專利名稱：肝病、高血脂癥和糖尿病治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
肝病、高血脂癥和糖尿病的患者人數(shù)成為許多社會的大問題。肝病、高血脂癥和糖尿病是分別由其獨自的原因產(chǎn)生的疾病。例如，像病毒性肝炎那樣由感染引起的肝病，遺傳性缺陷起因的原發(fā)性高血脂癥，遺傳性胰島素分泌不足引起的糖尿病等。但是，脂肪肝、酒精性肝炎等肝病、飲食性高血脂癥和飲食性糖尿病大多與淀粉、脂肪、醇性飲料等過度攝取、生活習(xí)慣密切相關(guān)，因此也常常并發(fā)肝病、高血脂癥和糖尿病。
本發(fā)明涉及肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，以及肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療用食品。詳細(xì)地說，涉及含有富含L-谷氨酰胺的肽為特征的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑及含有該肽的食品。
背景技術(shù)：
作為肝病的代表例，可以舉出脂肪肝、病毒性肝炎、酒精性肝炎、肝硬化等炎癥性肝炎。為了治療肝病，使用甘草酸制劑、多烯磷脂酰膽堿、馬洛替酯、二氯乙酸二異丙基胺、硫普羅寧、原卟啉鈉、氯化甲基蛋氨酸、干擾素、熊果去氧膽酸、小柴胡湯、肝臟水解物、谷胱甘肽等。但是，這些藥劑對迅速改善肝病的效果低，治療往往需要長時間。另外，即使在某種程度上可以迅速改善肝病，改善后的GOT值、GPT值、γ-GTP值也常常停止在一般認(rèn)為是正常值的上限值。而且，即使在肝病的治療有效的場合，也存在具有副作用的問題。
這樣，希望開發(fā)出日常攝取容易、其治療效果優(yōu)良且安全性高的用于預(yù)防或治療肝病的藥劑和飲食品。
高血脂癥是血液中的總膽固醇或中性脂肪或這兩者超過一定的基準(zhǔn)值場合下的病名，包括遺傳性缺陷起因的原發(fā)性高血脂癥和飲食性高血脂癥、糖、蛋白質(zhì)、脂肪等代謝異常、肝病在原疾病上連續(xù)發(fā)生而產(chǎn)生的繼發(fā)性高血脂癥。作為高血脂癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，一般采用220mg/dl以上作為總膽固醇的基準(zhǔn)值，150mg/dl以上作為中性脂肪的基準(zhǔn)值。
在高血脂癥的原因中，最成問題的是由過量攝取肉類等富含膽固醇或中性脂肪的高脂肪食物、高碳水化合物食物、酒精等的能量產(chǎn)生的繼發(fā)性高血脂癥。高血脂癥成為動脈硬化的原因，進(jìn)一步引起心肌梗塞、腦血栓癥等嚴(yán)重疾病，因此不能置之不理。因此，使用普伐他汀鈉、考來米朵(コレスチミド)、辛伐他汀、煙酸、安妥明降脂乙酯類等藥劑，進(jìn)行使血液中的膽固醇或中性脂肪減少的藥物療法。但是，這些藥劑存在副作用和服用時不適感、給藥結(jié)束后再發(fā)病等問題。
另外，作為高血脂癥的治療，進(jìn)行飲食療法和運(yùn)動療法，但這些療法的效果顯現(xiàn)需要長時間，因此均有必要長期連續(xù)進(jìn)行。因此，希望開發(fā)出日常攝取容易、降低膽固醇或中性脂肪的作用優(yōu)良且安全性高的用于預(yù)防治療高血脂癥的藥劑，以及飲食品。到目前為止，作為能夠添加到食品中的藥劑，報導(dǎo)有茶、紅葡萄酒、可可豆等中所含的多酚類具有高膽固醇血脂癥預(yù)防作用(例如，參見特開平11-308978號公報和日本營養(yǎng)·糧食學(xué)會志，39(6)，第495～500頁，1986)。
糖尿病是以胰島素分泌不足、胰島素抗性等引起的慢性高血糖為特征的疾病群，該病的產(chǎn)生與遺傳、環(huán)境因素有關(guān)。糖尿病包括胰腺β細(xì)胞因某些原因被破壞或功能衰竭，不能分泌胰島素而引發(fā)高血糖的I型(胰島素依賴型)糖尿病、胰島素分泌量減少、組織的胰島素感受性降低等引起的II型(胰島素非依賴型)糖尿病，此外還包括因伴隨妊娠分泌的激素作用，胰島素的作用降低而引發(fā)的妊娠糖尿病。這些糖尿病中90％是胰島素非依賴型，除遺傳因素外，一般認(rèn)為原因是過量攝取能量、偏食、運(yùn)動不足、壓力等。
總之，慢性高血糖狀態(tài)不僅使糖尿病自體惡化，而且引發(fā)神經(jīng)障礙、視網(wǎng)膜癥、腎臟障礙等合并癥，成為腦血管障礙、缺血性心臟疾病、糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜癥、糖尿病性神經(jīng)障礙等嚴(yán)重疾病的原因。另外，妊娠糖尿病成為子宮內(nèi)胎兒死亡和新生兒死亡的原因。
作為預(yù)防或治療糖尿病的重要手段是控制血糖值，為此，進(jìn)行營養(yǎng)指導(dǎo)、運(yùn)動療法、藥物療法。營養(yǎng)指導(dǎo)和運(yùn)動療法是預(yù)防或治療糖尿病的有效手段，但其效果顯現(xiàn)需要長時間，因此有必要長期繼續(xù)嚴(yán)密的飲食限制和運(yùn)動。另外，運(yùn)動療法不僅有時引起低血糖狀態(tài)，而且因患者的不同有時反而使并發(fā)癥惡化，需要注意。
作為藥物療法，主要可以舉出胰島素療法和口服糖尿病治療藥療法2種。胰島素療法主要針對胰島素依賴型糖尿病患者進(jìn)行，不僅日常注射胰島素，而且需要控制胰島素的注射量。另外，口服糖尿病治療藥已知有磺酰基尿素類治療藥(SU劑)、雙胍(BG劑)、α-糖甙酶抑制藥、鹽酸吡格列酮等胰島素抗性改善藥，但除低血糖癥狀之外，還有乳酸酸中毒(惡心·嘔吐·腹疼·昏睡)、肝障礙等副作用，另外對于并用的藥也需注意。為此，希望開發(fā)出日常攝取容易、降低血糖值的作用優(yōu)良且安全性高的預(yù)防或治療糖尿病的藥劑，以及飲食品。
另一方面，由小麥蛋白得到L-谷胺酰胺或含有L-谷胺酰胺的肽的方法是已知的(例如，參見特許2019439號公報和特許第2985193號公報)。另外，還報導(dǎo)了L-谷胺酰胺或含有L-谷胺酰胺的肽對維持腸粘膜的結(jié)構(gòu)和功能以及改善免疫功能降低等有用(例如，參見特開平5-236909號公報和EP756827-A2)。但是，富含L-谷胺酰胺的肽具有使GOT值、GPT值、γ-GTP值正?；?、使血液中的膽固醇和中性脂肪降低、使血糖值降低、具有能夠預(yù)防和/或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的作用，到目前為止是不為人所知的。
發(fā)明的公開本發(fā)明的課題是提供效果高、不用擔(dān)心副作用、攝取容易且從安全方面考慮，在價格上也能長期服用的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，以及具有預(yù)防和/或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的效果的食品。
本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，施用富含L-谷氨酰胺的肽可以在短時間內(nèi)改善肝病患者的GOT值、GPT值、γ-GTP值至正常值或者接近正常值，施用富含L-谷胺酰胺的肽可以在短時間內(nèi)改善總膽固醇、LDL膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)至正常值或者接近正常值，以及施用富含L-谷胺酰胺的肽可以在短時間內(nèi)改善血糖值至正常值或者接近正常值。
因此，本發(fā)明涉及肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，其特征在于含有由構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L-氨基酸構(gòu)成的、L-谷氨酰胺含量為15～60質(zhì)量％、平均分子量為200～100,000的肽。優(yōu)選該肽的L-谷氨酰胺含量為20-40質(zhì)量％，平均分子量為500～20000，特別優(yōu)選以小麥粉谷蛋白為原料制造的肽。
另外，在以下的記載中，把本發(fā)明的谷氨酰胺含量高的肽稱為“谷氨酰胺肽”。另外，在本說明書中，術(shù)語“肽”和“谷氨酰胺肽”是指由構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L-氨基酸構(gòu)成的肽。因此，術(shù)語“L-氨基酸”或者“氨基酸”是指構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L-氨基酸。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有具有預(yù)防和/或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的效果的肽的食品。通過使飲食品含有本發(fā)明的谷氨酰胺肽，可以容易地在日常生活中攝取谷氨酰胺肽。
在本發(fā)明中，肝病就是脂肪肝、病毒性肝炎、酒精性肝炎、肝硬化等炎癥性肝炎，也包括病名難斷定的，但GOT值、GPT值、γ-GTP等肝功能指標(biāo)異常的癥狀。
GOT(谷草轉(zhuǎn)氨酶)是大多存在于心肌、肝臟、骨骼肌肉、腎臟等組織和臟器的細(xì)胞中，分解蛋白質(zhì)形成氨基酸的酶。即使在正常的狀態(tài)下，構(gòu)成人體的細(xì)胞同時生成和衰變，因此在健康人的血液中也常常含有規(guī)定量的GOT。在健康成人的血液中的GOT含量(正常值)一般認(rèn)為為5～40IU/L，但如果在前述心肌、肝臟、骨骼肌肉、腎臟等組織和臟器中產(chǎn)生異常，就會向血液中放出大量的GOT。為此，一般認(rèn)為GOT值為診斷臟器和人體組織中有無疾病時的重要指標(biāo)之一。
另外，GPT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)和GOT一樣，是和形成氨基酸有關(guān)的酶，大量特異性存在于肝細(xì)胞中，在腎臟中存在的約為肝臟中的1/3，在其它臟器中存在量少。一般認(rèn)為在成人的血液中的常規(guī)GPT值為5～42IU/L，但血液中的GPT含量(GPT值)對肝細(xì)胞的變性或壞死等肝障礙起敏感性反應(yīng)而增加，因此一般認(rèn)為是進(jìn)行肝病診斷時的重要指標(biāo)之一。
γ-GTP(γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶)是和GOT以及GPT一樣分解蛋白質(zhì)的酶，存在于腎臟中最多，其次也包含在胰腺、肝臟、脾臟、小腸中。γ-GTP即使在肝細(xì)胞中，在毛細(xì)膽管側(cè)、膽管上皮、腸上皮細(xì)胞等與酶的分泌和吸收關(guān)聯(lián)的部位也大量存在。成人的血液中的γ-GTP值的正常值一般認(rèn)為為50IU/L以下(0～50IU/L)。γ-GTP在對肝臟顯示出毒性的醇或藥劑等破壞肝細(xì)胞時或者結(jié)石、癌等堵塞膽管而內(nèi)部堵塞時，大量向血液中放出。γ-GTP特別對醇敏感反應(yīng)，而且在肝臟或膽道有不適時，比其它酶更早顯示出異常值，因此，一般γ-GTP值、GOT值和GPT值一起作為肝病的指標(biāo)，廣泛使用。
在本發(fā)明中，高血脂癥是指血液中的膽固醇或者中性脂肪這兩者超過一定基準(zhǔn)值的病態(tài)，高血脂癥的病態(tài)包括高膽固醇血癥和中性脂肪血癥。因此，本發(fā)明的高血脂癥的預(yù)防和/或治療劑是為了治療或預(yù)防膽固醇或中性脂肪超過一定基準(zhǔn)值的病態(tài)而施用或服用的。其中，高血脂癥的指標(biāo)不僅使用總膽固醇值(游離膽固醇和酯化的膽固醇的總和)或中性脂肪值(也稱為甘油三酯)，而且還使用LDL膽固醇值(低密度脂蛋白膽固醇值)等。
在本發(fā)明中，糖尿病是指血糖值超過一定基準(zhǔn)值的病態(tài)。因此，本發(fā)明的糖尿病的預(yù)防或治療劑是為了治療或預(yù)防血糖值超過一定基準(zhǔn)值的病態(tài)而施用或服用的。另外，作為糖尿病的指標(biāo)，除血糖值(例如空腹時血糖值)之外，還使用糖血紅蛋白Alc(Hb Alc)和1，5-脫水-D-糖醇(1，5-AG)等。
Hb Alc是血紅蛋白A(Hb A)與葡萄糖鍵合的物質(zhì)，它包括不穩(wěn)定型Hb Alc和穩(wěn)定型Hb Alc。穩(wěn)定型Hb Alc與葡萄糖的鍵合穩(wěn)定，可以知道過去4個月的血糖值的動態(tài)，但通常用于研究過去1-2個月的平均血糖值的動態(tài)。Hb Alc的正常值在4.3～5.8％的范圍，在6.0％以上的場合，需要一些治療。
1，5-脫水-D-糖醇(1，5-AG)是葡萄糖的一部分被還原的單糖。1，5-AG的正常范圍是14μg/mL以上，但隨著高血糖引起的尿糖排泄立刻減少，在血糖狀態(tài)改善的同時，慢慢恢復(fù)。為此，可以了解過去5～7天左右短時間內(nèi)的血糖的變化，因沒有受到飲食等影響，還可以隨時進(jìn)行評價。
這些血糖值根據(jù)Hb Alc和1，5-AG的指標(biāo)測定法，在糖尿病治療領(lǐng)域中是公知的，也被定為基準(zhǔn)。為此，按照該基準(zhǔn)的測定器和試劑盒有市售，這些均可以使用進(jìn)行測定。
下面詳細(xì)地說明本發(fā)明。
在本發(fā)明中使用的谷氨酰胺肽只要是L-谷氨酰胺含量至少為15質(zhì)量％，平均分子量為200～100000的肽即可，此外沒有特別的限定，天然或者重組蛋白質(zhì)的水解物、化學(xué)合成或者基因工程制作的肽或者它們的組合物均可使用。
谷氨酰胺肽中的L-谷氨酰胺含量如果低于15質(zhì)量％，則不能期待充分預(yù)防和/或治療疾病的效果。對L-谷氨酰胺含量的上限沒有特別的限定，但如果超過60質(zhì)量％，則從天然蛋白質(zhì)進(jìn)行調(diào)制變得困難，因此從購得和調(diào)制的容易性和經(jīng)濟(jì)性方面來看，優(yōu)選60質(zhì)量％以下，更優(yōu)選20～40質(zhì)量％。
谷氨酰胺肽中的L-谷氨酰胺含量可以從基于含有酰胺態(tài)氮的L-氨基酸含量計算法或者在谷氨酰胺肽是合成物的場合，從合成時的L-谷氨酰胺的使用比例等求出，所述含有酰胺態(tài)氮的L-氨基酸從用酰胺態(tài)氮取代法測定的酰胺態(tài)氮含量求出。
另外，如果谷氨酰胺肽的平均分子量低于200，則呈現(xiàn)苦味，味道變差。另一方面，如果谷氨酰胺肽的平均分子量超過100000，則加水時形成粘稠的塊，操作性就會變差。谷氨酰胺肽的平均分子量只要在200～100000，對其沒有特別的限定，優(yōu)選500～20000，更優(yōu)選1000～10000。
在本說明書中所述的谷氨酰胺肽的平均分子量是用凝膠過濾法測定時的平均分子量，對于其詳細(xì)內(nèi)容，記載在下面的實施例中。
在本發(fā)明中使用的谷氨酰胺肽只要L-谷氨酰胺含量至少為15質(zhì)量％，對L-谷氨酰胺以外的L-氨基酸的種類和其組成比等沒有特別的限定。
谷氨酰胺肽由構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L-氨基酸構(gòu)成，因此在對人和動物的安全性方面是優(yōu)良的，但作為本發(fā)明的肽，使用食品中所含的蛋白質(zhì)水解得到的谷氨酰胺肽，特別是水解小麥谷蛋白得到的谷氨酰胺肽，從安全性、獲得和調(diào)制的容易性、經(jīng)濟(jì)性等方面來看是優(yōu)選的。
在本發(fā)明中優(yōu)選使用的谷氨酰胺肽可以用蛋白酶、酸、堿等，在生成平均分子量為200～100000范圍內(nèi)的水解物的條件下，水解含有25～50質(zhì)量％L-谷氨酰胺的小麥谷蛋白來制造。
小麥谷蛋白通常含有25～50質(zhì)量％的L-谷氨酰胺，為此，在使其成為平均分子量為200～100000范圍內(nèi)的條件下，水解小麥谷蛋白，根據(jù)需要進(jìn)行分級等，可以比較容易地得到L-谷氨酰胺含量在15～60質(zhì)量％范圍內(nèi)的谷氨酰胺肽。
小麥谷蛋白在水中不溶且對水的分散性差，但水解小麥谷蛋白得到的谷氨酰胺肽低分子化，因此對水的分散性優(yōu)良。
小麥谷蛋白由來的谷氨酰胺肽可以用蛋白酶或者用蛋白酶和淀粉酶水解小麥谷蛋白的方法制造(參見特許2019439號公報和特許第2985193號公報)。此時的蛋白酶可以使用例如胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、柑色多孔菌起源的酸性蛋白酶、曲霉起源產(chǎn)生的蛋白酶、木瓜蛋白酶、波蘿蛋白酶等各種蛋白酶。用蛋白酶水解小麥谷蛋白時，如果合并使用淀粉酶，可以分解除去小麥谷蛋白中所含的淀粉質(zhì)和纖維質(zhì)等雜質(zhì)，可以高收率得到高純度的谷氨酰胺肽(參見特許第2985193號公報)。
本發(fā)明的谷氨酰胺肽例如小麥谷蛋白由來的谷氨酰胺肽以往已經(jīng)有市售(例如日清フ アルマ株式會社制的“谷氨酰胺肽GP-1”、DMV社制的“谷氨酰胺肽GPA”等)。這些谷氨酰胺肽可以直接使用，也可以根據(jù)情況，施行水解、分級等處理。
本發(fā)明的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防或治療劑和食品通常以谷氨酰胺肽的質(zhì)量計，成人在1～40g/天的范圍給藥。一般每天給藥量為6～10g。但是，在本發(fā)明中使用的肽是天然物由來的安全性高的肽，也可以進(jìn)一步增加其給藥量。給藥量最好在看到效果等情況下，適當(dāng)增減。給藥量也可以每天1次給藥和攝取，但最好分?jǐn)?shù)次給藥。
本發(fā)明的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防或治療劑可以按照通用方法制成片劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑、糖漿劑、干糖漿劑、液劑等口服制劑。此時，根據(jù)需要，可以使用其它公知的添加劑，例如賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、香味劑、著色劑、表面活性劑、糖衣劑等。
作為賦形劑，可以舉出葡萄糖、白糖、乳糖、甘露糖醇、木糖醇、山梨糖醇、結(jié)晶纖維素、微結(jié)晶纖維、羧甲基纖維素鈉、各種淀粉、羧甲基淀粉鈉、糊精、環(huán)糊精、羧乙烯基聚合物、磷酸氫鈣、輕質(zhì)二氧化硅、氧化鈦、偏硅酸鋁酸鎂等。
作為粘合劑，可以舉出黃耆膠、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、α-淀粉、海藻酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等。作為崩解劑，可以舉出淀粉、表面活性劑，和胃酸反應(yīng)產(chǎn)生氣體的碳酸氫鈉等。作為潤滑劑，可以舉出硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石、硬化油、蔗糖脂肪酸酯、二甲基聚硅氧烷、微晶蠟、蜂蠟等。
作為香味劑，可以舉出檸檬酸等酸味劑、糖精等甜味劑、薄荷等香料。作為著色劑，可以使用明確作為食用使用的色素。
作為表面活性劑，可以舉出聚氧乙烯硬化蓖麻油、單硬脂酸甘油酯、單硬脂酸脫水山梨糖醇酯、單棕櫚酸脫水山梨糖醇酯、單月桂酸脫水山梨糖醇酯、聚山梨酸酯類、十二烷基硫酸鈉、蔗糖脂肪酸酯等。作為糖衣劑，可以舉出甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素等。
使食品含有本發(fā)明的谷氨酰胺肽，攝取進(jìn)一步變得容易。作為這種食品，可以舉出面包、烏冬面等面類，餅干、酥脆薄片餅干等碳水化合物類食品，茶類，湯類，撒在飯上的粉狀食品，黃油、果醬等涂抹食品，流食，果汁類，果凍狀飲料等形式。作為健康食品、功能食品，每天的施用量最好為可以管理的形式。本發(fā)明的食品具有預(yù)防或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的效果。
實施發(fā)明的最佳方式通過下面的實施例具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明絲毫不受實施例的限定。
另外，用如下方法測定肽(谷氨酰胺肽)的平均分子量、肽中的谷氨酰胺含量。
用孔徑0.45μm的膜過濾器過濾肽的水溶液，用凝膠過濾測定分子量。作為柱，使用日本バイオラツドラボラトリ-ズ社制的“バイオシルSEC125-5”。測定條件是測定波長280nm、洗脫液0.2mM磷酸緩沖液(pH6.0，0.1％SDS)、流速0.2ml/分。另外，作為分子量的標(biāo)準(zhǔn)，使用卵清蛋白(分子量44kDa)、肌球蛋白(分子量17kDa)和維生素B12(分子量1.35kDa)。
肽中的谷氨酰胺含量含有酰胺態(tài)氮的氨基酸是谷氨酰胺和天冬酰胺2種，但對于小麥谷蛋白質(zhì)，其中所含的含有酰胺態(tài)氮的氨基酸中的95質(zhì)量％以上是谷氨酰胺。也就是說，即使把小麥谷蛋白中的含有酰胺態(tài)氮的氨基酸量直接作為谷氨酰胺含量，也不會有大的誤差。因此，把小麥谷蛋白中的含有酰胺態(tài)氮的氨基酸量直接作為谷氨酰胺含量。
按照Wilcox的化學(xué)物質(zhì)中的酰胺定量法[Meth.Enzymol.，11，36-65(1967)]求出谷氨酰胺肽中所含的酰胺態(tài)氮的含量。具體地說，往康威氏燒瓶中放入谷氨酰胺肽，往其中加入1N的鹽酸，使谷氨酰胺肽中的酰胺態(tài)氮以氨氣游離，按照衛(wèi)生檢查指南[日本藥學(xué)會編“衛(wèi)生試驗法·注解”，p274-276，金原出版(1990)]，將產(chǎn)生的氨氣定量，從定量的氨氣量求出肽中所含的酰胺態(tài)氮量，基于該量，算出含有酰胺態(tài)氮的氨基酸含量作為谷氨酰胺含量。
制造例1谷氨酰胺肽的制造(1)往反應(yīng)釜中裝入離子交換水9700kg、檸檬酸酐38kg和小麥谷蛋白(活性谷蛋白，Weston Foods Limited制)1500kg，加溫至45℃后，加入蛋白酶(天野制藥株式會社制的“蛋白酶M ア マノ”)2.2g和淀粉酶(阪急バイオインダストリ-株式會社制的“液化酶T”)1.1kg，在45℃水解5小時，然后用25％氫氧化鈉水溶液將液體的pH調(diào)節(jié)至4.4～4.5，保持5小時進(jìn)行酶處理。
(2)接著，將液體在80℃保持20分鐘，使酶失活后，冷卻至65℃，往其中加入淀粉酶(阪急バイオインダストリ-株式會社制的“液化酶T”)0.5kg，使小麥谷蛋白中所含的淀粉質(zhì)和纖維質(zhì)水解后，將液體保持在90℃20分鐘，使淀粉酶失活。
(3)然后，將液體冷卻到10℃以下后，再次加熱到55℃，往其中加入活性炭(武田藥品工業(yè)株式會社制的“タケコ-ル”)100kg，在55℃攪拌30分鐘。
(4)使液溫在45℃，加入濃助過濾劑(昭和化學(xué)工業(yè)株式會社制的“ラヂオライト”)，使用加壓過濾裝置進(jìn)行過濾，回收濾液7000升(7m3)。
(5)在減壓下，將在上述(4)中回收的濾液濃縮至Brix值為20～40后，使用板式加熱器，在110℃加熱20秒殺菌，然后冷卻至55℃。
(6)使用噴霧干燥裝置，在送風(fēng)溫度160℃、排風(fēng)溫度80℃的條件下，將在上述(5)中得到的液體噴霧干燥，得到小麥谷蛋白的水解物即谷氨酰胺肽粉末約1000kg。
(7)用60目篩(網(wǎng)目數(shù)為0.246mm)將在上述(6)中得到的谷氨酰胺肽粉末分級，回收通過60目篩網(wǎng)的微粉末(谷氨酰胺肽微粉末)。
(8)測定在上述(7)中回收的谷氨酰胺肽(微粉末)的平均分子量和谷氨酰胺含量，平均分子量為約8000和谷氨酰胺含量為32質(zhì)量％。
制造例2～4谷氨酰胺肽的制造用和制造例1一樣的方法，得到下面表1所示的性狀的谷氨酰胺肽。
表1

實施例1 片劑的制造混合在制造例1中得到的谷氨酰胺肽83.3g、結(jié)晶纖維素(旭化成株式會社制)10g和聚乙烯吡咯烷酮(BASF社制)5g，往其中添加乙醇30ml，用濕式法，按照常規(guī)方法制造顆粒。將由此得到的顆粒干燥后，加入硬脂酸鎂1.2g制成壓片用顆粒粉末，使用壓片機(jī)壓片，制造1片1g的片劑100個(每片片劑的谷氨酰胺肽含量為0.838g)。
實施例2 糖漿劑的制造將精制水400g煮沸，邊攪拌邊往其中加入白糖750g和在制造例1中得到的谷氨酰胺肽100g使之溶解，趁熱隔著布，往其中加入精制水，使總量為1000ml，制造糖漿劑(每100ml糖漿劑的谷氨酰胺肽含量為10g)。
實施例3 顆粒劑的制造混合谷氨酰胺肽GP-1(平均分子量7000，L-谷氨酰胺含量32質(zhì)量％；日清フアルマ株式會社制)76g、乳糖(DMV社制)13.3g、結(jié)晶纖維素(旭化成株式會社制)6.7g和聚乙烯吡咯烷酮(BASF社制)4g，往其中添加乙醇30ml，用濕式法，按照常規(guī)方法制造顆粒，干燥后，造粒，得到顆粒劑(每10g顆粒劑的谷氨酰胺肽含量為7.6g)。
實施例4 流食的制造往約65℃的純凈水750g中添加酪蛋白酸鈉(DMV社制)40g、麥芽糊精(三和デンプン社制)160g和谷氨酰胺肽GP-1(日清フアルマ株式會社制)25g并使之溶解，然后添加維生素混合物5g和礦物質(zhì)微量元素的各成分混合液。將混合液投入均質(zhì)混合機(jī)(特殊機(jī)化工業(yè)制)中，在約8000rpm下粗乳化15分鐘。將所得乳化液冷卻至約20℃，添加香料后，進(jìn)行最后的攪拌。將該液體填充到小口袋中至母液230g后，進(jìn)行氮氣置換，同時密封小口袋，在121℃進(jìn)行15分鐘殺菌，得到濃厚流食。每230g流食的谷氨酰胺肽含量約5g。
實施例5 面包的制造混合小麥粉(強(qiáng)力粉)150g和干酵母2g。除此之外，將谷氨酰胺肽GP-1(日清フアルマ株式會社制)20g、砂糖20g、食鹽3g、脫脂奶粉6g溶解在溫水70g中，添加雞蛋1個，充分?jǐn)嚢?。將其加入到小麥粉中，用手充分捏合后，加入約40g黃油并充分捏合，制作20個輥面包面坯。然后，發(fā)酵后，在表面涂布溶解的雞蛋，在180℃烤箱中焙烤約15分鐘，制造輥面包。該輥面包每個含有約1g谷氨酰胺肽。
實施例6 意大利面用肉醬的制造將意大利面用肉醬(150g)放入鍋中，同時加入谷氨酰胺肽GP-1(日清フアルマ株式會社制)5g并加熱，制造意大利面用肉醬。將該肉醬填充到小袋中后，進(jìn)行氮氣置換，同時密封小袋，在121℃下進(jìn)行殺菌15分鐘，得到含有谷氨酰胺肽的意大利面用肉醬。
實施例7 烏冬面的制造相對于小麥粉(中力粉)300g，使谷氨酰胺肽GP-1(日清フアルマ株式會社制)15g、食鹽15g分散在水150g中，充分?jǐn)嚢枘蠛喜l(fā)酵。之后，拉伸面坯，切成寬約5mm，制作烏冬面。將其在沸騰的水中煮約10分鐘，外觀、味道、食感均良好。該烏冬面每1份含有約5g谷氨酰胺肽。
下面，就本發(fā)明的谷氨酰胺肽對肝病、高血脂癥和/獲糖尿病的治療，用試驗例說明。
下面就本發(fā)明的谷氨酰胺肽有關(guān)肝病的藥理試驗進(jìn)行說明。
作為肝病的治療效果指標(biāo)的GOT值、GPT值、γ-GTP值的測定方法如下。
GOT值按照對應(yīng)日本臨床化學(xué)會(JSCC)的標(biāo)準(zhǔn)化方法的UV法〔“臨床化學(xué)”18、231-249頁(1989)〕進(jìn)行測定。
GPT值按照對應(yīng)JSCC的標(biāo)準(zhǔn)化方法的UV法〔“臨床化學(xué)”18、250-262頁(1989)〕進(jìn)行測定。
γ-GTP值按照對應(yīng)JSCC的標(biāo)準(zhǔn)化方法的比色法〔“臨床化學(xué)”24、106-121頁(1995)〕進(jìn)行測定。
受試者A男性(58歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽 約9.9g/天試驗方法讓訴說全身倦怠和食欲不振的脂肪肝的受試者飯后內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天3次，測定給藥前、給藥開始1周后、3周后的GOT、GPT、γ-GTP。其結(jié)果示于表2中。
表2
受試者B男性(60歲)給藥藥劑實施例2的糖漿劑給藥量谷氨酰胺肽 約6g/天試驗方法讓訴說全身倦怠和食欲不振的脂肪肝的受試者飯后內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天3次，測定給藥前、給藥開始3周后的測定GOT、GPT、γ-GTP。其結(jié)果示于表3中。
表3

受試者C男性(49歲)給藥藥劑實施例2的糖漿劑給藥量谷氨酰胺肽約8g/天試驗方法讓C型慢性肝炎的受試者內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天2次(早·晚)，測定給藥前、給藥開始3周后的GOT、GPT、γ-GTP。其結(jié)果示于表4中。
表4
試者D男性(51歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽 約8g/天試驗方法讓C型慢性肝炎的受試者內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天2次(早·晚)，測定給藥前、給藥開始4周后的GOT、GPT、γ-GTP。其結(jié)果示于表5中。
表5

在上述試驗例中，發(fā)現(xiàn)無論哪位受試者，肝功能的指標(biāo)GOT、GPT、γ-GTP均降低，肝功能得到改善。這些結(jié)果顯示出本發(fā)明的谷氨酰胺肽對肝病的預(yù)防或治療具有優(yōu)良的藥理作用。
下面，就谷氨酰胺肽有關(guān)高血脂癥的藥理試驗進(jìn)行說明。
根據(jù)其癥狀，對高血脂癥的受試者口服給藥特定量的谷氨酰胺肽，一定時間后，測定總膽固醇值、中性脂肪值、LDL膽固醇值、動脈硬化指數(shù)等，評價高血脂癥的改善作用。另外，按照如下方法，測定血液中的總膽固醇值、LDL膽固醇值、中性脂肪、動脈效果指數(shù)。
總膽固醇值在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用酶法[宇治等，日本臨床，Vol.53，增刊，第615頁(1995)]測定。
LDL膽固醇值在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用酶的測定法[菅野等，醫(yī)學(xué)和藥學(xué)，Vol.3，No.3，第635頁(1997)]測定。
中心脂肪值在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用酶法(游離甘油消除法)[澀谷等，日本臨床，Vol.53，增刊，第606頁(1995)]測定。
動脈硬化指數(shù)在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用選擇性抑制HDL膽固醇值法(直說法)[中井等，日本臨床，Vol.53，增刊，第617頁(1995)]測定，通過下式，算出動脈硬化指數(shù)。動脈硬化指數(shù)＝(總膽固醇值-HDL膽固醇值)÷(HDL膽固醇值)[有關(guān)高血脂癥的試驗例1]受試者E男性(58歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽10g/天試驗方法讓受試者飯后內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天3次，測定給藥前、給藥開始1周后、3周后和3個月后的總膽固醇、中性脂肪。其結(jié)果示于表6中。
表6
受試者F男性(60歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽6g/天試驗方法讓受試者飯后內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天3次，測定給藥前、給藥開始3周后和3個月后的總膽固醇、LDL膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)。其結(jié)果示于表7中。
表7

在上述試驗例中，發(fā)現(xiàn)無論哪位受試者，高血脂癥的指標(biāo)總膽固醇值、中性脂肪值、LDL膽固醇值、動脈硬化指數(shù)均降低了，高血脂癥得到改善。這些結(jié)果顯示出本發(fā)明的谷氨酰胺肽對高血脂癥的預(yù)防或治療具有優(yōu)良的藥理作用。
下面，就谷氨酰胺肽有關(guān)糖尿病的藥理試驗進(jìn)行說明。
根據(jù)其癥狀，對糖尿病的受試者口服給藥特定量的谷氨酰胺肽，一定時間后，測定空腹時血糖值、Hb Alc和1，5-AG，評價糖尿病的改善作用。另外，血糖值、Hb Alc和1，5-AG的測定如下。
血糖值作為血糖值的測定法，一般為葡萄糖氧化酶(GOD)法、葡萄糖酶脫氫酶(GDH)法等酶電極法、己糖激酶(HX)法、葡萄糖氧化酶/過氧化物酶(GOD/POD)法等酶比色法，在本實施例中，在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用GDH法[前川等，日本臨床，vol.53，增刊，第527頁(1995)]測定。
Hb Alc作為Hb Alc的標(biāo)準(zhǔn)法，已知高效液相色譜法(HPLC法)、膠乳凝集法(LA法)、親和性法。在本實施例中，在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用LA法[老刃，日本臨床，vol.48，增刊，第315頁(1990)]測定。
1，5-AG在本實施例中，在臨床檢查受理機(jī)關(guān)即株式會社エスア-ルエル(東京)，用酶法[川合，日本臨床，vol.47，增刊，第439頁(1989)]測定。
受試者G男性(67歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽 10g/天試驗方法讓受試者飯后內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天3次，測定給藥前、給藥開始1個月后和3個月后的空腹時血糖值、Hb Alc和1，5-AG，。其結(jié)果示于表8中。
表8

在上述試驗例中，發(fā)現(xiàn)受試者的糖尿病的指標(biāo)空腹時血糖值、HbAlc和1，5-AG顯著改善。該結(jié)果顯示出本發(fā)明的谷氨酰胺肽對糖尿病的預(yù)防或治療具有優(yōu)良的藥理作用。

試者H男性(68歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽約8g/天試驗方法讓訴說倦怠感和食欲不振的并發(fā)脂肪肝和高血脂癥的受試者內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天2次(早·晚)，測定給藥前、給藥開始4周后和3個月后的GOT、GPT、γ-GTP、總膽固醇、LDL膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)。其結(jié)果示于表9中。
表9
試者I男性(50歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽約8g/天試驗方法讓可見脂肪肝的征兆且為高血脂癥的受試者內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天2次(早·晚)，測定給藥前、給藥開始4周后和3個月后的GOT、GPT、γ-GTP、總膽固醇、LDL膽固醇、中性脂肪、動脈硬化指數(shù)。其結(jié)果示于表10中。
表10

在上述試驗例中，發(fā)現(xiàn)無論哪位受試者，肝功能的指標(biāo)GOT、GPT、γ-GTP和高血脂癥的指標(biāo)總膽固醇、中性脂肪值、LDL膽固醇、動脈硬化指數(shù)均降低了，肝功能和高血脂癥得到改善。這些結(jié)果顯示出即使在并發(fā)脂肪肝和高血脂癥的場合，本發(fā)明的谷氨酰胺肽也具有優(yōu)良的效果。
受試者J女性(74歲)給藥藥劑實施例3的顆粒劑給藥量谷氨酰胺肽6g/天試驗方法讓受試者飯后內(nèi)服谷氨酰胺肽，每天3次，測定給藥前、給藥開始2周后、4周后和3個月后的總膽固醇、LDL膽固醇、中性脂肪、空腹時血糖值、Hb Alc和1，5-AG。其結(jié)果示于表11中。
表11

在上述試驗例中，發(fā)現(xiàn)高血脂癥的指標(biāo)總膽固醇、中性脂肪值、LDL膽固醇降低了，糖尿病的指標(biāo)空腹時血糖值、Hb Alc和1，5-AG顯著改善。該結(jié)果顯示出即使在并發(fā)高血脂癥和糖尿病的場合，本發(fā)明的谷氨酰胺肽也具有優(yōu)良的效果。
工業(yè)實用性本發(fā)明提供肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，以及含有該肽的食品，其特征在于含有由構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L-氨基酸構(gòu)成的、L-谷氨酰胺含量為15～60質(zhì)量％、平均分子量為200～100000的肽。
通過施用或攝取本發(fā)明的藥劑或食品，可以在短時間內(nèi)顯著改善肝病、高血脂癥和/或糖尿病。另外，在本發(fā)明中使用的谷氨酰胺肽的安全性優(yōu)良，適于長期給藥。為此，本發(fā)明的藥劑和食品對肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療極其有效。
權(quán)利要求
1.一種肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，其特征在于含有由構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L-氨基酸構(gòu)成的、L-谷氨酰胺含量為15～60質(zhì)量％、平均分子量為200～100000的肽。
2.權(quán)利要求1所述的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，其中所述肽是L-谷氨酰胺含量為20～40質(zhì)量％、平均分子量為500～20000的肽。
3.權(quán)利要求1或2所述的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，其中所述肽是以小麥谷蛋白為原料制造的肽。
4.權(quán)利要求1～3任一項所述的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，肝病是脂肪肝或者丙型慢性肝炎。
5.權(quán)利要求1～3任一項所述的肝病、高血脂癥和/或糖尿病的預(yù)防和/或治療劑，高血脂癥是高膽固醇血癥或者高中性脂肪血癥。
6.含有權(quán)利要求1～3任一項所述的肽的預(yù)防和/或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的食品。
全文摘要
本發(fā)明是用于預(yù)防和/或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的含有由構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的L－氨基酸構(gòu)成的、L－谷氨酰胺含量為15～60質(zhì)量％、平均分子量為200～100000的肽的藥劑和食品，以及含有該肽的食品。服用該藥劑，或者攝取該食品，可以發(fā)揮預(yù)防或治療肝病、高血脂癥和/或糖尿病的治療效果。該藥劑和食品的效果高，不用擔(dān)心副作用且攝取容易。
文檔編號A61K38/01GK1649617SQ0380984
公開日2005年8月3日 申請日期2003年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月1日
發(fā)明者堀口升, 堀口裕, 鈴木良雄 申請人:日清藥業(yè)股份有限公司