專利名稱：肽基化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的肽基化合物和它們在治療有效療法中的用途以及用于診斷成像技術(shù)的用途。更具體地，本發(fā)明涉及這樣的肽基化合物作為與和血管發(fā)生相關(guān)的受體結(jié)合的導(dǎo)向載體的用途，特別是整聯(lián)蛋白受體，例如αvβ3整聯(lián)蛋白受體。因此這樣的造影劑可以用于診斷例如惡性疾病，心臟病，子宮內(nèi)膜異位，與炎癥相關(guān)的疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和卡波濟(jì)氏肉瘤。此外，這樣的試劑可以在這些疾病的治療性療法中使用。
背景技術(shù)：
新血管能通過兩種不同的機(jī)理形成血管發(fā)生或血管生成。血管發(fā)生是從存在的血管分支形成新血管。這種過程的主要刺激可能是對組織中的細(xì)胞的不充分的營養(yǎng)和氧(氧不足)的供應(yīng)。細(xì)胞可以通過分泌多種的血管發(fā)生因子響應(yīng)；常常提到的一個(gè)例子是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。這些因子引起蛋白水解酶的分泌，蛋白水解酶裂解基膜蛋白質(zhì)，還有限制這些可能有害的酶的作用的抑制劑。血管發(fā)生因子的其他突出的作用是引起內(nèi)皮細(xì)胞的移行和分裂。與基膜附著的圍繞血管在contralumenal側(cè)上形成連續(xù)片狀的內(nèi)皮細(xì)胞沒有經(jīng)歷有絲分裂。附著損失和來自血管發(fā)生因子的受體的信號的聯(lián)合作用引起內(nèi)皮細(xì)胞移動，繁殖，并且自身重排，最終在新血管周圍合成基膜。
血管發(fā)生在組織生長和重組中是突出的，包括傷口愈合和炎癥過程。
當(dāng)腫瘤達(dá)到毫米大小時(shí)為了保持它們的生長速度，必須開始血管發(fā)生。血管發(fā)生伴隨內(nèi)皮細(xì)胞和它們的環(huán)境的特征性變化。除了在影響和控制蛋白質(zhì)水解中涉及的各種蛋白質(zhì)之外，在準(zhǔn)備移行中這些細(xì)胞的表面被重組，基膜被降解的地方隱蔽結(jié)構(gòu)被暴露。在腫瘤的情況下，得到的血管網(wǎng)通常被打亂，形成明顯的關(guān)聯(lián)還有動靜脈分路。對血管發(fā)生的抑制作用被認(rèn)為是抗腫瘤治療的有希望的策略。
伴隨血管發(fā)生的轉(zhuǎn)化作用對于診斷也是非常有希望的，一個(gè)明顯的例子是惡性疾病，但是這個(gè)概念還指出對炎癥和各種與炎癥相關(guān)的疾病非常有前途，包括動脈粥樣硬化，早期動脈粥樣硬化損傷的巨噬細(xì)胞可能是血管發(fā)生因子的潛在根源。在心肌梗塞部分再血管化作用中也涉及這些因子，如果短時(shí)間內(nèi)狹窄得以解決，則發(fā)生心肌梗塞部分再血管化作用。
下面給出與新血管形成或血管發(fā)生，新血管的發(fā)育或增殖有關(guān)的不期望病癥的其他例子。關(guān)于這方面也可參見WO 98/47541。
與血管發(fā)生有關(guān)的痰病和征兆是例如各種形式的癌癥和轉(zhuǎn)移，例如乳腺癌，皮膚癌，結(jié)腸癌，胰腺癌，前列腺癌，肺癌或卵巢癌。
其他疾病和征兆是炎癥(例如慢性的)，動脈粥樣硬化，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和牙齦炎。
與血管發(fā)生有關(guān)的其他疾病和征兆是動靜脈alformations，星形細(xì)胞瘤，絨毛膜癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，血管瘤(兒童期，毛細(xì)血管)，肝細(xì)胞瘤，子宮內(nèi)膜增生，心肌缺血，子宮內(nèi)膜異位，卡波濟(jì)氏肉瘤，斑變性，黑素瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，外周動脈閉塞痰病，骨關(guān)節(jié)炎，牛皮癬，視網(wǎng)膜病(糖尿病，增生)，硬皮病，精原細(xì)胞瘤和潰瘍性結(jié)腸炎。
血管發(fā)生涉及對內(nèi)皮細(xì)胞和周圍的組織獨(dú)特的受體。這些標(biāo)志包括生長因子受體例如VEGF和整聯(lián)蛋白家族受體。免疫組織化學(xué)研究證明各種整聯(lián)蛋白可能最重要的是αv類的在血管頂端表面上表達(dá)[Conforti，G.，等，(1992)Blood 8037-446]并且是對于通過循環(huán)配體的導(dǎo)向的可利用的[Pasqualini，R.，等，(1997)NatureBiotechnology 15542-546]。α5β1也是促進(jìn)纖連蛋白基質(zhì)裝配和引發(fā)細(xì)胞附著纖連蛋白的重要的整聯(lián)蛋白。它在細(xì)胞移行[Bauer，J.S.，(1992)J.Cell Biol.116477-487]以及腫瘤發(fā)病和轉(zhuǎn)移中也起著重要的作用[Gehlsen，K.R.，(1988)J.Cell Biol.106925-930]。
整聯(lián)蛋白αvβ3是已知與血管發(fā)生有關(guān)的受體中的一種。受刺激的內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出在血管發(fā)生過程的關(guān)鍵時(shí)期的存活取決于這種受體，因?yàn)棣羦β3整聯(lián)蛋白受體/配體相互作用的拮抗劑誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡并且抑制血管生長。
整聯(lián)蛋白是雜二聚體，其中α-和β-亞基滲透細(xì)胞膜脂雙層。α-亞基在其胞外鏈上有四個(gè)Ca2+結(jié)合結(jié)構(gòu)域，β-亞基有多個(gè)半胱氨酸-富集結(jié)構(gòu)域。
細(xì)胞粘著中涉及的很多配體(例如纖連蛋白)包含三肽序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。該RGD序列表現(xiàn)出作為代表該序列的配體與細(xì)胞表面上的受體之間的基本識別位點(diǎn)而起作用。一般認(rèn)為配體和受體之間的二級相互作用提高相互作用的特異性。這些二級作用可能發(fā)生在配體和緊鄰RGD序列的受體之間的部分或者發(fā)生在遠(yuǎn)離RGD序列的位點(diǎn)。
已知RGD肽與很多種整聯(lián)蛋白受體結(jié)合并且有調(diào)節(jié)臨床顯著應(yīng)用的很多種細(xì)胞作用的潛力(Ruoslahti，J.Clin.Invest.，871-5(1991))。可能對于RGD肽及其模擬物的最廣泛研究的作用涉及它們作為導(dǎo)向血小板整聯(lián)蛋白GpIIbIIIa的抗凝劑。
例如WO97/06791和WO95/25543中描述過使用抗體或者包含RGD的肽通過施用αvβ3或αvβ5對組織中相關(guān)發(fā)生的抑制作用。EP578083描述了一系列包含單環(huán)RGD的肽，WO90/14103要求保護(hù)RGD-抗體。Haubner等在J.Nucl.Med.(1999)；401061-1071中描述了新的一類以包含單環(huán)RGD的肽為基礎(chǔ)的導(dǎo)向腫瘤的示蹤劑。使用全身放射自顯影的生物分布研究揭示125I-標(biāo)記肽具有非?？斓难呵宄屎椭饕文懝芘判雇緩?，導(dǎo)致高背景。
WO98/54347和WO95/14714中還描述了包含多個(gè)橋鍵的環(huán)RGD肽。從體內(nèi)生物淘選得到的肽(WO97/10507)已經(jīng)被用于各種各樣的導(dǎo)向應(yīng)用。序列CDCRGDCFC(RGD-4C)被用來藥物導(dǎo)向，例如doxirubicin(WO98/10795)，核酸和腺病毒(參見WO99/40214，WO99/39734，WO98/54347，WO98/54346，US5846782)。不管怎樣包含多個(gè)半胱氨酸殘基的肽有著多個(gè)二硫鍵異構(gòu)體能發(fā)生的缺陷。有4個(gè)半胱氨酸殘基的肽例如RGD-4C有著形成3種不同的二硫鍵折疊形式的可能性。因?yàn)镽GD藥學(xué)核心被迫形成三種不同的構(gòu)象，因此這些異構(gòu)體對于整聯(lián)蛋白受體有不同的親和性。
PCT/NO01/00146和PCT/NO01/00390公開了包含RGD的肽為基礎(chǔ)的化合物的其他例子，這些專利文獻(xiàn)在此引作參考。
因此與體內(nèi)血管發(fā)生相關(guān)的整聯(lián)蛋白受體的有效導(dǎo)向和成像要求化學(xué)穩(wěn)健和穩(wěn)定的選擇性、高親和性RGD為基礎(chǔ)的載體。因此，當(dāng)為了減少與背景有關(guān)的問題而設(shè)計(jì)顯像劑時(shí)，排泄途徑是重要的因素。本發(fā)明描述的二環(huán)結(jié)構(gòu)符合這些嚴(yán)格條件。
本發(fā)明的描述本發(fā)明的一方面提供如權(quán)利要求書中定義的式I的新的肽為基礎(chǔ)的化合物。這些化合物對整聯(lián)蛋白受體有親和性，例如對整聯(lián)蛋白αvβ3有親和性。
式I的化合物具有至少兩個(gè)橋鍵，其中一個(gè)橋鍵形成二硫鍵，第二個(gè)橋鍵包括硫醚(硫)鍵，并且所述橋鍵中將肽部分折疊成“巢”構(gòu)型。
因此，本發(fā)明的化合物每個(gè)分子部分最多有一個(gè)二硫橋。本發(fā)明定義的化合物具有令人驚奇地體內(nèi)穩(wěn)定性，并且穩(wěn)定于符合標(biāo)記條件下，例如用锝標(biāo)記中應(yīng)用的條件。
這些新的化合物可以用于治療有效療法以及用于成像目的。
式I定義本發(fā)明描述的新的肽為基礎(chǔ)的化合物或者其生理可接受鹽 其中G代表甘氨酸，和D代表天冬氨酸，和R1代表-(CH2)n-或-(CH2)n-C6H4-，優(yōu)選R1代表-(CH2)-，和n代表1和10之間的正整數(shù)，和h代表1或2的正整數(shù)，和X1代表氨基酸殘基，其中所述氨基酸具有一個(gè)功能側(cè)鏈例如酸或胺，優(yōu)選天冬氨酸或谷氨酸，賴氨酸，高賴氨酸，二氨基脂環(huán)酸(alcylicacid)或二氨基丙酸，X2和X4獨(dú)立地代表能形成二硫鍵的氨基酸殘基，優(yōu)選半胱氨酸或高半胱氨酸殘基，和X3代表精氨酸，N-甲基精氨酸或精氨酸模擬物，優(yōu)選精氨酸，和X5代表疏水性氨基酸或者其衍生物，優(yōu)選酪氨酸，苯丙氨酸，3-碘-酪氨酸或萘基丙氨酸殘基，更優(yōu)選苯丙氨酸或3-碘-酪氨酸殘基，和X6代表含有硫羥的氨基酸殘基，優(yōu)選半胱氨酸或高半胱氨酸殘基，和X7不存在或者代表優(yōu)選以單分散性PEG結(jié)構(gòu)單元為基礎(chǔ)的均相生物改性劑部分，包括1-10個(gè)所述結(jié)構(gòu)單元鏈節(jié)，所述生物改性劑具有改變所述藥物的藥物動力學(xué)和血液清除率的功能。另外，X7還可以代表1-10個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選甘氨酸，賴氨酸，天冬氨酸或絲氨酸。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，X7代表由單分散性PEG類似結(jié)構(gòu)的聚合作用構(gòu)成的生物改性劑單元，式II的17-氨基-5-氧代-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸 其中n等于1-10的整數(shù)并且其中C-末端單元是酰胺部分。
W1不存在或代表間隔基團(tuán)部分并且優(yōu)選從戊二酸和/或琥珀酸和/或聚乙二醇為基礎(chǔ)的單元和/或式II的單元衍生出 Z1是抗腫瘤劑，螯合劑或者報(bào)道基因部分，可以用式III的螯合劑代表 其中各個(gè)R1，R2，R3，和R4獨(dú)立地是R基團(tuán)；各個(gè)R基團(tuán)獨(dú)立地是H或C1-10烷基，C3-10烷基芳基，C2-10烷氧基烷基，C1-10羥基烷基，C1-10烷基胺，C1-10氟代烷基，或者兩個(gè)或多個(gè)R基團(tuán)，與它們連接的原子一起形成碳環(huán)，雜環(huán)，飽和的或不飽和的環(huán)，或者能代表式a，b，c或d給出的螯合劑 式e代表螯合劑的優(yōu)選的實(shí)施例
室溫下，接近中性pH有水存在的條件下，可以將包括式III的螯合劑的軛合物進(jìn)行放射性標(biāo)記，給出好的放射化學(xué)純度，RCP。室溫下打開肽成分的二硫橋的風(fēng)險(xiǎn)比高溫小。室溫下放射性標(biāo)記軛合物的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是醫(yī)院配藥程序簡便。
間隔基團(tuán)部分W1的作用是使相對大的螯合劑與肽成分的活性位點(diǎn)之間有距離。間隔基團(tuán)部分W1還用于使大的抗腫瘤劑與肽的活性位點(diǎn)之間有距離。
發(fā)現(xiàn)生物改性劑，X7，改變化合物的藥物動力學(xué)和血液清除率。生物改性劑使組織，例如肌肉，肝臟等較少吸收化合物，因此由于較少背景干擾而給出較好的診斷成像。生物改性劑的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是排泄主要通過腎。
但是，式I定義的化合物還可以包括螯合劑，Z1，如表I中定義。
在本發(fā)明的一些方面，Z1包括報(bào)道基因部分，其中所述報(bào)道基因部分包括放射性核素。下面的表I中列出了螯合劑的其他定義。
表I




在本發(fā)明式I的一些方面，Z1部分包括結(jié)合18F同位素或Cu同位素，作為輔基或者通過取代或加成反應(yīng)而摻合到試劑中。因此得到的化合物可以在正電子發(fā)射斷層掃描(PET)成像中使用。
在本發(fā)明式I的一個(gè)方面中，Z1代表抗腫瘤劑。在這方面，化合物定向與癌相關(guān)的血管發(fā)生位點(diǎn)并且將抗腫瘤劑帶給病灶區(qū)。
抗腫瘤劑可以是環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，二甲磺酸丁酯，甲氨喋呤，阿糖孢苷，氟尿嘧啶，長春堿，紫杉醇，阿霉素，柔紅霉素，依托泊苷，替尼泊苷，順鉑，安吖啶，多西紫杉，但是也可以使用寬范圍的其他抗腫瘤劑。
這里描述的軛合物的肽成分優(yōu)選沒有自由氨基-或羧基-末端。這使得這些化合物抗酶促降解的抗性顯著提高，結(jié)果它們與很多已知的自由肽相比體內(nèi)穩(wěn)定性提高。
根據(jù)這里使用的術(shù)語“氨基酸”指它的最廣義意義的蛋白質(zhì)源的L-氨基酸，D-氨基酸，化學(xué)改性的氨基酸，N-甲基，Cα-甲基和氨基酸側(cè)鏈模擬物和非天然氨基酸例如萘基丙氨酸。任何天然存在的氨基酸或者這樣的天然存在的氨基酸的模擬物都是優(yōu)選的。
下面的化合物I-IV詳細(xì)說明式I的化合物的一些優(yōu)選實(shí)施方案
化合物I 化合物II
化合物III 化合物IV 在大多數(shù)情況下，優(yōu)選的是肽中的氨基酸全部是L-型。但是，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，肽中的氨基酸中的一個(gè)，兩個(gè)，三個(gè)或多個(gè)優(yōu)選是D-型。包含這樣的D-型氨基酸對化合物的血清穩(wěn)定性有顯著作用。
根據(jù)本發(fā)明，式I中定義的任何氨基酸殘基可以優(yōu)選代表天然存在的氨基酸，并且獨(dú)立地是D-或L-構(gòu)型之任何一種。
本發(fā)明的一些化合物是高親和性RGD為基礎(chǔ)的載體。根據(jù)這里使用的，術(shù)語“高親和性RGD為基礎(chǔ)的載體”指在對αvβ3整聯(lián)蛋白的競爭結(jié)合測試中Ki＜10nM并且優(yōu)選＜5nM，并且Ki值通過與已知的高親和性配體鋸鱗血抑肽競爭而測得的化合物。實(shí)施這樣的競爭測試的方法是本領(lǐng)域公知的。
本發(fā)明還提供含有有效量的(例如在體內(nèi)成像中增強(qiáng)成像對照的有效量)通式I的化合物或者其鹽，和一種或多種藥學(xué)可接受佐劑，賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。
本發(fā)明還提供含有有效量的通式I的化合物或者其酸加成鹽，和一種或多種藥學(xué)可接受佐劑，賦形劑或稀釋劑的用于治療疾病的藥物組合物。
其他有代表性的間隔基團(tuán)(W1)成分包括結(jié)構(gòu)-型多糖，貯存-型多糖，多氨基酸和它的甲酯和乙酯酯，和多肽，寡糖和寡核苷酸，它們可以包含或不包含酶裂解位點(diǎn)。
本發(fā)明造影劑中的報(bào)道基因(Z1)可以是在體內(nèi)診斷成像過程中能直接或間接檢測的任何部分。優(yōu)選地，造影劑包括一個(gè)報(bào)道基因。優(yōu)選的是散發(fā)或者可被引起散發(fā)射線(例如通過放射性衰變)的部分。
對于MR成像，報(bào)道基因是非零核自旋同位素(例如19F)或者具有沒有配對的電子自旋因此有順磁性，超順磁性，鐵氧體磁性或鐵磁體性質(zhì)的材料；對于光成像，報(bào)道基因是光散射體(例如有色的或沒有色的顆粒)，光吸收體或光發(fā)射體；對于磁量成像，報(bào)道基因具有可檢測磁性；對于電抗成像，報(bào)道基因影響電抗；對于閃爍成像法，SPECT，PET，等等，報(bào)道基因是放射性核素。
一般來說，報(bào)道基因可以是(1)可螯合金屬或包含多原子金屬的離子(即TcO，等)，其中所述金屬是高原子數(shù)金屬(例如原子數(shù)大于37)，順磁物質(zhì)(例如過渡金屬或鑭系)，或放射性同位素，(2)共價(jià)鍵合的非金屬物質(zhì)，它是沒有配對的電子點(diǎn)(例如存留自由基中的氧或碳)，高原子數(shù)非金屬，或放射性同位素，(3)含有高原子數(shù)原子，顯示協(xié)同的磁性性狀(例如超順磁性，鐵氧體磁性或鐵磁性)或者包含放射性核素的多原子簇或晶體。
下面更詳細(xì)描述特別優(yōu)選的報(bào)道基因(Z1)的實(shí)施例。
螯合金屬報(bào)道基因優(yōu)選選自如下90Y，99mTc，111In，47Sc，67Ga，51Cr，177mSn，67Cu，167Tm，97Ru，188Re，177Lu，199Au，203Pb和141Ce。
連接基團(tuán)部分上的螯合基團(tuán)理想的是與金屬離子螯合。合適的螯合基團(tuán)的其他例子公開于US-A-4647447，WO89/00557，US-A-5367080，US-A-5364613。
本發(fā)明的金屬與任何螯合劑螯合的方法在本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平內(nèi)。通過三種一般方法中的任一種，金屬能與螯合劑部分結(jié)合直接結(jié)合，模板合成和/或金屬轉(zhuǎn)移作用。直接結(jié)合是優(yōu)選的。
因此期望金屬離子容易與螯合劑絡(luò)合，例如，只是通過使含有螯合劑部分的水溶液與優(yōu)選pH范圍大約4至大約11的水溶液中的金屬接觸或混合。所述鹽可以是任何鹽，但是優(yōu)選所述鹽是金屬的水溶性鹽，例如鹵化物鹽，更優(yōu)選選擇這樣的鹽使得不干擾金屬離子與螯合劑的結(jié)合。
含有螯合劑的部分優(yōu)選在pH在大約5和大約9之間，更優(yōu)選pH在大約6和大約8之間水溶液中。含有螯合劑的部分能與緩沖鹽例如檸檬酸鹽，碳酸鹽，乙酸鹽，磷酸鹽和硼酸鹽混合，達(dá)到最佳pH。優(yōu)選地，選擇緩沖鹽使得不干擾接著的金屬離子與螯合劑的結(jié)合。
下面的同位素或同位素對能被用于成像和治療而不改變放射標(biāo)記方法或螯合劑47Sc21；141Ce58；188Re75；177Lu71；199Au79；47Sc21；131I53；67Cu29；131I53和123I53；188Re75和99mTc43；90Y39和87Y39；47Sc21和44Sc21；90Y39和123I53；146Sm62和153Sm62；和90Y39和111In49。
優(yōu)選的非金屬原子報(bào)道基因包括放射性同位素例如123I，131I和18F和非零核自旋原子例如19F，和重原子例如I。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，具體涉及碘或氟放射性同位素的使用。例如，如果肽或連接基團(tuán)由能在共價(jià)鍵生成反應(yīng)中被碘或氟化學(xué)取代的取代基組成，例如，包含羥基苯基或?qū)ο趸郊柞；倌軋F(tuán)的取代基，這樣的取代基可以通過本領(lǐng)域公知的方法分別用碘或氟的放射性同位素標(biāo)記。這些基團(tuán)可以用于治療性或診斷性成像應(yīng)用中。同時(shí)，在治療性或診斷性成像應(yīng)用中也可以使用與相同的肽-連接基團(tuán)上的螯合劑連接的金屬。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案涉及特別用于腫瘤成像的通式(I)的放射性標(biāo)記試劑。
可以對患者施用足夠量的得到與特定成像技術(shù)期望的對比度的本發(fā)明的診斷劑用于成像。報(bào)道基因是金屬的情況下，一般情況下，每千克患者體重使用0.001至5.0毫摩爾螯合成像金屬離子的劑量有效實(shí)現(xiàn)足夠的對比度提高。對于報(bào)道基因是放射性核素，每70kg體重使用0.01至100mCi，優(yōu)選0.1至50mCi的劑量一般是足夠的。
用于治療用途的本發(fā)明的化合物的劑量取決于要治療的病癥，但是一般是1pmol/kg至1mmol/kg體重級。
因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的生理可接受載體或賦形劑加以配制用于給藥。例如，化合物，任選地加有藥學(xué)可接受賦形劑，可以懸浮或溶解于含水介質(zhì)，然后將得到的溶液或混懸液滅菌。
式I的化合物在對病癥的治療中是治療有效的，并且在體內(nèi)成像中是可檢測的。因此，例如信號基因部分上的載體具有治療功效，例如憑借載體部分的放射性核素報(bào)道基因的放射性治療作用。
因此認(rèn)為式I的化合物在治療組合物(藥物)的制備中的用途，和對人體或動物體的治療性療法或預(yù)防性治療，優(yōu)選對癌癥的治療方法中的用途代表本發(fā)明的另一方面。
本申請上下文中可以使用的報(bào)道基因的其他例子在WO98/47541的第63-66和70-86頁給出，這些頁上的公開內(nèi)容全部在此引作參考。因此主張上面提到的頁中公開的每一個(gè)和所有報(bào)道基因或者其部分認(rèn)為是本申請中包含的本發(fā)明說明書的一部分。
本發(fā)明的另一方面提供式I的化合物用于制備在涉及對人體或動物體施用造影介質(zhì)并且對所述人體或動物體的至少一部分成像的診斷方法中使用所述造影介質(zhì)的用途。
本發(fā)明的另一方面提供涉及對所述人體或動物體施用造影劑，例如施用到脈管系統(tǒng)，并且對所述人體或動物體的至少一部分成像的對人體或動物體成像的方法，其中所述造影劑使用閃爍法，PET或SPECT形式分布，其中所述造影劑使用式I的物質(zhì)。
本發(fā)明的另一方面提供對事先施用含有式I定義的化合物的造影劑組合物的人體或動物體產(chǎn)生增強(qiáng)的像的方法，所述方法包括對所述人體或動物體的至少一部分成像。
本發(fā)明的另一方面提供檢測使用藥物例如細(xì)胞毒素物質(zhì)治療人體或動物體減輕與癌癥相關(guān)的癥狀優(yōu)選血管發(fā)生的作用的方法，所述方法包括對所述人體或動物體施用式I的物質(zhì)并且檢測細(xì)胞受體優(yōu)選內(nèi)皮細(xì)胞受體特別是αvβ3受體對所述物質(zhì)的吸收，所述施用和檢測任選地但是優(yōu)選反復(fù)進(jìn)行，例如用所述藥物治療之前，期間和之后。
可以應(yīng)用化學(xué)合成公知的所有的方法合成本發(fā)明的化合物，但是特別有用的是使用自動肽合成儀的Merrifield的固相方法(J.Am.Chem.Soc.，852149(1964))。在體外篩選測試之前，肽和肽螯合物可以使用高效液相色譜法(HPLC)純化并且通過質(zhì)譜和分析HPLC表征。
現(xiàn)在通過下面的非限制性實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-NH2的合成 1a)cPn216螯合物的合成對于锝螯合物cPn216合成的描述，讀者參見專利申請GB0116815.2。
1b)cPn216-戊二酸中間體的合成
cPn216(100mg，0.29mmol)溶解于DMF(10mL)并且攪拌下分批加入戊二酸酐(33mg，0.29mmol)。將反應(yīng)攪拌23小時(shí)，使得完全轉(zhuǎn)化為期望的產(chǎn)物。RP-HPLC之后以好的產(chǎn)率獲得純的酸。
1c)cPn216-戊二酸的四氟苯硫酯的合成 向cPn216-戊二酸(300mg，0.66mmol)的DMF(2mL)溶液加入HATU(249mg，0.66mmol)和NMM(132μL，1.32mmol)。將混合物攪拌5分鐘之后加入四氟苯硫酚(0.66mmol，119mg)。將溶液攪拌10分鐘之后用20％乙腈/水(8mL)將反應(yīng)混合物稀釋，并且通過RP-HPLC將產(chǎn)物純化，凍干之后得到110mg期望的產(chǎn)物。
1d)ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-NH2的合成 分子量＝1118.844精確質(zhì)量＝1117.464分子式＝C46H76CN13O11S3使用1mmol氨基酸筒以0.25mmol規(guī)模使用Rink酰胺AM樹脂起始在ABI 433A自動肽合成儀上合成肽。在偶聯(lián)之前使用HBTU將氨基酸預(yù)先活化。使用氯代乙酸酐的DMF溶液將N-末端胺基氯乙?；?0分鐘。
在含有TIS(5％)，H2O(5％)和苯酚(2.5％)的TFA中同時(shí)從樹脂中去除肽和側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)(除了tBu之外)，進(jìn)行2小時(shí)。
后處理之后獲得295mg的粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.42分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1118.5，實(shí)測值，1118.6)。
1e)硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-NH2的合成 分子量＝1062.383精確質(zhì)量＝1081.487分子式＝C46H75N13O11S3295mg的ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-NH2溶解于水/乙腈。用氨水將混合物調(diào)節(jié)至pH8并且攪拌16小時(shí)。
后處理之后獲得217mg的粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2mL/min；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.18min)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1882.5，實(shí)測值，1882.6)。
1f)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-NH2的合成 分子量＝968.150精確質(zhì)量＝967.346分子式＝C38H57N13O11S3用茴香醚(500μL)，DMSO(2mL)和TFA(100mL)的溶液處理217mg硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-NH260分鐘，接著真空去除TFA，并且通過加入二乙基醚將肽沉淀。
對粗產(chǎn)物(202mg)實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 10μC18(2)250×50mm柱)純化，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用60分鐘，流速50毫升/分鐘。
凍干之后得到112mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，5-50％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，5.50分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 968，實(shí)測值，971)。
1g)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-AsP-Cys6-Phe-Cys]-NH2的合成 9.7mg二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-NH2，9.1mg的cPn216螯合物活潑酯和6μL的N-甲基嗎啉溶解于DMF(0.5mL)。將混合物攪拌3小時(shí)。
對反應(yīng)混合物實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱)純化，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用40分鐘，流速10毫升/分鐘。
凍干之后得到5.7mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，0-30％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，7.32分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1407.7，實(shí)測值，1407.6)。
實(shí)施例2二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝1的合成2a)17-(Fmoc-氨基)-5-氧代-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸 利用Fmoc化學(xué)過程使該結(jié)構(gòu)單元與固相偶聯(lián)。這種結(jié)構(gòu)單元的偶聯(lián)形式簡言之是指(PEG)n，其中n是正整數(shù)。
1，11-二疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷無水THF(100ml)中的四乙二醇(19.4g，0.100mol)和甲磺酰氯(25.2g，0.220mol)的溶液保持在氬氣下并且在冰/水浴上冷卻至0℃。用45分鐘的時(shí)間向燒瓶中滴加三乙胺(22.6g，0.220mol)的無水THF(25ml)溶液。1小時(shí)之后去除冷卻浴并且繼續(xù)攪拌4小時(shí)。加入水(60ml)。按順序向混合物加入碳酸氫鈉(6g，至pH8)和疊氮化鈉(14.3g，0.220mmol)。蒸餾去除THF并且將水溶液回流24小時(shí)(形成兩層)。將混合物冷卻并且加入乙醚(100ml)。用氯化鈉將水相飽和。分離各相并且用乙醚萃取水相(4×50ml)。合并的有機(jī)相用鹽水(2×50ml)洗滌并且干燥(MgSO4)。過濾并且濃縮，得到22.1g(91％)黃色油狀物。產(chǎn)物不用進(jìn)一步純化即可在下一步中使用。
11-疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷胺室溫下經(jīng)3小時(shí)向機(jī)械劇烈攪拌著的5％鹽酸(200ml)中1，11-二疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷(20.8g，0.085mol)的混懸液加入三苯基膦(19.9g，0.073mol)的乙醚(150ml)溶液。再將反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)。分離各相并且用二氯甲烷萃取水相(3×40ml)。水相在冰/水浴上冷卻并且通過加入KOH將pH調(diào)節(jié)至大約12。將產(chǎn)物萃取到二氯甲烷中(5×50ml)。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)相。過濾并蒸發(fā)，得到14.0g(88％)黃色油狀物。通過MALDI-TOF質(zhì)譜分析(基質(zhì)α-氰基-4-羥基肉桂酸)，正如所預(yù)期的，在219給出M+H峰。使用1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR光譜學(xué)進(jìn)一步表征證實(shí)結(jié)構(gòu)。
17-疊氮基-5-氧代-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸向11-疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷胺(10.9g，50.0mmol)的二氯甲烷溶液(100ml)中加入二甘醇酸酐(6.38g，55.0mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌一夜。HPLC分析(柱子Vydac 218TP54；溶劑A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度4-16％B，20分鐘；流速1.0毫升/分鐘；UV檢測在214和284nm進(jìn)行)，表明滯留時(shí)間18.3分鐘時(shí)起始物完全轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。將溶液濃縮得到定量產(chǎn)率的黃色漿液。通過LC-MS(ES離子化作用)分析產(chǎn)物，正如所預(yù)期的給出[MH]+335。1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR光譜與結(jié)構(gòu)相吻合。產(chǎn)物不用進(jìn)一步純化即可在下一步中使用。
17-氨基-5-氧代-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸使用H2(g)-Pd/C(10％)還原17-疊氮基-5-氧-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸(8.36g，25.0mmol)的水溶液(100ml)。進(jìn)行反應(yīng)直到LC-MS分析表明起始物完全轉(zhuǎn)化(柱子Vydac 218TP54；溶劑A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度4-16％B，20分鐘；流速1.0毫升/分鐘；UV檢測在214和284nm進(jìn)行，ES離子化作用對于起始物是M+H 335，對于產(chǎn)物是309)。將溶液過濾并且在下一步中直接使用。
17-(Fmoc-氨基)-5-氧代-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸向上一步得到的17-氨基-5-氧-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七酸(相當(dāng)于25.0mmol氨基酸)的水溶液加入碳酸氫鈉(5.04g，60.0mmol)和二噁烷(40ml)。滴加Fmoc-氯(7.11g，0.275mol)的二噁烷(40ml)溶液。將反應(yīng)混合物攪拌一夜。將二噁烷蒸出(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā))并且用乙酸乙酯萃取水相。通過加入鹽酸將水相酸化并且將沉淀出的物質(zhì)萃取到氯仿中。將有機(jī)相干燥(MgSO4)，過濾并濃縮，得到11.3g(85％)黃色漿液。通過LC-MS分析證實(shí)結(jié)構(gòu)(柱子Vydac 218TP54；溶劑A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度40-60％B，20分鐘；流速1.0毫升/分鐘；UV檢測在214和254nm進(jìn)行，ES離子化作用對于5.8分鐘峰的產(chǎn)物正如預(yù)期的是M+H 531)。分析表明副產(chǎn)物含量非常低，產(chǎn)物不用進(jìn)一步純化即可使用。
2b)ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)n-NH2，其中n＝1的合成 以0.25mmol規(guī)模開始，由HATU活化作用介導(dǎo)，人工使PEG單元與Rink酰胺AM樹脂偶聯(lián)。使用1mmol氨基酸筒在ABI 433A自動肽合成儀上組裝其余的肽。在偶聯(lián)之前使用HBTU預(yù)先將氨基酸活化。使用氯乙酸酸酐的DMF溶液將N-末端胺基氯乙?；?0分鐘。
在含有TIS(5％)，H2O(5％)和苯酚(2.5％)的TFA中同時(shí)從樹脂中去除肽和側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)(除了tBu之外)，進(jìn)行2小時(shí)。
后處理之后獲得322mg的粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.37分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1409，實(shí)測值，1415)。
2c)硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝1的合成 322mg的ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)n-NH2溶劑于水/乙腈。用氨水將混合物調(diào)節(jié)至pH8并且攪拌16小時(shí)。
后處理之后獲得粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.22分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1373，實(shí)測值，1378)。
2d)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2其中n＝1的合成
用茴香醚(200μL)，DMSO(2mL)和TFA(100mL)的溶液處理硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)n-NH260分鐘，接著真空去除TFA，并且通過加入二乙基醚將肽沉淀。
對70mg粗產(chǎn)物實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱)純化，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用40分鐘，流速10毫升/分鐘。
凍干之后得到46mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，0-30％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.80分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1258.5，實(shí)測值，1258.8)。
2e)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2其中n＝1的合成 13mg[Cys2-6]環(huán)[CH2CO-Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，9.6mg的cPn216螯合物活潑酯和8μL的N-甲基嗎啉溶解于DMF(0.5mL)。將混合物攪拌2小時(shí)30分鐘。
對反應(yīng)混合物實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱)純化，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用40分鐘，流速10毫升/分鐘。
凍干之后得到14.2mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，0-30％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，7.87分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1697.8，實(shí)測值，1697.9)。
實(shí)施例3二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝2的合成3a)ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)n-NH2，其中n＝2的合成 根據(jù)實(shí)施例2b)組裝肽，人工偶聯(lián)兩個(gè)PEG單元。
后處理之后獲得粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.40分鐘)。
3b)硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝2的合成
ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)n-NH2，其中n＝2溶劑于水/乙腈。用氨水將混合物調(diào)節(jié)至pH8并且攪拌16小時(shí)。
后處理之后獲得380毫克粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，Phenomenex Luna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.28分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1663，實(shí)測值，1670)。
3c)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2其中n＝2的合成 用茴香醚(500μL)，DMSO(2mL)和TFA(100mL)的溶液處理380mg硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝2，60分鐘，接著真空去除TFA，并且通過加入二乙基醚將肽沉淀。
對粗產(chǎn)物(345mg)實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 10μC18(2)250×50mm柱)純化，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用60分鐘，流速50毫升/分鐘。
凍干之后得到146mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，0-30％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，7.42分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1548.6，實(shí)測值，1548.8)。
3d)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2其中n＝2的合成 146mg[Cys2-6]環(huán)[CH2CO-Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-(PEG)2-NH2，110mg的cPn216螯合物活潑酯和76μL的N-甲基嗎啉溶解于DMF(6mL)。將混合物攪拌9小時(shí)。
對反應(yīng)混合物實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 10μC18(2)250×50mm柱)純化，使用0-30％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用60分鐘，流速50毫升/分鐘。
凍干之后得到164mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，0-30％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，8.13分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，M+H 1988.0，實(shí)測值，1988.0)。
實(shí)施例4二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝4的合成4a)ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)n-NH2，其中n＝4的合成 根據(jù)實(shí)施例2b)組裝肽，人工偶聯(lián)所有四個(gè)PEG單元。
后處理之后獲得粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.50分鐘)。
4b)硅醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2，其中n＝4的合成
ClCH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)4-NH2溶劑于水/乙腈。用氨水將混合物調(diào)節(jié)至pH8并且攪拌16小時(shí)。
后處理之后獲得粗產(chǎn)物肽(分析HPLC梯度，5-50％B，10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，6.37分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，[(M+2H)/2]1122.0，實(shí)測值，1122.5)。
4c)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2其中n＝4的合成 用茴香醚(100μL)，DMSO(1mL)和TFA(50mL)的溶液處理硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)4-NH260分鐘，接著真空去除TFA，并且通過加入二乙基醚將肽沉淀。
對粗產(chǎn)物(345mg)實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna5μC18(2)250×21.20mm柱)純化，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用40分鐘，流速10毫升/分鐘。
凍干之后得到12mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，5-50％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，4.87分鐘)。
4d)二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys(cPn216-戊二酰)-Cys2-Arg-Gly-Asp-Cys6-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2其中n＝4的合成 12mg二硫化物[Cys2-6]硫醚環(huán)[CH2CO-Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-(PEG)4-NH2，5.2mg的cPn216螯合物活潑酯和2μL的N-甲基嗎啉溶解于DMF(0.5mL)。將混合物攪拌7小時(shí)。
對反應(yīng)混合物實(shí)施制備HPLC(Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm柱)純化，使用5-50％B，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，用40分鐘，流速10毫升/分鐘。
凍干之后得到8mg純物質(zhì)(分析HPLC梯度，5-50％B，用10分鐘，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；柱子，PhenomenexLuna 3μC18(2)50×4.6mm；流速，2毫升/分鐘；檢測，UV 214nm；產(chǎn)物滯留時(shí)間，5.17分鐘)。利用質(zhì)譜進(jìn)行產(chǎn)物的進(jìn)一步表征預(yù)期值，[(M+2H)/2]1284.6，實(shí)測值，1284.9)。
序列表<110>Amersham Health AS<120>肽基化合物<130>NO 20014954<150>NO 20014954<151>2001-10-11<160>1<170>專利版本3.1<210>1<211>8<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<220>
<221>DISULFID<222>(2)..(5)<223>氨基酸殘基2和5之間的二硫橋<220>
<221>THIOETH<222>(1)..(8)<223>氨基酸殘基1和8之間的硫醚橋<400>1Lys Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys1 權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物或者其藥學(xué)可接受鹽 其中G代表甘氨酸，D代表天冬氨酸，R1代表-(CH2)n-或-(CH2)n-C6H4-，其中n代表正整數(shù)1-10，h代表1或2的正整數(shù)，X1代表氨基酸殘基，其中所述氨基酸具有一個(gè)功能側(cè)鏈例如酸或胺，X2和X4獨(dú)立地代表能形成二硫鍵的氨基酸殘基，X3代表精氨酸，N-甲基精氨酸或精氨酸模擬物，X5代表疏水性氨基酸或者其衍生物，和X6代表含有硫羥的氨基酸殘基，和X7不存在或者代表生物改性劑部分，Z1代表抗腫瘤劑，螯合劑或者報(bào)道基因部分和W1不存在或代表間隔基團(tuán)部分。
2.權(quán)利要求1要求的化合物，其中任何氨基酸殘基獨(dú)立地是D或L構(gòu)型。
3.權(quán)利要求1要求的化合物，其中R1代表-(CH2)-。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)要求的化合物，其中X1代表天冬氨酸，谷氨酸，賴氨酸，高賴氨酸，二氨基脂環(huán)酸或其衍生物。
5.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X2，X4和X6獨(dú)立地代表半胱氨酸或高半胱氨酸殘基。
6.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X3代表精氨酸殘基。
7.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X5代表酪氨酸，苯丙氨酸，3-碘-酪氨酸或萘基丙氨酸殘基。
8.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X7不存在或者包括1-10單元的單分散PEG結(jié)構(gòu)單元。
9.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X7不存在或者包括1-10單元的式II
10.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X7代表1-10個(gè)氨基酸殘基。
11.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中X7代表甘氨酸，賴氨酸，天冬氨酸或絲氨酸殘基，優(yōu)選甘氨酸。
12.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中Z1是式III的螯合劑 其中各個(gè)R1，R2，R3，和R4獨(dú)立地是R基團(tuán)；各個(gè)R基團(tuán)獨(dú)立地是H或C1-10烷基，C3-10烷基芳基，C2-10烷氧基烷基，C1-10羥基烷基，C1-10烷基胺，C1-10氟代烷基，或者兩個(gè)或多個(gè)R基團(tuán)，與它們連接的原子一起形成碳環(huán)，雜環(huán)，飽和的或不飽和的環(huán)。
13.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中Z1是
14.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中Z1包括報(bào)道基因部分。
15.權(quán)利要求14要求的化合物，其中報(bào)道基因部分包括金屬放射性核素，順磁性金屬離子，熒光金屬離子，重金屬離子或簇離子。
16.權(quán)利要求14和15要求的化合物，其中報(bào)道基因部分包括90Y，99mTc，111In，47Sc，67Ga，51Cr，177mSn，67Cu，167Tm，97Ru，188Re，177Lu，199Au，203Pb，141Ce或18F。
17.權(quán)利要求1-16要求的化合物，其中報(bào)道基因部分是99mTc。
18.權(quán)利要求1-11要求的化合物，其中Z1是抗腫瘤劑。
19.權(quán)利要求18要求的化合物，其中Z1代表環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，二甲磺酸丁酯，甲氨喋呤，阿糖孢苷，氟尿嘧啶，長春堿，紫杉醇，阿霉素，柔紅霉素，依托泊苷，替尼泊苷，順鉑，安吖啶或多西紫杉。
20.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)要求的化合物，其中W1是戊二酸或琥珀酸。
21.權(quán)利要求1要求的化合物，其由下式所定義化合物I 化合物II 化合物III 化合物IV
22.一種藥物組合物，它含有有效量的通式(I)的化合物或者其鹽，和一種或多種藥學(xué)可接受佐劑，賦形劑或稀釋劑，所述藥物組合物用于提高體內(nèi)成像中的成像對比度或者用于治療疾病。
23.權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)要求的化合物用于制備在涉及對人體或動物體施用所述造影介質(zhì)并且對所述人體或動物體的至少一部分成像的診斷方法中使用的造影介質(zhì)的用途。
24.一種涉及對人體或動物體施用造影劑并且對分布有所述造影劑的所述人體或動物體的至少一部分成像的對人體或動物體成像的方法，其特征在于所述造影劑包括權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)要求的化合物。
25.一種對事先施用含有權(quán)利要求1要求的化合物的造影劑組合物的人體或動物體產(chǎn)生增強(qiáng)成像的方法，該方法包括對所述人體或動物體的至少一部分成像。
26.檢測使用藥物治療人體或動物體以減輕與癌癥相關(guān)的癥狀的作用的方法，所述方法包括對所述人體或動物體施用權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)要求的化合物或組合物并且檢測細(xì)胞受體對所述化合物或組合物的吸收，所述施用和檢測任選地但是優(yōu)選反復(fù)進(jìn)行，例如用所述化合物或組合物治療之前，期間和之后。
27.一種對人體或動物體治療癌癥或相關(guān)疾病的方法，該方法包括施用有效量的權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)要求的化合物或組合物。
28.權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)要求的化合物用于制備用于對人或動物的癌癥或相關(guān)疾病的治療性或預(yù)防性治療的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作診斷成像劑或者治療藥物的新的肽基化合物，其中所述物質(zhì)包括與整聯(lián)蛋白受體結(jié)合的導(dǎo)向載體。
文檔編號A61P19/02GK1622830SQ02813864
公開日2005年6月1日 申請日期2002年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月10日
發(fā)明者A·庫斯伯特森, B·因德雷沃爾, M·索爾巴肯, C·M·阿歇爾, T·恩格爾, H·J·瓦德斯沃斯 申請人:安盛藥業(yè)有限公司