專利名稱：蛇葡萄素在制備降血糖藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域。
文獻Walter Karrerr，Birkhauser，Verlag，Bassel undstuttgart(1958)，P.652，NO1640公開了蛇葡萄素的結構式， 但是沒有對蛇葡萄素的活性進行充分的研究。
本發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)蛇葡萄素在醫(yī)藥領域具有廣泛的用途。
本發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)蛇葡萄素具有降血糖和降血脂作用，可以制備成降血糖藥和降血脂藥。蛇葡萄素可以直接用作藥物，還可以與藥學可接受載體或賦形劑混合制成藥物組合物。其中優(yōu)選含有2％至98％重量比的蛇葡萄素，加入藥學可接受載體或賦形劑至100％重量比。還可以與現(xiàn)有技術中與蛇葡萄素相配伍的藥物活性成分一起配制成藥物組合物，其中所述相配伍的藥物活性成分優(yōu)選是黃酮類藥物，所述黃酮類藥物優(yōu)選是楊梅素。組合物中黃酮類藥物含量與蛇葡萄素含量重量比可以是2-80∶20-98。本發(fā)明組合物可以制備成片劑，顆粒劑，膠囊，外用藥。優(yōu)選活性成分對人施用的劑量是0.01-5克/千克體重/天，但是也可以根據(jù)具體情況而定，不局限于此范圍。
片劑的普通配方可以是蛇葡萄素10％-90％重量比，乳糖90％-10％重量比，任選地加適量羧甲基纖維素鈉，硬脂酸鎂，50％乙醇適量。沖劑的普通配方可以是蛇葡萄素5-100％重量比，(蔗糖+糊精)95-0％重量比，蔗糖∶糊精＝2∶1，任選地加適量其它助劑，總量為100％。膠囊的普通配方可以是蛇葡萄素10-100％重量比，淀粉90-0％重量比，任選地加適量其它助劑，總量為100％。但是本領域技術人員也可以根據(jù)需要用本領域公知的技術和載體配制成其它劑型。
蛇葡萄素可以從蛇葡萄屬植物中提取，也可以用上述文獻公開的方法制備。所述蛇葡萄屬植物包括粵蛇葡萄，棟葉玉葡萄，顯齒蛇葡萄，大葉蛇葡萄，白蘞，東北蛇葡萄和山葡萄。所述提取方法可以是通過各種溶劑(水和/或有機溶劑)煎煮葡萄科植物，煎煮一次或多次，煎煮液經(jīng)濃縮冷卻，靜置過夜，檢測沉淀與上清的藥效成分，取具有活性的沉淀，經(jīng)色譜分離后得到本發(fā)明蛇葡萄素物。煎煮所用的溶劑優(yōu)選水，醇類，酯類，酮類，醚類和強極性有機溶劑，更優(yōu)選低級鏈烷醇，低級脂肪酸酯，具有3-12個碳原子的酮和醚和/或水，最優(yōu)選甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇，正丁醇，異丁醇，仲丁醇，叔丁醇，乙酸乙酯，乙酸甲酯，甲酸乙酯，丙酮，甲基乙基酮，乙醚，甲基乙基醚，甲基叔丁基醚，二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺和/或水等等。色譜分離填料可以是聚酰胺，聚丙烯酰胺，大孔吸附樹脂，陽離子交換樹脂，陰離子交換樹脂，優(yōu)選聚酰胺，聚丙烯酰胺，大孔吸附樹脂，更優(yōu)選聚酰胺。
本發(fā)明的原理是通過建立藥理篩選模型追蹤蛇葡萄素的藥效活性，找到其藥用用途。試驗證明蛇葡萄素具有降血糖和降血脂作用。
蛇葡萄素可以通過藥物領域常規(guī)配制技術和載體，配制成藥物組合物。本發(fā)明組合物可以制備成片劑，顆粒劑，膠囊，外用藥。但是本領域技術人員也可以根據(jù)需要用本領域公知的技術和載體配制成其它劑型。
通過下面的實施例詳細說明本發(fā)明。但是應該理解這些實施例只是說明本發(fā)明，而不是在任何方面限制本發(fā)明的范圍。實施例1片劑蛇葡萄素25g，乳糖53g，羧甲基纖維素鈉1.5g，硬脂酸鎂0.5g，50％乙醇5ml上述組分在混合機中混合后壓制成片。
上述組分混合均勻后，裝入膠囊。
四氧嘧啶(Alloxan)Sigma公司；50％葡萄糖注射液鹽城新曹制藥廠。
SUPER GLUCOCARD II GT-1640型超級血糖測定儀日本京者第一科學株式會社生產(chǎn)GLUCOCARD血糖試紙日本京者第一科學株式會社生產(chǎn)。1.5.實驗方法1.5.1.正常動物禁食5小時后，取小鼠測血糖。篩檢空腹血糖在正常范圍內(nèi)的小鼠40只，按血糖水平隨機分為四組，每組10只，分別為正常對照組和樣品各劑量組(組間差不大于1.1mmol/L)》1.5.2.高血糖模型動物嚴格禁食24小時后，小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶50mg/kgBW，6天后禁食5小時，測血糖。篩檢空腹血糖值＞10mmol/L的小鼠40辦，按血糖水平隨機分為四組，每組10只，分別為模型對照組和樣品各劑量組(組間差不大于1.1mmol/L)。1.5.3.空腹血糖和糖耐量的測定按設計劑量對小鼠連續(xù)灌胃給受試物30天，然后禁食5小時，給予葡萄糖1.5g/kgBW灌胃，于0、0.5、2.0小時三時相分別測定血糖值。1.6.統(tǒng)計方法全部實驗數(shù)據(jù)采用SPSS/PC軟件包(單因素方差分析)在微機上處理。2.結果2.1.蛇葡萄素對正常小鼠體重的影響表1 各組正常小鼠的初始體重、中期體重、結束體重組別 初始體重 中期體重 結束體重動物數(shù)體重(g) 動物數(shù) 體重(g)動物數(shù)體重(g)正常對照 1023.4±1.010 30.5±1.5 1032.4±1.6受0.25g/kg 1023.6±1.110 31.2±1.2 1033.1±1.6試0.50g/kg 1023.7±1.210 30.9±1.6 1032.3±1.9物1.50g/kg 1023.5±1.210 31.1±1.2 1033.5±1.5F值0.1130.4780.369P值0.9520.6980.790注受試物各劑量組小鼠體重在各試驗期和正常對照組比較，差異均無顯著意義(方差分析，P＞0.05)2.2.蛇葡萄素對正常小鼠空腹血糖的影響表2 蛇葡萄素對正常小鼠空腹血糖的影響
注受試物各劑量組空腹血糖值和正常對照組比較，差異均無顯著性意義(方差分析，P＞0.05)。2.3.蛇葡萄素對正常小鼠餐后血糖的影響表3 蛇葡萄素對正常小鼠餐后血糖的影響組別 動物數(shù)葡萄糖0h血糖值(mmol/L)(只) (g/kBW) 0.5h2h正常對照 101.5 4.6±0.7 10.4±1.2 5.5±0.7受0.25g/kg101.5 4.4±0.9 10.7±1.1 5.1±1.1試0.50g/kg101.5 4.5±0.8 10.6±1.7 5.1±1.0物1.50g/kg101.5 4.5±0.9 10.4±1.4 5.2±1.7F值 0.311 0.221 0.518P值 0.823 0.865 0.664注受試物各劑量組餐后血糖值和正常對照組比較，差異均無顯著性意義(方差分析，P＞0.05)。2.4.蛇葡萄素對正常小鼠糖耐量的影響表4 蛇葡萄素對正常小鼠糖耐量的影響組別 動物數(shù) 血糖升高及降低幅度(mmol/L)(只) 0.5h-0h0.5h-2h正常對照 10 5.8±0.9 4.8±0.9受0.25g/kg10 6.4±0.5 5.6±1.1試0.50g/kg10 6.0±1.1 5.6±1.1物1.50g/kg10 6.0±1.3 5.4±1.2F值0.995 1.015P值0.406 0.393注受試物各劑量組糖耐量值和正常對照組比較，差異均無顯著性意義(方差分析，P＞0.05)。2.5.蛇葡萄素對引起的高血糖小鼠體重的影響表5 各組高血糖模型小鼠的初始體重、中期體重、結束體重組別初始體重 中期體重 結束體重動物數(shù)體重(g)動物數(shù) 體重(g)動物數(shù)體重(g)正常對照1024.3±1.3 10 30.7±2.0 1031.2±1.9受0.25g/kg 1024.4±2.5 10 31.7±2.1 1032.5±2.3試0.50g/kg 1024.2±1.3 10 31.6±2.5 1032.2±2.8物1.50g/kg 1024.2±1.4 10 31.1±1.8 1031.5±1.5F值 0.273 0.5691.423P值 0.845 0.6280.250注受試物各劑量組各階段體重和模型對照組比較，差異均無顯著性意義(方差分析，P＞0.05)。2.6.蛇葡萄素對引起的高血糖小鼠空腹血糖的影響表6 蛇葡萄素對高血糖模型小鼠空腹血糖的影響
注與模型對照組比較，*P＞0.05(q檢驗)受試物低劑量組試驗后空腹血糖值及前后空腹血糖差值與模型對照組比較，差異均有顯著(方差分析，P＞0.05)。2.7.蛇葡萄素對引起的高血糖小鼠餐后血糖的影響表7 蛇葡萄素對高血糖型小鼠餐后血糖的影響組別 動物數(shù) 葡萄糖0h 血糖值(mmol/L)(只)(g/kgBW) 0.5h2h正常對照 10 1.5 20.4±5.131.2±2.7 24.7±3.7受0.25g/kg 10 1.5 13.4±4.1* 26.9±4.6 16.8±6.9*試0.50g/kg 10 1.5 15.2±6.027.9±5.6 17.5±7.9*物1.50g/kg 10 1.5 17.6±6.128.6±4.8 20.7±7.8F值3.1322.415 3.689P值0.0430.079 0.032注受試物低劑組餐后0h血糖值和低中劑量組餐后2h血糖值與模型對照組比較，差異均有顯著(方差分析，P＞0.05)。
2.8.蛇葡萄素對引起的高血糖小鼠糖耐量的影響表8 蛇葡萄素對高血糖模型小鼠糖耐量的影響組別動物數(shù)血糖升高及降低幅度(mmol/L)(只)0.5h-0h0.5h-2h正常對照 10 10.8±3.2 6.5±2.9受0.25g/kg10 13.9±1.6 10.1±2.9試0.50g/kg10 12.0±3.3 9.1±3.9物1.50g/kg10 11.4±2.7 8.7±4.5F值 1.311 2.278P值 0.265 0.120注受試物各劑量組糖耐量值和模型對照組比較，差異均有顯著(方差分析，P＞0.05)。
實驗結果表明，蛇葡萄素具有調節(jié)血糖作用。實施例8蛇葡萄素降血脂的試驗將動物隨機分為4組，正常對照組、陽性對照組、模型對照組、提取液組。每組10只小鼠，一日一次，連續(xù)給藥10天，正常對照組不給任何藥。其余各組小鼠均給高脂乳劑0.5ml/只，形成實驗性高血脂，于10天用藥后禁食過夜，次日從小鼠眼眶取靜脈血，按酶法檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量。結果表明，模型對照組血清TC、TG值明顯升高，HDL-C值下降，與模型對照比較，蛇葡萄素組能明顯降低血清TC、TG值，還使HDL-C略有升高，說明此提取物能抑制高脂乳劑引起的小鼠血脂升高，具有降脂作用。1.材料和方法1.1.受試物含有蛇葡萄素的原料(其中蛇葡萄素的含量為65％)，將受試物用蒸餾水配制成所需濃度的渾濁液供試驗用。1.2.實驗動物SPF級Wistar大鼠，體重170-190g，雌性，共55只(5只備用)。實驗溫度23-25℃，相對濕度65-70％。1.3.飼料1.3.1.普通基礎飼料Wistar純鼠料。1.4.劑量分組實驗分為五個組，即正常對照組、高脂模型對照組和受試物低、中、高三個劑量組，劑量分別為0.5、1.0、1.5g/kg.bw，相當于推薦人體日攝入量3g/60kg.bw的10、20、30倍。1.5.實驗方法大鼠適應性飼養(yǎng)3天后開始實驗。取大鼠尾血，測定血清總膽固醇(TC0)、甘油三脂(TG0)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c0)基礎值。根據(jù)TC0水平，將大鼠隨機分成五組，每組10只動物，即低、中、高劑量組，正常對照組和高脂模型對照組。除正常對照組給予基礎飼料外，其余各組均給予高脂飼料。三個受試物劑量組按1.0ml/100g.bw的容量經(jīng)口灌胃給予，正常對照組和高脂模型對照組自由飲水進食。連續(xù)給予30天，于灌胃第30天檢測TC、TG、HDL-C值。1.6.主要儀器與試劑SABA-18型全自動生化分析儀(意大利產(chǎn))，標準質控血清及相應試劑盒均由上海復星長征醫(yī)學科學有限公司生產(chǎn)。1.7.數(shù)據(jù)處理采用STATA統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析2.結果2.1.蛇葡萄素對高脂模型動物體重的影響從表9可見，與模型對照組比較，低、中、高劑量組在第四周時大鼠體重均低于模型對照組，低、中、高劑量組與模型對照組比較差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。與正常對照組比較，低、中、高劑量組第四周體重均高于正常對照組，但經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異無顯著性。2.2.蛇葡萄素對高血脂模型大鼠體重的影響由表9可知，和對照組相比，蛇葡萄素對大鼠體重無明顯影響。
表9蛇葡萄素對高血脂模型大鼠體重的影響(g，x±s)劑量 動物數(shù)體重g/kg.bw (只)始重 第一周第二周第三周終重正常對照 10 181.4±2.8202.2±6.2219.6±4.7226.2±3.7230.7±4.0**模型對照 10 181.7±3.5208.7±2.6224.5±4.4231.4±3.5237.6±3.70.5 10 181.5±3.90 207.9±3.2220.79±3.2 226.9±3.4232.1±2.8**1.0 10 181.6±2.5208.6±3.1222.40±2.3 228.2±3.0233.9±2.2**1.5 10 184.2±2.3207.9±3.2221.5±3.1226.5±3.0232.0±3.0****與模型對照組比較P＜0.012.3.蛇葡萄素對大鼠總膽固醇含量的影響從表10可見，與模型對照組比較，實驗結束時中、高劑量組總膽固醇含量在實驗期間下降明顯，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異有顯著性(p＜0.05、P＜0.01)。
表10 蛇葡萄素對大鼠總膽固醇含量的影響(mmol/L，x±s)
*與模型對照組比較P＜0.05，**與模型對照組比較P＜0.012.4.蛇葡萄素對大鼠甘油三酯含量的影響從表11可見，與模型對照組比較，試驗結束時低、中、高劑量組甘油三酯含量下降明顯，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異有顯著性(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)。
表11 蛇葡萄素對大鼠甘油三酯含量的影響(mmol/L，x±s)
*與模型對照組比較P＜0.05，**與模型對照組比較P＜0.012.5.蛇葡萄素對大鼠高密度脂蛋白膽固醇含量的影響從表12可見，與模型對照組比較，低、中、高劑量組對高密度脂蛋白膽固醇有升高作用，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異有顯著性(P＜0.05)。
表12 蛇葡萄素對大鼠高密度脂蛋白膽固醇含量的影響(mmol/L，x±s)
模型對照 101.12±0.18 -0.84±0.11 -0.5 101.10±0.07 0.6560.97±0.09* 0.0261.0 101.14±0.08 0.8590.94±0.07* 0.0411.5 101.14±0.07 0.7980.95±0.08* 0.016*與模型對照組比較P＜0.052.6.蛇葡萄素對大鼠血脂水平的影響本實驗方法為高脂飼料與受試物同時給予，屬預防性，故TG、TC下降及HDL-c上升值均與高脂模型對照組比較。由表13可見，中、高劑量組總膽固醇含量下降幅度分別為15.8％、20.2％，低、中、高劑量組甘油三酯含量下降幅度分別為15.9％、17.3％、18.0％，低、中、高劑量組高密度脂蛋白膽固醇含量升高值為4.48、4.98、4.35mg/dl。
表13 蛇葡萄素對大鼠血脂水平的影響劑量 動物數(shù)TC TG HDL-Cg/kg.bw(只) (％) (％) (mg/dl)0.51010.1 15.9 4.481.01015.8 17.3 4.981.51020.2 18.0 4.35判斷標準 下降＞10％ 下降＞15％ 升高4mg/dl注HDL-c升高值(mg/dl)是mmol/L×38.7＝mg/dl換算結果實施例9蛇葡萄素增強免疫力功能的試驗1.蛇葡萄素對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響1.1實驗目的觀察蛇葡萄素對小鼠吞噬功能的影響。
1.2受試藥物名稱蛇葡萄素溶劑熱雙蒸水用量0.5ml/20g小鼠1.3對照樣品聯(lián)苯雙酯；上海天平制藥廠，滬衛(wèi)藥準字(1995)第3765號-0111.4動物小鼠，昆明種，雄性，19～21g。
雞紅細胞5％濃度1.5方法昆明種小鼠，隨機分為5組，即對照組、蛇葡萄素75、150、300mg/kg、聯(lián)苯雙酯150mg/kg，對照組給予生理鹽水，給藥組均口服給藥，每日1次，共6次，末次給藥同時腹腔注射0.5％水解乳蛋白1.5ml/只，24小時后腹腔注射5％雞紅細胞0.1ml，30分鐘后斷頭放血，用生理鹽水沖洗腹腔，收集腹腔巨噬細胞37℃孵育半小時，離心，沉淀物涂片，染色，油鏡下計數(shù)細胞，以下列公式計算，并與對照組比較。
1.6結果結果見表13，蛇葡萄素低、中、高劑量均能促進小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞及增加吞噬指數(shù)，聯(lián)苯雙酯150mg/kg劑量組也能促進小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能。
表13.蛇葡萄素對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響(±SD)
**P＜0.01與模型對照組比較2.蛇葡萄素對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響2.1實驗目的觀察蛇葡萄素對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響。
2.2受試藥物名稱蛇葡萄素溶劑熱雙蒸水用量0.5ml/20g小鼠2.3對照樣品聯(lián)苯雙酯；上海天平制藥廠，滬衛(wèi)藥準字(1995)第3765號-0112.4動物小鼠，C57BL/6，♂，19～21g。
2.5其他材料刀豆球蛋白(ConA)Sigma產(chǎn)品，50μg/ml濃度3H-TdR上海原子核研究所，放射性濃度1mci/ml培養(yǎng)基RPMI-1640，內(nèi)含15％小牛血清、巰基乙醇、Hepes等2.6方法C57BL/6小鼠，隨機分為5組，即正常對照組、蛇葡萄素75、150、300mg/kg、聯(lián)苯雙酯150mg/kg，每天口服給藥1次，連續(xù)7天，給藥結束后，處死動物無菌條件下取脾，計數(shù)脾細胞，并調整細胞濃度為1×107/ml，在96孔細胞培養(yǎng)板上每孔加細胞懸液100μl，ConA 50μl，和培養(yǎng)液，各組均設三復管，37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)48小時，加入3H-TdR 0.5μci/孔，繼續(xù)培養(yǎng)18小時，用多頭細胞收集器收集細胞，在液閃儀上測CPM值，并與對照組比較，結果見表14。
2.7結果表14.蛇葡萄素對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響
*P＜0.05**P＜0.01與對照組比較結果表明，蛇葡萄素有明顯的促進小鼠脾淋巴細胞增殖的作用，并以低劑量作用較其它兩組強。
權利要求
1.一種降血糖的藥物組合物，特征在于其含有降血糖有效量的蛇葡萄素和藥學可接受賦形劑。
2.權利要求1的藥物組合物，其中含有2％至98％重量比的蛇葡萄素。
3.權利要求1-2任一項的藥物組合物，其中進一步含有與蛇葡萄素相配伍的藥物活性成分。
4.權利要求3的藥物組合物，其中所述相配伍的藥物活性成分是黃酮類藥物，組合物中黃酮類藥物含量與蛇葡萄素含量重量比可以是2-80∶20-98。
5.權利要求4的藥物組合物，其中所述黃酮類藥物是楊梅素。
6.權利要求1-5的任一藥物組合物在制備降血糖藥物中的用途。
7.權利要求1-5的任一藥物組合物在制備降血糖和降血脂藥物中的用途。
8.蛇葡萄素在制備降血糖藥物中的用途。
9.蛇葡萄素在制備降血糖和降血脂藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種降血糖的藥物組合物，特征在于其含有降血糖有效量的蛇葡萄素和藥學可接受賦形劑。所述組合物優(yōu)選含有2％至98％重量比的蛇葡萄素。本發(fā)明還公開了所述組合物的制備方法，以及蛇葡萄素在制備降血糖藥物中的用途。
文檔編號A61K31/352GK1457774SQ0313805
公開日2003年11月26日 申請日期2003年5月30日 優(yōu)先權日2003年5月30日
發(fā)明者任啟生, 宋新榮 申請人:任啟生, 宋新榮