chǎn)生和分析基本上按照已描述的方法(Robertson，E.J.(1987)TeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsAPracticalApproach(E.J.Robertson編著)OxfordIRLPress，p.71-112)，讓AB-1ES細(xì)胞(McMahon，A.P.和Bradley，A.，(1990)Cell621073-1085)在無有絲分裂活性的SNL76/7細(xì)胞飼養(yǎng)層(出處同前)上生長。采用Hasty等所述的方法(Hasty，P.R.等，(1991)Nature350243-246)，將線性化的CMD打靶載體電穿孔到AB-1細(xì)胞中。將電穿孔細(xì)胞以1-2×106細(xì)胞/皿的密度接種到100mm培養(yǎng)皿中。24小時后，向培養(yǎng)基中加入G418(200微克/ml有效成分)和FIAU(5×10-7M)，讓抗藥性克隆在8-9天內(nèi)產(chǎn)生。挑出克隆，用胰酶處理，將其分為兩個部分，進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)。然后將得自每個克隆的一半細(xì)胞冷凍，分析另一半細(xì)胞的載體和靶序列之間的同源重組。通過DNA印跡雜交法進(jìn)行DNA分析。如Laird等所述(Laird，P.W.等，(1991)NucleicAcidsRes.194293)，從克隆中分離DNA。分離的基因組DNA用SpeI消化，用915bpSacI片段即探針A探測(參見圖1)，探針A與μ內(nèi)含子增強子和μ轉(zhuǎn)換區(qū)之間的序列雜交。探針A從野生型基因座檢測到一個9.9kbSpeI片段，從μ基因座檢測到一個已經(jīng)與CMD打靶載體同源重組(neo表達(dá)盒含有一個SpeI位點)的7.6kb鑒別性條帶。在通過DNA印跡分析篩選出的1132個G418和FIAU抗性克隆中，3個克隆顯示出指示在μ基因座同源重組的所述7.6kbSpeI條帶。這3個克隆進(jìn)一步用酶BglI、BstXI和EcoRI消化，以證實所述載體同源整合到μ基因中。當(dāng)用探針A雜交時，用BglI、BstXI或EcoRI消化的野生型DNA的DNA印跡分別產(chǎn)生15.7、7.3和12.5kb的片段，而7.7、6.6和14.3kb的片段分別指示被打中μ等位基因的存在。所有3個通過SpeI消化所檢測的陽性克隆都顯示出預(yù)期的鑒別所述neo盒插入Cμl外顯子中的BglI、BstXI和EcoRI限制性片段。帶有突變型μ基因的小鼠的產(chǎn)生將指定編號為264、272和408的所述3個被打中ES克隆解凍復(fù)蘇，如Bradley所述(Bradley，A.，(1987)載于TeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsaPracticalApproach.(E.J.Robertson編著)OxfordIRLPress，p.113-151)，注射到C57BL/6J胚泡中。將經(jīng)注射的胚泡轉(zhuǎn)移到假孕雌性小鼠的子宮中，產(chǎn)生代表來源于輸入ES細(xì)胞和宿主胚泡的細(xì)胞混合物的嵌合小鼠。根據(jù)刺豚鼠毛色中C57BL/6J黑色背景上來源于所述ES細(xì)胞系的量，可以肉眼估計ES細(xì)胞對所述嵌合體的貢獻(xiàn)程度?？寺?72和408僅產(chǎn)生低百分比的嵌合體(即刺豚鼠著色的百分比低)，而克隆264產(chǎn)生高百分比的雄性嵌合體。讓這些嵌合體與C57BL/6J雌性配種，產(chǎn)生指示ES細(xì)胞基因組種系遺傳的刺豚鼠后代。通過對BglI消化的尾部活檢樣品的DNA的DNA印跡分析(如上文關(guān)于ES細(xì)胞DNA分析所述的方法)，篩選所述被打中的μ基因。大約50％的所述刺豚鼠后代除顯示15.7kb的野生型條帶之外，還顯示出一個7.7kb的BglI雜交條帶，證明所述被打中μ基因的種系遺傳。轉(zhuǎn)基因小鼠的μ基因的功能失活的分析為了確定neo盒插入到Cμl中是否使所述Ig重鏈基因失活，讓克隆264嵌合體與JHD突變純合型小鼠配種，JHD突變由于JH基因區(qū)段的缺失而使重鏈表達(dá)失活(Chen等，(1993)Immunol.5647-656)。產(chǎn)生了4個刺豚鼠后代。從1月齡這些動物中獲得血清，通過ELISA分析鼠IgM的存在。所述4個后代中的2個完全缺乏IgM(參見表1)。尾部活檢樣品DNA通過BglI消化并使其與探針A(參見圖1)雜交、以及通過StuI消化并與475bpEcoRI/StuI片段(出處同前)雜交進(jìn)行DNA印跡分析，分析所述4只動物的基因型，證明不能表達(dá)血清IgM的動物是其中所述重鏈基因座中的一個等位基因帶有所述JHD突變、而另一個等位基因帶有所述Cμl突變的動物。JHD突變雜合型小鼠顯示出血清Ig的野生型水平。這些數(shù)據(jù)證明，所述Cμl突變使μ基因的表達(dá)失活。表1表1顯示了通過ELISA檢測的攜帶CMD突變和JHD突變的小鼠(CMD/JHD)、JHD突變雜合型小鼠(+/JHD)、野生型小鼠(129Sv×C57BL/6J)F1小鼠(+/+)以及B細(xì)胞缺陷型JHD突變純合型小鼠(JHD/JHD)的血清IgM水平。實施例2用于生產(chǎn)全人抗CD89單克隆抗體的CHO12轉(zhuǎn)基因小鼠的產(chǎn)生HCO12人重鏈轉(zhuǎn)基因通過將pHC2(Taylor等，1994，Int.Immunol.，6579-591)的80kb插入片段和pVx6的25kb插入片段共同注射，產(chǎn)生HCO12轉(zhuǎn)基因。質(zhì)粒pVx6如下所述構(gòu)建。將包含人種系VH1-18(DP-14)基因與約2.5kb5′側(cè)翼基因組序列和5kb3′側(cè)翼基因組序列的8.5kbHindIII/SalIDNA片段，亞克隆到質(zhì)粒載體pSP72(Promega，Madison，WI)中，產(chǎn)生質(zhì)粒p343.7.16。將包含人種系VH5-51(DP-73)基因與約5kb5′側(cè)翼基因組序列和1kb3′側(cè)翼基因組序列的7kbBamHI/HindIIIDNA片段，克隆到基于pBR322的質(zhì)?？寺≥d體pGP1f(Taylor等1992，NucleicAcidsRes.206287-6295)中，產(chǎn)生質(zhì)粒p251f。由pGP1f衍生的一種新克隆載體pGP1k用EcoRV/BamHI消化，與包含人種系VH3-23(DP47)基因以及約4kb5′側(cè)翼基因組序列和5kb3′側(cè)翼基因組序列的10kbEcoRV/BamHIDNA片段連接。所得的質(zhì)粒p112.2RR.7用BamHI/SalI消化，與p251f的7kb純化BamHI/SalI插入片段連接。所得的質(zhì)粒pVx4用XhoI消化，與p343.7.16的8.5kbXhoI/SalI插入片段連接。獲得一個具有與另外兩個V基因方向相同的VH1-18基因的克隆。命名為pVx6的該克隆然后用NotI消化，如Hogan等所述(B.Hogan等，ManipulatingtheMouseEmbryo，ALaboratoryManual，2ndedition，1994，ColdSpringHarborLaboratoryPress，PlainviewNY)，將經(jīng)純化的26kb插入片段與純化的pHC2的80kbNotI插入片段以1∶1的摩爾比共同注射到半日齡(C57BL/6J×DBA/2J)F2胚胎的原核中。從由經(jīng)注射胚胎發(fā)育而成的小鼠，建立了三個獨立的包含得自Vx6以及HC2的序列的轉(zhuǎn)基因小鼠系。這些系命名為(HCO12)14881、(HCO12)15083和(HCO12)15087。然后，這三個系中的每個系與包含實施例1中所述的CMD突變、JKD突變(Chen等1993，EMBOJ.12811-820)和(KCo5)9272轉(zhuǎn)基因(Fishwild等1996，NatureBiotechnology14845-851)的小鼠配種。所產(chǎn)生的小鼠在內(nèi)源小鼠重鏈和κ輕鏈基因座被破壞純合型的背景中表達(dá)人免疫球蛋白重鏈和κ輕鏈轉(zhuǎn)基因。實施例3人抗CD89單克隆抗體和雙特異性抗體的產(chǎn)生通過用重組可溶性CD89抗原免疫HCO12小鼠，產(chǎn)生人抗CD89單克隆抗體。具體地說，HCO12小鼠最初用20μg在完全弗氏佐劑中乳化的抗原免疫，然后用在不完全弗氏佐劑中的所述抗原再免疫兩次。小鼠通過腹膜內(nèi)注射每2周進(jìn)行免疫。最后一次免疫后10天，通過EILSA(如下所述)測定人IgG抗CD89效價。產(chǎn)生足夠效價(抗CD89IgG應(yīng)答)的小鼠在脾切除術(shù)之前3天和2天，用23μg抗原進(jìn)行第四次加強。收獲得自應(yīng)答小鼠的脾，將其分散為單細(xì)胞。為了產(chǎn)生生產(chǎn)抗CD89抗體的雜交瘤，用PEG，將得自血漿中含有抗CD89抗體的小鼠的脾細(xì)胞與P3X63-Ag8.653細(xì)胞(保藏于ATCC，保藏號為ATCCCRL1580，非分泌型小鼠骨髓瘤細(xì)胞)融合。在雜交瘤生長后，根據(jù)人IgG的產(chǎn)生，用抗人IgGELISA，篩選含有雜交瘤的各孔。根據(jù)以下特性篩選和選擇陽性雜交瘤(1)產(chǎn)生人IgG1κ抗體，(2)與可溶性重組CD89結(jié)合，和(3)與表達(dá)CD89的免疫系統(tǒng)結(jié)合。發(fā)現(xiàn)稱為7.4(7F12)、8.2(8D2)和14.1(14A8)的3個陽性克隆符合這些標(biāo)準(zhǔn)。在結(jié)合研究中使用基于固相ELISA的測定。簡而言之，用含可溶性重組CD89的PBS包被96孔微量滴定板(1μg/ml)，于室溫保溫過夜。然后所述板用PBS-0.2％Tween-20(PBST)洗滌，于室溫下用含雞血清白蛋白的PBST封閉1小時。得自產(chǎn)生抗CD89的雜交瘤的上清液或純化抗體(在PBS中)加入到各孔中，于室溫保溫2小時。所述板如上所述用PBST洗滌，然后與50μlHRP綴合山羊抗人一起于室溫保溫1小時。洗滌后，向各孔中加入100μlABTS(含150mg2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸的500ml0.1M檸檬酸，pH4.35)/H2O2(10μl30％H2O2/10mlABTS溶液)chromagen/底物溶液，用酶標(biāo)儀于405nm波長下讀出所述樣品的讀數(shù)。用ELISA(人κ)(上述相同的方案)，根據(jù)同種型進(jìn)一步表征產(chǎn)生結(jié)合CD89的人IgG的雜交瘤。根據(jù)結(jié)合可溶性CD89、具有人IgG1κ同種型的抗體的產(chǎn)生，選擇3個細(xì)胞系-7.4、8.2和14.1。從使用含有1-5％Fetalclone(Hyclone，Logan，UT)的HyQ-CCM1培養(yǎng)基的Cellmax生物反應(yīng)器(Cellco，LagunaHills，CA)中分離抗體，并且通過柱色譜純化。純化抗體在0.3M碳酸鈉緩沖液pH9.5中充分透析，以供用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記用。通過將1mg固體FITC溶于1mlDMSO中，制備FITC儲液。在恒定混合下滴加FITC儲液，其加入量提供50μgFITC/mg抗體蛋白質(zhì)。在加入FITC之后，將溶液于室溫避光保溫1-3小時。通過在用PBS平衡的SephadexG-10柱上通過凝膠過濾，分離FITC標(biāo)記的抗體。如以下實施例中所述，根據(jù)結(jié)合特異性和活性，進(jìn)一步表征純化抗體。實施例4人抗CD89單克隆抗體的表征I.結(jié)合/特異性研究通過ELISA檢測顯示出與CD89顯著結(jié)合的雜交瘤上清液純化的單克隆抗體(Mab)(例如7.4、8.2和14.1)用流式細(xì)胞術(shù)(FACS分析)如下作進(jìn)一步測試，證實與以下表達(dá)CD89的細(xì)胞結(jié)合(1)被轉(zhuǎn)化以表達(dá)人CD89的鼠2a1.6細(xì)胞(″2a1.6/CD89細(xì)胞″)，(2)人PMNL細(xì)胞(″HuPMN″)和(3)從表達(dá)人CD89的轉(zhuǎn)基因小鼠中分離出的PMNL細(xì)胞(″FcαRITgMsPMN″)。特別是，證實MAb14.1識別CD89(FcαRI)，其識別位置位于胞外結(jié)構(gòu)域2內(nèi)、IgA結(jié)合位點之外，這使其區(qū)別于已知的鼠抗CD89Mab，例如My43(小鼠IgM)，后者阻斷FcαRI配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Shen，L.等，1989J.Immunol.1434117)。PMNL分離通過Ficoll-Histopaque(Sigma)密度梯度離心，從健康志愿者的肝素化靜脈血中分離出人PMNL。用cytospin制劑測定的PMNL純度超過95％，細(xì)胞活力為＞98％(通過錐蟲藍(lán)排除測定)。在分離鼠PMNL之前，給小鼠皮下注射15μg聚乙二醇粒細(xì)胞集落刺激生長因子(PEG-G-CSF，由J.Andreson博士友好提供，Amgen，ThousandOaks，CA)，以增加PMNL數(shù)目。3天后從眶后血管叢采集血液。通過低滲裂解除去紅細(xì)胞，然后用補充10％FCS的RPMI1640培養(yǎng)基(GibcoBRL，GrandIsland，NY)洗滌剩余的白細(xì)胞3次。在FACSsan(BectonDickinson，SanJose，CA)上進(jìn)行的FACS分析表明，白細(xì)胞由約55％PMNL、約40％淋巴細(xì)胞、約3％單核細(xì)胞和約1％嗜酸性粒細(xì)胞組成。通過錐蟲藍(lán)排除測定的細(xì)胞活力總是超過95％。FACS分析1(結(jié)合研究)將50微升抗體稀釋液加入到含50,000個2a1.6/CD89細(xì)胞的50微升Facsbuffer中，于4℃孵育30分鐘。然后細(xì)胞用100微升Facsbuffer洗滌3次，與兔(Fab2)抗HuIgG-FITC一起于4℃孵育30分鐘，用100微升Facsbuffer洗滌3次。將細(xì)胞重懸于200微升Facsbuffer中。在Facscalibur(BectonDickinson)上測定熒光。FACS分析2(特異性研究1)將含25微升1mg/ml的Facsbuffer加入到含50,0002a1.6/CD89細(xì)胞的50微升Facsbuffer中，于4℃孵育15分鐘。加入25微升抗體稀釋液，于4℃孵育30分鐘，并用100微升Facsbuffer洗滌3次。然后將細(xì)胞與兔(Fab2)抗HuIgG-FITC一起于4℃孵育30分鐘，用100微升Facsbuffer洗滌3次，重懸于200微升Facsbuffer中。在Facscalibur(BectonDickinson)上測定熒光。FACS分析3(特異性研究2)將50微升抗體稀釋液加入到含50,0002a1.6/CD89細(xì)胞以及對照細(xì)胞Jurkat/IIIa、CHO/IIIbNA.2、CHO/IIIbNA.1、2a1.6/CD64或SLC細(xì)胞的50微升Facsbuffer中，于4℃孵育30分鐘，并用100微升Facsbuffer洗滌3次。然后將細(xì)胞與兔(Fab2)抗HuIgG-FITC一起于4℃孵育30分鐘，用100微升Facsbuffer洗滌3次。將細(xì)胞重懸于200微升Facsbuffer中。在Facscalibur(BectonDickinson)上測定熒光。FACS分析4(全血結(jié)合研究)將50微升抗體稀釋液加入到50微升人、小鼠或CD89Tg小鼠全血中，于4℃孵育30分鐘。細(xì)胞用FACS裂解緩沖液裂解，于4℃孵育，并用100微升Facsbuffer洗滌3次，與兔(Fab2)抗HuIgG-FITC一起于4℃孵育30分鐘，用100微升Facsbuffer洗滌3次。將細(xì)胞重懸于200微升Facsbuffer中。在Facscalibur(BectonDickinson)上測定熒光。II.競爭研究在下述的阻斷研究和抑制ELISA中，測試Mab14.1和7.4抑制人IgA和MabMy43(一種小鼠抗CD89抗體)與CD89結(jié)合的能力。同IgA一樣，MY43在所述天然配體結(jié)合位點與CD89結(jié)合，因此與IgA結(jié)合競爭。也測試Mab14.1和7.4抑制MabA77和A59(它們在天然配體IgA的結(jié)合位點之外結(jié)合)與CD89結(jié)合的能力。Mab14.1不抑制IgA和MY43與CD89的結(jié)合，但抑制A77和A59與CD89的結(jié)合，表明它在所述天然配體結(jié)合位點之外結(jié)合。Mab7.4不抑制IgA、MY43、A77或A59與CD89的結(jié)合，表明它也在所述天然配體結(jié)合之外結(jié)合，但結(jié)合位點與14.1不同。阻斷研究將25微升抗體稀釋液加入到含50,0002a1.6/CD89細(xì)胞的50微升Facsbuffer中，于4℃孵育15分鐘。加入25微升亞適濃度的A77-FITC、A59-PE或MY43，于4℃孵育30分鐘，用100微升Facsbuffer洗滌3次。將經(jīng)MY43處理的細(xì)胞與兔(Fab2)抗Hu-IgG-Fc-FITC一起于4℃孵育30分鐘，用100微升Facsbuffer洗滌3次。將細(xì)胞重懸于200微升Facsbuffer中。在Facscalibur(BectonDickinson)上測定熒光。抑制ELISA96孔ELISA(平)底板用100微升/孔含可溶性重組CD89(1微克/ml)的PBS包被，于室溫保溫過夜。將ELISA板排空，與100微升/孔PBS/0.05％Tween1％雞血清(PBST/Ch)一起于室溫保溫60分鐘。將板排空，與過量的在PBST/Ch中稀釋的抗體(50微升/孔)一起保溫10分鐘。將50微升/孔的aIgA2溶液以劑量反應(yīng)加入到PBST/Ch中，于室溫保溫60分鐘。然后所述板用PBS/0.05％Tween(PBST)洗滌3次，與100微升/孔4E8-生物素(小鼠抗IgA)一起于室溫保溫60分鐘。然后所述板用PBST洗滌3次，與100微升/孔含Strep-HRP的PBST/Ch一起于室溫保溫60分鐘，用PBST洗滌3次，用ABTS使ELISA顯色。在Bio-tek讀出儀中讀出405nm波長下的光密度。III.免疫沉淀研究發(fā)現(xiàn)Mab14.1和7.4免疫沉淀可溶性重組CD89(sCD89)。簡而言之，ProtGSepharoseFastFlow柱用PBS洗滌3次。用含經(jīng)洗滌微珠的PBS于4℃將sCD89預(yù)純化(preclear)2小時。經(jīng)預(yù)純化的sCD89與抗體即小鼠IgG或人IgG一起于4℃保溫2小時。CD89/IgG溶液用ProtG于4℃洗滌1小時，然后用PBS洗滌5次。然后將樣品重懸于SDS-PAGE樣品緩沖液中，在SDS-PAGE梯度凝膠中電泳，然后凝膠用考馬斯亮藍(lán)染色。IV.親和性研究Mab14.1和7.4的親和性動力學(xué)即結(jié)合平衡締合常數(shù)(Ka)和解離常數(shù)(Kd)如下測量。測量Mab14.1的Ka約為1.5×109，而Kd約為6.8×10-10。測量Mab7.4的Ka約為2.0×108，而Kd約為5.1×10-9。通過將sCD89固定在芯片上，然后讓所述Mab以不同濃度流過所芯片，用BIAcore測定測量親和性動力學(xué)。也通過讓sCD89流過Mab，進(jìn)行Mab捕獲測定。通過胺偶聯(lián)，進(jìn)行所述抗原和人IgG的固定化。試劑盒購自BIAcore，包括芯片和緩沖液。使用langmuir模型描述擬合。通過所述儀器所帶的軟件上得到的模型，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實施例5人抗CD89單克隆抗體的活性I.鈣流出研究如下測試Mab14.1，表明它誘導(dǎo)鈣流出。Mab7.4不誘導(dǎo)鈣流出。將細(xì)胞洗滌3次之后，將38微升SNARF-1和38微升FLUO-3加入到在1.52ml無血清培養(yǎng)基中重懸浮的3e6細(xì)胞中。所述細(xì)胞于37℃避光孵育，加入5ml溫?zé)?37℃)無血清培養(yǎng)基，將細(xì)胞于37℃再孵育5分鐘。然后細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基洗滌2次，用抗體抗FcαR1包被，然后再次洗滌。將細(xì)胞重懸于Ca++Mobilisation緩沖液中，在流式細(xì)胞儀上運行24秒，以建立基線水平。接著，加入交聯(lián)抗體抗HuIgG-Fc細(xì)胞，監(jiān)測4分鐘。讓所用的細(xì)胞不與抗FcαR1一起孵育，以便建立陰性對照。II.人C1q結(jié)合研究如以下小節(jié)中所述，通過ELISA和FACS測試Mab14.1和7.4在ELISA中以及當(dāng)與表達(dá)CD89的細(xì)胞結(jié)合時(在FACS分析中)固定hC1q的能力。Mab14.1能夠在ELISA中固定hC1q，當(dāng)與細(xì)胞結(jié)合時固定能力弱。Mab7.4能夠在ELISA中固定hC1q，但在與細(xì)胞結(jié)合時不固定hC1q。這些Mab當(dāng)與細(xì)胞結(jié)合時(這反映體內(nèi)條件)不能固定hC1q，使其對于治療應(yīng)用特別有用，例如在不希望啟動補體級聯(lián)(導(dǎo)致靶細(xì)胞裂解)的情況下。ELISA分析簡而言之，96孔ELISA(平)底板用100微升/孔含人IgG(3微克/ml)的PBS(hIgG1、hIgG2、hIgG3和hIgG4用作對照)包被，于室溫保溫過夜，將ELISA板排空，然后與100微升/孔Phosphate/NaCl/明膠/Tween緩沖液(C1q-ELISA稀釋劑)一起于室溫保溫60分鐘。將板排空，與在C1a-ELISA稀釋劑中稀釋的20微克/ml(100微升/孔)一起于室溫保溫60分鐘，用C1q-ELISA稀釋劑洗滌3次。接著，所述板與100微升/孔在C1q-ELISA稀釋劑中稀釋的兔抗hC1q一起于室溫保溫60分鐘，用C1q-ELISA稀釋劑洗滌3次，與100微升/孔在C1q-ELISA稀釋劑中稀釋的PO-綴合豬抗RbIgG-Fc一起于室溫保溫60分鐘。然后所述板用C1q-ELISA稀釋劑洗滌3次。所述ELISA用ABTS顯色，在Bio-tek讀出儀中讀出405nm波長下的光密度。FACS分析將25微升C1q-Facsbuffer中的抗體稀釋液加入到含50,0002a1.6/cd89細(xì)胞的50微升Facsbuffer加NaCl(C1q-Facsbuffer)中，于4℃孵育15分鐘，向其中加入25微升C1q-Facsbuffer中的hC1q(20微克/ml)，于4℃孵育30分鐘。然后細(xì)胞用100微升C1q-Facsbuffer洗滌3次，與兔抗hC1q-Fitc一起于4℃孵育30分鐘，用100微升C1q-Facsbuffer洗滌3次。將細(xì)胞重懸于200微升C1q-Facsbuffer中。在Facscalibur(BectonDickinson)上測定熒光。等同方案本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到或者能夠僅用常規(guī)實驗就確定此中所述的本發(fā)明具體實施方案的許多等同方案。這類等同方案將包括在以下權(quán)利要求書中。序列表<110>米德列斯公司(Medarex，Inc.)等<120>抗Fcα受體(CD89)的人單克隆抗體<130>MXI-211PC<150>US60/338,956<151>2001-11-05<150>US60/268,075<151>2001-02-12<160>4<170>FastSEQforWindowsVersion4.0<210>1<211>357<212>DNA<213>Homosapiens<400>1caggtgcaactggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactc60tcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatgttctgcactgggtccgccaggct120ccaggcaaggggctggattgggtggcagtgatatcagatgatggaaggaataaatacttc180gcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtat240ctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgtattactgtgtgagagaaggg300tatagcggcagctggtttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca357<210>2<211>119<212>PRT<213>Homosapiens<400>2GlnValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerSerTyr202530ValLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuAspTrpVal354045AlaValIleSerAspAspGlyArgAsnLysTyrPheAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnSerLysAsnThrLeuTyr65707580LeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095ValArgGluGlyTyrSerGlySerTrpPheAspTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrLeuValThrValSerSer115<210>3<211>321<212>DNA<213>Homosapiens<400>3gccatccagttgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcacc60atcacttgccgggcaagtcagggcattagcagtgctttagcctggtatcagcagaaacca120gggaaagctcctaagctcctgatctatggtgcctccagtttggaaggtggggtcccatca180aggttcagcggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcct240gaagattttgcaacttattactgtcaacagtttaatagttacccattcactttcggccct300gggaccaaagtggatatcaaa321<210>4<211>107<212>PRT<213>Homosapiens<400>4AlaIleGlnLeuThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlnGlyIleSerSerAla202530LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrGlyAlaSerSerLeuGluGlyGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnPheAsnSerTyrProPhe859095ThrPheGlyProGlyThrLysValAspIleLys100105<210>5<211>357<212>DNA<213>Homosapiens<400>5caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactc60tcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagctatgctatgcactgggtccgccaggct120ccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatatcatatgatggaagaaataaagactac180gcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtat240ctgcaaatgaacagcctgagagctgaggacacggctgtgcattactgtgcgaggcttgac300tggggatatgatgcttttgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca357<210>6<211>119<212>PRT<213>Homosapiens<400>6GlnValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerSerTyr202530AlaMetHisTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaValIleSerTyrAspGlyArgAsnLysAspTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnSerLysAsnThrLeuTyr65707580LeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValHisTyrCys859095AlaArgLeuAspTrpGlyTyrAspAlaPheAspIleTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>7<21l>327<212>DNA<213>Homosapiens<400>7gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccacc60ctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcagctacttagcctggtaccagcagaag120cctggccaggctcccaggctcctcatctatggtgcatccagcagggccactggcatccca180gacaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggag240cctgaagattttgcagtgtattactgtcagcagtatggtagctcacctccgtacactttt300ggccaggggaccaagctggagatcaaa327<210>8<211>109<212>PRT<213>Homosapiens<400>8GluIleValLeuThrGlnSerProGlyThrLeuSerLeuSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysArgAlaSerGlnSerValSerSerSer202530TyrLeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeu354045IleTyrGlyAlaSerSerArgAlaThrGlyIleProAspArgPheSer505560GlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerArgLeuGlu65707580ProGluAspPheAlaValTyrTyrCysGlnGlnTyrGlySerSerPro859095ProTyrThrPheGlyGlnGlyThrLysLeuGluIleLys10010權(quán)利要求1.一種與人CD89結(jié)合的分離的人單克隆抗體。2.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體不激活補體。3.權(quán)利要求1的分離的抗體，其中所述抗體在與所述受體的IgA結(jié)合位點不同的位點與CD89結(jié)合。4.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體抑制IgA與CD89的結(jié)合。5.權(quán)利要求4的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體對IgA與CD89結(jié)合的抑制至少達(dá)約50％。6.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體以至少108M-1的平衡締合常數(shù)(Ka)與人CD89結(jié)合。7.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體以至少109M-1的平衡締合常數(shù)(Ka)與人CD89結(jié)合。8.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體重鏈?zhǔn)荌gG1重鏈，而所述抗體輕鏈?zhǔn)铅瘦p鏈。9.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體包含由包含選自SEQIDNO1和5的核苷酸序列的核酸所編碼的重鏈以及由包含選自SEQIDNO3和7的核苷酸序列的核酸所編碼的輕鏈以及它們的保守序列修飾。10.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體包含含有選自SEQIDNO2和6的氨基酸序列的重鏈以及含有選自SEQIDNO4和8的氨基酸序列的輕鏈以及它們的保守序列修飾。11.一種分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體與人CD89結(jié)合，并且具有至少一種選自以下的特性(a)與人CD89的結(jié)合平衡締合常數(shù)(Ka)為至少約107M-1；(b)與人CD89的解離常數(shù)(Kd)為約10-8S-1或更低；(c)在體內(nèi)與人CD89結(jié)合時不激活補體；(d)所述抗體與人CD89上不抑制人IgA與所述受體結(jié)合的表位結(jié)合；(e)所述抗體包含含有選自SEQIDNO2和6的氨基酸序列及其保守序列修飾的重鏈、和含有選自SEQIDNO4和8的氨基酸序列及其保守序列修飾的輕鏈。12.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體是Fab片段或單鏈抗體。13.權(quán)利要求1的分離的人單克隆抗體，其中所述抗體由雜交瘤生產(chǎn)，所述雜交瘤包括得自其基因組中包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物的、與無限增殖化細(xì)胞融合的B細(xì)胞。14.一種雜交瘤，所述雜交瘤包括得自其基因組中包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物的、與無限增殖化細(xì)胞融合的B細(xì)胞，其中所述雜交瘤產(chǎn)生可檢測量的權(quán)利要求1的人單克隆抗體。15.選自名為7.4、8.2和14.1的雜交瘤的權(quán)利要求14的雜交瘤。16.一種分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體與人CD89上由選自mAb7.4、8.2和14.1的抗體所限定的表位結(jié)合。17.一種分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體與人CD89上由mAb14.1所限定的表位結(jié)合，并且具有SEQIDNO2中所示的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO4中所示的輕鏈氨基酸序列。18.一種分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體具有選自mAb7.4、8.2和14.1的抗體的結(jié)合特性。19.一種分離的人單克隆抗體，所述人單克隆抗體具有mAb14.1的結(jié)合特性，并且具有SEQIDNO2中所示的重鏈氨基酸序列和SEQIDNO4中所示的輕鏈氨基酸序列。20.一種轉(zhuǎn)基因非人類動物，所述轉(zhuǎn)基因非人類動物表達(dá)權(quán)利要求1的抗體，其中所述轉(zhuǎn)基因非人類動物具有包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組。21.生產(chǎn)權(quán)利要求1的抗體的方法，所述方法包括用CD89或表達(dá)CD89的細(xì)胞，免疫其基因組中包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和人輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因非人類動物，使得所述動物的B細(xì)胞產(chǎn)生抗體；分離所述動物的B細(xì)胞；且將所述B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成分泌所述抗體的無限增殖雜交瘤細(xì)胞。22.一種雙特異性或多特異性分子，所述分子包含權(quán)利要求16的人抗體和一個與非CD89的靶抗原結(jié)合的部分。23.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，其中所述抗體是Fab片段或單鏈抗體。24.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，其中所述靶抗原是腫瘤抗原。25.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，其中與所述靶抗原結(jié)合的所述部分包含抗體或腫瘤配體。26.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，所述分子包括融合蛋白。27.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，所述分子包括化學(xué)連接的綴合物。28.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，所述分子在存在表達(dá)CD89的效應(yīng)細(xì)胞時誘導(dǎo)表達(dá)所述靶抗原的細(xì)胞裂解(ADCC)。29.權(quán)利要求22的雙特異性或多特異性分子，其中所述抗原選自癌胚抗原(CEA)、胃泌素釋放肽受體抗原(GRP)、粘蛋白抗原、表皮生長因子受體(EGF-R)、HER2/neu、HER3、HER4、CD20、CD30、MAGE抗原、SART抗原、MUC1抗原、c-erb-2抗原和TAG72。30.一種分子綴合物，所述分子綴合物包含與抗原連接的權(quán)利要求16的人抗體。31.權(quán)利要求30的分子綴合物，其中所述抗體是Fab片段或單鏈抗體。32.權(quán)利要求30的分子綴合物，所述分子綴合物包括融合蛋白。33.權(quán)利要求30的分子綴合物，所述分子綴合物包括化學(xué)連接的綴合物。34.權(quán)利要求30的分子綴合物，其中所述抗原35.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1的人抗體和藥學(xué)上可接受的載體。36.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求22的雙特異性分子和藥學(xué)上可接受的載體。37.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求30的分子綴合物和藥學(xué)上可接受的載體。38.一種組合物，所述組合物包含兩種或更多種權(quán)利要求1的人抗體的組合，其中每種所述抗體與人CD89的一種不同表位結(jié)合。39.權(quán)利要求35的組合物，所述組合物還包含細(xì)胞毒性藥。40.一種免疫毒素，所述免疫毒素包含與細(xì)胞毒性藥連接的權(quán)利要求2的抗體。41.一種抑制細(xì)胞生長的方法，所述方法包括讓所述細(xì)胞與有效量的權(quán)利要求22的雙特異性抗體接觸，使得所述細(xì)胞的生長被抑制，其中所述雙特異性抗體包括一個與所述細(xì)胞上一種抗原結(jié)合的部分。42.權(quán)利要求41的方法，其中所述抗原是腫瘤抗原。43.權(quán)利要求42的方法，其中所述腫瘤抗原來自選自卵巢癌、乳腺癌、睪丸癌、前列腺癌、白血病和淋巴瘤的癌癥的癌細(xì)胞。44.權(quán)利要求41的方法，其中所述抗原是自身抗原。45.權(quán)利要求41的方法，其中所述抗原來自微生物。46.權(quán)利要求45的方法，其中所述微生物選自細(xì)菌、病毒和寄生蟲。47.一種治療或預(yù)防特征為IgA免疫復(fù)合物沉淀的疾病的方法，所述方法包括給予需要治療的受治療者對于治療或預(yù)防所述疾病有效量的與CD89特異性結(jié)合的分離的人單克隆抗體，其中所述單克隆抗體阻斷IgA與CD89的結(jié)合。48.權(quán)利要求47的方法，其中所述特征為IgA免疫復(fù)合物沉淀的疾病選自慢性肝炎、Henoch-Schonlein紫癜(HSP)、Berger病和IgA性腎小球性腎炎。49.權(quán)利要求47的方法，其中所述單克隆抗體與CD89上由抗體8.2所限定的表位結(jié)合。50.一種檢測樣品中CD89或表達(dá)CD89的細(xì)胞存在的方法，所述方法包括使所述樣品與權(quán)利要求1的抗體在允許所述抗體和CD89之間形成復(fù)合物的條件下接觸；并且檢測所述復(fù)合物的形成。51.一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含編碼與人CD89結(jié)合的人單克隆抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)和恒定區(qū)的核苷酸序列，其中所述重鏈核苷酸序列選自SEQIDNO1和SEQIDNO5，而所述輕鏈核苷酸序列選自SEQIDNO3和SEQIDNO7。全文摘要公開了與Fcα受體(CD89)特異性結(jié)合的人單克隆抗體，包括與人效應(yīng)細(xì)胞的IgA的Fc受體特異性反應(yīng)的單克隆抗體。所述結(jié)合劑例如抗體可用于將人效應(yīng)細(xì)胞(例如巨噬細(xì)胞)靶向靶細(xì)胞(例如癌細(xì)胞、感染性因子等)。為此，可以構(gòu)建含有來源于抗Fcα受體抗體的結(jié)合區(qū)和靶特異性抗體的結(jié)合區(qū)的雙功能抗體或異源抗體。靶效應(yīng)細(xì)胞可以特異性地裂解靶細(xì)胞。文檔編號A61P17/02GK1500097SQ02807838公開日2004年5月26日申請日期2002年2月11日優(yōu)先權(quán)日2001年2月12日發(fā)明者D·胡森,J·范德溫克,M·A·范迪克,D胡森,攣驢,范迪克申請人:米德列斯公司