專利名稱：瓊脂糖在制備治療前列腺增生病藥劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及瓊脂糖在酶消融治療前列腺增生中的用途，尤其是作為酶混合物的控釋劑的用途。
背景技術(shù)：
瓊脂糖主要用于郵電子工業(yè)學(xué)、細(xì)胞工業(yè)學(xué)、細(xì)菌學(xué)、化工學(xué)、生化學(xué)、免疫化學(xué)等方面，其主要是在電子泳動法中作為載體，分離蛋白質(zhì)、核酸等。
良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia，BPH)是老年男性的常見多發(fā)疾病。在我國60歲以上的人口在1億以上，其中約30～50％的患者需要接受治療，這樣前列腺增生的患者就相當(dāng)之多。
前列腺增生的危害在于增生前列腺體對尿道的壓迫引起下尿路梗阻癥狀以及一系列繼發(fā)損害，并嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。
目前的治療方式1.口服藥物治療由于前列腺增生癥的發(fā)生機制仍不是十分明確，現(xiàn)有的藥物治療不是十分有效。
2.手術(shù)治療經(jīng)尿道前列腺切除術(shù)(Transurethral Resection of Prostate，TURP)是目前國際上推薦的治療前列腺增生的金標(biāo)準(zhǔn)。局限性①需要相關(guān)的特殊器械和手術(shù)技巧，推廣還不可能十分普遍。②手術(shù)費用較高，對大多數(shù)患者而言經(jīng)濟(jì)上依然難以接受。③要求患者能夠耐受麻醉，由于約77％的老年BPH患者還合并有其他的一些老年疾患，對耐受手術(shù)具有較高的風(fēng)險。④TURP也存在一些相關(guān)的并發(fā)癥(如出血、感染、TUR綜合征、尿道狹窄和尿失禁、逆行射精、勃起功能障礙等)。據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計，這些并發(fā)癥的發(fā)生率為18％，死亡率為0.2％。⑤從BPH患者的需求調(diào)查分析顯示，絕大多數(shù)BPH患者的初衷并不期望手術(shù)治療，而希望能夠得到更微創(chuàng)、更安全的治療。因而尋求更微創(chuàng)的治療手段是十分必要的。
3.微創(chuàng)治療近十年來，BPH的微創(chuàng)治療發(fā)展發(fā)展很快，大多數(shù)為以熱消融為基礎(chǔ)，如經(jīng)尿道微波熱療(TUMT)、經(jīng)尿道針刺射頻消融(TUNA)、間質(zhì)激光凝固(ILC)以及超聲聚焦(HIFU)等等，近期療效介于藥物治療與TURP之間，遠(yuǎn)期效果仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)比不上TURP。前列腺內(nèi)無水乙醇注射的臨床試驗在國外正如火如荼，其效果還有待驗證。
4.酶消融治療良性前列腺增生關(guān)于酶消融治療前列腺增生的研究較少，國外已申請專利保護(hù)為United States Patent 5，116，615。其配方為5000U/ml膠原酶、3000U/ml透明質(zhì)酸酶和1％(v/v)Triton-100溶于0.05M的20mMCa離子的枸櫞酸鹽溶液中，其使用方法為直接腺體內(nèi)注射。目前其配方和方法以及相關(guān)文獻(xiàn)報道的效果僅僅只能夠引起前列腺組織學(xué)上的變化，不能使前列腺體積明顯縮小，因此，治療效果不是很理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種酶消融治療良性前列腺增生中酶混合物的控釋劑，瓊脂糖在制備治療良性前列腺增生病藥劑中的應(yīng)用，使前列腺組織發(fā)生凝固性壞死，消除了前列腺組織中活性細(xì)胞產(chǎn)生的酶抑制物。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施由酶混合物和酶的控釋劑相配合，酶混合物為5000-10000U/m1膠原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明質(zhì)酸酶和100-800U/ml彈性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，酶的控釋劑為熱瓊脂糖1％-2％的D-Hank’s溶液，調(diào)整pH值為7.0，溫度控制在70-100℃。酶的聯(lián)合作用要優(yōu)于單一酶的作用，因此配方以膠原酶和胰蛋白酶為基礎(chǔ)，透明質(zhì)酸酶和彈性蛋白酶起輔助作用，其中彈性蛋白酶主要用于以纖維結(jié)締組織和平滑肌等基質(zhì)增生為主的前列腺?？紤]到Ca2+離子對胰蛋白酶的作用存在影響，用D-Hank’s液對其它酶的作用影響不大，因此采用D-Hank’s液作溶劑。
本發(fā)明提出的酶消融治療良性前列腺增生的酶混合物的控釋劑的使用方法是首先將瓊脂糖加入到D-Hank’s液中，加熱煮沸，配制成1-2％的熱瓊脂糖溶液。注入瓊脂糖劑量的計算公式為0.52×(左右徑×上下徑×前后徑-(左右徑-(4-8mm))×(上下徑-(4～8mm))×(前后徑-(4-8mm))。將適量熱瓊脂糖溶液迅速注入到前列腺體內(nèi)，從尿道粘膜上可見前列腺體微微發(fā)白。然后持續(xù)膀胱沖洗，等待60分鐘左右，以避免高溫造成酶的失活，同時瓊脂成為半固體狀，可以對注入的酶溶液產(chǎn)生控釋作用，瓊脂糖注射后在B超下不產(chǎn)生強回聲。此時通過直腸指診，判斷腺體內(nèi)溫度基本降至體溫，注入混合酶溶液，在B超監(jiān)視下，見注射后產(chǎn)生的強光團(tuán)達(dá)到預(yù)期的范圍即可。
由于上述解決方案中采用了熱瓊脂糖溶液作為酶的控釋劑，不僅在預(yù)定的范圍內(nèi)形成空腔，使增生的前列腺組織溶解，吸收；從組織學(xué)上能夠使前列腺組織變得疏松，類似一種海綿樣，腺體組織會變軟，對尿道的壓迫也會減輕；而且能使前列腺體積明顯縮小，優(yōu)于目前所有的微創(chuàng)治療；對尿道和周圍組織無損傷，治療后無明顯并發(fā)癥，要優(yōu)于TURP。此外，預(yù)計在臨床上治療1例患者所需的成本在1000-2000元左右，因此在臨床上具有經(jīng)濟(jì)、安全、簡便、微創(chuàng)、有效的優(yōu)點。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點①可以局部產(chǎn)生足夠時間的熱消融作用，使前列腺組織發(fā)生凝固性壞死，并消除前列腺組織中活性細(xì)胞產(chǎn)生的酶抑制物；②使腺體內(nèi)血管變性凝固，阻斷血流，防止注射到腺體內(nèi)酶的流失，防止血流中酶抑制物對酶作用的影響，防止前列腺注射過程中血腫的形成；③瓊脂糖的凝固點剛好為37℃，正常體溫下可在腺管內(nèi)凝固，直接阻塞酶的流失，局限酶的作用范圍；④由于瓊脂糖可用于蛋白質(zhì)電泳，因此，注射的酶可在瓊脂糖中進(jìn)行一定的擴(kuò)散，瓊脂糖可作為酶的載體達(dá)到緩釋的效果。⑤瓊脂糖對人體無害。
具體實施例方式
實施例1未用瓊脂糖溶液作為控釋劑，混合酶體外消融效果實驗體外實驗1將10份2g人TURP術(shù)后的前列腺標(biāo)本分別浸泡于1ml混合酶溶液中，酶混合物為5000-10000U/ml膠原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明質(zhì)酸酶和100-800U/ml彈性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，24h后，所有的前列腺標(biāo)本組織完全溶解。
體外實驗2將2ml混合酶溶液注射到2例離體的人前列腺體內(nèi)，酶混合物為5000-10000U/ml膠原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明質(zhì)酸酶和100-800U/ml彈性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，24h后，前列腺塌陷，失去正常形態(tài)。
以上實驗均采用空白對照，排除組織自溶的可能。實施例2未用瓊脂糖溶液作為控釋劑，混合酶體內(nèi)消融效果實驗將2ml混合酶溶液直接注入到狗的增生前列腺內(nèi)，酶混合物為5000-10000U/ml膠原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明質(zhì)酸酶和100-800U/ml彈性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中，注射過程中可見前列腺體迅速充血變紅。24h后觀察，前列腺外觀無明顯變化。剖開腺體注射部位，僅僅可見直徑很小的淺坑。組織病理學(xué)檢查，可見小部分前列腺組織出現(xiàn)組織被消化的現(xiàn)象。
對原因的分析造成體內(nèi)直接注射混合酶溶液效果不理想的主要原因在于酶在體內(nèi)的流失，同時體內(nèi)所產(chǎn)生的酶抑制物也抑制酶的消化作用實施例3使用瓊脂糖溶液作為控釋劑，酶消融治療良性前列腺增生體內(nèi)消融效果實驗7只雜交實驗犬，按30mg/kg體重的劑量，靜脈推注1％的戊巴比妥鈉，動物麻醉后，行下腹部直切口，逐層切開，顯露膀胱，在膀胱上切一小口，將溫敏電極置入到前列腺部尿道，用于測量注射過程中尿道表面溫度的變化。將膀胱頸上提，并游離前列腺周圍組織，充分顯露前列腺，用游標(biāo)卡尺測量前列腺三個徑線，計算前列腺體積，平均前列腺大小34.2ml(27-117ml)。直視下用5號皮試針頭直接穿刺前列腺體兩側(cè)葉，在混合酶溶液注射前注入熱瓊脂糖(70℃以上)，平均4.6ml(4-8ml)。注射過程中可見前列腺腺體變白，注射后無明顯出血。測溫儀記錄尿道內(nèi)測溫，注射過程中瞬間最高溫度為45℃，隨即迅速下降，說明對尿道不會產(chǎn)生損傷。等待60分鐘左右，腺體內(nèi)測溫下降至體溫。再注入混合酶溶液，平均5.4ml(4-10ml)，酶混合物為5000-10000U/ml膠原酶、0.5％-0.2％胰蛋白酶、3000-6000U/ml透明質(zhì)酸酶和100-800U/ml彈性蛋白酶配制于D-Hank’s液(mmol/LNaCl 137，KCl 5.4，Na2HPO4 0.37，K2HPO4 0.44，NaHCO3 4.2)中。24小時后，取2只實驗犬，再次在麻醉下打開下腹部切口，剖開前列腺一側(cè)葉，腺體內(nèi)出現(xiàn)相當(dāng)于注入酶溶液體積的空腔，并可見液化壞死組織流出。其余5只犬均通過經(jīng)直腸B超證實。1至2周后，取另2只實驗犬在麻醉下，再次剖開前列腺，可見空腔內(nèi)液化壞死物質(zhì)被吸收。B超監(jiān)控(每周1次)實驗犬前列腺空腔變化，可見空腔在1至5個月逐漸縮小，甚至消失，伴前列腺體積明顯縮小，每只實驗犬在B超觀察空腔基本消失時作為實驗結(jié)束的判斷指標(biāo)，用過量戊巴比妥鈉處死動物，取出前列腺，測量體積為原來的1/2-1/4，腺體大小平均18.2ml(9.7-48.7ml)。1只實驗犬進(jìn)行再次注射(4ml瓊脂糖+4ml混合酶溶液)，證明可進(jìn)一步縮小前列腺體積。實驗過程中，通過對照組(2只實驗犬，前列腺體積分別為12.5ml和39.4ml，只分別注入熱瓊脂糖溶液4ml和8ml，注射后24小時，只可見前列腺稍水腫，無空腔形成；注射后1月體積無明顯變化)排除這種效果為熱消融所產(chǎn)生的。同時，尿道和前列腺包膜完整，未發(fā)現(xiàn)任何相關(guān)的并發(fā)癥。
權(quán)利要求
1.瓊脂糖在制備治療良性前列腺增生病藥劑中的應(yīng)用。
2.按照權(quán)利要求1所述的瓊脂糖，其特征在于瓊脂糖為1-2％的D-Hank’s溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脂糖在制備治療前列腺增生病藥劑中的應(yīng)用。該瓊脂糖是1－2％的瓊脂糖溶液組成。該控釋劑解決了酶消融治療前列腺增生作用的有效性和可控性的問題。使前列腺組織發(fā)生凝固性壞死，消除了前列腺組織中活性細(xì)胞產(chǎn)生的酶抑制物，使腺體內(nèi)血管變性凝固，阻斷血流，防止注射到腺體內(nèi)酶的流失，防止血流中酶抑制物對酶作用的影響，防止前列腺注射過程中血腫的形成，對人體無害。
文檔編號A61K38/43GK1453038SQ0311888
公開日2003年11月5日 申請日期2003年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月3日
發(fā)明者張茨 申請人:武漢大學(xué)