專(zhuān)利名稱(chēng)：一種c21甾體配糖體在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及C21甾體配糖體的新用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
抑郁癥屬情感性精神障礙性疾病，1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)估計(jì)發(fā)病率占世界總?cè)丝诘?％～5％。近年來(lái)抗抑郁藥物的研究非?；钴S。20世紀(jì)50年代就有了對(duì)抑郁癥狀有效的三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥物(TCA)，但因缺乏選擇性而存在嚴(yán)重毒副作用，之后出現(xiàn)的單胺氧化酶抑制劑(MAO1)也因不可逆和無(wú)選擇性而在應(yīng)用上受到限制。1988年美國(guó)禮來(lái)公司推出選擇性5-羥色胺(5-HT)重?cái)z取抑制劑(SSR1)氟西汀(百憂解)，才使抑郁癥的治療有了進(jìn)展。
隨著細(xì)胞分子藥理學(xué)研究的飛躍，對(duì)抗抑郁機(jī)制的研究更加深入，對(duì)已有抗抑郁藥物的認(rèn)識(shí)和新藥篩選方向也更明確。近年開(kāi)發(fā)的抗抑郁藥物，包括氟西汀、氟伏沙明(nuvoxamine)、帕羅西汀(Pmoxetine)、舍曲林(sertraline)、齊美定(zimeldine)和曲唑酮(trazodone)、文拉法辛(venlafaxine)、瑞波西汀(reboxetine)、安非他酮(amfebufamone)、氯苯帕明(clomipramine)等，目前這類(lèi)藥臨床應(yīng)用最為廣泛，口服易吸收，與血漿蛋白結(jié)合率高，半衰期較長(zhǎng)，顯效快且作用強(qiáng)，療效與TCA相似，但副作用明顯較低。但由于抗抑郁藥物為長(zhǎng)期服用，在保證其療效的前提下，副作用的大小直接決定了這個(gè)藥物能否在臨床上進(jìn)行推廣。目前臨床上使用的抗抑郁化學(xué)藥，雖然較當(dāng)初的三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥物有很大的改進(jìn)，但仍然存在著副作用較大的缺點(diǎn)。即使是目前臨床首推的氟西汀，也有其誘發(fā)自殺傾向的報(bào)道。
C21甾體配糖體是一類(lèi)重要的藥物。早在二十年代就曾發(fā)現(xiàn)C21甾體類(lèi)成分并進(jìn)行了化學(xué)成分的研究。該類(lèi)化合物除從玄參科、毛莫科、夾竹桃科等植物中發(fā)現(xiàn)外，還以蘿藦科植物中存在更普遍。在蘿藦科植物中，研究較多的含有C21甾體化合物的植物有鵝絨藤屬、牛奶菜屑、肉珊瑚屬等，杠柳屬的一些植物亦含有較多的C21甾體化合物。這些屬的許多植物具有較大的應(yīng)用價(jià)值。如鵝絨藤屬植物青陽(yáng)參(Cynanchum otophyllum Schneid)、麗江牛皮消(C.likiangese)等的乳汁及根部作藥用，治療蛇傷、跌打、關(guān)節(jié)炎、脖瘤等。青陽(yáng)參所含有的青陽(yáng)參總苷在臨床上用以治療癲癇療效較好。白首烏(C.bungei)為滋補(bǔ)珍品，系山東泰山一帶四大名藥之一，具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用。隨著現(xiàn)代分離、分析方法的不斷發(fā)展，對(duì)鵝絨藤屬植物中的C21甾體配糖體的研究也不斷深入。其母體結(jié)構(gòu)通式如下 其中R1為糖鏈取代基，糖鏈由不同數(shù)目的單糖基組合而成。常見(jiàn)的糖基為葡萄糖、鼠李糖、加拿大麻糖、地支糖等；R2為不同的酰基取代基，如乙?；?、對(duì)羥基苯甲?；?，4-二甲基-2-烯-戊?；?。
通常，所述的單糖基為五碳糖或六碳糖基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以天然植物為原料的C21甾體配糖體的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
實(shí)際上，本發(fā)明涉及C21甾體配糖體在制備治療或改善具有抑郁狀態(tài)的精神障礙性疾病的藥物中的應(yīng)用。
特別涉及C21甾體配糖體在制備治療或預(yù)防抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
采用蘿藦科鵝絨藤屬植物青陽(yáng)參根莖(Cynanchum otophyllumSchneid)為原料，經(jīng)粉碎成小于10目的顆粒，用75％～80％醇或酮溶劑提取2～3次，溶劑的每次加量以沒(méi)過(guò)原料面為宜，合并提取液并在50℃～80℃下加熱濃縮回收溶劑，至無(wú)明顯的溶劑氣味；濃縮液用水稀釋?zhuān)瑵饪s液與水的重量比為1∶3～5，用石油醚或汽油萃取2～3次，水層再用氯仿或乙酸乙酯或甲酸乙酯萃取2～3次，合并所述的溶劑部分，回收溶劑，得到淺黃色粉末，即為青陽(yáng)參總苷，其中主要成分為青陽(yáng)參總甾體配糖體，含量為40～80％。
采用蘿藦科鵝絨藤屬植物昆明杯冠藤(C.willichii Weight)根莖為原料，經(jīng)粉碎成小于10目的顆粒，用75％～80％醇或酮溶劑提取2～3次，溶劑的每次加量以沒(méi)過(guò)原料面為宜，合并提取液并在50℃～80℃下加熱濃縮回收溶劑，至無(wú)明顯的溶劑氣味；濃縮液用水分散，濃縮液與水的重量比為1∶3～5，用石油醚或汽油萃取2～3次，水層再用氯仿或乙酸乙酯或甲酸乙酯萃取2～3次，合并所述的溶劑部分，回收溶劑，得到淺黃色粉末，即為昆明杯冠藤總苷，其中主要成分為C21甾體配糖體含量為50～80％。
對(duì)青陽(yáng)參總苷、杯冠藤總苷及其它來(lái)源的C21甾體配糖體為主成分的有效部位(簡(jiǎn)稱(chēng)總苷)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，總苷中配糖體的糖基部分，變化較多，但比較突出的特征是，構(gòu)成這些糖鏈的單個(gè)糖基，一般都含有2-去氧糖，如加拿大麻糖、地支糖等。將總苷用5％鹽酸水解，苷元相對(duì)簡(jiǎn)單些，主要由具有類(lèi)似骨架的C21甾體母核構(gòu)成，取代基的差別導(dǎo)致了苷元的差別，主要的苷元結(jié)構(gòu)為青陽(yáng)參苷元(qingyangshengenin)和告達(dá)庭(caudatin)，其它結(jié)構(gòu)苷元構(gòu)成的配糖體含量都不高?？傑罩校嚓?yáng)參苷元的含量一般為2～20％，告達(dá)庭含量一般為2～30％，所以，總苷的苷元的特征表現(xiàn)了總苷的基本特征。
青陽(yáng)參總苷或昆明杯冠藤總苷，經(jīng)過(guò)反復(fù)的柱層析，分離純化，得到構(gòu)成總苷的不同的C21甾體配糖體單體化合物。雖然柱層析方法分離成本很高，但由于可以更加方便地進(jìn)行質(zhì)量控制，也是一種重要的制備相關(guān)后續(xù)產(chǎn)品的方法。
總苷或C21甾體配糖體單體化合物，添加藥學(xué)上可接受的輔助劑，可以制成膠囊、片劑、滴丸、口服液、顆粒劑、注射劑、粉針劑或凍干粉針，用于藥物的制備。
有益效果C21甾體配糖體是一種天然來(lái)源的藥物原料，本發(fā)明的試驗(yàn)結(jié)果表明，其毒副作用小，療效獨(dú)特，具有良好的抗抑郁作用。且由于原料來(lái)源豐富，提取方法簡(jiǎn)單易行，價(jià)格低，可為患者用藥提供了一種理想的選擇，預(yù)示著很好的藥用前景。


圖1為青陽(yáng)參水解后的總苷元色譜圖。
其中色譜條件為色譜柱shim-pack VP-ODS(4.6×150mm，5μ)流動(dòng)相(甲醇-水)梯度洗脫時(shí)間甲醇水0.0140％60％10.00 50％50％15.00 70％30％
25.0080％20％流速1ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)254nm酸水解方法青陽(yáng)參總苷20mg，溶于10ml 5％甲醇鹽酸溶液中，加熱回流30分鐘。減壓濃縮，回收甲醇，加入5ml氯仿，溶解殘留物，水洗滌氯仿，至水層為中性。氯仿層蒸干，除去氯仿，殘留物用5ml甲醇溶解，得總苷元溶液，HPLC檢測(cè)。
具體實(shí)施例方式
通過(guò)下面給出的具體的實(shí)施例和藥理試驗(yàn)例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對(duì)本發(fā)明內(nèi)容的限定。
實(shí)施例1取青陽(yáng)參根莖10kg，粉碎，80％乙醇提取三次，合并提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋?zhuān)兔演腿∪?，水層再氯仿萃取三次，合并氯仿部分。回收氯仿，得淺黃色粉末300克，得率為3.0％。所得淺黃色粉末為青陽(yáng)參總苷，以青陽(yáng)參苷元為對(duì)照品，參照藥品標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-2343-97)方法，測(cè)得總苷含量為72.5％。以HPLC方法測(cè)定總苷中主要苷元含量，結(jié)果為青陽(yáng)參苷元含量為5.1％，告達(dá)庭含量為10.5％。
實(shí)施例2取昆明杯冠藤根莖10kg，粉碎，80％乙醇提取三次，合并提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋?zhuān)兔演腿∪危畬釉俾确螺腿∪?，合并氯仿部分。回收氯仿，得淺黃色粉末310克，得率為3.1％。所得淺黃色粉末為昆明杯冠藤總苷。以青陽(yáng)參苷元為對(duì)照品，參照藥品標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-2343-97)方法，測(cè)得總苷含量為80.4％。以HPLC方法測(cè)定總苷中主要苷元含量，結(jié)果為總苷中青陽(yáng)參苷元含量為6.0％，告達(dá)庭含量為15.2％。
實(shí)施例3取青陽(yáng)參總苷50g，溶于甲醇200ml，加入200g 100目粒度的硅膠，攪拌均勻，將甲醇揮干。取1000g 300～400目粒度的硅膠，按常規(guī)方法柱層析，洗脫系統(tǒng)為氯仿-甲醇(20∶1～5∶1)，梯度洗脫。收集洗脫液，得5部分，第3部分用反相硅膠反復(fù)柱層析，甲醇∶水(60∶40)洗脫，得化合物1 1.2g，為青陽(yáng)參苷甲。白色粉末，分子式為C56H86O16，分子量932。易溶于乙醇、甲醇、乙酸乙酯、氯仿。
實(shí)施例4將青陽(yáng)參總苷100g、淀粉60g、糊精5g混和均勻，加入10％淀粉漿制軟材，用14目尼龍篩網(wǎng)制粒，60～70℃通風(fēng)干燥，16目篩整粒，加入硬脂酸鎂1.5g、羧甲基淀粉鈉5g混勻，壓制成1000片，包衣，即得所需的片劑，每片含青陽(yáng)參總苷100mg。
實(shí)施例5取青陽(yáng)參總苷100g，加入淀粉50g、硬脂酸鎂2g混勻，直接用全自動(dòng)膠囊填充機(jī)填充成1000粒，拋光，即得所需的膠囊。每粒含青陽(yáng)參總苷100mg。
實(shí)施例6取青陽(yáng)參總苷15g，投入30g加入熔融的聚乙二醇6000中，攪拌至溶解，轉(zhuǎn)移至貯液瓶中，密閉并保溫在80～90℃，調(diào)節(jié)滴丸機(jī)液滴定量閥門(mén)，由上往下滴入10～15℃的液狀石蠟中，供制1000粒，將形成的滴丸瀝干并擦除液狀石蠟，干燥，即得所需的滴丸。每粒含青陽(yáng)參總苷15mg。
實(shí)施例7取青陽(yáng)參總苷20g，溶液蒸餾水500ml中，入蜂蜜100g、蔗糖10g、苯甲酸鈉2g，加熱至80℃～90℃，攪拌使溶解，保溫30min，濾過(guò)，濾液加水稀釋至1000ml，攪勻，灌封，每支10ml，滅菌，即得所需的口服液。
實(shí)施例8取青陽(yáng)參總苷1份、糊精4份及乙醇適量，混勻，過(guò)10目篩制成顆粒，與60℃～70℃干燥，整粒，分裝，即得所需的顆粒劑，每包重500mg。
實(shí)施例9取青陽(yáng)參總苷25g，加注射用水適量溶解，加配置量的0.02％活性炭攪拌5～10min，濾過(guò)，濾液稀釋至5000ml，加氯化鈉調(diào)節(jié)滲透壓至等滲，調(diào)pH6.5～8.0，超濾，灌封成1000支，即得所需的注射劑，每支5ml含青陽(yáng)參總苷25mg，肌肉注射用。
實(shí)施例10取青陽(yáng)參總苷50g，加注射用水使溶解，加配制量的0.02％活性炭攪拌5～10min，濾過(guò)，濾液加水稀釋至1000ml，調(diào)pH6.5～8.0，超濾，噴霧干燥，干粉無(wú)菌分裝，即得所需的注射劑。每支25mg。肌肉注射用。
實(shí)施例11無(wú)菌條件下取青陽(yáng)參總苷25g，置于無(wú)菌容器內(nèi)，加注射用水1000ml，調(diào)節(jié)pH6.5～8.0，加配制量的0.02％活性炭攪拌5～10min，用無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再用滅菌垂熔漏斗精濾或超濾，濾液檢驗(yàn)合格后分裝于2ml安瓿中，低溫冷凍干燥，無(wú)菌熔封，即得所需的粉針劑，每支含青陽(yáng)參總苷25mg。臨用前加注射用水適量使之溶解，肌肉注射用。
藥理試驗(yàn)例1——急性毒性試驗(yàn)取小鼠120只，每組10只，灌胃給不同劑量的藥物，連續(xù)觀察7天，計(jì)數(shù)死亡小鼠。計(jì)算LD50，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1.急性毒性試驗(yàn)結(jié)果劑量 死亡 存活LD50組別mg/kg(只) (只)mg/kgQYS 1002 8/10 2/10QYS 701 5/10 5/10688.1QYS 491 2/10 8/10
QYS3440/10 10/10KMBGT 1200 8/10 2/10KMBGT 8005/10 5/10 710.1KMBGT 5002/10 8/10KMBGT 3500/10 10/10Q-A3008/10 2/10Q-A2005/10 5/10 180.5Q-A1002/10 8/10Q-A50 0/10 10/10注LD50CALC2.0版軟件計(jì)算，“QYS”為青陽(yáng)參總苷的簡(jiǎn)稱(chēng)、KMBGT為昆明杯冠藤總苷的簡(jiǎn)稱(chēng)，Q-A為青陽(yáng)參苷甲的簡(jiǎn)稱(chēng)。
藥理試驗(yàn)例2——小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)玻璃缸，直徑14cm，高19cm，內(nèi)放自來(lái)水，水深14cm，水溫26℃。小鼠置入缸內(nèi)，游15分鐘后取出，自然晾干后，分為8組正常對(duì)照組、丙咪嗪組及QYS、KMBGT各自的20mg/kg、60mg/kg組及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組，在游泳后0、19和24小時(shí)后分別灌胃給藥三次，半小時(shí)后再次進(jìn)行強(qiáng)迫游泳，丙咪嗪組僅在第二次游泳前30分鐘腹腔注射一次。用電子秒表記錄5分鐘內(nèi)每只小鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間。試驗(yàn)采用盲法，觀測(cè)者不知?jiǎng)游锝o藥情況。
試驗(yàn)前24、5、0.5小時(shí)連續(xù)3次灌胃QYS、KMBGT、Q-A后，QYS、KMBGT各自的20mg、60mg及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組小鼠的強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間均縮短，其中QYS、KMBGT的60mg/kg組和Q-A的45mg組劑量效果最為顯著，與正常對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且作用優(yōu)于10mg/kg的丙咪嗪組。試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。
表2.QYS、KMBGT、Q-A組對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(X±SE)組別 劑量(mg/kg)不動(dòng)時(shí)間(秒)縮短率(％)正常對(duì)照 87.9±18.6丙咪嗪10 69.1±14.7 21.4QYS 20 58.7±15.3 33.2QYS 60 33.9±12.9* 61.5*KMBGT 20 60.5±12.6 31.2KMBGT 60 35.1±13.5* 60.1*Q-A 15 55.2±12.8 37.2Q-A 45 30.5±14.0 65.3*與對(duì)照組比*P＜0.05藥理試驗(yàn)例3——小鼠懸尾試驗(yàn)將動(dòng)物隨機(jī)分為8組—正常對(duì)照組、丙咪嗪組、QYS、KMBGT各自的20mg/kg、60mg/kg組及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組(通稱(chēng)給藥組)。給藥組灌胃給藥4次，丙咪嗪ip給藥一次，30分鐘后，用膠布將小鼠在距尾尖1cm處固定，使其頭朝下，距地面50cm。小鼠懸尾6分鐘，記錄后4分鐘內(nèi)不動(dòng)時(shí)間。
給藥組灌服30分鐘后，QYS、KMBGT的20和60mg/kg劑量組及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組小鼠的懸尾不動(dòng)時(shí)間減少，與正常對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，表明能顯著縮短小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間。
表3.QYS、KMBGT、Q-A對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(X±SE)組別劑量(mg/kg)不動(dòng)時(shí)間(秒)縮短率(％)
正常對(duì)照 120.1±14.3丙咪嗪 1027.4±10.4***77.2QYS 2056.7±11.7** 52.8QYS 6061.8±16.7* 48.5KMBGT 20KMBGT 60Q-A 15Q-A 45與對(duì)照組比 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001藥理試驗(yàn)例4——小鼠自由活動(dòng)試驗(yàn)小鼠被灌胃不同劑量的QYS、KMBGT、Q-A組后30分鐘，依次放入小鼠自主活動(dòng)箱，該儀器由計(jì)算機(jī)自動(dòng)記錄動(dòng)物活動(dòng)次數(shù)，共有四個(gè)活動(dòng)室，每次每箱放兩只動(dòng)物，記錄5分鐘內(nèi)小鼠活動(dòng)次數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果與正常組對(duì)比，一次性灌胃給QYS、KMBGT 20、60、180mg/kg，Q-A 15mg、45mg、100mg/kg后，小鼠自主活動(dòng)數(shù)均無(wú)顯著差異，說(shuō)明對(duì)動(dòng)物無(wú)明顯興奮性，在藥理試驗(yàn)例3、4中反應(yīng)的結(jié)果是其抗抑郁效果的表現(xiàn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。
表4.QYS、KMBGT、Q-A對(duì)小鼠5分鐘內(nèi)活動(dòng)次數(shù)的影響(X±SD)組別 劑量(mg/kg)不動(dòng)時(shí)間(秒)正常對(duì)照 200.5±53.8QYS20 228.5±68.5QYS60 226.8±58.6QYS180194.5±60.9
KMBGT20220.5±52.5KMBGT60225.5±55.0KMBGT180 205.5±60.5Q-A 15220.5±52.5Q-A 45220.5±52.5Q-A 100 220.5±52.5藥理試驗(yàn)例5——利血平拮抗試驗(yàn)取小鼠隨機(jī)分成12組，每組12只。每鼠皮下注射利血平注射液3mg/kg，同時(shí)給予相應(yīng)藥物，1.5小時(shí)后分別觀測(cè)上眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能的動(dòng)物個(gè)數(shù)。其中上瞼下垂觀察30秒內(nèi)眼瞼至少閉合一半的動(dòng)物個(gè)數(shù)。運(yùn)動(dòng)不能將小鼠放入直徑7.5的圓形白紙中央，觀察15秒內(nèi)仍呆在圈內(nèi)的動(dòng)物個(gè)數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。
表5.QYS、KMBGT、Q-A對(duì)利血平所致眼瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能作用的影響(x±s)劑量 眼瞼下垂對(duì)抗百分率 運(yùn)動(dòng)不能 對(duì)抗百分率組別mg/kg (只)(％) (只) (％)對(duì)照組 10/12 16.67 7/12 41.67丙咪嗪 103/1275.0** 10/1216.67阿米替林 702/1283.33**10/1216.67QYS405/1258.33* 6/12 50.0QYS208/1233.33 7/12 41.67QYS108/1233.33 11/128.33KMBGT 405/1258.33 6/12 50.0
KMBGT20 8/12 33.33 8/12 33.33KMBGT10 8/12 33.33 11/12 8.33Q-A 40 6/12 50.0* 6/12 50.0Q-A 20 8/12 33.33 7/12 41.67Q-A 10 8/12 33.33 10/12 16.67x2檢驗(yàn)與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12在對(duì)抗利血平模型上，40mg/kg劑量出現(xiàn)明顯的對(duì)抗眼瞼下垂效應(yīng)，表明QYS、KMBGT、Q-A的抗抑郁作用機(jī)制與相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。對(duì)運(yùn)動(dòng)不能的小鼠未表現(xiàn)出明顯的作用，陽(yáng)性藥也未表現(xiàn)出明顯的效應(yīng)。
權(quán)利要求
1.C21甾體配糖體在制備治療或改善具有抑郁狀態(tài)的精神障礙性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.C21甾體配糖體在制備治療或預(yù)防抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種C21甾體配糖體在制藥領(lǐng)域中的新用途。本發(fā)明通過(guò)深入系統(tǒng)的試驗(yàn)證實(shí)C21甾體配糖體其毒副作用小，對(duì)具有抑郁狀態(tài)的精神障礙性疾病，特別是對(duì)抑郁癥療效獨(dú)特。且由于原料來(lái)源豐富，提取方法簡(jiǎn)單易行，價(jià)格低，可為患者用藥提供了一種理想的選擇，預(yù)示著很好的藥用前景。
文檔編號(hào)A61K31/704GK1634097SQ20041007955
公開(kāi)日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2004年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月9日
發(fā)明者楊慶雄, 金和鍇, 楊崇仁 申請(qǐng)人:云南云藥實(shí)驗(yàn)室有限公司